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    豐水期長蕩湖水質(zhì)評價與微生物群落結(jié)構(gòu)特征研究

    2024-12-26 00:00:00徐志鵬閔嵩傲許嘉誠汪金輝巫丹
    環(huán)境科學(xué)與管理 2024年12期
    關(guān)鍵詞:微生物群落長蕩湖豐水期

    關(guān)鍵詞:豐水期;長蕩湖;水質(zhì)評價;微生物群落

    中圖分類號:X171.4 文獻標(biāo)志碼:B

    前言

    微生物是水生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,在維持水生態(tài)系統(tǒng)的功能和健康中起著重要作用,同時微生物也是反映水環(huán)境健康的重要指標(biāo)。張建波等認(rèn)為后生浮游動物可作為湖泊水環(huán)境變化的指示性生物。由于微生物能將對生態(tài)環(huán)境造成威脅的有機物和有毒物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可以維護生態(tài)平衡的無機物。如枯草芽孢桿菌是一類革蘭氏陽性菌,其分泌的多種高活性胞外酶,能快速分解并吸收水環(huán)境中的有機物,以達(dá)到改善水質(zhì)的效果。因此全面調(diào)查長蕩湖微生物群落組成是極有必要的。

    長蕩湖位于江蘇省常州市。長蕩湖南北長約15.5km,東西寬約9km,湖泊總面積85.31km2,平均水深1.1m。隨著長蕩湖周邊農(nóng)業(yè)、漁業(yè)的快速發(fā)展以及過度城鎮(zhèn)化,導(dǎo)致湖泊水體嚴(yán)重富營養(yǎng)化,水質(zhì)日漸惡化。

    目前有關(guān)長蕩湖的研究主要聚焦于藻類、動物的群落結(jié)構(gòu)特征以及沉積物污染風(fēng)險等方面,但鮮有全面研究長蕩湖微生物群落結(jié)構(gòu)組成。鑒于豐水期雨量充沛,水樣采集方便且豐水期長蕩湖的水體污染更為嚴(yán)重。因此此研究基于2021年6月長蕩湖采樣數(shù)據(jù),采用2種水質(zhì)評價方法綜合評價豐水期長蕩湖水質(zhì)現(xiàn)狀,并運用高通量測序技術(shù)分析長蕩湖微生物群落結(jié)構(gòu)特征,為控制長蕩湖水體污染和生態(tài)修復(fù)提供理論依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1采樣點設(shè)置與采樣時間

    根據(jù)長蕩湖地形輪廓,在長蕩湖南部、中部、東部和北部共設(shè)置4個采樣點。4個采樣點編號依次為W156、W158、W160、W163,于2021年6月(豐水期)進行水體樣品采集。采樣點的分布見圖1。

    1.2水樣采集與測定方法

    使用有機玻璃采水器采集長蕩湖表層水,每個采樣點采集1L水樣,保存于已消毒滅菌并用樣本底水充分清洗的聚乙烯取樣瓶中,并在4℃條件下運回實驗室。其中500 mL水樣用于理化因子測定,500 mL在實驗室無菌環(huán)境下使用0.45μm濾膜過濾后,將濾膜放入10mL凍存管并保存于-80℃冰箱,用于后續(xù)DNA測序。

    此次測定理化指標(biāo)包括總有機碳(TOC)、總氮(TN)、總磷(TP)、水溫(WT)、pH值及溶解氧(DO)。TOC采用燃燒氧化-非分散紅外吸收法;TN采用堿性過硫酸鉀-紫外分光光度法;TP采用鉬酸銨分光光度法;采用YSI多參數(shù)水質(zhì)分析儀(YSI PR01020,USA)現(xiàn)場測定WT、pH和DO。

    1.3微生物群落測序分析方法

    先在無菌環(huán)境中將濾膜剪成碎片,然后使用PowerWater DNA(MOBIO,USA)試劑盒提取基因組DNA。通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的基因組DNA。使用正向引物341F(5’-CCTAYGGGRBG-CASCAG -3’)和反向引物806R(5’-GGACTAC-NNGGGTATCTAAT-3’)對V3-V4可變區(qū)進行PCR擴增。使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR產(chǎn)物,利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit(Axygen Biosci-ences,Union City,CA,USA)進行純化,Tris-HCl洗脫,2%瓊脂糖電泳檢測。測序采用IlluminaMiSeq PE300高通量測序平臺進行測序。PCR及測序均由上海凌恩生物科技公司完成。

