人參組織培養(yǎng)物護(hù)膚品緊致抗皺功效的研究

本研究綜合了人體體驗(yàn)功效評(píng)價(jià)、斑馬魚功效評(píng)價(jià)以及生物實(shí)驗(yàn)功效評(píng)價(jià)三類評(píng)價(jià)方法，結(jié)合主觀感受滿意度調(diào)研結(jié)果，對(duì)含人參組織培養(yǎng)物的柔膚水、精華液及面霜產(chǎn)品的緊致、抗皺功效進(jìn)行研究。首先通過對(duì)篩選出的30位平均年齡38.8歲的體驗(yàn)者進(jìn)行使用產(chǎn)品前后皮膚彈性R2值、面部紋理數(shù)量、眼周皺紋數(shù)量改善效果測(cè)試及數(shù)據(jù)分析。結(jié)果顯示，體驗(yàn)者使用4周各指標(biāo)平均改善率為20.81%、8.40%、13.8%，顯著性分析p值＜0.01。同時(shí)對(duì)精華液進(jìn)行自由基DPPH清除、彈性蛋白酶抑制以及斑馬魚抗皺功效實(shí)驗(yàn)；結(jié)果均顯示產(chǎn)品具有清除DPPH自由基、抑制彈性蛋白酶活性、促進(jìn)斑馬魚體內(nèi)膠原蛋白生成基因表達(dá)的作用，各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯著性分析p值＜0.05，表示產(chǎn)品具有顯著的緊致、抗皺功效。

關(guān)鍵詞：人參組織培養(yǎng)物；化妝品功效評(píng)價(jià)；皮膚彈性；皺紋；紋理；緊致；抗皺

人參作為珍貴的美容護(hù)膚化妝品原料植物，含有人參皂苷、多糖等功效活性成分，不僅能夠提高皮膚細(xì)胞抗氧化酶活性、增加膠原蛋白表達(dá)、減緩皮膚皺紋產(chǎn)生，還能減少紫外線對(duì)細(xì)胞損傷，并且能抑制酪氨酸酶活性，達(dá)到美白作用[1]。

人參組織培養(yǎng)物是指從野生山參的部分組織中分離出來(lái)，以無(wú)菌狀態(tài)導(dǎo)入培養(yǎng)反應(yīng)器內(nèi)，誘導(dǎo)出愈傷組織、分化培養(yǎng)形成不定根；再通過篩選種源、三級(jí)培養(yǎng)、清潔、干燥、提取等步驟制得；利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)人參不定根， 可以使人參生產(chǎn)不受氣候、病蟲害等外界環(huán)境影響，且具有規(guī)模大、質(zhì)量穩(wěn)定、生產(chǎn)周期短等優(yōu)點(diǎn)[2]。母本野山參年限越長(zhǎng)，其含有的人參皂苷、人參多糖等生物活性成分也就更加豐富。

人參中的皂苷成分主要包括原型人參皂苷和稀有人參皂苷2類，天然的稀有人參皂苷主要由原型人參皂苷經(jīng)過生物活性酶轉(zhuǎn)化或代謝得到次生衍生物；隨著人參生長(zhǎng)年限增長(zhǎng)，而逐漸富集積累；目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種稀有人參皂苷，其中包括Rg3、Rh2、Rg5、Rk1、Rk3、Rk2、Rh1、Rh3、CK、Rg6、aPPD等，與原型人參皂苷相比，稀有人參皂苷的生物活性更高，也更容易被人體吸收利用[3]。

化妝品的功效評(píng)價(jià)方法目前主要包括人體功效實(shí)驗(yàn)、體外的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、斑馬魚實(shí)驗(yàn)等測(cè)評(píng)方法。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)有著簡(jiǎn)單快捷，重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)存在種間差異及倫理問題等；在體的消費(fèi)者主觀使用評(píng)價(jià)是化妝品功效評(píng)價(jià)的主要方式之一，但易受消費(fèi)者主觀因素的影響[4]?；瘖y品在體功效測(cè)試能更直接地反映出化妝品的實(shí)際使用效果，可作為化妝品的功效評(píng)價(jià)及宣稱最有參wM8bgGb3JUeBzzAqxPElU9p3X/KkWPxS08GRZWhm8QM=考價(jià)值的信息[5]。因此化妝品功效需要進(jìn)行綜合、系統(tǒng)評(píng)價(jià)，以提高了化妝品功效評(píng)價(jià)的全面性、準(zhǔn)確性和可靠性。

