氨氯地平及左氨氯地平對大鼠體內(nèi)侖伐替尼藥物動力學(xué)的影響及其機制

摘要：目的研究氨氯地平及左氨氯地平對侖伐替尼藥物動力學(xué)的影響并探究相關(guān)機制。方法選取18只雄性SD大鼠隨機分為3組，包括侖伐替尼（1.2 mg/kg）組、氨氯地平（1.0 mg/kg）聯(lián)合侖伐替尼組和左氨氯地平（0.5 mg/kg）聯(lián)合侖伐替尼組，每組各6只。分別用0.5%羧甲基纖維素鈉、氨氯地平及左氨氯地平灌胃液預(yù)處理8 d，末次灌胃后給予侖伐替尼，并按照規(guī)定的采血時間點眼內(nèi)眥靜脈叢采血。采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法測定大鼠血漿中侖伐替尼的藥物濃度，非房室模型計算藥物動力學(xué)參數(shù)。采用RT-qPCR檢測大鼠肝組織中細(xì)胞色素P450 3A1（CYP3A1）、P-糖蛋白（P-gp）和乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）mRNA表達(dá)。符合正態(tài)分布的計量資料多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗；不符合正態(tài)分布的計量資料多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗。結(jié)果3組間藥時曲線下面積AUC0-∞（F=4.567，Plt;0.05）、清除率CLz/F（F=5.038，Plt;0.05）和峰濃度Cmax（F=11.667，Plt;0.01）比較差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義（P值均lt;0.05），與侖伐替尼組比較，氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組AUC0-∞升高36.1%（Plt;0.05）、CLz/F下降26.1%（Plt;0.05）、Cmax升高56.7%（Plt;0.01），左氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組Cmax升高37.7%（Plt;0.05）；RT-qPCR結(jié)果顯示，3組間CYP3A1、P-gp和BCRP mRNA的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為10.160、5.350、5.237，P值均lt;0.05），與侖伐替尼組比較，氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組大鼠肝臟CYP3A1、P-gp和BCRP mRNA表達(dá)水平明顯下降（P值均lt;0.05），而左氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組大鼠肝臟中CYP3A1 mRNA表達(dá)水平也明顯下降（Plt;0.05）。結(jié)論氨氯地平可以增加侖伐替尼的體內(nèi)暴露量，作用機制可能與抑制肝臟中CYP3A1、P-gp和BCRP的mRNA表達(dá)有關(guān)；而左氨氯地平僅增加侖伐替尼的峰濃度。

關(guān)鍵詞：癌，肝細(xì)胞；大鼠，Sprague-Dawley；氨氯地平；侖伐替尼

基金項目：河北省自然科學(xué)基金（H2022307063）；政府資助臨床醫(yī)學(xué)優(yōu)秀人才培養(yǎng)項目（202218）；河北省醫(yī)學(xué)適用技術(shù)跟蹤項目（GZ2022007）

Effect of amlodipine and levamlodipine on the pharmacokinetics of lenvatinib in rats and related mechanisms

YAN Bin1，2，3，CAO Gexi1，2，3，DENG Yanru1，2，3，LI Ying2，3，DONG Zhanjun1，2，3，BAI Wanjun1，2，3.（1.Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；2.Department of Pharmacy，Hebei General Hospital，Shijiazhuang 050000，China；3.Hebei Key Laboratory of Clinical Pharmacy，Shijiazhuang 050000，China）

