復(fù)合乳酸菌制劑對犢牛免疫性能的試驗效果及影響研究

隨著人們對于肉制品質(zhì)量需求的不斷增加，對于優(yōu)良品種的牛肉需求也在一定程度上得以增加。近年來，為鼓勵農(nóng)民群眾大力發(fā)展現(xiàn)代化畜牧業(yè)，出臺了一系列的政策文件，以促進(jìn)犢牛養(yǎng)殖水平的提升，但是由于犢牛的人工飼養(yǎng)成本較高，大多數(shù)養(yǎng)殖戶在飼養(yǎng)過程中依然采取傳統(tǒng)的飼養(yǎng)方式，導(dǎo)致犢牛的生長速度相對較慢，產(chǎn)肉率無法顯著地提升。與此同時，在畜牧業(yè)集約化進(jìn)程不斷強(qiáng)化的背景下，抗生素的使用量不斷增加，雖然在一定程度上提升了犢牛的生長性能以及健康水平，但是抗生素的廣泛使用增加了犢牛對于抗生素的耐藥性，并且抗生素的殘留還會通過食物鏈的傳播對人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。飼料添加劑具備降低牲畜患病概率、提升牲畜免疫能力、加快生長速度、提升采食量等功效，而乳酸菌是飼料添加劑的常見類型，同時也是反芻動物胃腸道中的一種主要菌群，能夠產(chǎn)生大量的消化酶，也能夠有效降解飼料中的粗纖維，有利于反芻動物充分消化、吸收飼料中的營養(yǎng)成分。其中，復(fù)合乳酸菌制劑以其獨特的生物學(xué)功能和益生效果，在改善動物腸道健康、增強(qiáng)免疫力等方面展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，復(fù)合乳酸菌制劑富含多種乳酸菌，可以通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而間接提高犢牛的免疫性能。盡管復(fù)合乳酸菌制劑在畜牧業(yè)中的應(yīng)用已有一定的研究基礎(chǔ)，但其在犢牛免疫性能提升方面的具體作用機(jī)制和應(yīng)用效果仍需進(jìn)一步深入研究。因此，本研究旨在通過實驗手段，探究復(fù)合乳酸菌制劑對犢牛免疫性能的影響，為復(fù)合乳酸菌制劑的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。

一、材料與方法

1、試驗動物與材料的選取

本次試驗中隨機(jī)選取20頭斷奶犢牛，品種為西門塔爾牛，斷奶時間為30日齡，體重在40kg左右，將20頭犢牛隨機(jī)分為2組，即基礎(chǔ)飼糧組和復(fù)合乳酸菌組，每組10個重復(fù)。本次試驗地點為青海省祁連縣某養(yǎng)殖場，所選用的復(fù)合乳酸菌制劑生產(chǎn)廠家為云南天騰化工有限公司，復(fù)合乳酸菌制劑中的主要成分包含植物乳桿菌、戊糖片球菌和乳酸片球菌，活菌數(shù)量總共為2×1010CFU/g。

2、犢牛的試驗飼料

犢牛的飼料主要有燕麥草、開食料以及代乳粉所組成。其中，開食料的生產(chǎn)廠家為成都同樂飼料科技有限公司，開食料由70%的玉米粉、3%的葵花粕、5%的小麥麩皮、20%的豆粕以及2%的維生素混合料和礦物質(zhì)所組成。代乳粉的生產(chǎn)廠家為河北司鐸生物有限公司，代乳粉的主要成分為50%的全脂奶粉、10%的乳糖、13%的葡萄糖、25%的乳清粉、1%的魚油以及1%的礦物質(zhì)和維生素。

3、復(fù)合乳酸菌制劑的試驗設(shè)計

隨機(jī)選取20頭斷奶犢牛，品種為西門塔爾牛，斷奶時間為30日齡，體重在40kg左右，將20頭犢牛隨機(jī)分為2組，即基礎(chǔ)飼糧組和復(fù)合乳酸菌組，每組10個重復(fù)。其中，基礎(chǔ)飼糧組飼喂由燕麥草、開食料以及代乳粉的基礎(chǔ)飼料，復(fù)合乳酸菌組飼喂具有復(fù)合乳酸菌制劑的飼料，正式試驗期為90d，預(yù)試期為7d。復(fù)合乳酸菌組中將50mL的復(fù)合乳酸菌制劑添加到代乳粉中對犢牛進(jìn)行飼喂，對每頭犢牛進(jìn)行單獨的圈養(yǎng)，每日早、晚各飼喂2次，同時記錄每頭犢牛的飼料采食量。

