牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在牙髓再生中的作用機(jī)制

[摘要] 牙髓再生是一種基于組織工程治療牙髓壞死的新策略，應(yīng)用種子細(xì)胞結(jié)合支架和生長因子，實現(xiàn)牙本質(zhì)、血管和神經(jīng)的新生。外泌體是一類直徑約為30～150 nm的細(xì)胞外囊泡，在調(diào)控細(xì)胞間信息和物質(zhì)傳遞中發(fā)揮重要作用。2016 年以來，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體因其在牙髓組織再生領(lǐng)域展現(xiàn)出的巨大潛力而備受矚目。本文介紹了牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體的種類和培養(yǎng)環(huán)境，并對牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體調(diào)控細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化、血管生成、神經(jīng)再生和成骨向分化的作用和機(jī)制作一綜述。

[關(guān)鍵詞] 外泌體； 牙髓再生； 牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞

[中圖分類號] R781.3 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [doi] 10.7518/gjkq.2024064

組織工程被視為解決牙髓再生修復(fù)的重要途徑。傳統(tǒng)的組織工程涉及種子細(xì)胞、支架材料及生物活性因子等的有機(jī)結(jié)合，其中干細(xì)胞作為種子細(xì)胞是組織工程的核心成分。然而，干細(xì)胞治療面臨免疫排斥、醫(yī)學(xué)倫理爭議和安全問題，是制約其直接應(yīng)用于臨床的重要因素。2013年以來，干細(xì)胞旁分泌的外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，發(fā)揮與干細(xì)胞相似的組織修復(fù)作用。與干細(xì)胞不同，外泌體可長期儲存和運輸，且無自身復(fù)制能力，具備較低的成瘤和病原體轉(zhuǎn)移風(fēng)險[1]，具有廣闊的應(yīng)用前景。

2016年以來，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體由于在牙髓組織再生領(lǐng)域展現(xiàn)出的巨大潛力而備受學(xué)者關(guān)注[2-3]。本文就外泌體在牙髓再生中的研究現(xiàn)狀進(jìn)行回顧，總結(jié)不同來源外泌體的應(yīng)用特點，重點討論了牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體影響牙本質(zhì)分化、血管新生和神經(jīng)修復(fù)的作用機(jī)制，以期為后續(xù)研究提供參考。

1 外泌體與細(xì)胞外囊泡的定義和生物學(xué)特性

外泌體（exosome） 是細(xì)胞外囊泡（extracellularvesicles，EVs） 的一種，為核內(nèi)體來源，是由細(xì)胞通過“內(nèi)吞-融合-釋放”過程分泌的膜性囊泡樣小體，直徑為30～150 nm[4]。除了外泌體，EVs 還包括微囊泡（microvesicles） 和凋亡小體（apoptotic bodies）， 為質(zhì)膜來源。按尺寸大小，EVs分為小于200 nm的小EVs （small EVs，sEVs）和大于200 nm的中/大EVs （medium/large EVs，m/lEVs）[5]。外泌體屬于小EVs，故在部分外文文獻(xiàn)中亦表述為sEV或EV。2018年，中國抗癌協(xié)會腫瘤標(biāo)志專業(yè)委員會外泌體技術(shù)專家委員會發(fā)布國內(nèi)外泌體專家共識《外泌體研究、轉(zhuǎn)化和臨床應(yīng)用專家共識》[6]。2021年，由中國研究型醫(yī)院學(xué)會細(xì)胞外囊泡研究與應(yīng)用專業(yè)委員會（ChineseSociety for Extracellular Vesicles， Chinese ResearchHospital Association，CRHA-CSEV） 牽頭制定的《人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡》（T/CRHA 001-2021） 和《人多能干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡》（T/CRHA 002-2021） 2項團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，為干細(xì)胞來源的外泌體/小細(xì)胞外囊泡的規(guī)范研究奠定了基礎(chǔ)。2024年2月，國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會（The International Society for Extracellular Vesicles，ISEV） 在發(fā)布的官方指南《Minimal informationfor studies of extracellular vesicles（MISEV2023） ： From basic to advanced approaches》[7]中，更新了對外泌體和細(xì)胞外囊泡命名的建議：當(dāng)不能明確其發(fā)生途徑時，避免使用“外泌體”等名稱，推薦使用通用術(shù)語“EVs”來保證其可拓展性。本綜述根據(jù)國內(nèi)慣例和延續(xù)已發(fā)表文獻(xiàn)的表述，使用“外泌體”一詞；同時亦參照外文原文表述，適時使用“EVs”或“sEV”。