    1.4數(shù)據(jù)處理與分析

    水質(zhì)評價方法分別采用水污染指標(biāo)法和內(nèi)梅羅指數(shù)法2種評價方法。

    1.4.1水污染指數(shù)法

    水污染指數(shù)法以單因子指數(shù)法為基礎(chǔ),內(nèi)插計算出各污染指標(biāo)的WPI值,選取WPI值的最高值來判定水體污染等級。選取的環(huán)境參數(shù)為總氮、總磷、DO,每個參數(shù)的WPI值計算公式如式(1):

    基于Microsoft Excel處理的原始實驗數(shù)據(jù);微生物多樣性指數(shù)使用QIIME軟件(1.7.0版)計算,使用Origin 2018軟件繪制物種豐度柱狀圖。依托微信在線平臺繪制Circos圖分析各片區(qū)門分類水平下微生物群落結(jié)構(gòu)特征。

    2結(jié)果與討論

    2.1長蕩湖水質(zhì)現(xiàn)狀

    長蕩湖理化因子濃度與空間分布有一定關(guān)聯(lián)。如表1所示,長蕩湖3個理化因子呈現(xiàn)從南到北濃度逐步降低的趨勢。其中TN濃度從1.14 mg/L降至0.68 mg/L;TP濃度從0.1 mg/L降至0.03 mg/L;TOC含量從5.4 mg/L降至3.8 mg/L。這是因為豐水期降雨量大,且人湖河流在長蕩湖北部的輸水量更多,因此造成了長蕩湖南部污染物濃度高于北部。長蕩湖各片區(qū)的WT、pH差距不大,長蕩湖南部片區(qū)和北部片區(qū)DO濃度低于中部和東部片區(qū)。整體而言,除南部片區(qū),長蕩湖其他片區(qū)的理化指標(biāo)均達(dá)到地表Ⅲ類水標(biāo)準(zhǔn)。

    運用水污染指數(shù)法、內(nèi)梅羅指數(shù)法分別對豐水期長蕩湖進行水質(zhì)評價。2種水質(zhì)評價方法結(jié)果顯示:長蕩湖南部片區(qū)比其他3個片區(qū)水質(zhì)現(xiàn)狀嚴(yán)重,超標(biāo)因子為TN、TP。但采用水污染指數(shù)法評價的水質(zhì)現(xiàn)狀普遍低于內(nèi)梅羅指數(shù)法。因為水污染指數(shù)法是基于單因子指數(shù)法,即采用“最差規(guī)則”來確定水質(zhì)等級,雖然對單項指標(biāo)有較好的評價意義,但缺乏對水體環(huán)境綜合考慮??傮w而言,長蕩湖南部片區(qū)的部分水質(zhì)指標(biāo)(TN、TP)超標(biāo),但長蕩湖整體水質(zhì)達(dá)標(biāo)。

    2.2長蕩湖微生物群落分布特征

    2.2.1微生物群落Alpha多樣性指數(shù)分析

    長蕩湖微生物群落Alpha多樣性指數(shù)分析結(jié)果見表2。

    長蕩湖4個采樣點的Coverage指數(shù)均在97%以上,說明此次測序結(jié)果可靠。Ace、Chaol指數(shù)代表微生物豐富度。北部片區(qū)Ace指數(shù)最高,達(dá)5 462;中部片區(qū)最低,為2 590。相同地,北部片區(qū)Chaol指數(shù)最高(5248),而中部片區(qū)最低(2528)。Shannon、Simpson指數(shù)表示微生物群落的多樣性。Shannon指數(shù)最高的是北部片區(qū),其次為東部片區(qū)、南部片區(qū)、中部片區(qū)。Simpson指數(shù)與Shannon指數(shù)反映結(jié)論一致??傮w而言,長蕩湖微生物群落的豐富度與多樣性呈現(xiàn)出北部片區(qū)gt;東部片區(qū)gt;南部片區(qū)gt;中部片區(qū)的規(guī)律。