在試驗開始前及試驗結(jié)束后分別測定犢牛的體重，在整個試驗的過程中應(yīng)為犢牛提供足夠的飲水，同時要保證飲水的清潔、衛(wèi)生。犢牛舍需要加強(qiáng)通風(fēng)換氣工作，對地面存在的糞污進(jìn)行及時清理，至少間隔3d對犢牛舍進(jìn)行一次全面消毒，且犢牛的水槽、料槽在使用前后需要及時清潔，如犢牛在斷奶之前若殘留乳汁，需要對乳汁進(jìn)行集中處理，并對奶桶進(jìn)行消毒與清潔。要定期為犢牛更換干凈的墊草，可以通過堆積發(fā)酵殺菌的方式對犢牛的分泌物和排泄物進(jìn)行處理。與此同時，要做好牛舍的驅(qū)蚊滅蠅管理工作，以避免蚊蠅將病原傳染給犢牛。其次，做好牛舍的溫濕度控制管理。犢牛舍的溫度應(yīng)始終保持在15～20℃的范圍內(nèi)，相對濕度控制在25%～30%的范圍內(nèi)，以此來為犢牛提供舒適良好的生長環(huán)境。最后，做好牛體清潔工作。每日需要為犢牛刷拭1～2次的皮毛，這樣不但可以及時清除掉犢牛體表存在的寄生蟲和污物，還可以在刷拭被毛的過程中幫助犢牛更好的血液循環(huán)，有利于犢牛快速生長發(fā)育。當(dāng)犢牛生長至90日齡時需要為其接種口蹄疫疫苗，30d之后需要再次接種，間隔4～6周定期為犢牛接種。在接種疫苗的過程中應(yīng)做好驅(qū)蟲管理措施，通常在犢牛生長至6月齡時或者是斷奶前后，需要為其驅(qū)除體外和體內(nèi)寄生蟲，通?？梢允褂冒⒕S菌素或者是伊維菌素等驅(qū)蟲藥。

4、血清免疫與抗氧化指標(biāo)的測定

分別在開始試驗之前以及試驗的第90d早上飼喂之前，在基礎(chǔ)飼糧組和復(fù)合乳酸菌組中隨機(jī)抽取3只犢牛采集靜脈血，將采集之后的血樣放置于抗凝劑管中，將試管輕輕搖晃，避免出現(xiàn)凝血的現(xiàn)象。將血樣以5000轉(zhuǎn)/min的速度離心10min分離并收集血清，隨后采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行免疫球蛋白含量的測定。具體操作如下：將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加入微孔板中，進(jìn)行反應(yīng)孵育，隨后洗板并加入特異性的酶標(biāo)記抗體，再次孵育反應(yīng)、洗板，加入底物并進(jìn)行反應(yīng)孵育，最后加入停止液，最終在微孔板中測定吸光度，根據(jù)吸光度值與免疫球蛋白濃度成正比，計算出IgA、IgM、IgG的含量。使用購自上海源葉生物公司的試劑盒進(jìn)行超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶以及總抗氧化能力的測定，將樣品加入試劑盒中，按照試劑盒說明書中的步驟進(jìn)行反應(yīng)操作。

5、試驗數(shù)據(jù)的處理與分析

對納入研究的患者進(jìn)行基線數(shù)據(jù)的描述統(tǒng)計，采用SPSS17.0對兩組犢牛的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，可以采用獨立樣本t檢驗方法，同時采用非參數(shù)檢驗方法判斷護(hù)理效果是否顯著，P＜0.05代表二者的具有差異性。

二、復(fù)合乳酸菌制劑對犢牛免疫性能的影響結(jié)果

根據(jù)表1中的結(jié)果來看，將復(fù)合乳酸菌制劑加入飼料中，相比較于基礎(chǔ)飼糧組而言，在為期為90d的試驗結(jié)束時，犢牛體內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶以及超氧化物歧化酶顯著提升，雖然總抗氧化能力也有所增加，但是相比較于對照結(jié)果而言，二者的差異并不顯著（P＞0.05）。由此可見，復(fù)合乳酸菌制劑對于犢牛自身的抗氧化能力能夠帶來積極的影響，能夠進(jìn)一步強(qiáng)化犢牛對氧化應(yīng)激的抵抗能力。與此同時，復(fù)合乳酸菌組中犢牛在為期90d的試驗結(jié)束后，體內(nèi)的IgA含量、IgM含量以及IgG含量相比較于對照組而言均呈現(xiàn)逐的增加的趨勢，尤其是IgG含量，顯著高于對照結(jié)果，二者之間具備顯著的差異（P＜0.05），這意味著復(fù)合乳酸菌制劑能夠為犢牛自身免疫能力的提升產(chǎn)生積極影響，有利于強(qiáng)化犢牛自身的免疫能力。