Corresponding author：BAI Wanjun，baiwanjun0311@163.com（ORCID：0009-0008-3266-8765）

Abstract：Objective To investigate the effect of amlodipine and levamlodipine on the pharmacokinetics of lenvatiniband related mechanisms.Methods A total of 18 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into lenvatinib（1.2 mg/kg）group，amlodipine（1.0 mg/kg）+lenvatinib group，and levamlodipine（0.5 mg/kg）+lenvatinib group，with 6 rats in each group.The rats were pretreated with 0.5%sodium carboxymethyl cellulose，amlodipine or levamlodipine by gavage for 8 days，and lenvatinib was given after the last intragastric administration.Blood samples were collected from the intraocular canthus venous plexus at thespecified time points.Ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was used to measure the plasma concentration of lenvatinib in rats，and anon-compartment model was used to calculate pharmacokinetic parameters.RT-qPCR was used to measure the mRNA expression levels of cytochrome P450 3A1（CYP3A1），P-glycoprotein（P-gp），and breast cancer resistance protein（BCRP）in rat liver tissue.A one-way analysis of variance was used for comparison of normally distributed continuous data between multiple groups，and the Dunnett-t test was used for further comparison between two groups；the Kruskal-Wallis H test was used for comparison of non-normally distributed continuous data between groups.Results There were significant differences between the three groups in the area under the concentration-time curve AUC0-∞（F=4.567，Plt;0.05），clearance rate CLz/F（F=5.038，Plt;0.05），and peak concentration Cmax（F=11.667，Plt;0.01）.Compared with the lenvatinib group，the amlodipine+lenvatinib group had an increase in AUC0-∞by 36.1%（Plt;0.05），a reduction in CLz/F by 26.1%（Plt;0.05），and an increase in Cmax by 56.7%（Plt;0.01），and the levamlodipine+lenvatinib group had an increase in Cmax by 37.7%（Plt;0.05）.RT-qPCR showed that there were significant differences in the mRNA expression levels of CYP3A1，P-gp，and BCRP between the three groups（F=10.160，5.350，and 5.237，all Plt;0.05），and compared with the lenvatinib group，the amlodipine+lenvatinib group had significant reductions in the mRNA expression levels of CYP3A1，P-gp，and BCRP in rat liver tissue（all Plt;0.05），while the levamlodipine+lenvatinib group had a significant reduction in the mRNA expression level of CYP3A1 in rat liver tissue（Plt;0.05）.Conclusion Amlodipine can increase the in vivo exposure of lenvatinib possibly by inhibiting the mRNA expression of CYP3A1，P-gp，and BCRP in the liver，while levamlodipine only increases the peak concentration of lenvatinib.

Key words：Carcinoma，Hepatocellular；Rats，Sprague-Dawley；Amlodipin；Lenvatinib

Research funding：Hebei Natural Science Foundation Project（H2022307063）；Government-funded Program for Outstanding Clinical Medical Talent Development（202218）；Hebei Provincial Medical Applicable Technology Tracking Project（GZ2022007）

原發(fā)性肝癌是全球第六大常見癌癥類型，目前我國原發(fā)性肝癌的發(fā)病率和死亡率高居惡性腫瘤第4位及第2位［1］。肝細(xì)胞癌（HCC）是最常見的原發(fā)性肝癌類型，占75%～90%［2-4］。靶向治療的酪氨酸激酶抑制劑在HCC系統(tǒng)治療中發(fā)揮重要作用?？诜嗍荏w酪氨酸激酶抑制劑侖伐替尼具有抗腫瘤增殖和免疫調(diào)節(jié)活性［5-6］，作為系統(tǒng)抗腫瘤治療的一線藥物，適用于不可切除的輕度肝功能不全（Child Pugh A級）的晚期肝癌患者［3］。