外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂類、遺傳物質(zhì)如RNA等多種生物活性分子，在細(xì)胞間通訊和物質(zhì)轉(zhuǎn)運中扮演關(guān)鍵角色。目前研究顯示，外泌體含有多種不同功能的蛋白質(zhì)，如參與細(xì)胞穿透、侵襲和融合的四次跨膜蛋白，與抗原結(jié)合和呈遞相關(guān)的熱休克蛋白，參與外泌體釋放的多泡體形成蛋白，以及負(fù)責(zé)膜轉(zhuǎn)運和融合的蛋白質(zhì)。外泌體還攜帶不同形式的RNA，包括微小RNA （miRNA）、長鏈非編碼RNA （lncRNA）、與piwi蛋白相互作用的RNA （piRNA）、信使RNA （mRNA）、轉(zhuǎn)運RNA （tRNA）、小核RNA （snRNA） 和小核仁RNA （snoRNA） 等[3]。這些生物活性物質(zhì)使得外泌體在促進(jìn)組織修復(fù)與再生、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、以及攜帶藥物進(jìn)行靶向遞送等方面均發(fā)揮重要作用[8-9]。外泌體對受體細(xì)胞的影響一般涉及2個過程：第1步為內(nèi)吞作用介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)，第2步為外泌體“貨物”介導(dǎo)的基因表達(dá)和細(xì)胞命運控制[10]。其中，受體細(xì)胞對外泌體的選擇性攝入主要由受體-配體相互作用、直接質(zhì)膜融合和受體細(xì)胞的吞噬作用3種方式調(diào)節(jié)[11]。通過以上過程，外泌體將組織特異性的蛋白和RNA運輸至受體細(xì)胞，參與對受體細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和分化等重要生理活動的調(diào)控。

2 參與牙髓再生的外泌體來源和提取環(huán)境

外泌體的功能高度依賴于其細(xì)胞來源及細(xì)胞的生理狀態(tài)[10]。參與牙髓再生的外泌體通常從牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞中提取，常見的細(xì)胞來源包括牙髓干細(xì)胞（dental pulp stem cells，DPSCs）[12]、人脫落乳牙牙髓干細(xì)胞（stem cells from human exfoliateddeciduous teeth，SHED）[13]和根尖牙乳頭來源的干細(xì)胞（stem cells from apical papilla，SCAP）[14]。SCAP對于牙髓和根方牙本質(zhì)的正常發(fā)育至關(guān)重要，故其來源的外泌體常用于研究生理或病理狀態(tài)下對DPSCs的影響，但受限于取材難度大，人源SCAP外泌體的研究還比較有限。此外，牙發(fā)育期上皮結(jié)構(gòu)Hertwig’s上皮根鞘（Hertwig’sepithelial root sheath，HERS） 細(xì)胞來源的外泌體亦引發(fā)個別學(xué)者關(guān)注，其對牙髓細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和潛在機(jī)制得到較為深入的研究[15]。

外泌體通常從細(xì)胞培養(yǎng)上清中收集，應(yīng)用差速離心、密度梯度分離、免疫磁珠、超濾或試劑盒等方法富集外泌體。通過改變細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，預(yù)先誘導(dǎo)細(xì)胞分化，其分泌的外泌體將具備誘導(dǎo)干細(xì)胞向特定方向分化的潛力[10，16-17]。在氧化應(yīng)激、缺氧或炎癥狀態(tài)下，細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體趨于擁有恢復(fù)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的治療作用[18-20]。此外，2021年以來，亦有少數(shù)學(xué)者從干細(xì)胞三維培養(yǎng)聚合體[21-22]或直接從牙髓組織中提取外泌體[23]。Wu等[22]的研究顯示，提取自SHED聚合體的外泌體的產(chǎn)量約為普通細(xì)胞來源外泌體的3倍，且在促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移與血管形成方面具有更好的效應(yīng)。研究者將這種效應(yīng)歸結(jié)于聚合體中細(xì)胞外基質(zhì)的作用，因其可模擬細(xì)胞天然微環(huán)境中的機(jī)械、化學(xué)與生物學(xué)特性，故聚合體產(chǎn)生外泌體的生物學(xué)效應(yīng)得到增強(qiáng)。Chen等[23]省卻了細(xì)胞培養(yǎng)步驟，從豬牙髓組織的浸提液中提取外泌體（pulp tissue derived-exosomes，DPT-Exos），并證明DPT-Exos與常規(guī)DPSCs外泌體相比，具有更好的促進(jìn)SCAP增殖、遷移和分化的作用。然而，由于DPT-Exos是牙髓天然環(huán)境中多種細(xì)胞外泌體的集合，發(fā)揮關(guān)鍵作用的是何種成分，仍有待進(jìn)一步探究。

