生防菌對(duì)芒果葉部炭疽病的生防效果研究

摘 要：生物防治是芒果膠孢炭疽病防控的主要措施之一。為了系統(tǒng)性評(píng)價(jià)生防菌的防控效果，為生防菌劑的生產(chǎn)應(yīng)用提供指導(dǎo)，本文采用離體葉片針刺法，室內(nèi)評(píng)價(jià)了18種生防菌對(duì)‘貴妃’‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’兩個(gè)芒果主栽品種葉部炭疽病的防護(hù)、治療和兼防兼治效果。結(jié)果表明，生防菌對(duì)兩個(gè)主栽品種的芒果葉部病害的防效具有一致性，18種生防菌均具有防護(hù)、治療和兼防兼治的作用，其中對(duì)‘貴妃’芒果效果較好的是S8（蠟質(zhì)芽孢桿菌菌劑）、S3（枯草芽孢桿菌菌劑），對(duì)‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果效果最好的是S3；田間防治芒果葉部炭疽病試驗(yàn)表明，S8、S9（枯草·納豆·地衣芽孢桿菌·硝化細(xì)菌）效果較好，防效超過90%，可以應(yīng)用于芒果葉部膠孢炭疽病的生物防治中。

關(guān)鍵詞：芒果葉部炭疽??；生防菌；防治效果；田間防治

中圖分類號(hào)：S667.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-1038（2024）10-0041-06

DOI：10.19590/j.cnki.1008-1038.2024.10.008

Research on Bio-control Effect of Bio-control Bacteria

on Mango Leaf Anthracnose

CHEN Ze YANG Shiyou ZHU Min LUO Ruixiong ZHANG He

（1. Lingao County of Comprehensive Administrative Law Enforcement Bureau， Lingao 571800， China; 2. Key Laboratory of Integrated Pest Management on Tropical Grops， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Environment and Plant Protection Institute， Haikou 571101， China;

3. College of Biology Sciences and Agronomy， Honghe University， Mengzi 661199， China; 4. Tropical Crops

Genetic Resources Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou 571101， China）

Abstract： Biological control is one of the main measures for the prevention and control of mango anthracnose. In order to systematic evaluation of control effect of bio-control bacteria， provide guidance for the production and application of bio-control agents， this article evaluated protective， therapeutic， combined prevention and treatment effects of 18 biocontrol bacteria on the leaf anthracnose of two main varieties of mango， ‘Guifei’ mango and ‘Tainong No.1’ mango， indoors. The results showed that the control effect of bio-control bacteria on the leaf diseases of two main varieties of mango was consistent. All 18 bio-control bacteria had protective， therapeutic， and combined prevention and treatment effects. Among them， S8 （Bacillus cereus） and S3 （Bacillus subtilis） had better effects on ‘Guifei’， and S3 had the best effect on ‘Tainong 1’ mango. The field experiment on preventing and controlling anthracnose in mango leaves showed that S8 and S9 （Bacillus subtilis · natto · licheniformis · nitrifying bacteria） had good control effects， with a control efficiency of over 90%， and could be applied in the biological control of Colletotrichum gloeosporioides in mangoes.

Keywords： Mango leaf anthracnose; bio-control bacteria; control effect; field control

近年來，國(guó)家大力提倡發(fā)展綠色生物農(nóng)藥，鼓勵(lì)生產(chǎn)中多施用綠色生物農(nóng)藥，逐步減少化學(xué)農(nóng)藥的施用量，保障農(nóng)產(chǎn)品安全。植物病原物在致病過程中會(huì)受到寄主植物、環(huán)境條件等的影響，利用有益微生物來控制病害發(fā)生發(fā)展的方法被稱為植物病害生物防治，而這些有益微生物則稱為植物病害生防菌[1]，其產(chǎn)品便是綠色生物農(nóng)藥，通過以菌治菌或以菌抑菌的方式實(shí)現(xiàn)對(duì)病害的防控[2]，對(duì)人畜安全、環(huán)境友好[3]，同時(shí)也能改善環(huán)境，獲得長(zhǎng)期效益，符合生態(tài)文明建設(shè)要求。

