江蘇省大豆豆莢真菌病害的病原菌分離與鑒定

收稿日期：2024-02-06

基金項(xiàng)目：生物育種鐘山實(shí)驗(yàn)室基金項(xiàng)目（ZSBBL-KY2023-03）；農(nóng)業(yè)生物育種重大項(xiàng)目（2023ZD0403402）；江蘇省種業(yè)振興“揭榜掛帥 ”項(xiàng)目[JBGS（2021）057]；江蘇省林業(yè)科技創(chuàng)新與推廣項(xiàng)目[LYKJ-盱胎（2023）1號(hào)]

作者簡(jiǎn)介：李藝陽(yáng)（2000-），女，江蘇鹽城人，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹参锊±韺W(xué)。（ E-mail）1871561437@qq.com； 吳冕為共同第一作者。

通訊作者：崔曉艷，（E-mail）cxy@jaas.ac.cn

摘要： 真菌引起的大豆豆莢病害直接影響大豆籽粒及鮮食豆莢的產(chǎn)量和品質(zhì)，為了解江蘇省大豆豆莢病害的主要致病菌，本研究從南京、淮安、徐州、南通、鹽城的大豆種植區(qū)內(nèi)采集了78份有明顯病斑的豆莢，通過病原菌組織分離與純化得到112種病原菌。通過對(duì)比ITS與TUB2序列，112種病原菌被分為半知菌亞門的5個(gè)屬：鐮刀菌屬（Fusarium spp.）、炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）、擬莖點(diǎn)霉屬（Diaporthe spp.）、黑孢菌屬（Nigrospora spp.）和色二孢屬（Lasiodiplodia spp.）。其中鐮刀菌屬占比最高，占65.18%。從每個(gè)屬中選擇1個(gè)病原菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察以及柯赫氏法則驗(yàn)證，并結(jié)合分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)演化分析。結(jié)果證明5個(gè)分離物分別屬于層出鐮刀菌（F. proliferatum）、平頭炭疽菌（C. truncatum）、大豆擬莖點(diǎn)霉菌（D. longicolla）、球黑孢菌（N. sphaerica）和假可可毛色二孢菌（L. pseudotheobromae）。本研究明確了為害江蘇省大豆豆莢的主要病原菌，為大豆豆莢真菌病害的有效防控提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 大豆；真菌病害；病原菌鑒定

中圖分類號(hào)： S435.651"" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A"" 文章編號(hào)： 1000-4440（2024）10-1801-09

Isolation and identification of the pathogens causing soybean pod fungal diseases in Jiangsu province

LI Yiyang^1，2， WU Mian²， GU Heping²， CHEN Xin²， CUI Xiaoyan^1，2

（1.College of Plant Protection， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China； 2.Institute of Industrial Crops， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Zhongshan Biological Breeding Laboratory， Nanjing 210014， China）

Abstract： Soybean pod diseases caused by fungi directly affect the yield and quality of soybean seeds and fresh pods. In this study， 112 pathogens were isolated and purified from 78 diseased pods collected from soybean growing areas in Nanjing， Huai’an， Xuzhou， Nantong and Yancheng. By comparing ITS and TUB2 sequences， 112 species of pathogens were classified into five genera of Deuteromycotina： Fusarium spp.， Colletotrichum spp.， Diaporthe spp.， Nigrospora spp. and Lasiodiplodia spp. Among them， Fusarium spp. accounted for the highest proportion （65.18%）. One pathogen from each genus was selected for morphological observation and Koch’s rule validation， and molecular biological identification and phylogenetic analysis were carried out. The results showed that the five isolates belonged to Fusarium proliferatum， Colletotrichum truncatum， Diaporthe longicolla， Nigrospora sphaerica and Lasiodiplodia pseudotheobromae， respectively. This study identified the main pathogens of soybean pods in Jiangsu province， providing a theoretical basis for effective control of soybean pod fungal diseases.