    2.2.2門分類水平微生物群落結(jié)構(gòu)

    長蕩湖微生物群落在門分類水平上具有較高的多樣性。4個采樣點中共檢測出32種已知微生物菌門,長蕩湖微生物在門分類水平上組成如圖2(a)所示,其中相對豐度排在10名之后的菌門和其他未知物種歸為其它( others)。長蕩湖相對豐度大于10_10的主要菌門有放線菌門(Actinobacteria)、變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)、酸桿菌門(Acidobacteriota)。

    不同片區(qū)優(yōu)勢菌門的種類相似。如放線菌門(Actinobacteria)為長蕩湖各片區(qū)占比最高的優(yōu)勢菌門,據(jù)報道放線菌門( Actinobacteria)是濕地、湖泊及海洋等各種水環(huán)境細(xì)菌群落中的優(yōu)勢門類。相比其他細(xì)菌,放線菌能更好地躲避原生動物的捕食,死亡率相對較低;在氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)元素充足的湖泊中,碳源常會限制細(xì)菌生長繁殖,而放線菌在利用碳源方面具有更強的競爭力,所以水中放線菌門(Actinobacteria)的占比相對較高。但不同片區(qū)優(yōu)勢菌門的相對豐度卻有所差別。藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobac-teria)在長蕩湖北部片區(qū)和東部片區(qū)的相對豐度分別為13.27%和5.86%,高于長蕩湖中部片區(qū)(2.93%)和南部片區(qū)(0.81%)。研究表明藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)繁殖過多則會引發(fā)水華、使水體富營養(yǎng)化且藍(lán)藻生長潛力由營養(yǎng)物質(zhì)濃度決定。但此研究中北部、東部片區(qū)的氮磷濃度低于南部和中部片區(qū),猜測是人湖河流含有大量的藍(lán)細(xì)菌,進而導(dǎo)致北部、東部片區(qū)藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)的豐度急劇上升。長蕩湖南部片區(qū)和中部片區(qū)厚壁菌門(Firmicutes)的相對豐度為16.86%、20.92%,遠(yuǎn)高于東部(0.25%)和北部片區(qū)(0.35%)。這與李建松等研究結(jié)論一致。研究發(fā)現(xiàn)厚壁菌門(Firmi-cutes)是藍(lán)藻水華降解末期的最優(yōu)勢菌門。原因可能是藍(lán)藻降解末期水體中溶解氧幾乎耗盡,引起了嗜陽菌屬(Heliophilum)的大量增殖,進而導(dǎo)致厚壁菌門(Firmicutes)在水體中的比例上升。

    Circos圖可以直觀展現(xiàn)長蕩湖不同片區(qū)的門分類水平微生物群落組成情況。如圖2(b)所示,放線菌門(Actinobacteria)和變形菌門(Proteobacteria)在不同片區(qū)生物量分布均勻。如放線菌門(Actinobac-teria)是長蕩湖各片區(qū)占比最高的菌門,其在南部片區(qū)、中部片區(qū)、東部片區(qū)及北部片區(qū)的相對豐度依次為36.6%、43.01%、39.56%、33.85%。疣微菌門(Verrucomicrobia)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)相對豐度呈現(xiàn)由南到北逐漸遞增的趨勢。而厚壁菌門(Firmicutes)相對豐度呈現(xiàn)由南到北逐漸遞減的趨勢。特別是擬桿菌門(Bacteroidetes)在北部片區(qū)(13.72%)、南部片區(qū)(11.52%)、東部片區(qū)(11.85%)的相對豐度相近,但高于中部片區(qū)(3.94%)。由于人湖河流攜帶的污染物對長蕩湖水質(zhì)有一定影響,猜測長蕩湖北部、南部和東部片區(qū)的擬桿菌門相對豐度的提升來源于人湖河流的輸入。可見長蕩湖微生物群落結(jié)構(gòu)與空間位置、外源輸入有關(guān)。

