水禽心包積液-肝炎綜合征的診斷及防控

摘 要：水禽心包積液-肝炎綜合征主要是由Ⅰ群禽腺病毒血清4型感染引起的一種水禽傳染病，感染后主要引起包涵體肝炎和心包積液。該病傳播廣泛且迅速，給我國水禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。文章概述心包積液-肝炎綜合征的病原、診斷方法和防控措施等，旨在為該病的診斷及防控等提供一定的參考。

關(guān)鍵詞：心包積液-肝炎綜合征；禽腺病毒；診斷；防控

中圖分類號：S858.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1673-1085（2024）09-0050-03基金項(xiàng)目：財(cái)政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系基金資助（CARS-42-34）

第一作者：張紅（1988—），女，碩士，助理研究員，主要從事禽病診斷及防治研究，E-mail：hzhang1012@163.com

通信作者：陳志峰（1977—），男，研究員，主要從事家禽營養(yǎng)與繁殖研究，E-mail：qqhr139@sina.com

收稿日期：2024-03-14

心包積液-肝炎綜合征為一種嚴(yán)重威脅我國水禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的傳染病，自2015年以來在我國大部分水禽養(yǎng)殖地區(qū)流行。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查和禽腺病毒的傳播特性（垂直傳播和隱性感染等），水禽對該病毒感染情況不可輕視，做好水禽腺病毒病的防控意義重大。

1 病原簡介

禽腺病毒（Fowl Adenovirus，F(xiàn)AdV ）隸屬于腺病毒科（Adenoviridae）、禽腺病毒屬（Aviadenovirus）。FAdV分三個(gè)群，包括Ⅰ群禽腺病毒、Ⅱ群禽腺病毒和Ⅲ群禽腺病毒。Ⅰ群禽腺病毒分12個(gè)血清型，即FAdV-1～FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-9～FAdV-11。當(dāng)前水禽腺病毒主要流行的血清型以FAdV-4型、FAdV-8b型為主，其中FAdV-4型主要引起心包積液-肝炎綜合征[1]。FAdV為雙鏈、無包膜DNA病毒。病毒粒子直徑為70～100 nm，呈穩(wěn)定的20面體對稱結(jié)構(gòu)[2]。FAdV基因組為42～45 kb，編碼了多種結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。病毒顆粒主要結(jié)構(gòu)蛋白包括纖突蛋白、五鄰體蛋白、六鄰體蛋白，其中纖突蛋白氨基酸序列較保守，參與病毒粒子包裝，參與體液免疫，使機(jī)體產(chǎn)生中和抗體；五鄰體蛋白在腺病毒粒子的頂點(diǎn)，負(fù)責(zé)病毒結(jié)構(gòu)的維持，可與宿主細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合有很好的免疫原性，使動(dòng)物體產(chǎn)生特異性抗體起保護(hù)作用；六鄰體蛋含有型、群和亞群特異性抗體決定簇，有較好的免疫原性，與致病性相關(guān)[3]。

2 流行病學(xué)

1963年在美國首次報(bào)道該病，之后在多個(gè)國家流行。該病1976年在我國臺灣省最早出現(xiàn)，隨后在其他多個(gè)省份出現(xiàn)，2015年以來在我國河北、黑龍江、吉林、遼寧、山東、江蘇等省均發(fā)生了疫情，呈快速暴發(fā)流行趨勢[4]。該病在3～5周齡的肉鴨及鵝多發(fā)，發(fā)病鴨群多于3周齡開始出現(xiàn)死亡，4～5周齡達(dá)到死亡高峰，高峰期持續(xù)4～8 d，5～6周齡時(shí)死亡減少，整個(gè)病程為8～15 d，死亡率為20%～75%。本病即可水平傳播，也可垂直傳播；一年四季均能發(fā)生，夏秋季節(jié)多發(fā)。

3 臨床癥狀

該病潛伏期短，以發(fā)病初期無明顯先兆、突然倒地、兩腳劃空、數(shù)分鐘內(nèi)死亡為特征。感染流行期患病鴨、鵝表現(xiàn)精神沉郁、癱瘓等癥狀。被感染種鴨出現(xiàn)產(chǎn)蛋下降等癥狀，軟殼蛋、砂殼蛋和血斑蛋等異常蛋增多。