Key words： soybean；fungal diseases；pathogen identification

大豆[Glycine max（L.）Merr.]是中國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，它是人類植物蛋白的主要來源，也可用于加工優(yōu)質(zhì)飼料和農(nóng)副產(chǎn)品，在日常生產(chǎn)中不可或缺^[1-2]。近年來，隨著國(guó)家持續(xù)推進(jìn)大豆-玉米帶狀復(fù)合種植、糧豆輪作、鹽堿地開發(fā)利用等產(chǎn)能提升工程，大豆總產(chǎn)量有所提高，初步緩解了大豆產(chǎn)需缺口大、嚴(yán)重依賴進(jìn)口等問題^[3]。但隨著復(fù)種指數(shù)的增加，實(shí)際生產(chǎn)中大豆病蟲害發(fā)生頻率也在逐年提高，大豆病蟲害包括真菌病害、病毒病害、細(xì)菌病害、蟲害等，種類多，危害大。據(jù)報(bào)道，全球已知的大豆病害有70余種，其中在中國(guó)發(fā)生的大豆病害有40余種，常見的病害有10余種^[4]。

前人研究發(fā)現(xiàn)，真菌侵染會(huì)使大豆豆莢發(fā)病，引起大豆豆莢干枯、豆莢萎縮及豆莢腐爛，是大豆豆莢上最為常見的病害^[5]，目前已報(bào)道的豆莢真菌病害主要有大豆炭疽?。⊿oybean anthracnose）、大豆紫斑?。⊿oybean cercospora spot）、大豆莢枯?。⊿oybean pod blight）、大豆黑斑病（Soybean black spot）等。大豆炭疽病是由炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）真菌引起，炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）真菌包括平頭炭疽菌（C. truncatum）等10余種^[6-7]；菊池尾孢菌（Cercospora kikuchii）是大豆紫斑病的病原菌^[8]；大豆莢枯病的病原菌主要是鐮刀菌屬（Fusarium spp.）真菌，鐮刀菌屬（Fusarium spp.）真菌包括木賊鐮刀菌（F. equiseti）等10余種^[9]；鏈格孢屬真菌（Alternaria spp.）是大豆黑斑病的病原菌，包括鏈格孢（A. alternata）、蕓苔鏈格孢（A. brassicae）、細(xì)極鏈格孢（A. tenuissima）^[10]。豆莢真菌病害的病原菌數(shù)量繁多，種類復(fù)雜，同一種大豆病害可能是由同一屬不同種的病原菌引起的，而不同種病原菌的形態(tài)特征、致病性、侵染規(guī)律、對(duì)殺菌劑的敏感性都不盡相同^[11]，因此需要對(duì)病原菌進(jìn)行精細(xì)鑒定。

由于發(fā)現(xiàn)的病原菌種類的增多和屬種間的區(qū)別較小，利用傳統(tǒng)的基于病原菌形態(tài)特征的病原菌鑒別技術(shù)難以對(duì)致病菌進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基因測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用越來越廣泛，目前ITS、HIS3、TUB2、GAPDH和CHS-1等多基因特征序列分析在物種的屬級(jí)和種級(jí)進(jìn)化關(guān)系分析和鑒定中發(fā)揮了重要的作用，也是目前常用的病原菌鑒定方法^[12]。

本研究采集了江蘇南京、淮安、徐州、南通、鹽城5個(gè)地區(qū)大豆種植區(qū)內(nèi)的病莢，擬通過組織分離與純化，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察與分子生物學(xué)鑒定，明確江蘇省引起大豆豆莢發(fā)病的主要病原菌，為今后江蘇地區(qū)大豆豆莢真菌病害的防控及抗病品種的選育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病樣的采集

本研究于2023年大豆生長(zhǎng)季（始粒期-滿粒期）在江蘇南京、淮安、徐州、南通、鹽城5個(gè)地區(qū)的大豆種植區(qū)內(nèi)采集具有明顯病斑的豆莢樣品，標(biāo)記后于-20 ℃冰箱保存。

1.2 病原菌的分離純化與保存

將采集到的豆莢用清水沖洗，在病健交界處取數(shù)塊2 mm×2 mm的植物組織，置于75%酒精中浸泡30 s，隨后在NaClO溶液（有效氯濃度為2%）中浸泡2 min，用去離子水沖洗3遍。將處理后的植物組織放入PDA培養(yǎng)基（含50 μg/mL的利福平和氨芐青霉素）中密封，25 ℃暗培養(yǎng)48 h。