細(xì)胞色素P450 3A4（CYP3A4）是參與人體內(nèi)侖伐替尼代謝的主要代謝酶，此外，侖伐替尼是P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）的一種底物，并且對P-gp及BCRP介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運有輕微抑制或無抑制作用［7-9］。目前，關(guān)于侖伐替尼相互作用的研究數(shù)據(jù)較少，臨床上尚無相關(guān)藥物相互作用的報道［10］。高血壓（42%）、腹瀉（39%）、食欲下降（34%）等是侖伐替尼臨床治療相關(guān)的最常見的不良反應(yīng)，侖伐替尼與抗高血壓藥物聯(lián)合用藥情況較為普遍，其中鈣通道阻滯劑（calcium channel blocker，CCB）是臨床最常用的降壓藥物［11］，研究［12］表明，CCB與酪氨酸激酶抑制劑治療期間血壓顯著降低相關(guān)。氨氯地平是一種臨床常用的CCB，主要通過CYP3A4代謝，同時也是P-gp的底物［13-14］。鈣拮抗劑通常對P-gp有不同程度的抑制作用［15］，有研究［16］結(jié)果表明，氨氯地平以濃度依賴性方式調(diào)節(jié)P-gp底物的轉(zhuǎn)運體依賴的跨膜流量，同時，氨氯地平是BCRP中等強度抑制劑［17］。此外，氨氯地平可能通過抑制P-gp和CYP3A2提高大鼠體內(nèi)他克莫司的血濃度［18］，作為P-gp的底物，氨氯地平可顯著增加環(huán)孢素A的AUC0 2 h，顯著增加環(huán)孢素A的吸收［19］。左氨氯地平是氨氯地平左旋體，相關(guān)藥物動力學(xué)研究數(shù)據(jù)較少。因此，研究氨氯地平及左氨氯地平對侖伐替尼藥物動力學(xué)的影響并初步探討機制，將對臨床合理聯(lián)合用藥具有重要意義。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1儀器LC-30A型超高效液相色譜儀（日本島津公司）含LC-30AD型二元高壓梯度泵，SIL30AC型自動進樣器，CTO30A柱溫箱室；AB Sciex 5500型三重四極桿質(zhì)譜儀（美國AB公司）配備Turbo VTM型電噴霧離子化源和三重四級桿質(zhì)量分析器；EXT-C18色譜柱［月旭科技（上海）股份有限公司］；NewClassic電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；移液槍（德國Eppendorf公司）；渦旋振蕩器（Thermo Scientific）；高速冷凍離心機（美國Thermo Fisher公司）；KQ5200E超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；S1010E型離心機（美國SCILOGEX公司）。?80℃超低溫冰箱（美國Thermo Fisher公司）；ABI 7500實時熒光定量PCR儀（美國Thermo Fisher公司）；組織包埋盒（江蘇世泰實驗器材有限公司）；Multiskan Mk3型酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems公司）；全自動樣品冷凍研磨儀（上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司）。

1.1.2藥品與試劑侖伐替尼（純度：98%，批號：Q75191201，石藥集團）；2H5-侖伐替尼（純度：99.5%，批號：ZZS-20-624-A9，上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司）；苯磺酸氨氯地平（純度：99.9%，批號：100374-202106，中國食品藥品檢定研究院）；苯磺酸左氨氯地平（純度：99.9%，批號：100546-202105，中國食品藥品檢定研究院）；羧甲基纖維素鈉；乙腈、乙酸銨及甲酸（高效液相色譜純級，賽默飛世爾科技有限公司）；純水（娃哈哈飲用純凈水）；TRNzol Universal總RNA提取試劑（批號：Y1418）、FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒（批號：y1915-zs）、SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）熒光定量預(yù)混試劑增強版（批號：y1822-zs）購自北京天根生化科技有限公司；引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成。

1.1.3實驗動物健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，清潔級，體質(zhì)量220～280 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2019-0008。大鼠在溫度為23～27℃、濕度為40%～60%、12 h晝夜循環(huán)的控制環(huán)境中適應(yīng)1周，動物可以自由進食和飲水。實驗開始前12 h，禁食，可自由飲水。動物使用許可證號：SYXK（冀）2020-005。

1.2方法

1.2.1色譜條件色譜柱：EXT-C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，2.7μm），含5 mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）為流動相，采用梯度洗脫0～1 min：60%B；1～2 min：60%→90%B；2～4 min：90%B；4～4.1 min：90%→60%B；4.1～5.1 min：60%B。流速0.25 mL/min，進樣體積為1μL。

1.2.2質(zhì)譜條件ESI源正離子模式，離子源溫度600℃，侖伐替尼的定量監(jiān)測離子對為m/z 427.2→370.1，內(nèi)標(biāo)2H5-侖伐替尼的定量監(jiān)測離子對為m/z 432.2→369.8（圖1）。去簇電壓DP為120 V，碰撞能量CE為34 V，氣簾氣為20.0 psi、源噴射電壓為5 500 V、Gas 1為60.0 psi、Gas 2為65.0 psi。

1.2.3儲備液和工作液的制備精密稱取侖伐替尼適量，用二甲基亞砜（DMSO）溶解，得到濃度為2 mg/mL的儲備液，用50%乙腈水逐級稀釋為質(zhì)量濃度為25 000、10 000、5 000、2 000、500、200、100、20 ng/mL的工作溶液。用相同的方法制備得到20 000、1 000、50 ng/mL的質(zhì)控工作液。精密稱取2H5-侖伐替尼適量，DMSO溶解得到1 mg/mL的儲備液，用50%乙腈水稀釋內(nèi)標(biāo)儲備液得到50 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣本的制備45μL的空白血漿，分別加入5μL的系列工作溶液，得到濃度為2、10、20、50、200、500、1 000、2 500 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度點，同法制得濃度為5、100、2 000 ng/mL的質(zhì)控樣本。