4 剖檢病變

對患病死亡的水禽進(jìn)行剖檢，可見心包內(nèi)有滲出液，液體透明為淡黃色。肝臟腫大、出血、無彈性，腎臟腫脹、出血，肺部出血、水腫，膽囊腫大，胸腺出血。

5 診斷方法

一般結(jié)合發(fā)病水禽的臨床癥狀及剖檢病變做出初步診斷，確診需進(jìn)行病毒分離鑒定、血清學(xué)檢測或分子生物學(xué)診斷方法。

5.1 病毒分離鑒定方法

可通過在病料中分離病原，并在顯微鏡下觀察進(jìn)行確診，該方法準(zhǔn)確、可靠，但耗時(shí)長。實(shí)驗(yàn)室分離病毒主要包括雞胚接種和細(xì)胞接種。其中雞胚接種是將病料中病毒易嗜的器官組織剪碎、研磨制備成懸液，過濾除菌接種SPF雞胚，收集接種后收取尿囊液即可得到病毒液。細(xì)胞接種分離病毒是將制備的組織懸液接種于雞肝癌細(xì)胞（LMH）或雞胚肝細(xì)胞（CEL）等單層細(xì)胞，在培養(yǎng)箱中吸附1 h，棄掉接種的組織懸液，加入適量培養(yǎng)液，在72 h內(nèi)進(jìn)行觀察，待細(xì)胞出現(xiàn)病變后即可收取病毒液；若在此期間細(xì)胞沒有病變，需要繼續(xù)盲傳，直至五代未病變再棄去[5]。

5.2 血清學(xué)檢測方法

血清學(xué)檢測技術(shù)包括瓊脂凝膠擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和膠體金檢測法。其中：瓊脂凝膠擴(kuò)散法是可溶性抗體抗原在凝膠中結(jié)合后形成沉淀線，從而確診病原。該方法不需要儀器設(shè)備檢測，肉眼可見，但耗時(shí)較長；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是將抗原或抗體包被到固相載體上，加入待測定的抗體或抗原，再加入相應(yīng)的酶標(biāo)記抗體，形成酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)，發(fā)生顏色的變化，借助儀器檢測抗體或抗原的量。該方法操作簡單，耗時(shí)短，需要特定的儀器設(shè)備；中和試驗(yàn)是用已知抗原檢測血清中相應(yīng)的抗體，也可用已知抗體檢測相應(yīng)抗原。該方法特異性強(qiáng)，但耗時(shí)較長；膠體金檢測法是基于抗原抗體的特異性結(jié)合，在相應(yīng)位置聚集產(chǎn)生肉眼可見的顯色線。該方法操作簡單，耗時(shí)短，但無法定量[6]。

5.2 分子生物學(xué)檢測方法

分子生物學(xué)檢測方法包括PCR檢測技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)（LAMP）、核酸探針技術(shù)。PCR檢測技術(shù)目前應(yīng)用較廣，耗時(shí)短，靈敏度準(zhǔn)確度好。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)包括探針法和熒光染料法，具有比常規(guī)PCR檢測技術(shù)更快速準(zhǔn)確且能夠定量等優(yōu)點(diǎn)。LAMP與常規(guī)PCR方法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法相比，操作簡捷、耗時(shí)短，無需儀器，結(jié)果肉眼可見，但引物設(shè)計(jì)難度相對較高。核酸探針技術(shù)是根據(jù)核苷酸堿基互補(bǔ)的原理，使用特異性基因探針識別特異的靶序列，進(jìn)而達(dá)到定性或定量的目的，該方法準(zhǔn)確性好、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短，但成本高且存在放射性污染等問題。目前還沒有能夠同時(shí)檢測出Ⅰ群禽腺病毒12種血清型的技術(shù)方法，在此方向上有待進(jìn)一步研究。

