陜西省略陽烏雞種雞場雞白痢、雞滑液囊支原體與雞毒支原體感染狀況調(diào)查與分析

摘 要：為了解陜西省略陽烏雞種雞場雞白?。≒ullorum Disease，PD）、雞滑液囊支原體（Mycoplasma synoviae，MS）和雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）的流行情況，利用估計流行率的抽樣方法對略陽烏雞種雞場開展了調(diào)查。結(jié)果顯示，略陽烏雞種雞場雞白痢個體陽性率為4.73%（95%CI：3.1%～6.9%）；滑液囊支原體個體陽性率為65.82%（95%CI：61.7%～69.8%）；雞毒支原體個體陽性率為64.91%（95%CI：60.8%～68.9%）。風(fēng)險因素調(diào)查發(fā)現(xiàn)，種雞場內(nèi)三種疾病的感染受到飼養(yǎng)管理方式、消毒措施以及長期不當(dāng)使用抗菌藥物等因素的影響較大。因此，在實施種源病凈化時，應(yīng)重點考慮這些因素，以更好地控制雞白痢、雞滑液囊支原體和雞毒支原體等種源性傳染病的流行。

關(guān)鍵詞：雞白痢;雞滑液囊支原體;雞毒支原體;陜西省

中圖分類號：S831.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" 文章編號：0488-5368（2024）11-0089-05

收稿日期：2024-05-31 修回日期：2024-06-12

第一作者簡介：師清博（1991-），女，獸醫(yī)師，碩士研究生，主要從事動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查工作。

通信作者：張智鵬。

Investigation and Analysis for Infection of Pullorum Disease， Mycoplasma synoviae

and Mycoplasma gallisepticum in Breeding Chicken Farms

in Lueyang County of Shaanxi Province

SHI Qingbo HE Yongjun" CHEN Xinzhong DENG Puyuan XIONG Weiman ZHANG Li LI Yanming ZHAO Li LIU Yang ZHANG Zhipeng

（1.Hanzhong Animal Disease Prevention and Control Center，Hanzhong，Shaanxi 723000，China;

2.Agricultural Comprehensive Service of Laozhuang Town， Chenggu， Shaanxi 723200， China;

3. Lueyang Animal Husbandry and Veterinary Technology Extension Center， Lueyang， Shaanxi 724300， China）

Abstract： To understand the prevalence of Pullorum Disease（PD）， Mycoplasma gallisepticum （MG） and Mycoplasma synoviae （MS） infections in breeding farms of Shaanxi province， an investigation was carried out at Lueyang Breeding Chicken Farm by using the sampling method to estimate prevalence.The results showed that the individual positive rate of PD， MG and MS in the farm were 4.73%（95%CI：3.1%～6.9%），64.91%（95%CI：60.8%～68.9%）and" 65.82%（95%CI：61.7%～69.8%）， respectively. The investigation of risk factors found that the infection of the three diseases in the breeder flock was greatly influenced by factors such as breeding methods， disinfection practices， and prolonged misuse of antibiotics. Therefore， when implementing avian embryo purification measures， these factors should be given priority to better control the spread of diseases like Pullorum Disease and avian mycoplasmosis.

Key words：Pullorum Disease; Mycoplasma synoviae; Mycoplasma gallisepticum; Shaanxi Province

雞白痢（Pullorum Disease，PD）是由雞白痢沙門氏菌引起的各種年齡階段雞均可發(fā)生的一種細(xì)菌性傳染病，雛雞感染后可造成嚴(yán)重白痢，甚至急性敗血癥，死亡率較高，成年雞被感染后多呈慢性或隱性感染，會長期帶菌，導(dǎo)致產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率下降。目前對家禽危害較大的兩種支原體為雞毒支原體，又稱雞敗血支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）和滑液囊支原體（Mycoplasma synoviae，MS），MS、MG感染后可導(dǎo)致肉雞生長發(fā)育遲緩、飼料利用率低和胴體降級等，產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能下降和淘汰率增加等[1，2]。MG在家禽中會引起以氣囊炎為特征的慢性呼吸道疾病，并伴有黏膜卡他性炎癥[1]，MS 主要造成關(guān)節(jié)炎、滑液囊膜炎，二者均可通過水平和垂直傳播，各個日齡的雞群都易感，無明顯的季節(jié)性。