Part 1實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要材料、試劑及儀器

潔面乳、含人參組織培養(yǎng)物的護(hù)膚樣品（包括柔膚水、精華液、面霜樣品），空白組護(hù)膚樣品（人參組織培養(yǎng)物用純化水代替）自制；除潔面乳外，柔膚水、精華、面霜功效均為保濕、緊致、抗皺。人參組織培養(yǎng)物（山東安然納米實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）。

皮膚彈性測(cè)試儀（Cutometer dual MPA580，德國(guó)CK 公司）和VISIA 面部圖像分析儀（Canfield公司，美國(guó)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 體驗(yàn)者篩選

體驗(yàn)者知悉本次測(cè)試全部?jī)?nèi)容，且自愿參加體驗(yàn)測(cè)試并簽閱知情同意書。知情同意書中，明確說(shuō)明了參與測(cè)試相關(guān)的可能存在風(fēng)險(xiǎn)、益處、權(quán)利及責(zé)任的所有必要信息內(nèi)容。

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)

30位－40位年齡在30歲－55歲具有健康皮膚的女性；體驗(yàn)者面部眼周或額頭有明顯皺紋，其在功效測(cè)試期間能夠保持正常的生活作息規(guī)律；應(yīng)具有一定語(yǔ)言表達(dá)能力，可閱讀并理解知情同意書的內(nèi)容，以便真實(shí)反饋樣品使用感受；在測(cè)試期間同意停止使用其他具有抗皺功效的護(hù)理或保健產(chǎn)品。

（2）排除標(biāo)準(zhǔn)

皮膚極度敏感、過敏體質(zhì)、有皮膚疾病或有嚴(yán)重其它疾病而可能會(huì)影響測(cè)試結(jié)果判斷的體驗(yàn)者；處于妊娠、哺乳、備孕期等特殊期的女性；近期有使用過可能對(duì)測(cè)試結(jié)果有影響的美容產(chǎn)品、不能堅(jiān)持并配合定期數(shù)據(jù)采集等其他不適合參加的體驗(yàn)者。

1.2.2 測(cè)試及評(píng)價(jià)方法

體驗(yàn)者每天早晚各使用一次樣品，按照潔面乳、水、精華液、面霜的順序進(jìn)行皮膚護(hù)理，其中左側(cè)臉頰及眼周使用的水、精華液、面霜中添加人參組織培養(yǎng)物，右側(cè)臉頰及眼周使用空白組樣品（不含人參組織培養(yǎng)物）；共體驗(yàn)測(cè)試8周，分別在0、4、8周各回訪一次，進(jìn)行測(cè)試VISIA面部圖像分析測(cè)試及皮膚彈性測(cè)試。

使用VISIA圖像分析儀主要測(cè)試分析體驗(yàn)者使用產(chǎn)品前后面部紋理及眼周細(xì)紋特征數(shù)量的變化趨勢(shì)，數(shù)值越小，表明皺紋及紋理越少，皮膚越細(xì)膩，則效果也就越好。

使用皮膚彈性測(cè)試儀測(cè)量臉頰的皮膚總彈性參數(shù)值R2，連續(xù)測(cè)試3次取平均值；其表示皮膚的回彈量與皮膚的最大拉伸量之比，其被認(rèn)為是最接近皮膚真實(shí)彈力狀態(tài)的參數(shù)值，比值越大（極限最大值為1），表明皮膚彈性越好[6]。

測(cè)試條件：體驗(yàn)者使用統(tǒng)一的潔面產(chǎn)品對(duì)面部進(jìn)行清潔，然后在測(cè)試環(huán)境中穩(wěn)定靜坐30 分鐘，期間保持心態(tài)放松，盡量避免不必要的活動(dòng)。隨后研究者分別對(duì)體驗(yàn)者臉部?jī)蓚?cè)臉頰、眼周皮膚進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試全程在溫度為（22.0±2.0）℃，相對(duì)濕度為50%±10%的恒溫恒濕環(huán)境中進(jìn)行。