三、討論

乳酸菌是一類革蘭氏陽性菌，能夠利用碳水化合物進(jìn)行發(fā)酵，產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸及一些抑菌活性物質(zhì)，乳酸菌通常具有耐受胃腸道酸性環(huán)境的特性，可以是厭氧菌或者兼性厭氧菌。一旦進(jìn)入宿主的胃腸道，乳酸菌可以與腸黏膜上的細(xì)胞結(jié)合并形成一層生物膜，有助于排斥和抑制病原菌在腸道內(nèi)的生長，從而起到保護(hù)性的作用。乳酸菌在代謝過程中會產(chǎn)生多種有機(jī)酸，如乳酸、乙酸、丙酸和苯乳酸，有機(jī)酸可以降低腸道的pH值，創(chuàng)造出一個更適宜于有益菌群生長的酸性環(huán)境，同時抑制有害菌的繁殖，乳酸菌可以通過改變腸道的微環(huán)境來維持腸道菌群的平衡，同時促進(jìn)有益菌的生長，從而提高宿主的免疫功能和整體健康。研究表明，乳酸菌在動物營養(yǎng)和健康方面扮演著重要的角色，特別是在調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)免疫功能、抑制病原微生物等方面具有顯著作用。與此同時，在飼料中加入乳酸菌能夠通過調(diào)節(jié)腸道環(huán)境來改善消化道黏膜屏障的功能，增加食物中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率，有助于提高動物的生長速度和生長效率，進(jìn)而減少飼料的浪費。

除此以外，免疫球蛋白在機(jī)體的免疫應(yīng)答中扮演著重要角色，其中包括免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）等，免疫球蛋白的存在反映了機(jī)體對外來抗原的應(yīng)對能力，其水平的變化可以反映出機(jī)體的免疫狀態(tài)，檢測血清中的免疫球蛋白水平可幫助評估機(jī)體的免疫狀態(tài)和免疫應(yīng)答能力。與此同時，良好的抗氧化能力有助于維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和健康，抗氧化能力是機(jī)體對抗氧化應(yīng)激和有害物質(zhì)的抵抗能力，通過對血清中的抗氧化能力進(jìn)行檢測，可以評估機(jī)體對有害物質(zhì)的清除和抵御能力，從而間接反映出機(jī)體的免疫狀態(tài)。在犢牛的免疫方面，IgG是一種非常重要的免疫球蛋白。在犢牛出生時由于胎盤的限制，其無法通過母體的乳汁獲得足夠的免疫球蛋白，因此在出生后的幾個小時內(nèi)，犢牛主要依賴從母體血液中通過胎盤獲得的IgG來提供免疫保護(hù)，這種被動免疫傳遞在犢牛早期生命中至關(guān)重要，能夠幫助犢牛建立起免疫防御系統(tǒng)。隨著時間的推移，犢牛逐漸開始自行產(chǎn)生自身的IgG免疫球蛋白，以增強(qiáng)其免疫能力和應(yīng)對外界病原體的能力。

為了進(jìn)一步加強(qiáng)犢牛自身的免疫性能，可以采取以下幾種措施：

第一，做好疾病的預(yù)防工作。牛舍應(yīng)定期進(jìn)行徹底的清洗和消毒，使用有效的消毒劑如10%漂白粉溶液或2%石炭酸溶液，清洗牛舍的墻壁、地板和牛欄；確保牛舍有良好的通風(fēng)系統(tǒng)，良好的通風(fēng)能減少濕度和氨氣濃度，及時清理牛舍中的糞便，減少病原體和昆蟲滋生的機(jī)會。糞便應(yīng)收集并安全處理或作為有機(jī)肥料使用；實施不同年齡和健康牛只的隔離措施，病牛應(yīng)及時隔離以避免傳染給健康牛只，在養(yǎng)殖期牛只獲得必要的維生素、礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)，應(yīng)根據(jù)牛只的年齡、生產(chǎn)狀態(tài)（如育肥、泌乳或懷孕）調(diào)整飼料配方。