略陽烏雞在陜西省略陽縣的17個鎮(zhèn)街均有飼養(yǎng)，略陽烏雞種源主要分布在略陽縣黑河流域的黑河、仙臺壩、觀音寺、兩河口等區(qū)域[5]。據(jù)2023年春季防疫信息統(tǒng)計，略陽縣烏雞存欄100 羽以上的場戶有 46個，烏雞總存欄量約 11.4 萬羽。建有1個略陽烏雞核心育種場，10個略陽烏雞良種繁育場，通過核心育種場和繁育場為全縣略陽烏雞生態(tài)養(yǎng)殖場戶提供種源純正、品質(zhì)優(yōu)良的烏雞苗。目前對略陽烏雞養(yǎng)殖危害最嚴(yán)重的種源性疫病為PD、MS和MG。做好略陽烏雞種源性疫病的本底調(diào)查工作是有序推進略陽烏雞種源病凈化、提升略陽烏雞這一優(yōu)良地方品種核心競爭力，促進漢中市略陽烏雞產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的重要措施。本研究重點對這三種略陽烏雞常見種源病的感染情況進行調(diào)查，旨在為略陽烏雞種源病的凈化提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本 對漢中市略陽縣11個烏雞種雞場（即核心育種場和良種繁育場）進行抽樣檢測和現(xiàn)場問卷調(diào)查。場內(nèi)個體的選擇按照估計流行率的樣本量計算公式n=（Z ×p（1-p））/e ，取置信度（CL）95%，15%預(yù)期流行率為（p），10%可接受絕對誤差（e），計算得出每個場戶內(nèi)應(yīng)抽取的雞只數(shù)量為49只[3]，實際每場內(nèi)的抽樣數(shù)量為50只?，F(xiàn)場抽樣時，采取系統(tǒng)隨機抽樣方法，按一定的籠位間隔進行抽樣。

1.1.2 主要試劑 雞白痢雞傷寒多價染色雞平板凝集試驗抗原，批號20210906，強陽性血清，批號20211112，弱陽性血清，批號20210702（北京中海生物科技有限公司）；BioCheck D群沙門氏菌（GroupD）抗體檢測試劑盒，批號FS8152（荷蘭百測）；BioCheck雞滑液囊支原體（MS）抗體檢測試劑盒，批號FS8381（荷蘭百測）；BioCheck敗血支原體（MG）抗體檢測試劑盒，批號FS8447（荷蘭百測）。

1.1.3 主要儀器 高速離心機LG10-2.4A"""""" ，北京醫(yī)用離心機廠；自動洗板機，北京普朗新技術(shù)有限公司；Multiskan FC酶標(biāo)儀，美國Thermo ScientificTM公司；微量振蕩器，北京海淀電子醫(yī)療儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 具體如下。

1.2.1.1 雞白痢 采用中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《雞白痢和雞傷寒診斷技術(shù)》（NY/T 536-2017）血清平板凝集試驗進行初篩，對出現(xiàn)50%及以上凝集的樣品再進行D群沙門菌（GroupD）抗體ELISA檢測，具體操作步驟參考荷蘭百測公司BioCheck D群沙門菌（GroupD）抗體ELISA檢測試劑盒說明書。

1.2.1.2 禽支原體病 采用ELISA方法對MS、MG進行抗體檢測，具體操作方法參考荷蘭百測公司雞滑液囊支原體、雞毒支原體抗體檢測試劑盒說明書。

1.2.2 現(xiàn)場調(diào)查 調(diào)查方法如下。

1.2.2.1 調(diào)查對象及方式 針對略陽縣11個種雞場（核心育種場和良種繁育場），采取現(xiàn)場查看、座談、訪談等方式進行調(diào)查與信息收集。