3 牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體影響牙髓再生的作用和機(jī)制研究

牙髓再生被定義為牙根結(jié)構(gòu)、牙本質(zhì)和牙髓—牙本質(zhì)復(fù)合體的再生，包括血運網(wǎng)絡(luò)的重建、神經(jīng)元形成和牙本質(zhì)沉積[24]。2013年以來，基于干細(xì)胞的牙髓再生研究已獲得較大進(jìn)展。干細(xì)胞聯(lián)合支架植入根管內(nèi)，可形成具有成牙本質(zhì)細(xì)胞的牙髓樣組織[25-26]，且部分報道[27]顯示新生組織擁有血管和神經(jīng)結(jié)構(gòu)，具備與天然牙髓相似的形態(tài)和功能。隨著越來越多的學(xué)者認(rèn)識到外泌體是細(xì)胞傳遞信息和物質(zhì)的重要介質(zhì)，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體在牙髓再生中的作用受到重視。學(xué)者[28]將這些外泌體促進(jìn)牙髓再生修復(fù)的能力歸功于它們能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移和分化，并具有促進(jìn)血管生成和保護(hù)神經(jīng)的特性，而這些特性被認(rèn)為是外泌體攜帶的蛋白和RNA聯(lián)合作用的結(jié)果[10]。

3.1 參與成牙本質(zhì)向分化

誘導(dǎo)細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化，形成新的牙本質(zhì)沉積，從而促進(jìn)牙髓根尖周病患牙的牙根延長和根管壁增厚，是牙髓再生修復(fù)的首要目標(biāo)?，F(xiàn)有研究表明，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體在一定程度上對細(xì)胞的增殖、遷移和成牙本質(zhì)向分化均有促進(jìn)作用。2016年，Huang等[10]發(fā)現(xiàn)DPSCs外泌體可被DPSCs 和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bonemarrow mesenchymal stem cells，BMMSCs） 以劑量依賴的方式內(nèi)吞，并觸發(fā)P38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK） 信號通路，引起磷酸化P38的表達(dá)增加，上調(diào)骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP） 2和BMP9的表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化。研究者還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)成牙本質(zhì)向分化誘導(dǎo)的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體與普通外泌體相比，可更有效地誘導(dǎo)干細(xì)胞分化，推測這種差異是由于外泌體攜帶的miRNA和蛋白成分的不同導(dǎo)致。Hu等[16]通過微小RNA測序比較上述兩種外泌體上microRNA的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)miR-5100、miR-27a-5p、miR-652-3p、miR-1260a、miR-1260b，miR-370-3p和let-7f-1-3p等7種microRNA在經(jīng)成牙誘導(dǎo)的DPSCs分泌的外泌體中表達(dá)上調(diào)；經(jīng)驗證，miR-27a-5p能負(fù)向調(diào)控潛在轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1 （latent transforminggrowth factor β1-binding protein 1， LTBP1），激活TGFβ1/smads通路促進(jìn)DPSCs的成牙本質(zhì)向分化。田衛(wèi)東團(tuán)隊[23]應(yīng)用豬牙構(gòu)建體內(nèi)“細(xì)胞歸巢”模型，證實牙髓組織外泌體可招募SCAP，更廣泛地再生牙髓樣結(jié)締組織。Guo等[21]證明脫細(xì)胞牙基質(zhì)提供的微環(huán)境，可促進(jìn)SHED聚合體外泌體的分泌，在脫細(xì)胞牙基質(zhì)和SHED聚合體共培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的外泌體，能顯著提高SHED的成牙本質(zhì)相關(guān)蛋白如牙本質(zhì)涎磷蛋白（dentinsialophosphoprotein，DSPP） 和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白4（dentin matrix protein 4，DMP4） 的表達(dá)水平，有利于牙本質(zhì)形成。