1.2.5血漿樣品處理50μL血漿樣品，加入內(nèi)標(biāo)工作溶液5μL，300μL乙腈，渦旋混合，13 400×g離心10 min。取上清液轉(zhuǎn)移至進樣小瓶用于進樣分析。

1.3方法學(xué)驗證

1.3.1選擇性通過比較6份來自不同大鼠的空白血漿、定量限血漿樣本及大鼠灌胃給予侖伐替尼后真實血漿樣品的峰面積，評價選擇性，以確定血漿中是否有內(nèi)源性成分干擾侖伐替尼的檢測。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為2、10、20、50、200、500、1 000、2 500 ng/mL，線性回歸分析采用加權(quán)最小二乘法，以標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度為橫坐標(biāo)，分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，以1/x2為權(quán)重因子，進行曲線擬合得回歸方程，定量下限為標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度的最低點。

1.3.3精密度和準(zhǔn)確度按照“1.2.5”項處理定量下限血漿樣品和低、中、高濃度的質(zhì)控樣品，每一濃度平行進行6份，通過計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）和相對誤差（RE）來評估批內(nèi)的精密度和準(zhǔn)確度。通過連續(xù)3 d測定來評估批間精密度和準(zhǔn)確度。質(zhì)控樣品RSD、RE應(yīng)小于15%，定量下限的RSD、RE應(yīng)小于20%。

1.3.4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)使用不同來源的空白大鼠血漿配制低、中、高濃度的質(zhì)控樣品，每個濃度6份，按前文“1.2.5”處理，進樣記錄峰面積為A；用乙腈沉淀空白血漿后得到基質(zhì)溶液，向基質(zhì)溶液加入低、中、高質(zhì)控侖伐替尼及內(nèi)標(biāo)溶液，進樣得到基質(zhì)存在下的峰面積為B；用乙腈稀釋侖伐替尼的質(zhì)控溶液和內(nèi)標(biāo)工作液制備分析物和內(nèi)標(biāo)的純?nèi)芤?，進樣得到不存在基質(zhì)時的峰面積為C。提取回收率為A/B，基質(zhì)效應(yīng)為B/C。

1.3.5穩(wěn)定性通過分析低、中、高濃度的質(zhì)控樣品，每個濃度6個樣品，評估大鼠血漿中侖伐替尼的穩(wěn)定性?？疾靵龇ヌ婺崮M血漿樣品在室溫下放置8 h，處理后的樣品置于自動進樣器中12 h的短期穩(wěn)定性，凍融3次的穩(wěn)定性，以及在?20℃下凍存30 d的長期穩(wěn)定性。根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線分析質(zhì)控樣品的濃度，測得濃度應(yīng)當(dāng)在標(biāo)示濃度的85%～115%，RSD應(yīng)小于15%。

1.4藥代動力學(xué)實驗18只雄性SD大鼠隨機分為3組，每組6只，A組為侖伐替尼對照組，B組為氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組，C組為左氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組。氨氯地平、左氨氯地平及侖伐替尼灌胃液用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）（含2.5%DMSO）溶液配制。A組：連續(xù)8 d給予空白溶劑0.5%CMC-Na（含2.5%DMSO）；B組：連續(xù)8 d灌胃1.0 mg/kg的氨氯地平；C組：連續(xù)8 d灌胃0.5 mg/kg的左氨氯地平；在第8天灌胃1 min后，所有組均灌胃給予1.2 mg/kg的侖伐替尼。于侖伐替尼給藥前以及給藥后0.25、0.5、1、2、3、4、8、12、24、48、72、96 h從眼內(nèi)眥靜脈叢取約0.3 mL血置于肝素化的離心管中，在離心機中以7 200 r/min，離心9 min，將上層血漿轉(zhuǎn)移至新的離心管中，冷藏備用［20］。按“1.2.5”處理血漿樣品，按“1.2.1”“1.2.2”測定大鼠血漿中侖伐替尼的濃度。采用DAS 2.1.1軟件非房室模型，計算藥代動力學(xué)參數(shù)。

