雞新城疫病毒的現(xiàn)場檢疫和實驗室檢驗方法研究分析

雞新城疫，作為一種烈性、病毒性的傳染病，對雞養(yǎng)殖業(yè)構(gòu)成了嚴重威脅。該病具有不間斷連續(xù)發(fā)病、大面積爆發(fā)、單一發(fā)病少、感染宿主多等流行病學特征，進一步增加了防控難度。病毒長期潛伏在自然環(huán)境中，更是對現(xiàn)場檢疫和實驗室檢驗提出了更高的挑戰(zhàn)。為了深入探討雞新城疫的防控策略，本文著重從現(xiàn)場檢疫與實驗室檢驗的角度出發(fā)，對該病的病原、流行特點及致病原因進行了全面分析。在此基礎上，明確了現(xiàn)場檢疫的方向，并對現(xiàn)場檢疫前調(diào)查、群體檢疫、活體檢疫、肉尸檢疫等關鍵環(huán)節(jié)的要點、臨床癥狀與剖檢表現(xiàn)進行了詳細論述。同時，本文還介紹了雞新城疫實驗室檢驗中常用的幾種方法，旨在為雞新城疫的檢疫工作提供有益的參考和借鑒。通過綜合應用這些方法，有望提高雞新城疫的檢疫效率，為雞養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供有力保障。

一、雞新城疫流行特征

1、雞新城疫病原

雞新城疫，也被稱為亞洲雞瘟，是一種高接觸性的傳染病，特別易感于雞類。感染后，病雞常出現(xiàn)敗血癥癥狀。此病的主要傳染源為病雞和帶毒雞，而雞新城疫病毒則是其病原，屬于副粘病毒亞科。該病毒具有近圓形的形態(tài)，配備有囊膜和纖突，其中囊膜直徑介于100～250nm之間，纖突長度大約為8nm。病毒的基因組由不分節(jié)段的單股負鏈RNA構(gòu)成。值得一提的是，該病毒展現(xiàn)出強大的生存能力。在室溫環(huán)境下，病毒可以存活超過200d。而在1℃～5℃的低溫環(huán)境中，其毒力甚至可以維持超過一年。然而，病毒對日光和溫濕條件較為敏感，這些環(huán)境條件下病毒的生存能力會減弱。此外，病毒對常見的消毒劑如酒精、氫氧化鈉和漂白粉等也相當敏感。在病毒學研究中，雞新城疫病毒顯示出一定的穩(wěn)定性。不同毒株之間的同源性約為95%。至今，已被識別的毒株類型主要有基因7型、基因8型和F48E7型。這些研究成果為防控雞新城疫提供了重要的理論依據(jù)。

2、流行特點

雞新城疫是一種烈性傳染病，具有高度的流行性和感染性，其傳播不受季節(jié)性限制，可感染各年齡段的雞群，但年齡超過二年的老雞感染概率較低。病毒通過呼吸道、消化道、皮膚傷口等多種途徑侵入雞體組織，其中高致病性毒株感染病雞的死亡率較高，潛伏期通常在2～7d。雞新城疫的病程可以分為最急性型、急性型和亞急性或慢性型。最急性型病雞通常在出現(xiàn)輕微臨床癥狀后突然死亡，急性型病程則持續(xù)2～5d，表現(xiàn)為體溫升高至43℃以上，口腔流出黏液等典型癥狀。而亞急性或慢性型病程較長，可持續(xù)10～20d，其臨床癥狀與急性型較為相似，但死亡率較低，癥狀明顯，可通過個體檢疫進行辨識。雞新城疫傳染特點使其發(fā)病急驟，最急性型和急性型的死亡率高，病毒在自然環(huán)境及雞養(yǎng)殖環(huán)境中長期潛伏，是雞的頭號傳染病。此外，非典型新城疫的出現(xiàn)也呈現(xiàn)出多發(fā)趨勢，多呈混合性感染，導致典型病變診斷價值下降。例如，雞新城疫典型病變診斷依據(jù)的腺胃乳頭出血癥狀，在禽流感、腺胃炎等疾病中也會出現(xiàn)。因此，為了提高雞新城疫診斷的準確性和檢出率，需要對其進行現(xiàn)場檢疫與實驗室檢驗的深度研究。通過明確該病的典型癥狀表現(xiàn)，總結(jié)出一套有效可行的檢疫檢驗方法，有助于及時識別和控制雞新城疫的流行，減少養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟損失。同時，也有助于為預防和控制雞新城疫提供科學依據(jù)，保障雞群健康和養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