取3～5塊PDA培養(yǎng)基上菌落邊緣的菌絲塊（2 mm×2 mm），放入15 mL無菌水中用勻漿機(jī)打碎，吸取60 μL液體均勻涂布在濃度為3% 的WA培養(yǎng)基（含50 μg/mL的利福平和氨芐青霉素）上，25 ℃暗培養(yǎng)24～48 h。挑取單根菌絲轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)7 d。挑取菌落邊緣菌絲于PDB培養(yǎng)基中，120 r/min振動(dòng)培養(yǎng)5 d后吸取培養(yǎng)液置于凍存管中，于-80 ℃冰箱中長(zhǎng)期保存。

1.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定

以核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)基因（ITS）序列和β-微管蛋白2基因（TUB2）序列為模版，設(shè)計(jì)引物ITS-ITS4（TCCTCCGCTTATTGATATGC）/ITS5（GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG）；TUB2-T1（AACATGCGTGAGATTGTAAGT）/Bt2b（ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC），PCR擴(kuò)增病原菌DNA。擴(kuò)增產(chǎn)物由擎科生物工程（南京）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果在NCBI（美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中進(jìn)行BLAST比對(duì)，確定病原菌的種屬。同時(shí)下載與病原菌ITS序列和TUB2序列相似性高的序列，利用MEGA-X軟件中的最大似然法（ML）構(gòu)建病原菌和相似菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹，分析病原菌與相似菌種的親緣關(guān)系。

1.4 病原菌的形態(tài)學(xué)觀察

首先肉眼觀察25 ℃暗培養(yǎng)的純化分離物的菌落顏色、菌絲形態(tài)，吸取無菌水輕輕沖洗菌落，將孢子沖出后，用熒光顯微鏡觀察孢子形態(tài)及大小。若病原菌的孢子無法被沖洗出，取菌絲塊置于PDB培養(yǎng)基中，25 ℃條件下120 r/min振動(dòng)培養(yǎng)5 d至產(chǎn)孢后再用顯微鏡觀察。

1.5 柯赫氏法則驗(yàn)證

參考大豆黃化苗接種大豆炭疽病病原菌的方法^[13]，在裝有濕潤(rùn)蛭石的花盆中均勻播種大豆，用黑色塑料袋覆蓋花盆，暗培養(yǎng)4～5 d，將5 cm黃化苗拔出，沖洗干凈后備用。用直徑為0.5 cm的打孔器在PDA平板培養(yǎng)基的菌落邊緣打孔，取菌絲塊，并將長(zhǎng)有菌絲的一面貼在在大豆黃化苗下胚軸部位，用濕潤(rùn)的吸水紙將接種部位包裹起來，并在外面包裹1層無菌錫紙，放于25 ℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，12 h光照與12 h黑暗交替，記錄發(fā)病情況。切取黃化苗發(fā)病組織置于PDA培養(yǎng)基（含有50 μg/mL利福平和50 μg/mL氨芐青霉素）中培養(yǎng)，觀察形成的菌落形態(tài)，并提取DNA進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，完成柯赫氏法則驗(yàn)證。

2 結(jié)果與分析

2.1 感病豆莢的采集

在江蘇省南京、徐州、淮安、南通、鹽城5個(gè)城市的大豆種植區(qū)內(nèi)采集78份大豆病莢。其中，在南京市共采集到29份大豆病莢（六合區(qū)16份、浦口區(qū)8份、玄武區(qū)5份）；在徐州市銅山區(qū)共采集到15份大豆病莢；在淮安市共采集到15份大豆病莢（淮陰區(qū)3份，洪澤區(qū)12份）；在南通市如東縣共采集到9份大豆病莢；在鹽城市共采集到10份大豆病莢（濱?？h6份、鹽都區(qū)4份）。

采集的感病豆莢表面均有圓形或不規(guī)則的黑色斑塊，有的病斑有暈圈，隨著病原菌侵染程度的加深，病斑面積也逐漸擴(kuò)大，直至侵染整個(gè)豆莢，使豆莢干枯、籽粒干癟，嚴(yán)重時(shí)大豆顆粒無收（圖1）。