1.2.2.2 問卷設(shè)計 在采集樣本的同時開展現(xiàn)場調(diào)查，設(shè)計統(tǒng)一的問卷，對每個調(diào)查場的基本養(yǎng)殖信息與養(yǎng)殖場概況（建場年份、存欄量、雞苗來源企業(yè)、養(yǎng)殖方式等）、飼養(yǎng)管理（飲水來源、雞舍內(nèi)溫濕度監(jiān)測、飼養(yǎng)用具使用、藥物治療等）生物安全管理措施（消毒、防鳥防鼠、糞污處理、病死雞處理等）以及當(dāng)前養(yǎng)殖過程中存在的技術(shù)困難等問題進行調(diào)查。

1.2.3 統(tǒng)計與分析 用 Excel 2019 軟件進行檢測數(shù)據(jù)的整理、計算及圖表繪制；應(yīng)用IBM SPSS Statistics 25軟件對收集的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，應(yīng)用卡方檢驗比較不同陽性率的差異顯著性，Plt;0.05代表差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 略陽烏雞種雞場PD、MS、MG檢測結(jié)果

采用垂直試驗的檢測方法，對血清平板凝集試驗結(jié)果為陽性的樣品再進行D群沙門菌 （GroupD）抗體ELISA檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有26 份樣品為陽性，個體陽性率為4.73%（95%CI：3.1%～6.9%），11個種雞場中有7個種雞場檢測到陽性樣品，群體陽性率為63.64%（95%CI：30.8%～89.1%），陽性場點內(nèi)個體陽性率從0.00%～26.00%不等；對采集的550份血清樣品進行MS抗體檢測，有362 份樣品為陽性，個體陽性率為65.82%（95%CI：61.7%～69.8%），群體陽性率為90.91%（10/11）（95%CI：58.7%～99.8%）；對采集的550份血清樣品進行MG抗體檢測，有357份樣品為陽性，個體陽性率為64.91%（95%CI：60.8%～68.9%），11個種雞場均檢測到陽性樣品，群體陽性率為100.00%，陽性場點內(nèi)個體陽性率從4.00%～100.00% 不等。檢測詳細(xì)結(jié)果見表1。

2.2 MS、MG檢測結(jié)果比較

所調(diào)查種雞場MS、MG的感染較為嚴(yán)重，由圖1可以看出，有5個場的MS、MG的場內(nèi)個體陽性率均在60%以上。

2.3 不同飼養(yǎng)方式下PD、MS、MG檢測結(jié)果

由表2可知，在不同飼養(yǎng)方式下，PD、MS、MG的感染情況有所不同。PD的感染情況由高到低依次為網(wǎng)上平養(yǎng)（6.33%）、生態(tài)放養(yǎng)（6.00%）、籠養(yǎng)（0.67%）；MS的感染情況由高到低依次為生態(tài)放養(yǎng)（86.00%）、網(wǎng)上平養(yǎng)（63.67%）、籠養(yǎng)（56.67%）；MG的感染情況由高到低依次為網(wǎng)上平養(yǎng)（93.00%）、生態(tài)放養(yǎng)（45.00%）、籠養(yǎng)（22.00%）?？梢钥闯觯诨\養(yǎng)狀態(tài)下，三種病的陽性率都低于另兩種飼養(yǎng)方式。

2.3.1 不同飼養(yǎng)方式下PD的感染情況 籠養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)和生態(tài)放養(yǎng)條件下PD的陽性率分別為0.67%（1/150）、6.33%（19/300）、6.00%（6/100），三組數(shù)據(jù)總體存在著統(tǒng)計差異（χ" =7.569，Plt;0.05）。生態(tài)放養(yǎng)條件下PD陽性率與網(wǎng)上平養(yǎng)相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（Pgt;0.05），籠養(yǎng)條件下PD陽性率與網(wǎng)上平養(yǎng)、生態(tài)放養(yǎng)均存在著統(tǒng)計學(xué)差異（Plt;0.05），見表3。