3、致病原因

雞新城疫現(xiàn)階段無有效的治療方法，以免疫接種預防為主。高致病性新城疫發(fā)病與雞群整體的免疫水平、雞個體的抗病能力與健康程度，以及免疫程序、飼養(yǎng)管理等有關，致病原因復雜，主要有以下幾個方面的原因：①養(yǎng)雞戶接種的新城疫疫苗保護期短，保護力下降，即使接種疫苗，雞也有感染新城疫的可能性；②首次免疫不到位，基礎免疫力不足。二免或三免階段，免疫操作不規(guī)范，或是疫苗質(zhì)量較差，雞群免疫水平參差不齊，一旦養(yǎng)殖環(huán)境中存在新城疫病毒，免疫水平低下的雞率先發(fā)病，通過分泌物、排泄物向環(huán)境中大量排毒，從而導致該病在雞群中的大面積流行；③雞接種疫苗后，體內(nèi)抗原濃度過高，當達到一定程度時，抑制抗體的生成，使得免疫失效，雞接觸病毒后發(fā)??；④新城疫為接觸傳播，病雞與帶毒雞持續(xù)向環(huán)境中排毒，污染養(yǎng)殖設施、飲水、飼料等，致使健康雞感染該病。此外，病毒存在于自然環(huán)境之中，增加了雞感染新城疫的概率，養(yǎng)殖戶防不勝防，使得雞新城疫不間斷發(fā)病，增加了新城疫現(xiàn)場檢疫與實驗室檢驗的緊迫性和必要性。

二、雞新城疫現(xiàn)場檢疫

1、群體現(xiàn)場檢疫

①調(diào)查雞群感染及免疫情況

在現(xiàn)場檢疫詢問過程中，對養(yǎng)殖戶或養(yǎng)殖場的疫病記錄進行詳細檢查，以明確雞群在過去一年內(nèi)是否感染過疾病。同時，對運輸、銷售和屠宰環(huán)節(jié)中的雞群，需要詢問其接觸史，以確定是否存在潛在的風險。此外，還需關注雞群所在位置周邊2公里范圍內(nèi)的疫病流行情況。通過綜合考量雞群的新城疫感染史和接觸史，可以對雞群感染新城疫的風險程度進行初步評估。在免疫病況調(diào)查方面，應仔細檢查新城疫疫苗的接種記錄，確保雞群已經(jīng)完成了首免、二免和三免的完整接種流程，并確認其當前是否處于免疫保護期內(nèi)。若發(fā)現(xiàn)禽場接種疫苗的過程存在不規(guī)范行為或已超出免疫保護期，應立即要求禽場重新接種疫苗。在雞群接種疫苗后，若通過群體觀察發(fā)現(xiàn)疑似病例，需進行進一步的臨床檢查。一旦確診為雞新城疫，必須立即采取治療措施，同時嚴禁將病雞外售、外運或屠宰。若雞群未感染該病，則可確認免疫效果合格。這一系列的防控措施對于確保雞群健康、預防和控制新城疫的傳播具有重要意義。

②群體診斷

在進行新城疫現(xiàn)場群體檢疫時，對于整個雞群的臨床癥狀觀察和檢查至關重要。在雞群保持安靜且不活躍的狀態(tài)下，我們需要關注其精神狀態(tài)，以識別出可能存在的精神不振、離群獨棲的疑似病雞。這為我們后續(xù)的檢疫工作提供了重要的初步線索。接下來，通過仔細觀察雞的口腔和鼻腔，我們可以檢查是否有黏性分泌物的流出或附著。同時，雞的眼睛狀態(tài)也是重要的觀察對象，尤其是半閉或全閉的眼睛可能與疾病有關。這些觀察為我們提供了關于雞群健康狀況的直接證據(jù)。除了上述觀察，我們還需對雞群的整體健康水平進行評估。這包括觀察雞毛的光澤度、冠和肉髻的顏色以及雞體的勻稱性和強壯情況。這些指標能夠反映出雞群的整體營養(yǎng)狀況和生活環(huán)境，為我們判斷雞群是否健康提供了重要依據(jù)。此外，我們還需關注雞的姿態(tài)。是否存在頭頸隱縮、翅與尾下垂、張口呼吸等現(xiàn)象，這些都是判斷雞群健康狀態(tài)的重要參考。特別是，新城疫可能引發(fā)腹瀉癥狀，因此，檢查雞群的糞便也是必要的步驟。通常，感染新城疫的雞群糞便會呈現(xiàn)黃綠色或黃白色。在完成靜態(tài)檢查后，我們還需要進行動態(tài)檢查。通過促使雞群運動，我們可以觀察并檢查雞的采食情況和運動情況。如果雞群采食積極活躍、走動正常，且無麻痹、無痙攣、無異常動作等現(xiàn)象，這表明雞群整體處于健康狀態(tài)，感染新城疫的概率較低?？偟膩碚f，通過綜合靜態(tài)和動態(tài)檢查，我們可以全面評估雞群的健康狀況，為新城疫的防控提供科學依據(jù)。