芒果葉部炭疽病是芒果生產(chǎn)中發(fā)生最普遍、危害性最大的一種病害，在世界各地芒果產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，致病菌以膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）為主[4]，可造成芒果園內(nèi)植株梢枯、葉枯、落花落果和采后果實(shí)大量腐爛等[5]。病原菌的寄主范圍十分廣泛，不同寄主之間的病原菌可以相互感染，給病害防治增加了難度[6]。在芒果病害的生物防治中，生防芽孢桿菌[7-9]、酵母菌[10-11]是廣泛應(yīng)用的菌種類群；單一生防菌的抗菌譜較窄，而將良好相容性的多個(gè)種類的生防菌混合使用，能夠發(fā)揮各自抑菌優(yōu)勢(shì)，提升防治效果[12]；離體葉片針刺或劃傷法是對(duì)芒果病害評(píng)價(jià)的常用方法[13-14]。

當(dāng)前，對(duì)芒果具有較好生防效果的有生防細(xì)菌、生防酵母菌和生防真菌等多種類型，因絲狀真菌的定殖較為困難，往往采用發(fā)酵液進(jìn)行生物防治[15]，因此本文重點(diǎn)考慮生防細(xì)菌和生防酵母菌，選用市售量大的生防菌劑和本實(shí)驗(yàn)室自篩的多個(gè)生防菌株，在前期室內(nèi)抑菌試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用離體葉片針刺法測(cè)定生防菌對(duì)不同品種芒果葉片防治的效果，并通過田間試驗(yàn)測(cè)定生產(chǎn)可行性，提出芒果葉部炭疽病的生物防治措施，拓寬病害防控思路。

1 材料與方法

1.1 材料

供試的芒果炭疽病菌為膠孢炭疽菌菌株A2，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定與保存。

供試的18種生防菌劑中S1～S11為市售產(chǎn)品，其中枯草芽孢桿菌S1，山東省梁山縣陽光生物工程研究所；枯草芽孢桿菌S2，北海群林生物工程有限公司；枯草芽孢桿菌S3，云南星耀生物制品廠；嗜冷·枯草·納豆芽孢桿菌S4，山東寶來利生物工程股份有限公司；側(cè)孢芽孢桿菌S5，河南省沃寶生物科技有限公司；巨大芽孢桿菌S6，河南省沃寶生物科技有限公司；地衣芽孢桿菌S7，臨沂十七狼飼料有限公司；蠟質(zhì)芽孢桿菌S8，山東泰洛藥業(yè)有限公司；枯草·納豆·地衣芽孢桿菌·硝化細(xì)菌S9，西安富祺生物科技有限公司；地衣芽孢桿菌S10，山西凱盛肥業(yè)集團(tuán)有限公司；解淀粉芽孢桿菌S11，山西凱盛肥業(yè)集團(tuán)有限公司。其余7種為中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所實(shí)驗(yàn)室分離、篩選所得，編號(hào)分別為JM、5a-9、6a-3、6c-5、FCK、B1和Z10。

供試的樣品為‘貴妃’‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果的嫩葉，采自海南省東方市芒果園（108°43′E，19°11′N）內(nèi)。選取葉片完全張開、葉齡一致的健康嫩葉，用0.8% NaOCl消毒5 min，清水沖洗3次，晾干葉片，使背面向上平放在墊有濕潤(rùn)濾紙的保鮮盒內(nèi)，100%濕度下室溫保濕，備用[16]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 供試生防菌對(duì)離體芒果葉片炭疽病防效測(cè)定

將備用的‘貴妃’芒果嫩葉、‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果嫩葉，選用10針束針刺傷葉片正面，接種膠孢炭疽菌菌餅，即為離體葉片針刺法；以先接種生防菌，接種12 h后再接種膠孢炭疽菌菌餅的方式評(píng)價(jià)生防菌的防護(hù)效果；以先接種膠孢炭疽菌菌餅，接種12 h后再接種生防菌的方式評(píng)價(jià)生防菌的治療效果；以同時(shí)接種生防菌和膠孢炭疽菌菌餅的方式評(píng)價(jià)生防菌的兼防兼治效果；4 d后用十字交叉法測(cè)定病斑大小，以只接種膠孢炭疽菌菌餅而不添加任何生防菌液的為對(duì)照（CK），計(jì)算病情指數(shù)、防效[17]。