    2.2.3科分類水平微生物群落結(jié)構(gòu)

    豐水期長蕩湖共檢測出378種微生物菌科,如圖3所示,相對豐度前5的菌科依次為:螢光桿菌科(Ilumatobacteraceae)、魚孢菌科(Sporichthyaceae)、動球菌科(Planococcaceae)、叢毛單胞菌科(Co-mamonadaceae)。莫拉菌科(Moraxellaceae)。

    不同片區(qū)的科分類水平下微生物相對豐度有一定差別。如動球菌科(Planococcaceae)在長蕩湖南部片區(qū)和中部片區(qū)的相對豐度遠(yuǎn)高于東部和北部片區(qū),據(jù)報道動球菌科(Planococcaceae)的生長受多種環(huán)境因素共同影響,如pH、鹽度等。推測可能是人湖河流的輸入導(dǎo)致東部和北部片區(qū)水體理化性質(zhì)發(fā)生變化,從而造成動球菌科(Planococcaceae)含量降低。長蕩湖南部片區(qū)和中部片區(qū)莫拉菌科(Moraxellaceae)的含量同樣高于東部和北部片區(qū)。說明科分類水平下微生物與外源輸入有關(guān)。

    2.2.4屬分類水平微生物群落結(jié)構(gòu)

    長蕩湖4個采樣點共檢測出467種微生物菌屬;但所有采樣點均有未能確定分類學(xué)地位的菌屬。如圖4所示,相對豐度排在10名之后的菌屬和其他未知物種歸為其它(others)。長蕩湖相對豐度前5的菌屬依次為:CL500-29 marine group、hgcl clade、類芽孢八疊球菌屬(Paenisporosarcina)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、Clade Ill_norank。

    長蕩湖不同片區(qū)優(yōu)勢菌屬種類相似,但占比不同。CL500-29 marine group是長蕩湖占比最高的菌屬,其在中部片區(qū)的占比高于其他片區(qū)。hgclclade分布情況與CL500-29 marine group一致。類芽孢八疊球菌屬(Paenisporosarcina)、不動桿菌屬(Acinetobacter)的相對豐度呈現(xiàn)出南部片區(qū)、中部片區(qū)高于東部片區(qū)和北部片區(qū)。研究表明不動桿菌屬( Acinetobacter)屬于變形菌門,是一類重要的反硝化聚磷菌,其生長繁殖受營養(yǎng)物質(zhì)影響;由于長蕩湖氮磷濃度自南到北逐步降低,因此不動桿菌屬(Acinetobacter)的相對豐度也是自南到北逐漸下降。相反地,Clade Ill_norank在東部片區(qū)、北部片區(qū)的相對豐度略高于南部片區(qū)與中部片區(qū)??赡苁侨牒恿鬏斎朐斐傻摹?/p>

    3結(jié)論

    兩種水質(zhì)評價方法結(jié)果顯示,豐水期長蕩湖南部片區(qū)污染最為嚴(yán)重,其中超標(biāo)因子為TN、TP,但整體上長蕩湖水質(zhì)達(dá)標(biāo)。高通量測序結(jié)果表明,長蕩湖4個采樣點共檢測出微生物群落32門378科467屬。長蕩湖各片區(qū)的微生物群落中優(yōu)勢菌門、菌科、菌屬種類相似,但相對豐度卻有所差別。相對豐度前3的優(yōu)勢菌門、菌科分別為放線菌門(Actinobacte-ria)、變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmi-cutes)與螢光桿菌科(Ilumatobacteraceae)、魚孢菌科(Sporichthyaceae)、動球菌科(Planococcaceae);占比前3的優(yōu)勢菌屬包含CL500-29 marine group、hgclclade、類芽孢八疊球菌屬(Paenisporosarcina)。微生物群落Alpha多樣性分析結(jié)果顯示,長蕩湖微生物群落多樣性和豐富度呈現(xiàn)北部片區(qū)gt;東部片區(qū)gt;南部片區(qū)gt;中部片區(qū)的規(guī)律。長蕩湖微生物群落結(jié)構(gòu)與空間位置、外源輸入有關(guān)。

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