2、肉尸檢疫

對病死雞或是確診的病雞進行解剖檢驗，患有新城疫的病雞會有如下典型表現(xiàn)，①腺胃乳頭出血，有明顯的紅色出血點，乳頭腫脹。②鼻腔、喉頭、氣管、嗉囊等部位有酸臭黏液。③腸腔內(nèi)部有大量黏性積液，腸道淋巴結(jié)腫大，淋巴集結(jié)出血與壞死，以及還有卡他性炎癥等。④直腸黏膜彌漫性充血，或有條狀、點狀出血點，并存在滲出物。盲腸潰瘍、壞死。十二指腸壁出血及潰瘍。⑤肺部、心臟也會受到病毒的攻擊，出現(xiàn)肺淤血、肺水腫，心臟有出血點。⑥氣管黏膜病變，主要有增生、充血、出血。⑦肌胃角質(zhì)下層出血。⑧如果是產(chǎn)蛋雞，雞卵泡發(fā)生病變，有出血的現(xiàn)象。⑨慢性型雞新城疫會引起極度貧血，血液稀薄、顏色發(fā)淡。并且會累及腦部，引起急性化膿性腦炎、腦膜充血等癥狀。

3、鑒別診斷

在雞新城疫的現(xiàn)場檢疫環(huán)節(jié)，為了確保結(jié)果的準確性，需對多種類似疾病進行鑒別診斷，包括禽流感、傳染性支氣管炎、雞慢性呼吸道病和禽霍亂。這些疾病的鑒別對防止誤診和提高疾病控制能力具有重要意義。①禽流感，盡管其癥狀與新城疫相似，如腫頭腫臉和明顯的呼嚕咳嗽，但禽流感特有的冠、髯腫脹問題可作為鑒別要點。此外，禽流感剖檢時可見內(nèi)臟出血感染，這一表現(xiàn)也有助于兩者的區(qū)分。②傳染性喉氣管炎的特征性表現(xiàn)為喉頭出血和喙部流出帶血黏液，同時喉頭表面附有干酪樣物質(zhì)。這些癥狀與新城疫的臨床表現(xiàn)截然不同，有助于兩者的鑒別。③雞慢性呼吸道疾病與新城疫在癥狀上有相似之處，如氣囊變化和炎性滲出物。但雞慢性呼吸道疾病的病程較長，發(fā)展緩慢，病死率較低，而新城疫感染后短時間內(nèi)可能出現(xiàn)死亡病例。④禽霍亂在剖檢時嗉囊充滿食物，而新城疫是嗉囊充滿液體和氣體。此外，禽霍亂還伴有肝臟壞死點和心包處淡黃色積液等特征性表現(xiàn)，這些均有助于與新城疫的鑒別。通過對這些類似疾病的鑒別診斷，我們可以更準確地判斷雞只所患疾病，為制定有效的防控措施提供科學依據(jù)。

三、雞新城疫實驗室檢驗

1、實驗室病毒分離檢驗

從病死雞發(fā)生病變的部位提取組織，或是從病雞的排泄物、分泌物中提取樣品，組織樣品使用生理鹽水進行研磨，獲取1∶5的混合液，然后加入青霉素與鏈霉素，將濃度分別調(diào)整至100IU·mL-1與1000μg·mL-1。排泄物與分泌物樣品，直接放入生理鹽水中，然后加入青霉素與鏈霉素，用量為3ml，最后去除混合液中的水分。將混合液的pH值調(diào)整至7.2，放入恒溫37℃的環(huán)境下60min。離心處理后取上清液，保存在4℃的環(huán)境下，維持病毒良好的毒性。完成樣品處理后，采用SPF雞胚進行分離鑒定，雞胚日齡為10日，取上清液0.1ml直接接種在雞胚上，培養(yǎng)5-7d，獲取尿囊液。最后實驗室檢驗尿囊液，確定采集的樣品中有無新城疫病毒，可選擇使用血清學鑒定方法。檢驗病毒毒株的強弱，按照1×10-6～1×10-9的濃度稀釋尿囊液，將稀釋后的尿囊液按照濃度從低到高的順序，間隔8h接種在兩組雞胚上，每組為5個雞胚，在37℃恒溫環(huán)境中孵化7d，記錄雞胚死亡時間，在70h內(nèi)死亡，表明為強毒株，70h～150h之間為中等毒株，超過150h是弱毒株。