1.2.2 供試生防菌對(duì)芒果葉部炭疽病的田間防效試驗(yàn)

供試生防菌配制濃度為1×108 cfu/mL的生防菌液，選取‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’樹上剛抽出的嫩葉，用手持噴壺噴灑，間隔3 d施藥一次，連續(xù)施藥3次，試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，3次施藥后調(diào)查病情指數(shù)，計(jì)算防效[17]。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

室內(nèi)離體葉片接種后，采用十字交叉法測(cè)量病斑直徑。芒果炭疽病的嚴(yán)重程度根據(jù)病斑直徑（X）的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)判，0級(jí)為X=0 cm，1級(jí)為0＜X≤0.5 cm，3級(jí)為0.5 cm＜X≤1.0 cm，5級(jí)為1.0 cm＜X≤2.0 cm，7級(jí)為2.0 cm＜X≤4.0 cm，9級(jí)為X＞4.0 cm[18]。

田間防效試驗(yàn)時(shí)，芒果炭疽病的嚴(yán)重程度根據(jù)病斑面積占整個(gè)葉片面積的比例進(jìn)行分級(jí)，0級(jí)為無病斑，1級(jí)為病斑面積占整個(gè)葉片面積的5%（含）以下，3級(jí)為病斑面積占整個(gè)葉片面積的6%～15%，5級(jí)為病斑面積占整個(gè)葉片面積的16%～25%，7級(jí)為病斑面積占整個(gè)葉片面積的26%～50%，9級(jí)為病斑面積占整個(gè)葉片面積的51%以上。按照公式（1）（2）計(jì)算病情指數(shù)和防效。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2010進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用SPSS 18.0軟件進(jìn)行pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌對(duì)離體芒果葉片炭疽病的防效

2.1.1 生防菌對(duì)離體芒果葉片炭疽病的防護(hù)效果

由表1可知，先噴生防菌，再接種膠孢炭疽菌，4 d后兩個(gè)芒果品種上的病斑直徑、病情指數(shù)均小于對(duì)照，說明病斑擴(kuò)展得到了有效抑制；在‘貴妃’芒果上的防效介于25.9%～96.0%之間，防效超80%的生防菌株有S1、S3、S5、S8和JM；在‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果上的防效介于20.2%～95.7%之間，防效超80%的有S3和S8；對(duì)兩個(gè)芒果品種防效同時(shí)超過80%的生防菌株是S3和S8。分析兩個(gè)芒果品種上防效的線性相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，二者之間的線性回歸方程為y=0.956 7x-13.123（r=0.908 6），且呈極顯著正相關(guān)（P=0.01，pearson相關(guān)性為0.909）；說明Ｓ３和S８對(duì)炭疽病具有較好的防護(hù)效果。

2.1.2 生防菌對(duì)離體芒果葉片炭疽病的治療效果

由表2可知，先接種膠孢炭疽菌，再噴霧生防菌，4 d后發(fā)現(xiàn)兩個(gè)芒果品種上的病斑直徑、病情指數(shù)均小于對(duì)照，說明病斑擴(kuò)展得到有效抑制；在‘貴妃’芒果上的防效介于4.8%～96.0%之間，防效超80%的生防菌株有S8和S3；在‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果上的防效介于7.4%～87.7%之間，防效超80%的為S3；對(duì)兩個(gè)芒果品種防效同時(shí)超過80%的生防菌株是S3，其次是S8。分析對(duì)兩個(gè)芒果品種的治療效果的線性相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，二者之間的線性回歸方程為y=0.802 9x-0.992 8（r=0.947 6），說明S3對(duì)芒果炭疽病具有較好的治療效果。

