母源抗體對(duì)禽流感-新城疫疫苗免疫后抗體效價(jià)的影響規(guī)律研究

摘 要：為研究母源抗體對(duì)雞免疫禽流感-新城疫滅活疫苗后抗體效價(jià)的影響及其變化規(guī)律，試驗(yàn)將1日齡雞苗隨機(jī)分成A、B兩組，分別于1、7日齡接種禽流感（H9）-新城疫二聯(lián)滅活疫苗，并在1、7、21、35、42日齡分別采血，HI試驗(yàn)測(cè)定禽流感和新城疫抗體效價(jià)，試驗(yàn)期42 d。結(jié)果顯示：A、B兩組雞免疫21 d后禽流感抗體效價(jià)持續(xù)下降并達(dá)到最低值，A組禽流感抗體下降速度和幅度較B組高，禽流感抗體陽(yáng)性率21日齡最低，A組抗體陽(yáng)性率較B組低約30%，A組抗體效價(jià)明顯低于B組（Plt;0.05）；A、B兩組新城疫抗體效價(jià)持續(xù)下降，21日齡達(dá)到最低值，28日齡開(kāi)始上升，35日齡達(dá)到峰值，兩組間各日齡抗體效價(jià)、峰值均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05），A組新城疫抗體效價(jià)下降和上升的速度較B組慢。結(jié)果表明高母源抗體對(duì)禽流感滅活疫苗免疫后抗體效價(jià)影響較大，在高母源抗體基礎(chǔ)上免疫禽流感疫苗，影響免疫后抗體效價(jià)的上升速度和幅度；高母源抗體對(duì)新城疫滅活疫苗免疫后效價(jià)影響較小，早免疫能有效保護(hù)雞群。

關(guān)鍵詞：母源抗體；禽流感；新城疫；免疫；抗體

中圖分類號(hào)：S852.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2024）09-0026-07

禽流感（Avian influenza， AI）是由正黏病毒科、A型流感病毒屬中不同亞型流感病毒引起的嚴(yán)重侵害禽類呼吸系統(tǒng)的病毒病，其中H9N2、H7N9和H5Nx是嚴(yán)重影響全球家禽業(yè)的主要禽流感病毒亞型，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，高致病性禽流感亞型如H5和H7亞型也嚴(yán)重威脅鳥(niǎo)類和人類公共衛(wèi)生健康[1-2]。因此，禽流感是養(yǎng)禽業(yè)首要防控的主要疫病之一，也是我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)強(qiáng)制接種疫苗防控的禽病。新城疫（Newcastle disease， ND）是由新城疫病毒引起的一種急性、高度接觸性和致死性傳染病，也是養(yǎng)雞業(yè)重點(diǎn)防控的疫病之一[3-4]。目前用于防控禽流感和新城疫的疫苗類型主要有傳統(tǒng)疫苗、病毒載體疫苗、基因工程疫苗等[4]。養(yǎng)雞生產(chǎn)實(shí)踐中，為了減少疫苗接種次數(shù)和對(duì)雞的應(yīng)激，常將禽流感與新城疫病毒制成二聯(lián)苗或與其他病原制成多聯(lián)苗免疫接種雞群[5]。新制成的禽流感、新城疫疫苗，常用SPF雞檢測(cè)其免疫效果[6-7]?？贵w效價(jià)高的新制疫苗免疫具有一定母源抗體的雞群，免疫后疫苗的抗體效價(jià)表現(xiàn)參差不齊[4，7-8]。已有相關(guān)研究母源抗體對(duì)禽流感和新城疫疫苗免疫后抗體效價(jià)比較[8-9]，鮮有規(guī)律性的總結(jié)報(bào)道。本研究以具有高母源抗體的雛雞為研究對(duì)象，研究母源抗體對(duì)禽流感-新城疫滅活疫苗免疫后抗體效價(jià)的影響，總結(jié)分析了母源抗體對(duì)禽流感-新城疫滅活疫苗免疫后抗體效價(jià)變化的影響規(guī)律，以期為養(yǎng)雞生產(chǎn)實(shí)踐制定合理的禽流感、新城疫疫苗免疫方案和評(píng)價(jià)疫苗效果提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)雞、日糧