2、實驗室血清學檢驗

①血凝抑制檢驗

雞感染新城疫病毒后，病毒會分布在紅細胞表面，促使其凝集，由此形成血凝抑制作用。病雞體內(nèi)新城疫病毒的濃度水平較低，不會引起紅細胞凝集，在血凝抑制試驗檢測之前，先使用雞胚培養(yǎng)病毒，增加獲取尿囊液中病毒的濃度，然后再使用血凝抑制法進行檢驗。當?shù)谝淮螜z驗結(jié)果為陰性時，再將前期獲取的尿囊液進行離心處理獲取上清液，接種在雞胚上進行二次培養(yǎng)，再次檢驗結(jié)果為陰性，則可作出新城疫病毒的判斷。該檢測方法可用于發(fā)病和未發(fā)病檢疫雞群的新城疫實驗室檢驗。比如，對未免疫的雞群進行現(xiàn)場檢疫，檢驗結(jié)果為陽性，說明雞群被感染，針對免疫雞群檢疫結(jié)果為陰性，結(jié)合抗體滴度，可以判斷出雞群的免疫水平。

②其他檢驗方法

適用于雞新城疫血清學檢驗的方法較多，比較常用的有以下幾種檢驗方法：免疫組化法。采用異硫氰鹽熒光素、堿性磷酸等化學物質(zhì)，標記抗體后發(fā)生化學反應呈現(xiàn)出不同的顏色，以此進行抗原判斷；免疫熒光檢驗。結(jié)合運用免疫學方法與熒光標記法，標記新城疫病毒后，對樣品中的抗體進行鑒定與定位，如使用熒光顯微鏡檢查特異性蛋白在組織中的分布情況，檢驗的特異性良好，可保證檢測結(jié)果的準確性；酶聯(lián)免疫吸附法。使用雞新城疫ELISA試劑盒進行實驗室檢驗，檢驗操作簡單、速度快，依靠人眼觀察顯色劑顏色就可確定樣品中是否含有新城疫病毒，檢測的敏感性好。

3、實驗室分子學檢驗

新城疫實驗室分子學檢驗方法主要有兩種，一種是反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應，該檢驗方法不受非特異性因素的影響，在雞新城疫實驗室檢查中，表現(xiàn)出了良好的特異性、敏感性，檢驗速度快，結(jié)果直觀呈現(xiàn)，從分子水平就可確定病毒，可檢驗培養(yǎng)雞胚的尿囊液及提取病雞的組織樣品等。另一種是實時熒光反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應，引入寡核苷酸探針，對聚合酶鏈式反應過程中每個周期產(chǎn)生的產(chǎn)物進行可靠的檢測和定量檢測，是病原體檢測中的一種生物科學實驗技術。在雞新城疫實驗室檢驗中的應用，可以進行多重熒光定量檢測聚合酶鏈反應，準確的檢測出新城疫病毒毒株的強弱。

四、雞新城疫檢疫后的消毒防控

對于飼養(yǎng)場，要進行一次徹底的消毒工作，確保雞舍內(nèi)外環(huán)境的清潔。消毒前，先清理雞舍內(nèi)的糞便、墊料等污染物。然后使用3%的氫氧化鈉溶液，對雞舍內(nèi)外進行徹底噴灑。同時，飼養(yǎng)用具如飲水器、飼料槽等也要用消毒劑進行清洗和消毒。運送雞群的運輸車輛，用0.5%的過氧乙酸溶液或有效氯1000mg/L的含氯消毒劑對車輛內(nèi)外表面進行噴灑消毒，以防止病毒的傳播。

綜上所述，雞新城疫作為一種危害性大、傳染性強、死亡率高的嚴重性疫病，對于現(xiàn)場檢疫與實驗室檢驗的要求較高。在該病的現(xiàn)場檢疫環(huán)節(jié)，應深度的分析該病的臨床典型病癥，明確肉尸剖檢的典型表現(xiàn)，準確的區(qū)分具有相同臨床癥狀的其它類型疾病，提高現(xiàn)場檢疫的質(zhì)量與檢出率。同時在實驗室檢驗中，積極探尋靈敏性高、實用性強的檢驗方法，提高雞新城疫實驗室檢驗的準確性，為雞新城疫檢疫及防疫工作奠定實驗室檢驗基礎保障，從而全面提高現(xiàn)場檢疫與實驗室檢驗的技術水平。

（作者單位：123200遼寧省彰武縣畜牧業(yè)發(fā)展服務中心）