1.5動物組織采集采血結(jié)束后，繼續(xù)分組灌胃氨氯地平及左氨氯地平8 d，以2%的戊巴比妥腹腔注射麻醉大鼠，迅速取出肝臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗污物及血漬，濾紙吸干表面水分，轉(zhuǎn)移至包埋盒中于液氮中速凍，最終轉(zhuǎn)移至?80℃冰箱凍存使用。

1.6 RT-qPCR檢測肝臟mRNA表達(dá)水平使用總RNA快速抽提試劑盒提取肝組織中的總RNA，測定總RNA的濃度，根據(jù)260 nm與280 nm的吸光度（A）比值評估總RNA的純度，該值在1.8～2.0。使用FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）試劑盒進行定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)程序設(shè)置預(yù)變性95℃持續(xù)15 min，PCR反應(yīng)（40個循環(huán)，95℃、10 s，60℃、32 s），引物序列見表1。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料采用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗；不符合正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)（最小值～最大值）表示，組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1方法學(xué)驗證

2.1.1選擇性侖伐替尼和2H5-侖伐替尼的保留時間均為1.19 min。空白血漿、定量下限的侖伐替尼血漿樣本對照組、侖伐替尼灌胃給藥后大鼠實際血漿樣本組的色譜圖見圖2。在分析物和內(nèi)標(biāo)的保留時間處沒有干擾峰，其響應(yīng)低于侖伐替尼定量下限的20%，說明空白血漿中的物質(zhì)不干擾分析物的測定。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限侖伐替尼在2～2 500 ng/mL具有良好的線性，典型的校準(zhǔn)曲線為Y=0.198X+0.004 66（rgt;0.999）。所有標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度點的回算濃度均在標(biāo)示值的15%以內(nèi)。定量下限為2 ng/mL，具有可接受的精密度與準(zhǔn)確度。

2.1.3精密度和準(zhǔn)確度侖伐替尼的批內(nèi)、批間RSD在2.5%～6.1%范圍內(nèi)，批內(nèi)、批間RE在2.7%～9.0%范圍內(nèi)，結(jié)果表明批內(nèi)、批間精密度和準(zhǔn)確度均在可接受的范圍內(nèi)，結(jié)果見表2。該方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.1.4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)侖伐替尼的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見表3，結(jié)果表明，侖伐替尼的提取回收率88.25%～97.91%，基質(zhì)效應(yīng)98.32%～104.23%，RSD在3.7%～12.6%范圍內(nèi)。該方法具有良好的提取回收，基質(zhì)的存在不影響侖伐替尼的準(zhǔn)確定量。

2.1.5穩(wěn)定性穩(wěn)定性結(jié)果見表4，結(jié)果表明侖伐替尼血漿在室溫下放置8 h，處理后的樣品置于自動進樣器中12 h，凍融3次（?20℃至室溫，室溫至?20℃）及在?20℃長期儲存30 d都是穩(wěn)定的。

2.2大鼠體內(nèi)藥物動力學(xué)結(jié)果侖伐替尼單獨給藥與聯(lián)合氨氯地平及左氨氯地平時侖伐替尼的血藥濃度-時間曲線見圖3，主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表5。結(jié)果顯示，與對照組單獨應(yīng)用侖伐替尼相比，連續(xù)8 d灌胃氨氯地平，可使侖伐替尼的AUC0-∞升高36.1%（Plt;0.05）、CLz/F下降26.1%（Plt;0.05）、Cmax升高56.7%（Plt;0.01）；連續(xù)8 d灌胃左氨氯地平，使侖伐替尼Cmax升高37.7%（Plt;0.05）。

2.3氨氯地平及左氨氯地平對肝臟mRNA表達(dá)水平的影響3組間CYP3A1、P-gp和BCRP mRNA的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為10.160、5.350、5.237，P值均lt;0.05），與侖伐替尼組比較，氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組大鼠肝臟中CYP3A1、P-gp和BCRP mRNA表達(dá)明顯受到抑制（P值均lt;0.05），而左氨氯地平聯(lián)合侖伐替尼組大鼠肝臟中只有CYP3A1 mRNA表達(dá)明顯受到抑制（Plt;0.05）（圖4）。