6 防控措施

該病在水禽養(yǎng)殖密集的區(qū)域流行，做好水禽養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理能夠有效防控本病。養(yǎng)殖場對各種設(shè)備和環(huán)境嚴(yán)格消毒能夠降低水禽感染腺病毒的概率，腺病毒對常規(guī)消毒劑普遍存在抵抗力，用0.5%戊二醛和0.2%的甲醛處理消毒后能夠使該病毒失去感染性。在平時(shí)的飼養(yǎng)管理上應(yīng)注意多通風(fēng)，注意天氣變化，減少換舍、調(diào)群等應(yīng)激因素，可在飼糧中根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)添加維生素和黃芪多糖等提高免疫力的藥物，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體抵抗病毒的能力。因腺病毒可經(jīng)種蛋垂直傳播，所以種群的凈化是預(yù)防該病的有效方法，且能夠助力水禽養(yǎng)殖業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。

預(yù)防水禽心包積液-肝炎綜合征，主要以接種疫苗為主。目前防控該病的疫苗有滅活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗。我國學(xué)者研發(fā)的FAdV-4型多聯(lián)滅活疫苗有雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒?。á袢?型）三聯(lián)滅活疫苗和雞新城疫、傳染性支氣管炎、減蛋綜合征、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒?。á袢?型）五聯(lián)滅活疫苗。滅活疫苗易于制備、存儲(chǔ)和運(yùn)輸，穩(wěn)定性好，生物安全性高。FAdV-4弱毒疫苗的制備需要選出弱毒株，弱毒株可通過接種細(xì)胞或雞胚傳代致弱。也有研究者在無癥狀的雞體內(nèi)分離到FAdV-4，并將該毒株接種于SPF雞，SPF雞并沒有發(fā)生水禽心包積液-肝炎綜合征，但從泄殖腔拭子中可檢測到FAdV-4，表明該毒株并不是致病株，但具有免疫原性，可用于弱毒疫苗的制備。弱毒疫苗保護(hù)時(shí)間相對較長，不穩(wěn)定，有毒力返強(qiáng)的可能。基因工程疫苗不存在返祖風(fēng)險(xiǎn)，操作性強(qiáng)，目前關(guān)于禽腺病毒的基因工程疫苗的研發(fā)大多是將能夠編碼保護(hù)性抗原的基因片段克隆并表達(dá)[7]。禽腺病毒血清型很多，彼此之間幾乎沒有交叉保護(hù)，今后在禽腺病毒疫苗的研發(fā)中更應(yīng)該傾向于能夠同時(shí)預(yù)防多個(gè)血清型的多價(jià)疫苗。

如若養(yǎng)殖場未及時(shí)接種疫苗或接種疫苗后并沒有起到預(yù)防效果，則發(fā)生疫情的養(yǎng)殖場應(yīng)及時(shí)接種卵黃抗體。我國已有針對Ⅰ群FAdV-4型的卵黃抗體，為發(fā)生該疫情的養(yǎng)殖場提供一個(gè)有效的治療方法，可降低經(jīng)濟(jì)損失。

參考文獻(xiàn)：

[1] 遲麗麗，劉健，陳志遠(yuǎn)，等.禽腺病毒血清4型和8b型串聯(lián)截短Fiber2-Fiber蛋白在畢赤酵母中的優(yōu)化表達(dá)[J].中國畜牧獸醫(yī)，2023，50（08）：3056-3064.

[2] 王白玉.Hexon蛋白在禽腺病毒血清4型致病性中的作用及其機(jī)理研究[D].鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2022.

[3] 宋佳誠.禽腺病毒五鄰體（Penton）蛋白的表達(dá)純化及應(yīng)用[D].北京：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，2021.

[4] 鞏敏芝.用于高效預(yù)防功能添加劑的新型禽腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2023.

[6] 李鵬飛.禽Ⅰ群腺病毒病病原和抗體檢測方法的建立及其在血清學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

[7] 龍海川，張鶴平，苗立中，等.Ⅰ群禽腺病毒的分離檢測方法與疫苗研究進(jìn)展[J].中國家禽，2023，45（10）：76-83.