1日齡健康中速型三黃肉雞（雌）苗，購(gòu)自廣西某養(yǎng)殖公司；基礎(chǔ)日糧為商品飼料（小雞配合飼料161L），購(gòu)自南寧市某獸醫(yī)服務(wù)中心。

1.2 疫苗

禽流感（H9亞型）-新城疫二聯(lián)滅活疫苗，批號(hào)160022290，由普萊柯生物工程股份有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)雞分組與飼養(yǎng)管理 從71只1日齡健康中速型三黃肉雞苗隨機(jī)取5只心臟采血后棄去，其余隨機(jī)分成A組30只，B組36只，每組分3個(gè)重復(fù)。采取單層籠養(yǎng)方式，尼龍膜覆蓋籠頂，自然通風(fēng)控溫，飼養(yǎng)在廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)動(dòng)科院動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，自由采食與飲水，全程飼喂小雞配合飼料161L，試驗(yàn)期共42 d。

A組：所有雞苗于1日齡頸部皮下接種禽流感-新城疫二聯(lián)滅活疫苗，0.3 mL/只。B組：7日齡時(shí)隨機(jī)取6只雛雞心臟采血后棄去，其余雞只頸部皮下接種禽流感-新城疫二聯(lián)滅活疫苗，0.3 mL/只。

1.3.2 血清采集 分別于1、7日齡心臟采血，于21、28、35、42日齡翅下靜脈采血，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)采集3只；室溫放置待血液凝固后，取血清3 000 r/min離心5 min，取上清液放置-80 ℃低溫冰箱保存，用于測(cè)定禽流感、新城疫抗體效價(jià)。

1.3.3 禽流感抗體和新城疫抗體效價(jià)的測(cè)定 血凝試驗(yàn)（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）測(cè)定禽流感、新城疫HI抗體效價(jià)。所有收集的血清樣品，由廣西璞締恩葳生物科技有限公司一次性全部檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果記錄為n log2。根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2020）》，禽流感HI效價(jià)≥4 log2為陽(yáng)性，個(gè)體免疫合格；＜4 log2判為陰性，個(gè)體免疫不合格。根據(jù)《新城疫診斷技術(shù)（GB/T 16550-2020）》，新城疫抗體HI抗體效價(jià)≥4 log2判為陽(yáng)性，個(gè)體免疫合格；HI抗體效價(jià)≤3 log2判為陰性，個(gè)體免疫不合格。

抗體陽(yáng)性率=（HI抗體效價(jià)≥4 log2的雞只數(shù)/檢測(cè)雞只數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

雛雞免疫后產(chǎn)生的抗體數(shù)據(jù)，采用GraphPad 6.01軟件進(jìn)行處理，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用該軟件中的t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間抗體效價(jià)差異顯著性分析，Plt;0.05表示差異顯著，Pgt;0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 母源抗體對(duì)禽流感疫苗免疫效果的影響

由表1可知，在禽流感H9亞型母源抗體水平較高的背景下首免禽流感H9亞型-新城疫二聯(lián)滅活疫苗， H9抗體平均效價(jià)呈先下降后逐漸升高的趨勢(shì)。21日齡內(nèi)，B組H9抗體效價(jià)平均下降速度為0.29 log2/d，較A組的下降速度0.36 log2/d慢，試驗(yàn)后期B組抗體效價(jià)上升速度更快。B組各日齡的H9抗體效價(jià)均較A組高，其中21日齡時(shí)B組平均抗體效價(jià)顯著高于A組（Plt;0.05），其余日齡段抗體效價(jià)差異不顯著（Pgt;0.05）。A、B組H9抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均呈先下降后升高的趨勢(shì)。A組21～28日齡時(shí)， H9抗體低于免疫保護(hù)臨界值4 log2，抗體陽(yáng)性率低于50%；這期間，雞群有較大的感染風(fēng)險(xiǎn)；B組21～28日齡時(shí)H9抗體平均效價(jià)高于免疫保護(hù)臨界值4 log2，抗體陽(yáng)性率達(dá)63.63%～71.43%，經(jīng)計(jì)算較A組高約30%，其余日齡段A、B組抗體陽(yáng)性率均在80%以上，達(dá)到有效保護(hù)水平。母源抗體對(duì)禽流感疫苗免疫效果的影響見(jiàn)表1。