1.2.3 DPPH自由基清除率

采用紫外-可見分光光度法同時(shí)對(duì)50%濃度的實(shí)驗(yàn)組精華液及空白對(duì)照組進(jìn)行DPPH自由基清除檢測(cè)實(shí)驗(yàn)；得到精華液樣品的DPPH自由基清除率[7]。

1.2.4 彈性蛋白酶抑制率

采用紫外-可見分光光度法同時(shí)對(duì)50%濃度的實(shí)驗(yàn)組精華液及空白對(duì)照組進(jìn)行彈性蛋白酶抑制檢測(cè)實(shí)驗(yàn)；得到精華液樣品的彈性蛋白酶抑制率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)[8]。

1.2.5 斑馬魚實(shí)驗(yàn)測(cè)試

將0.5%濃度的精華液實(shí)驗(yàn)組和不添加精華液的空白對(duì)照組，給予30～90尾AB系斑馬魚，28℃條件下孵育24小時(shí)；提取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組斑馬魚的RNA，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組精華液促進(jìn)斑馬魚體內(nèi)I型膠原蛋白基因（collala基因）相對(duì)表達(dá)量[9]。

Part 2結(jié)果與討論

本研究共篩選出33名年齡在30歲至50歲女性體驗(yàn)者，最終有效體驗(yàn)者30例，平均年齡38.8歲。使用產(chǎn)品前，測(cè)試體驗(yàn)者左右臉皮膚各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)對(duì)比均無(wú)顯著性差異（p>0.05），排除左右臉皮膚初始狀態(tài)影響。

2.1 皮膚彈性測(cè)試

使用產(chǎn)品前后體驗(yàn)者左右臉頰皮膚彈性變化見圖1。使用產(chǎn)品后，左臉頰處的皮膚彈性R2平均值呈上升趨勢(shì)。皮膚彈性在第4周顯著提升至0.599 （p<0.001）；使用產(chǎn)品8周后，臉頰彈性R2平均值與第0周相比，其變化率為20.81%，具有極顯著性改變（p<0.001），右側(cè)對(duì)照組皮膚彈性提升效果不太明顯。說(shuō)明人參組織培養(yǎng)物具有顯著提升皮膚的彈性，緊致肌膚的效果。

皮膚彈性測(cè)試儀得到的皮膚總彈性值R2，用于表征皮膚彈性狀態(tài)，已有廣泛的應(yīng)用及良好的市場(chǎng)認(rèn)可度，可客觀評(píng)價(jià)皮膚緊致功效[8]。

2.2 皮膚VISIA測(cè)試

使用產(chǎn)品前后體驗(yàn)者臉部皮膚紋理變化見圖2；眼周皺紋變化見圖3。使用產(chǎn)品后，臉部的皮膚紋理及眼周皺紋的平均值均呈下降趨勢(shì)。臉部紋理及眼周皺紋在第4周有顯著降低，臉部紋理降低率為8.40% （p<0.01）；眼周皺紋降低率為13.8% （p<0.01）；使用產(chǎn)品8周后，臉部紋理降低率為19.38%，眼周皺紋降低率為20.47%，均具有極顯著性改變（p<0.001），說(shuō)明含有人參組織培養(yǎng)物的護(hù)膚品具有顯著平滑紋理、減少眼周可見皺紋的作用。與右側(cè)對(duì)照組相比，可見人參組織培養(yǎng)物在平滑紋理及減少眼周可見皺紋方面均具有較明顯的提升效果。

VISIA面部圖像分析具有非常好的可視化效果，同時(shí)能夠精確的定量的診斷分析皮膚檢測(cè)項(xiàng)目狀態(tài)；皮膚的紋理及皺紋通過使用前后圖像對(duì)比分析，非常直觀地反映出產(chǎn)品給皮膚帶來(lái)的變化。

2.3 生物實(shí)驗(yàn)功效測(cè)試

通過紫外分光光度計(jì)法測(cè)試50%含有人參組織培養(yǎng)物精華液產(chǎn)品對(duì)自由基DPPH自由基清除率為27.5%±0.11%以及彈性蛋白酶抑制率12.8%±0.66%；并與空白值比較，進(jìn)行顯著性差異p值分析，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示p＜0.05；測(cè)試結(jié)果具有顯著意義；測(cè)試對(duì)比圖見圖4、圖5。通過生物實(shí)驗(yàn)功效測(cè)試結(jié)果說(shuō)明產(chǎn)品也具有較顯著的抗氧化、緊致、抗皺效果。