第二，做好犢牛斷奶后的腹瀉預(yù)防工作。在飼養(yǎng)管理的過程中需要每日對犢牛進(jìn)行全面的觀察，觀察次數(shù)不得少于3次，健康觀察主要包含體溫、糞便、食欲、精神狀況是否正常等方面，一旦發(fā)現(xiàn)犢牛出現(xiàn)斷奶后的腹瀉情況需要及時采取針對性的措施。例如，可以通過益生菌、中草藥以及有機(jī)酸等方式，來促進(jìn)犢牛瘤胃發(fā)酵效率的增長，進(jìn)而對有害菌的生長造成阻礙，降低犢牛斷奶后的應(yīng)激反應(yīng)，對治療、預(yù)防犢牛腹瀉有著良好的效果。

第三，合理搭配精料。當(dāng)犢牛生長至1～2月齡時還無法反芻，直到3～6周齡時，犢牛的瘤胃中才會開始微生物活動，到3～4月齡時可以開始逐步反芻。所以在犢牛出生的7d之后可以開始飼喂精料，最好選擇成顆粒精料，粉料中的谷物需要經(jīng)過碾壓或擠扁處理，避免粉碎得過細(xì)而影響犢牛瘤胃的蠕動和消化過程。 隨著小牛年齡的增長，營養(yǎng)需求會逐漸增加。在1～8周的代乳粉培育期間，要逐漸增加精料和干草的攝取量，但仍需控制飼喂的數(shù)量，以免影響犢牛消化系統(tǒng)的適應(yīng)能力。在開始時可以將干料放在奶桶底部讓犢牛自主舔食，之后可以將干料放在料槽中讓犢牛自由攝取。

為了研究復(fù)合乳酸菌制劑對犢牛免疫性能產(chǎn)生的影響，本次試驗中隨機(jī)選取20頭斷奶犢牛，品種為西門塔爾牛，斷奶時間為30日齡，體重在40kg左右，將20頭犢牛隨機(jī)分為2組，即基礎(chǔ)飼糧組和復(fù)合乳酸菌組，每組10個重復(fù)，試驗地點為青海省祁連縣一養(yǎng)殖場中，所選用的復(fù)合乳酸菌制劑生產(chǎn)廠家為云南天騰化工有限公司，復(fù)合乳酸菌制劑中的主要成分包含植物乳桿菌、戊糖片球菌和乳酸片球菌，活菌數(shù)量總共為2×1010CFU/g。其中，基礎(chǔ)飼糧組飼喂由燕麥草、開食料以及代乳粉的基礎(chǔ)飼料，復(fù)合乳酸菌組飼喂具有復(fù)合乳酸菌制劑的飼料，正式試驗期為90d，預(yù)試期為7d。復(fù)合乳酸菌組中將50mL的復(fù)合乳酸菌制劑添加到代乳粉中對犢牛進(jìn)行飼喂，對每頭犢牛進(jìn)行單獨的圈養(yǎng)，每日早、晚各飼喂2次，同時記錄每頭犢牛的飼料采食量，最終測量兩組犢牛的IgA含量、IgM含量、IgG含量、超氧化物歧化酶水平、谷胱甘肽過氧化物酶水平以及總抗氧化能力。結(jié)果顯示，將復(fù)合乳酸菌制劑加入飼料中，相比較于基礎(chǔ)飼糧組而言，在為期為90d的試驗結(jié)束時，犢牛體內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶以及超氧化物歧化酶顯著提升，雖然總抗氧化能力也有所增加，但是相比較于對照結(jié)果而言，二者的差異并不顯著（P＞0.05）；復(fù)合乳酸菌組中犢牛在為期90d的試驗結(jié)束后，體內(nèi)的IgA含量、IgM含量以及IgG含量相比較于對照組而言均呈現(xiàn)逐的增加的趨勢，尤其是IgG含量，顯著高于對照結(jié)果，二者之間具備顯著的差異（P＜0.05）。由此可見，復(fù)合乳酸菌制劑對于犢牛自身的抗氧化能力能夠帶來積極的影響，能夠進(jìn)一步強(qiáng)化犢牛對氧化應(yīng)激的抵抗能力，并且復(fù)合乳酸菌制劑能夠為犢牛自身免疫能力的提升產(chǎn)生積極影響，有利于強(qiáng)化犢牛自身的免疫能力。