基金項(xiàng)目：廣西農(nóng)業(yè)科技自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（Z2023092）

第一作者：蔣玲艷（1977— ），女，博士，副教授，研究方向?yàn)榍莶∨c微生物學(xué)，E-mail： linyan_112@126.com

通信作者：王林果（1978— ），男，博士，高級(jí)獸醫(yī)師，研究方向?yàn)榍莶》乐?，E-mail：22490358@qq.com

收稿日期：2024-04-10

2.2 母源抗體對(duì)新城疫滅活疫苗免疫效果的影響

由表2可知，A、B組新城疫抗體效價(jià)均呈先降后升再降低的趨勢(shì)。21日齡時(shí)，A、B組新城疫抗體效價(jià)和陽(yáng)性率均達(dá)到最低。21～28日齡，B組新城疫抗體效價(jià)平均值和陽(yáng)性率略低于A組（Pgt;0.05），但兩組雞的抗體效價(jià)平均值高于5 log2，陽(yáng)性率均在80%合格水平以上，能有效保護(hù)雞群免受新城疫的攻擊。由試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，各日齡段A組的新城疫抗體效價(jià)較B組高，但差異不顯著（Pgt;0.05），兩組雞的抗體效價(jià)均于35日齡左右達(dá)到峰值，但峰值差異不顯著（Pgt;0.05），之后開(kāi)始下降。對(duì)于新城疫母源抗體效價(jià)8.80 log2的三黃雞，第一周內(nèi)無(wú)論是否接種疫苗，抗體效價(jià)均下降緩慢。A、B組21日齡內(nèi)，平均每日分別下降0.13 log2、0.16 log2；28日齡兩組雞的抗體效價(jià)均快速上升，35日齡達(dá)到峰值，各日齡段B組的新城疫抗體效價(jià)下降或上升的速度均較A組快。母源抗體對(duì)新城疫疫苗免疫效果的影響見(jiàn)表2。

2.3 SPF雞免疫禽流感-新城疫滅活疫苗后的抗體變化規(guī)律

李倩等[10]用新城疫-禽流感（H9亞型）-禽腺病毒三聯(lián)滅活疫苗分別免疫7日齡（接種0.2 mL/只）和21日齡（接種0.5 mL/只）的SPF雞，免疫后于不同時(shí)間采血測(cè)新城疫抗體和禽流感H9抗體效價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表3。表3結(jié)果顯示，無(wú)母源抗體的雞免疫禽流感和新城疫疫苗后，抗體效價(jià)持續(xù)上升，免疫后21～28 d達(dá)到峰值。7日齡接種0.2 mL/只的雞群抗體效價(jià)低于21日齡接種0.5 mL/只的雞群。SPF雞免疫禽流感-新城疫滅活疫苗后的抗體變化規(guī)律見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 SPF雞或無(wú)母源抗體雞免疫禽流感疫苗后的抗體變化規(guī)律

研究顯示[6-7，10-12]：SPF雞或無(wú)母源抗體影響下的禽流感疫苗免疫，免疫后7d抗體效價(jià)持續(xù)上升，一般免疫后21 d抗體效價(jià)可達(dá)峰值，免疫后21 d內(nèi)，禽流感抗體效價(jià)平均每日上升0.33 log2～0.45 log2。因此，禽流感抗體效價(jià)要達(dá)到保護(hù)臨界值4 log2的最短時(shí)間是（4/0.45≈9）9 d左右，但首次接種劑量會(huì)影響抗體效價(jià)上升的速度與峰值。

3.2 母源抗體對(duì)禽流感疫苗免疫效果的影響

在母源抗體存在的情況下，雛雞的母源抗體消長(zhǎng)趨勢(shì)主要表現(xiàn)：①下坡式：出殼后雛雞抗體效價(jià)持續(xù)降低；②單峰式：抗體效價(jià)在3～6日齡升高，7 日齡后持續(xù)降低。21日齡內(nèi)，禽流感母源抗體的自然消退速度為平均每日下降約0.30 log2 [7，13-16]，第7～14日齡下降最快。