2.2 病原菌的初步鑒定

對(duì)病原菌進(jìn)行分離和純化，在78份大豆病莢中共分離出112種病原菌，利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)112種病原菌的ITS和TUB2序列，將這112種病原菌分為5個(gè)屬，分別是鐮刀菌屬（Fusarium spp.）（73種）、炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）（15種）、擬莖點(diǎn)霉屬（Diaporthe spp.）（10種）、黑孢菌屬（Nigrospora spp.）（9種）和色二孢屬（Lasiodiplodia spp.）（5種），均屬于半知菌亞門真菌。其中鐮刀菌屬真菌占比最大，為65.18%；其次是炭疽菌屬真菌，占13.39%，擬莖點(diǎn)霉屬、黑孢菌屬和色二孢屬真菌占比均低于10.00%（圖2A）。在南京、徐州、淮安、南通、鹽城5個(gè)城市的大豆病莢中均分離到鐮刀菌屬真菌，說明該菌屬分布廣泛。炭疽菌屬真菌和擬莖點(diǎn)霉屬真菌在南京、淮安、徐州、鹽城的大豆病莢中被分離到，黑孢菌屬真菌在南京、淮安、南通、鹽城的大豆病莢中被分離到。色二孢屬真菌的檢出率較低，僅在南通地區(qū)的大豆病莢中被分離到（圖2B）。

2.3 病原菌的系統(tǒng)發(fā)育分析

從每個(gè)菌屬中選擇3種病原菌進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，編號(hào)如表1所示。選擇稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae PO-FA28）作為外類群構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示，系統(tǒng)發(fā)育樹共被分為5個(gè)支系，分別對(duì)應(yīng)鐮刀菌屬（Fusarium spp.）、黑孢菌屬（Nigrospora spp.）、炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）、色二孢屬（Lasiodiplodia spp.）和擬莖點(diǎn)霉屬（Diaporthe spp.）5個(gè)菌屬，均有較高的支持率（99.0%～100.0%）（圖3）。

NJLH15、NJXW30、XZ18屬于鐮刀菌屬，NJLH15與層出鐮刀菌（F. proliferatum）聚在一起，支持率為85.4%；NJXW30與串珠鐮刀菌（F. verticillioides）聚在一起，支持率為33.4%；XZ18單獨(dú)為一支，其臨近分支是木賊鐮刀菌（F. equiseti）和變紅鐮刀菌（F. incarnatum），支持率為100.0%。NJJP19、NJLH9、NT8屬于黑孢菌屬，NJJP19、NJLH9均與球黑孢菌（N. sphaerica）聚在一起，支持率分別為18.2%、41.6%；NT8為單獨(dú)一支，其臨近分支是黑孢菌（Nigrospora sp.）和稻黑孢菌（N. oryzae），但支持率較低，為5.6%。HADJ20、HADJ19、YC5屬于炭疽菌屬，YC5以37.8%的支持率與平頭炭疽菌（C. truncatum）聚在一起，HADJ20、HADJ19均單獨(dú)為一支，HADJ20的鄰近分支是平頭炭疽菌（C. truncatum），支持率為100.0%，HADJ19以44.4%的支持率與臨近分支大豆炭疽菌（C. sojae）和尖孢炭疽菌（C. acutatum）聚在一起。NT1、NT2、NT5屬于色二孢屬，NT2和NT5均與假可可毛色二孢菌（L. pseudotheobromae）聚在一起，支持率分別為86.8%和27.4%；NT1單獨(dú)為一支，臨近分支為假可可毛色二孢菌（L. pseudotheobromae），支持率為60.4%。YCBH8、XZ16、NJLH17屬于擬莖點(diǎn)霉屬，XZ16、NJLH17分別與大豆內(nèi)生間座殼真菌和大豆南方莖潰瘍病菌（D. phaseolorum）聚在一起，支持率分別為75.2%、69.8%，YCBH8單獨(dú)為一支，其鄰近分支是大豆擬莖點(diǎn)霉菌（D. longicolla），支持率為87.4%（圖3）。

2.4 病原菌的形態(tài)學(xué)特征

從每個(gè)菌屬中選擇1種病原菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，選取的病原菌分別為NJLH15、HADJ20、YCBH8、NJJP19、NT1。NJLH15的菌落中心為橘紅色，向外漸變?yōu)榘咨?，形狀呈較為規(guī)則的圓形，氣生菌絲茂密，呈絨毛狀（圖4A、圖4B）；NJLH15的小型分生孢子呈橢圓形，無色，大小為（5～15）μm×（2～3）μm；大型分生孢子呈鐮刀形，略微彎曲，具有1～5個(gè)隔膜，基部有足胞，無色，大小為（15～45）μm ×（2～5）μm（圖4C）；NJLH15厚垣孢子呈球形或近球形，大小為（8～10）μm×（5～10）μm（圖4D）。NJLH15與層出鐮刀菌（F. proliferatum）在系統(tǒng)發(fā)育樹上聚在一起，支持率為85.4%，同時(shí)，NJLH15的形態(tài)特征與F. proliferatum非常相似^[14]，因此將NJLH15鑒定為F. proliferatum成員。