2.1.3 生防菌對(duì)離體芒果葉片炭疽病的兼防兼治效果

由表3可知，同時(shí)接種膠孢炭疽菌和生防菌，4 d后發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)芒果品種上的病斑直徑、病情指數(shù)均小于對(duì)照，說明病斑擴(kuò)展得到明顯抑制；在‘貴妃’芒果上的防效介于16.7%～96.0%之間，防效超80%的依次有S8和S3；在‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果上的防效介于7.4%～98.5%之間，防效超80%的為S3，接近80%的是S5（78.4%）、S８（7５.３%）；對(duì)兩個(gè)芒果品種防效同時(shí)超過80%的生防菌株是S3，其次是S8。分析兩個(gè)芒果品種上防效的線性相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，二者之間的線性回歸方程為y=1.058 1x-20.561（r=0.901 7），說明S3對(duì)炭疽病具有較好的兼防兼治效果。

2.2 生防菌對(duì)芒果葉部炭疽病的田間防效

由圖1可知，田間防治效果測(cè)定表明，供試生防菌的田間防效介于29.9%～95.0%之間，各生防菌之間的防治效果差異顯著，S8、S9的防治效果超過90%，二者差異不顯著；防治效果在80%～90%之間的有S1、S2、S3、S4、S11、JM、5a-9、6a-3、FCK；防效較差的是B1、S6、Z10，分別為67.8%、55.0%、29.9%，三者之間差異顯著。

3 結(jié)論與討論

本文采用離體葉片針刺法測(cè)定供試的11種市售生防菌和7種自篩的生防菌對(duì)‘貴妃’‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果嫩葉的膠孢炭疽病的防治效果，發(fā)現(xiàn)供試的18種生防菌對(duì)兩個(gè)品種的膠孢炭疽病有不同的防治效果，‘貴妃’和‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’芒果嫩葉上，先噴生防菌再接種病原菌的平均防效（62.66%、46.82%），明顯高于先接種病原菌后噴生防菌（45.70%、35.70%）、同時(shí)接種病原菌和生防菌的組合（50.17%、32.53%）；同一種處理方法下的‘貴妃’和‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’的防效均表現(xiàn)為極顯著線性相關(guān)性，同時(shí)對(duì)3種處理方法的兩個(gè)芒果品種的防效進(jìn)行兩兩pearson線性相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，均表現(xiàn)為極顯著的線性相關(guān)性（P=0.01，pearson相關(guān)性介于0.832～0.974）。盡管供試生防菌對(duì)‘貴妃’膠孢炭疽病的防治效果常高于‘臺(tái)農(nóng)1號(hào)’，但在兩個(gè)品種上的防治效果表現(xiàn)極顯著的線性相關(guān)性，說明生防菌在不同的芒果品種上均能表現(xiàn)出相近的防治效果，也說明本文開展的選用兩個(gè)主栽品種測(cè)定生防菌防治效果的方法具有可行性，能真實(shí)性地反映生防菌的防控潛力，可為芒果其他葉部病害或其他作物病害測(cè)定生防菌防控效果提供參考。

研究發(fā)現(xiàn)，供試生防菌中S3和S8具有較好的膠孢炭疽病防護(hù)效果，S3對(duì)膠孢炭疽病具有較好的治療效果，其次是S8，結(jié)合田間防治效果和張欣等[16]的室內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果，綜合認(rèn)為S3、S8對(duì)芒果膠孢炭疽病的防治效果高于其他供試生防菌，具有預(yù)防和治療的效果，并能對(duì)芒果多種病害具有較佳的防治效果；S3為枯草芽孢桿菌菌劑、S8為蠟質(zhì)芽孢桿菌菌劑，均為細(xì)菌；而JM為季也蒙畢赤酵母[19-20]，屬于真菌；選用真菌和細(xì)菌進(jìn)行混合，二者的抑菌機(jī)理不一樣，能夠?qū)崿F(xiàn)互補(bǔ)，擴(kuò)大抑菌效果。生產(chǎn)中可以選用這三者進(jìn)行混合施用或輪換施用，從而增加生防菌的多樣性，降低因不同生態(tài)環(huán)境差異所導(dǎo)致的病害防效差異[2]；其施用方法是從剛抽出嫩葉時(shí)開始連續(xù)噴施生防菌，間隔3 d施用1次，連續(xù)施用3次，使生防菌劑在葉片上定殖，占領(lǐng)病原菌侵染的位點(diǎn)，保護(hù)傷口，從而實(shí)現(xiàn)病害的生物防治。

參考文獻(xiàn)：

[1] 韓長(zhǎng)志. 植物病害生防菌的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J]. 中國(guó)森林病蟲， 2015， 34（1）： 33-37， 25.