禽流感母源抗體對(duì)疫苗免疫后抗體效價(jià)的影響與接種疫苗時(shí)母源抗體效價(jià)高低密切相關(guān)。一般母源抗體越高，免疫后抗體效價(jià)下降幅度和持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，中和抗體效價(jià)上升越慢[7，17]。孫藝學(xué)等[16]研究禽流感H9母源抗體效價(jià)低于4 log2的10日齡雞群，免疫后7～21 d抗體效價(jià)持續(xù)升高。李倩等[10]給21日齡SPF雞注射新城疫-禽流感-禽腺病毒三聯(lián)滅活疫苗，抗體效價(jià)持續(xù)上升，免疫后21 d基本達(dá)到峰值。

表1結(jié)果表明，當(dāng)禽流感H9母源抗體效價(jià)處于較高水平時(shí)，1日齡首免禽流感滅活疫苗可加速母源抗體的消退，延緩疫苗抗體效價(jià)的升高；7日齡首免禽流感滅活疫苗，母源抗體下降的速度和幅度均低于1日齡首免，抗體產(chǎn)生的速度較快，幅度較大。B組28日齡時(shí)雖然禽流感H9抗體效價(jià)最低，但雞群的抗體陽(yáng)性率已達(dá)到71.43%。因此，雞苗在高母源抗體背景下，接種滅活疫苗不能改變母源抗體下降的趨勢(shì)，但不同母源抗體水平接種禽流感滅活疫苗，可改變禽流感抗體水平下降的幅度和免疫后抗體升高的速度、幅度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，首次免疫時(shí)母源抗體越高、日齡越小，免疫后抗體下降的幅度越大，上升的速度越慢；反之，抗體下降幅度越小，上升速度越快。無(wú)母源抗體或母源抗體較低時(shí)免疫禽流感疫苗，一般免疫后3周抗體效價(jià)可達(dá)峰值，而在高母源抗體背景下免疫，抗體效價(jià)峰值要在免疫后5～6周才能達(dá)到。

3.3 SPF雞免疫新城疫滅活疫苗后的抗體變化規(guī)律

有研究顯示[6-7， 18]，新城疫滅活疫苗免疫SPF雞，抗體產(chǎn)生的速度幾乎不受首免日齡和疫苗種類的影響，免疫后4～7 d可檢測(cè)到新城疫抗體升高。對(duì)于SPF雞，不同首免日齡，無(wú)論是新城疫滅活疫苗還是活疫苗均可在免疫后3周內(nèi)以0.35 ～0.43 log2/d的速度產(chǎn)生抗體，免疫后2周內(nèi)新城疫抗體效價(jià)平均每日上升0.40 log2以上。由此可得：無(wú)母源抗體干擾下，新城疫疫苗免疫后抗體要達(dá)到免疫臨界值4 log2需約10 d（4/0.40）。

3.4 母源抗體對(duì)新城疫疫苗的免疫效果影響

雞新城疫母源抗體的自然消長(zhǎng)規(guī)律，文獻(xiàn)報(bào)道不一，但基本在21日齡左右降到了檢測(cè)陰性水平，且多數(shù)報(bào)道顯示21日齡內(nèi)新城疫母源抗體自然消退速度為每日下降0.3 log2左右[7，19]。母源抗體的存在，使疫苗免疫后效果不一，因此制定合理免疫方案更顯重要。有研究不同日齡、不同新城疫母源抗體水平的雛雞免疫新城疫疫苗后抗體效價(jià)的變化，結(jié)果顯示[7-8，20]，母源抗體越高，免疫后21 d的抗體效價(jià)越低，一般在母源抗體高于6 log2時(shí)首免，免疫21 d后抗體效價(jià)一般不會(huì)高于母源抗體；而在母源抗體為4 log2時(shí)進(jìn)行首免，免疫后抗體效價(jià)會(huì)快速上升，免疫21 d后效價(jià)會(huì)顯著高于母源抗體效價(jià)。

本試驗(yàn)分別對(duì)1日齡、7日齡新城疫母源抗體8log2以上的雛雞首免新城疫-禽流感滅活疫苗，0～21日齡新城疫抗體均呈現(xiàn)下降，但平均抗體效價(jià)維持在4 log2以上，之后抗體均以較快速度升高，升降趨勢(shì)和峰值基本一致。相關(guān)文獻(xiàn)也發(fā)現(xiàn)[5，7-8，20]：21日齡內(nèi)不同日齡段母源抗體高于6 log2的雛雞，免疫新城疫滅活疫苗后，抗體效價(jià)會(huì)下降并持續(xù)到21日齡左右，一般要到第4周齡才檢測(cè)到抗體效價(jià)升高。母源抗體對(duì)新城疫活疫苗的影響，與滅活疫苗影響結(jié)果基本一致。母源抗體低于4 log2時(shí)免疫新城疫活苗，免疫后4 d可檢測(cè)到抗體上升。0～3周齡的雞新城疫母源抗體效價(jià)越低、首免日齡越大，抗體產(chǎn)生的速度越快[21]。