HADJ20的菌落生長(zhǎng)初期為純白色，后逐步變?yōu)樯罨?，菌落外觀呈圓形或近圓形，菌絲緊密（圖5A、圖5B）；分生孢子盤黑色，生有深棕色、具分隔的剛毛（圖5C）；分生孢子為單孢孢子，呈鐮刀狀，無隔膜，無色，大小為（15～38）μm×（2～5）μm（圖5D）。HADJ20雖然在系統(tǒng)發(fā)育樹上為一個(gè)單獨(dú)的分支，但其鄰近分支是平頭炭疽菌（C. truncatum），支持率為100% ，且HADJ20的形態(tài)特征與C. truncatum^[15]非常相似，因此將 HADJ20鑒定為C. truncatum成員。

YCBH8的菌落生長(zhǎng)初期為白色，后逐漸變?yōu)榈S色，培養(yǎng)基背面可見黑色子座，形狀呈圓形或近圓形（圖6A、圖6B）。α型分生孢子呈長(zhǎng)橢圓形，單孢，無色，含有2個(gè)油滴，大小為（5～12） μm×（2～4） μm（圖6C），未觀察到β型分生孢子。YCBH8雖然在系統(tǒng)發(fā)育樹上為一個(gè)單獨(dú)為分支，但其鄰近分支是大豆擬莖點(diǎn)霉菌（D. longicolla），支持率為87.4%，且YCBH8的形態(tài)特征與D. longicolla^[16]大體相似，因此將 YCBH8鑒定為D. longicolla成員。

NJJP19的菌落生長(zhǎng)初期為白色，后逐漸變?yōu)榛疑?，菌落形狀不?guī)則，邊緣呈波浪形，隨著分生孢子的產(chǎn)生，菌落逐漸變?yōu)楹稚蚝谏▓D7A、圖7B）。分生孢子為單孢孢子，亮黑色，呈橢圓形或球形，分生孢子單個(gè)頂生，大小為（10～18） μm×（8～12） μm（圖7C、圖7D）。NJJP19與球黑孢菌（N. sphaerica）聚在一起，支持率較低，僅為18.2%，但NJJP19的形態(tài)特征與N. sphaerica^[17]非常相似，因此將NJJP19鑒定為N. sphaerica成員。

NT1的菌落生長(zhǎng)初期為白色，后逐漸變?yōu)楹稚?，菌落邊緣?guī)整，氣生菌絲茂密，菌絲白色或灰色（圖8A、圖8B）。分生孢子為單孢孢子，無色透明，近似卵形，大小為（12～23） μm×（8～10） μm（圖8C），未見成熟分生孢子。NT-1為單獨(dú)的一個(gè)分支，其鄰近分支是假可可毛色二孢菌（L. pseudotheobromae），支持率為60.4%，且NT1的形態(tài)特征與L. pseudotheobromae^[18]相似，因此將NT1鑒定為L(zhǎng). pseudotheobromae成員。

2.5 柯赫氏法則驗(yàn)證

以大豆黃化苗下胚軸為試驗(yàn)材料，接種F. proliferatum、C. truncatum、D. longicolla、L. pseudotheobromae、N. sphaerica5種病原菌的菌絲，明確這5種病原菌的致病性。接種結(jié)果表明，5種病原菌均能導(dǎo)致大豆發(fā)病，但致病能力有所不同。根據(jù)病斑大小可以看出，接種F. proliferatum、C. truncatum、D. longicolla的黃化苗下胚軸發(fā)病嚴(yán)重，接種L. pseudotheobromae，N. sphaerica的黃化苗下胚軸癥狀非常輕（圖9A～圖9E）。分離發(fā)病部位的病原菌，再次進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定，結(jié)果顯示，分離得到的病原菌均與先前接種的病原菌相同（圖9F～圖9J），符合柯赫氏法則。