[2] 邱德文. 我國(guó)生物農(nóng)藥現(xiàn)狀分析與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 植物保護(hù)， 2007， 33（5）： 27-32.

[3] 黃偉， 萬明長(zhǎng)， 喬榮. 貴州獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與對(duì)策[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012， 40（4）： 184-186.

[4] 林善海， 黃思良， 潘潔莉. 芒果炭疽病生物防治研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)南方果樹， 2007， 36（5）： 42-44.

[5] 楊葉， 何書海， 張淑娟， 等. 海南芒果炭疽菌對(duì)多菌靈的抗藥性測(cè)定[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2008， 29（1）： 73-77.

[6] 戚佩坤. 廣東果樹真菌病害志[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2000： 6-16.

[7] 楊勝遠(yuǎn)， 陳桂光， 肖功年， 等. 芽孢桿菌Bacillus sp. X-98-2對(duì)芒果保鮮作用[J]. 食品科學(xué)， 2004（3）： 180-183.

[8] GOVENDER V， KORSTEN L， DHARINI S. Semi-commercial evaluation of Bacillus licheniform is to control mango post-harvest diseases in South Africa[J]. Postharvest Biology and Technology， 2005， 38（1）： 57-65.

[9] 趙佳， 童凱， 李東， 等. 芒果采后炭疽病生防菌研究進(jìn)展[J]. 保鮮與加工， 2022， 22（8）： 88-96.

[10] 何秀娟. 篩選芒果采后炭疽病和蒂腐病的生防菌研究[D]. 武漢： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2006： 33.

[11] 王潤(rùn)菡， 井敏敏， 趙紅， 等. 采后芒果炭疽病拮抗酵母菌的分離和篩選[J]. 食品研究與開發(fā)， 2016， 37（7）： 180-183.

[12] 葉子， 夏楊， 高愛平， 等. 生物防治在芒果病害上的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)果菜， 2020， 40（11）： 66-70.

[13] 張賀， 陳堅(jiān)， 劉曉妹， 等. 基于離體葉片法評(píng)價(jià)16種藥劑對(duì)杧果露水斑病菌的抑菌效果[J]. 中國(guó)南方果樹， 2018， 47（5）： 34-37.

[14] 羅睿雄， 黃建峰， 張欣， 等. 229份杧果種質(zhì)對(duì)炭疽病抗性初步評(píng)價(jià)[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2013， 33（3）： 36-40， 49.

[15] 張賀， 楊石有， 汪熊夢(mèng)琦， 等. 生防菌對(duì)芒果主要病害病原菌室內(nèi)抑菌試驗(yàn)[J]. 中國(guó)森林病蟲， 2018， 37（6）： 16-19.

[16] 張欣， 高愛平， 劉增亮， 等. 影響芒果炭疽病病斑擴(kuò)展的因素[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2009， 30（11）： 1656-1659.

[17] 梁威， 張蕊， 楊石有， 等. 生防酵母菌與金屬離子協(xié)同對(duì)芒果炭疽病的防治效果[J]. 中國(guó)南方果樹， 2018， 47（3）： 62-65， 69.

[18] 謝藝賢， 符悅冠. 熱帶作物種質(zhì)資源抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2009： 27-30.

[19] 高云慨， 張榮意， 鐘利文， 等. 1株新分離拮抗酵母菌株對(duì)芒果炭疽病生防效果及其分類鑒定[J]. 熱帶生物學(xué)報(bào)， 2015， 6（1）： 47-52.

[20] 陳敏， 高云慨， 宋海超， 等. 氯化鈣結(jié)合季也蒙畢赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）對(duì)抑制芒果采后炭疽病效果的影響[J]. 食品科學(xué)， 2016， 37（2）： 204-209.