3討論

腫瘤患者共患病的情況普遍存在，因應(yīng)對抗腫瘤治療導(dǎo)致的不良反應(yīng)而采取聯(lián)合用藥的情況也較為常見。由于腫瘤患者病情復(fù)雜，聯(lián)合用藥發(fā)生的藥物相互作用較為隱匿，不易察覺。對于經(jīng)常出現(xiàn)的聯(lián)合用藥進行相互作用研究，有助于臨床遴選藥物，保障患者合理用藥。高血壓是侖伐替尼最常見的不良反應(yīng)，氨氯地平及左氨氯地平降壓平穩(wěn)、用藥方便且價格便宜，為臨床常用的降壓藥物。目前，已有降糖藥物卡格列凈、降壓藥物替米沙坦及保肝藥物成分五味子甲素與侖伐替尼的相互作用研究［21-23］，但尚無CCB類降壓藥物與侖伐替尼相互作用研究報道，本實驗對氨氯地平與左氨氯地平進行對比研究，立足臨床聯(lián)合用藥，其結(jié)果具有一定的臨床用藥指導(dǎo)價值。

藥代動力學(xué)結(jié)果表明，氨氯地平及左氨氯地平均對侖伐替尼的藥代動力學(xué)參數(shù)有所影響，且氨氯地平相比左氨氯地平與侖伐替尼之間的藥物相互作用更加顯著。本研究中大鼠侖伐替尼給藥劑量是按照人體12 mg每天換算而來，是體質(zhì)量≥60 kg的患者使用的標(biāo)準(zhǔn)劑量，AUC升高至1.36倍，相當(dāng)于給藥劑量相應(yīng)提高，可能增加高血壓等不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險。由于接受侖伐替尼的患者出現(xiàn)不良事件的風(fēng)險很高［11］，聯(lián)合用藥時，更應(yīng)加強監(jiān)測并及時調(diào)整。此外，氨氯地平使侖伐替尼的AUC0∞升高至1.36倍，大于1.25倍且小于2倍，符合弱抑制藥標(biāo)準(zhǔn)［24］，表明氨氯地平對大鼠侖伐替尼體內(nèi)過程可能存在弱抑制，其作用機制可能是氨氯地平及左氨氯地平影響了大鼠肝臟中與侖伐替尼相關(guān)的代謝酶及轉(zhuǎn)運體。

侖伐替尼在人體內(nèi)主要經(jīng)CYP3A4代謝，并且是P-gp、BCRP的底物，因此采用RT-qPCR檢測大鼠肝臟P-gp、BCRP、CYP3A1（對應(yīng)人類CYP3A4）的mRNA表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果表明，氨氯地平可能通過抑制大鼠肝臟CYP3A1延緩侖伐替尼的代謝，通過抑制肝臟膽管膜上P-gp減緩侖伐替尼經(jīng)膽汁排泄，從而整體延緩侖伐替尼代謝，增加侖伐替尼的體內(nèi)暴露量；左氨氯地平可能通過抑制肝臟CYP3A1延緩侖伐替尼的代謝，一定程度上增加了侖伐替尼的體內(nèi)暴露。

總之，當(dāng)臨床上應(yīng)用侖伐替尼聯(lián)合氨氯地平時，可能致使侖伐替尼體內(nèi)暴露增加，進而增加不良反應(yīng)。左氨氯地平相比氨氯地平，用藥劑量低，不良反應(yīng)少，且對侖伐替尼藥物動力學(xué)影響更小，可能相對更安全。本研究是以大鼠為研究對象進行的藥物動力學(xué)研究，受種屬差異的影響，可能與人體體內(nèi)情況并非完全一致，尚需進一步臨床試驗研究。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2022年4月15日經(jīng)由河北省人民醫(yī)院實驗動物倫理委員會審批，批號：202216，符合實驗室動物管理與使用準(zhǔn)則。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：閆彬負(fù)責(zé)查閱文獻(xiàn)、實驗設(shè)計、實驗操作及撰寫論文；曹格溪、鄧艷茹和李穎負(fù)責(zé)協(xié)助實驗設(shè)計并解決實驗中遇到的問題；董占軍和白萬軍負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-04-01；錄用日期：2024-05-06

本文編輯：林姣

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