以上研究表明免疫后新城疫抗體的變化規(guī)律不僅與母源抗體水平有關(guān)，也跟日齡相關(guān)。新城疫母源抗體與疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)規(guī)律，具有日齡轉(zhuǎn)折點(diǎn)和抗體效價(jià)轉(zhuǎn)折點(diǎn)，21日齡是高母源抗體基礎(chǔ)下新城疫滅活疫苗首免后抗體效價(jià)升降的日齡轉(zhuǎn)折點(diǎn)，6 log2、4 log2是疫苗免疫后抗體效價(jià)升降轉(zhuǎn)折點(diǎn)。

4 結(jié)論

母源抗體對(duì)禽流感疫苗免疫效果有明顯影響，高水平母源抗體背景下接種禽流感疫苗，會(huì)加速母源抗體消退速度，延緩抗體上升速度并影響抗體峰值。對(duì)于高母源抗體的雛雞，禽流感最佳首免日齡計(jì)算公式為：（1日齡禽流感母源抗體效價(jià)-4）/0.30-9，母源抗體效價(jià)每增加一個(gè)滴度，首免日齡約推后3 d。

高母源抗體對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響相對(duì)較小，高母源抗體背景下的免疫可使21日齡內(nèi)雛雞的抗體效價(jià)維持在4 log2以上；而在母源抗體4 log2以下時(shí)接種疫苗，則抗體效價(jià)可在免疫后4 d左右上升，新城疫疫苗最晚首免日齡計(jì)算公式為：（1日齡新城疫母源抗體效價(jià)-4）/0.3-4。

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The Influence of Maternal Antibody on the Antibody Titers and the Changing Patterns Post-immunization with Avian Influenza and Newcastle Disease Vaccines

JIANG Lingyan1， PENG Jianbo1， ZHANG Zai1， WANG Linguo2

（1. College of Animal Science and Technolog2y， Guangxi Vocational University of Agriculture，

Nanning 530007， China; 2. Pulike Bioengineering， Inc.， Luoyang 471032， China）

Abstract： The study aimed to investigate the influence of maternal antibodies on the antibody titers and their changing patterns after immunization with inactivated vaccines against avian influenza （AI） and Newcastle disease （ND） in chickens. The experiment divided 1-day-old three-yellow chickens randomly into two groups， A and B， and vaccinated the chickens with inactivated bigeminal vaccine of avian influenza （H9） and Newcastle disease at 1 day and 7 days of age， respectively. To collect blood samples at 1，7， 21， 35， and 42 days of age and determine the antibody titers of AI and ND using hemagglutination inhibition （HI） test assay. The experimental period was 42 days. The results showed that the AI antibody titers continued to decrease to the lowest value after immunization for 21 days in groups A and B. The rate and magnitude of AI antibody decrease in group A were greater than those in group B. The positivity rate of AI antibody was the lowest at 21 days of age， and that of group A was about 30% lower than that of group B， and the antibody titers of Group A was significantly lower than that of Group B （Plt;0.05）. The antibody titers of ND continued to decline to the lowest value at 21 days of age in two groups， then to rise at 28 days of age， and to reach the peak value at 35 days of age. There was no significant difference in antibody titers and peak values between the two groups at each age （Pgt;0.05）. The rate of decrease and increase in antibody titer of ND in Group A was slower than that in Group B. The study showed that high maternal antibodies had a significant impact on the effect of inactivated AI vaccine. High maternal antibodies affected the rate and magnitude of antibody titer increasing and decreasing after immunization with AI vaccines. High maternal antibodies have relatively small impact on effect of inactivated ND vaccine， and early immunization can effectively protect chicken flocks.

Keywords： Maternal antibodies; Avian influenza; Newcastle disease; Immune; Antibody