3 討論

本研究從江蘇省內(nèi)5個(gè)大豆種植區(qū)采集發(fā)病大豆豆莢，分離出112種病原菌，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)，112種病原菌屬于半知菌亞門的5個(gè)屬。其中鐮刀菌屬病原菌占比最大，為65.18%，并且在江蘇省的每個(gè)大豆種植區(qū)菌都分離到鐮刀菌屬病原菌?？芍牭毒鷮俨≡菫楹K省大豆豆莢的主要病原菌。前人研究發(fā)現(xiàn)，鐮刀菌能夠侵染各個(gè)生長(zhǎng)階段的大豆，造成幼苗枯萎、莢果和種子腐爛以及根腐病^[19-21]，所以不僅要注意防控大豆根部或莖基部的鐮刀菌，同時(shí)也要重視防控大豆鼓粒期或鮮莢采收期豆莢上的鐮刀菌。炭疽菌屬真菌和擬莖點(diǎn)霉屬真菌均是大豆生產(chǎn)中常見的病原菌，在江蘇省分布較為廣泛。炭疽菌主要侵染大豆豆莢，大豆發(fā)病癥狀為，豆莢表面形成不規(guī)則的黑褐色斑點(diǎn)。炭疽菌嚴(yán)重影響鮮食豆莢的品質(zhì)和產(chǎn)量^[22]。擬莖點(diǎn)霉菌是大豆種腐病和莖枯病的主要致病菌^[23-24]，目前國(guó)內(nèi)還沒有關(guān)于大豆豆莢中分離到擬莖點(diǎn)霉菌的報(bào)道，國(guó)外也鮮有相關(guān)報(bào)道。目前關(guān)于黑孢菌屬真菌和色二孢屬真菌在大豆上被分離到的報(bào)道極少，本研究中，黑孢菌屬真菌在江蘇省大豆種植區(qū)分布較為廣泛，在4個(gè)種植區(qū)均分離到該病原菌。黑孢菌屬真菌是內(nèi)生真菌，其代謝產(chǎn)物能顯著抑制多種作物的真菌病害，主要存在于無癥狀宿主體內(nèi)，可作為生防菌^[25]，對(duì)于本研究分離到的黑孢菌屬真菌是否也能抑制其他真菌還有待進(jìn)一步探究。色二孢屬真菌的占比最少，僅占4.46%，只在1個(gè)采集地被分離到。色二孢屬真菌是變色菌，對(duì)它的研究主要集中在木材染色等方面^[26]，在大豆上鮮少被報(bào)道。由此可見，各采集地區(qū)分離到的病原菌不盡相同，可能是因?yàn)椴煌纳鷳B(tài)環(huán)境或地理環(huán)境影響病原菌群體結(jié)構(gòu)和組成。

國(guó)外的諸多研究結(jié)果表明，多種病原菌能造成大豆豆莢病害。早在23年前，美國(guó)研究者Roy等^[27]對(duì)侵染北美大豆豆莢的真菌進(jìn)行了綜述：在北美地區(qū)的大豆感病豆莢中分離到88種病原菌，分屬于65個(gè)屬。中國(guó)鮮有對(duì)大豆豆莢真菌病害的病原菌進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查的研究，本研究發(fā)現(xiàn)，除L. pseudotheobromae外，其他本研究分離到的病原菌均在此綜述中出現(xiàn)，L. pseudotheobromae首次在大豆豆莢上被分離到，這豐富和完善了引起大豆豆莢病害的病原菌菌庫(kù)。

病害的分類是進(jìn)行病害精準(zhǔn)防控的基礎(chǔ)，病害的防控要考慮到植物保護(hù)的綜合性、整體性、預(yù)防性和前瞻性。大豆的病害防治也應(yīng)如此，病原菌鑒定只是基礎(chǔ)工作，下一步應(yīng)該培育抗病品種、合理輪作、協(xié)調(diào)田間水系、建立合適的群體結(jié)構(gòu)，努力協(xié)調(diào)好營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)的矛盾，將物理防控、化學(xué)防控、生物防控有機(jī)結(jié)合，才能對(duì)大豆病害取得較為理想的防治效果。

參考文獻(xiàn)：

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（責(zé)任編輯：成紓寒）