生物實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)方法是通過測(cè)試產(chǎn)品對(duì)細(xì)胞衰老因子自由基清除、彈性蛋白酶抑制作用，間接證明產(chǎn)品具有皮膚緊致、抗皺效果。該兩種檢測(cè)方法是目前化妝品功效評(píng)價(jià)中比較常用的實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)方法，能夠客觀反映化妝品緊致、抗皺功效，具有較高的參考價(jià)值。

2.4 斑馬魚功效測(cè)試

通過斑馬魚測(cè)試含有人參組織培養(yǎng)物精華液產(chǎn)品對(duì)collala基因相對(duì)表達(dá)量，在0.5%濃度下，基因相對(duì)表達(dá)量為1.26與正常對(duì)照組相比，表達(dá)量有明顯增加，增加量約在26%左右；通過顯著性分析p值＜0.05，測(cè)試對(duì)比圖見圖6；說(shuō)明產(chǎn)品具有較明顯促進(jìn)膠原蛋白表達(dá)作用，進(jìn)而證明產(chǎn)品具有顯著的抗皺效果。

斑馬魚作為一種模式生物，其在分子水平上與人類相似程度超過85%，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)進(jìn)行原料功效篩選評(píng)估；斑馬魚測(cè)試的科學(xué)性和實(shí)用性得到了充分驗(yàn)證[10]。通過測(cè)試產(chǎn)品促進(jìn)斑馬魚體內(nèi)膠原蛋白基因的表達(dá)，進(jìn)而間接證明具有促進(jìn)人體膠原蛋白生成的作用及抗皺功效?；瘖y品抗皺功效評(píng)價(jià)方面，其對(duì)哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體實(shí)驗(yàn)具有很好的互補(bǔ)性及一定替代性。

2.5 體驗(yàn)者主觀感受統(tǒng)計(jì)

30位體驗(yàn)者分別在第0、4、8周隨訪時(shí)進(jìn)行自我評(píng)價(jià)問卷填寫，問卷內(nèi)容主要包含使用產(chǎn)品前后皮膚的彈性、緊實(shí)度、皺紋改善程度、皮膚光滑程度、皮膚滋潤(rùn)度是否有變化，產(chǎn)品膚感、延展性、吸收性、溫和性以及功效結(jié)果等是否滿意，最后對(duì)產(chǎn)品整體滿意度進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)體驗(yàn)者的個(gè)人主觀感受對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)結(jié)果為：針對(duì)緊致、抗皺、保濕有效率均大于85.71%；產(chǎn)品整體膚感、吸收速度及使用效果均比較滿意，體驗(yàn)過程無(wú)明顯紅腫、刺癢或過敏現(xiàn)象；整體滿意度為100%。由此可見，含人參組織培養(yǎng)物護(hù)膚產(chǎn)品具有較明顯的保濕、抗皺、緊致的效果。

Part 3結(jié)論

使用含有人參組織培養(yǎng)物護(hù)膚產(chǎn)品體驗(yàn)測(cè)試8周，進(jìn)行了人體面部皮膚彈性、VISIA圖像分析測(cè)試，并結(jié)合自由基DPPH清除率、彈性蛋白酶抑制率以及斑馬魚膠原蛋白基因表達(dá)量測(cè)試，結(jié)果均顯示產(chǎn)品具有顯著緊致、抗皺功效（p＜0.05）。

綜合人體體驗(yàn)功效評(píng)價(jià)、斑馬魚功效評(píng)價(jià)以及生物實(shí)驗(yàn)功效評(píng)價(jià)三類評(píng)價(jià)方法，并結(jié)合體驗(yàn)者主觀感受滿意度調(diào)研統(tǒng)計(jì)結(jié)果，表明含有人參組織培養(yǎng)物的護(hù)膚產(chǎn)品具有顯著的緊致、抗皺功效；且不同的功效評(píng)價(jià)方法與體驗(yàn)者主觀評(píng)價(jià)結(jié)果一致。

作者介紹

劉金坤，房凡仁，李 曉，高 帥，何演焱，李麗迪：供職于山東安然納米實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司

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