2.3.2 不同飼養(yǎng)方式下MS的感染情況 籠養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)和生態(tài)放養(yǎng)條件下MS的陽性率分別為56.67%（85/150）、63.67%（191/300）、86.00%（86/100），三組數(shù)據(jù)總體存在著統(tǒng)計差異（χ" =24.305，Plt;0.001）。網(wǎng)上平養(yǎng)條件下MS陽性率與籠養(yǎng)相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（Pgt;0.05），生態(tài)放養(yǎng)條件下MS陽性率與籠養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)均存在著統(tǒng)計學(xué)差異（Plt;0.05），見表4。

2.3.3 不同飼養(yǎng)方式下MG的感染情況 籠養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)和生態(tài)放養(yǎng)條件下MG的陽性率分別為22.00%（33/150）、93.00%（279/300）、45.00%（45/100），三組數(shù)據(jù)總體存在著統(tǒng)計差異（χ" =242.587，Plt;0.001）。MG的陽性率在三種不同的飼養(yǎng)方式下，兩兩之間均存在著統(tǒng)計學(xué)差異（Plt;0.05），見表5。

2.4 現(xiàn)場調(diào)查情況

2.4.1 基本情況 本次調(diào)查的種雞場中，有54.5%的場啟用時間超過10 a，其余場的啟用年限為2～6 a；有兩個場為自繁自養(yǎng)，其余場的雞苗均來源于略陽烏雞核心育種場。養(yǎng)殖方式主要有籠養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)或生態(tài)放養(yǎng)，養(yǎng)殖模式均為全進全出模式。大部分養(yǎng)殖場的飲用水來源為山泉水，少部分為井水或自來水。在商品雞或雞蛋的銷售方式方面，以上門收購或本場外送的方式為主，部分養(yǎng)殖場戶還采用微信、直播平臺等網(wǎng)絡(luò)銷售方式。

2.4.2 生物安全措施 在消毒管理方面，多數(shù)養(yǎng)殖場均能做到進入生產(chǎn)區(qū)前換裝、換鞋、消毒；所有場點對生產(chǎn)區(qū)進行不定期的消毒，其中大部分場戶雞舍每月（帶雞）消毒次數(shù)為4次，少數(shù)雞場每天消毒1次。所調(diào)查的種雞場均能做到種蛋孵化前消毒，孵化前孵化室及所有用具的消毒，場內(nèi)孵化、育雛育成及種雞飼養(yǎng)三區(qū)獨立，孵化廢棄物進行無害化處理；在糞污處理方面，所調(diào)查的場均能實現(xiàn)機械清糞，多數(shù)場戶能夠做到每天清糞1次；在病死雞無害化處理方面，大部分場以掩埋的方式進行處理，少數(shù)為焚燒處理。

2.4.3 略陽烏雞種源病防控情況

在疾病發(fā)生方面，據(jù)養(yǎng)殖場反映，通常情況下，PD、MS及MG發(fā)病雞所處的階段為5～16周齡，且以MS感染較為常見；在藥物性預(yù)防或治療方面，除略陽烏雞核心育種場外，其它種雞場均使用抗菌藥物防控雞白痢沙門菌、其它沙門菌或禽支原體感染；在凈化方面，僅略陽烏雞核心育種場開展過系統(tǒng)、規(guī)范的雞白痢凈化工作。經(jīng)調(diào)查顯示，多數(shù)養(yǎng)殖場認(rèn)為發(fā)生種源病的主要原因在于引種、飼養(yǎng)管理不善和不能及時診斷。