與DPSCs外泌體和SHED聚合體外泌體相似，SCAP外泌體具有驅(qū)動細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化的作用。Zhuang等[29]將SCAP外泌體聯(lián)合BMMSCs填入牙根段后植入裸鼠皮下12周，可見牙髓樣組織形成和新生牙本質(zhì)沉積；體外實驗發(fā)現(xiàn)SCAP外泌體可提高BMMSCs成牙向分化標(biāo)志物DSPP的表達(dá)水平，但對堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和Runx轉(zhuǎn)錄因子2 （Runt-related transcription factor2，RUNX2） 的表達(dá)無明顯影響，推測SCAP外泌體可能主要促進(jìn)BMMSCs的DSPP分泌而非分化。Yang等[30]在小鼠患根尖周炎的切牙牙乳頭組織中發(fā)現(xiàn)了高表達(dá)的EVs標(biāo)記物CD63，推測EVs可能參與炎癥狀態(tài)下牙乳頭的分化。由于觀察到在SCAP中過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子核因子Ⅰ/C （nuclear factorⅠ/C， NFIC） 可挽救脂多糖（lipopolysaccharides，LPS） 刺激產(chǎn)生的成牙分化抑制作用，作者構(gòu)建了載NFIC的EVs，經(jīng)裸鼠皮下移植實驗證明其能更有效地提高DMP-1的表達(dá)并促進(jìn)礦化物沉積。

以上系列研究顯示，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體對細(xì)胞的成牙本質(zhì)向分化的促進(jìn)作用，可能是通過外泌體攜帶的miRNA和蛋白調(diào)節(jié)多條信號通路（如Wnt/β-catenin、p38/MAPK、TGFβ/smads） 實現(xiàn)的。然而，不同培養(yǎng)條件或培養(yǎng)體系對外泌體所載“貨物”的影響，目前尚缺乏系統(tǒng)研究；對于外泌體組織或細(xì)胞來源的選擇，仍缺乏分子機(jī)制層面的依據(jù)。除外miRNA和蛋白，外泌體是否還通過lncRNA、mRNA或其他遺傳物質(zhì)影響細(xì)胞的成牙本質(zhì)向分化，有待進(jìn)一步探索。

3.2 參與血管生成

血管生成是牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體再生和發(fā)育的基礎(chǔ)。在牙根發(fā)育接近完成的牙齒中，由于根尖孔小，血管長入受到限制，常導(dǎo)致植入物的營養(yǎng)和供氧不足。因此，充足的血供是牙髓再生中需要攻克的難題。目前研究認(rèn)為，外泌體主要通過保持內(nèi)皮細(xì)胞的活性、提高細(xì)胞增殖和遷移能力來促進(jìn)血管生成[31]。DPSCs外泌體可提高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelialcells，HUVECs） 的增殖和遷移能力，效果呈濃度依賴性[32]。同時，DPSCs外泌體還能促進(jìn)HUVECs成管，上調(diào)血管生成相關(guān)基因如血管內(nèi)皮生長因子A （vascular endothelial growth factor A， VEFGA）、激酶插入?yún)^(qū)受體（kinase insert domain receptor，KDR）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 （matrix metalloprotein-9， MMP-9）、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1，SDF-1）、成纖維細(xì)胞生長因子2 （fibroblast growth factor 2，F(xiàn)GF2）的表達(dá)，并觸發(fā)p38/MAPK和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase， AMPK） 信號通路[33-34]。Wu等[22]證實，SHED聚合體分泌的外泌體能更明顯地促進(jìn)SHED的內(nèi)皮分化和HUVECs血管生成；該外泌體中表達(dá)上調(diào)的miR-26a，可通過轉(zhuǎn)化生長因子β （transforming growth factor-β，TGF-β） /SMAD2/3信號傳導(dǎo)，參與對血管生成的調(diào)控。Liu等[35]發(fā)現(xiàn)，SCAP外泌體可將細(xì)胞分裂周期蛋白42 （cell division cycle 42，Cdc42） 轉(zhuǎn)移至內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的骨架重組和遷移，從而在小鼠腭部牙齦缺損模型中發(fā)揮促進(jìn)早期血管化、改善軟組織再生的作用。與上述結(jié)果相矛盾的是，Liu等[36]的研究顯示，SHED外泌體能抑制HUVECs血管生成相關(guān)因子如VEGFA、MMP-9和血管生成素1 （angiopoietin 1，ANGPT1） 的表達(dá)，并顯著減少口腔鱗狀細(xì)胞癌裸鼠異位種植模型中的微血管形成。經(jīng)miRNA測序，作者發(fā)現(xiàn)SHED外泌體上富集miR-100-5p和miR-1246，推測該抑制作用與miR-100-5p和miR-1246分別經(jīng)哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR） /低氧誘導(dǎo)因子-1 （hypoxia inducible factor-1，HIF-1） 途徑和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin-converting enzyme，ACE） 途徑下調(diào)血管生成關(guān)鍵因子VEGFA的表達(dá)有關(guān)。