3 討論

本研究中對雞白痢的檢測采用了垂直試驗的檢測方法，原因在于目前常用的全血或血清平板凝集試驗由于其簡便、快速、成本低廉等優(yōu)勢，在雞白痢凈化過程中的應(yīng)用比較廣泛，但存在敏感性、特異性有限，且部分檢測試劑批次間差異較大、平板凝集肉眼判斷結(jié)果主觀性強等缺點，因此本研究采用了平板凝集試驗初篩，并進一步使用ELISA方法進行確診的方法。結(jié)果顯示，略陽烏雞種雞場PD個體陽性率為4.73%，MS的個體陽性

率為65.82%，MG的個體陽性率為64.91%。不同飼養(yǎng)方式情況下，三種病的感染狀況不同。在籠養(yǎng)狀態(tài)下，三種病的陽性率都低于網(wǎng)上平養(yǎng)或生態(tài)放養(yǎng)的飼養(yǎng)方式。有研究指出，育成雞在林地生態(tài)放養(yǎng)方式下，PD、MS為兩種常見的多發(fā)病[4]。此外，部分養(yǎng)殖場戶的場址選擇在河道邊或山體旁，在放養(yǎng)狀態(tài)下，因雨季等氣候條件的影響，容易引起雞白痢、支原體病、球蟲病等的發(fā)生。[5]

根據(jù)現(xiàn)場調(diào)查情況以及疫病的傳播和發(fā)病特點，分析陽性場可能存在的種源病感染風(fēng)險因素主要表現(xiàn)在以下幾個方面，一是在消毒方面，雞舍（帶雞）每月消毒次數(shù)不同，雞白痢和兩種支原體病的個體陽性率也有所不同，消毒頻率越高，陽性率越低，說明合理的消毒措施能夠有效減少雞白痢和支原體病的水平傳播；二是在對雞白痢和禽支原體的藥物性預(yù)防和治療方面，除核心育種場外，其它種雞場均使用了抗菌藥物進行預(yù)防或治療，但多數(shù)場依然存在雞白痢或支原體感染的現(xiàn)象，有研究表明，長期不合理的使用抗菌藥物是一些雞場難以徹底根除雞白痢的重要原因[6，7]；三是在飼養(yǎng)管理方面，凡是不同棟舍交叉使用飼養(yǎng)用具及飼養(yǎng)人員隨意串舍的場均為雞白痢感染陽性場，這充分說明了水平傳播途徑在雞白痢、支原體病的傳播過程中發(fā)揮了重要作用[8，9]。

綜合實驗室檢測及現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，略陽烏雞常見種源病凈化工作的主要難點有以下幾個方面，一是底子差，本底陽性率較高，尤其是MS、MG的感染情況較為嚴(yán)重，其群體陽性率較高；二是生物安全水平參差不齊，存在環(huán)境衛(wèi)生、生物安全管理措施不健全等問題；三是投入大，對于陽性率較高的場戶來說淘汰陽性雞數(shù)量大，資金投入大，影響凈化積極性；四是對于PD、MS的凈化來說診斷方法的選擇是影響凈化成功與否的關(guān)鍵因素之一，原因在于平板凝集診斷方法敏感性低，難以診斷出弱陽性雞，且國產(chǎn)檢測試劑批次間差異較大、平板凝集肉眼判斷結(jié)果主觀性強[10，11]。ELISA方法則具有重復(fù)性好，機讀結(jié)果準(zhǔn)確，客觀性強等優(yōu)點，但存在進口試劑價格昂貴使得凈化成本偏高的缺點。

4 建議

陜西省略陽烏雞種雞場PD、MS和MG感染情況較為嚴(yán)重。三種病的感染受飼養(yǎng)方式、消毒措施、長期不恰當(dāng)?shù)氖褂每咕幬锏纫蛩氐挠绊戄^大，建議在對種雞場實施種源病凈化時，可以著重考慮飼養(yǎng)管理方式、消毒措施及抗菌藥物使用這三個因素，以期更好地控制PD、MS和MG等種源性疫病的流行。

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