系列研究表明，炎癥、缺氧等環(huán)境下，細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具備更強(qiáng)的誘導(dǎo)血管生成潛能[18-19，37-38]，該作用涉及HIF-1、Toll樣受體（Tolllikereceptor，TLR）、血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）、促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞激酶受體（erythropoietin-producinghepatomocellular receptor， Eph） /膜結(jié)合配體（Eph receptor-interacting proteins，ephrin） 和Notch等信號通路。來自牙周炎牙齒的DPSCs-EV在刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成方面具有更大的潛力，提高血管生成相關(guān)基因/蛋白表達(dá)的能力顯著高于來自健康牙齒的DPSCs-EV[37]。經(jīng)LPS刺激產(chǎn)生的DPSCs外泌體中，miR-146a-5p、miR-2110和miR-200b-3p 的表達(dá)上調(diào)， 可能涉及HIF-1 和TLR信號通路[18]。低氧環(huán)境下，牙髓干細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體也可增強(qiáng)HUVECs的血管形成能力。Liu等[38]經(jīng)miRNA測序，發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)的SHED外泌體可能通過let-7f-5p/Argonaute1/VEGF和miR-210-3p/ephrinA3信號軸調(diào)控血管生成。Li等[19]通過液相二級質(zhì)譜（liquid chromatography coupled to tandemmass spectrometry，LC-MS/MS） 分析發(fā)現(xiàn)，相比于普通外泌體，低氧環(huán)境下產(chǎn)生的DPSCs外泌體有79種蛋白表達(dá)存在顯著差異，其中表達(dá)上調(diào)的賴氨酰氧化酶樣蛋白2 （lysyl oxidase-like 2，LOXL2） 參與了低氧外泌體介導(dǎo)的血管再生。此外，在過表達(dá)HIF-1α的DPSCs外泌體上，miR-15、miR-16、miR-17、miR-31 和miR-126 等10 種miRNA表達(dá)上調(diào)， 推測HIF-1α 通過增加外泌體上Notch信號通路的唯一配體——Jagged1的包裝，激活Notch信號通路，促進(jìn)血管生成[39]。

在牙髓再生中，血運的重建與牙髓細(xì)胞的正常分化關(guān)系密切?，F(xiàn)有的研究表明，外泌體對血管再生和細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化的促進(jìn)作用較為明確，并可能存在信號通路網(wǎng)絡(luò)的交聯(lián)。然而，外泌體在共培養(yǎng)環(huán)境下如何被不同細(xì)胞（如DPSCs和HUVECs） 精確識別內(nèi)吞，以及外泌體是否在復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中對不同細(xì)胞發(fā)揮一致的正向作用，目前尚存在諸多研究空白。隨著類器官和外泌體標(biāo)記技術(shù)的不斷進(jìn)步，有望在未來更加深入地理解外泌體調(diào)控組織內(nèi)多種細(xì)胞間通訊的機(jī)制。

3.3 參與神經(jīng)修復(fù)

神經(jīng)修復(fù)和再生是牙髓行使正常功能的關(guān)鍵。牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞起源于胚胎期遷移的神經(jīng)嵴細(xì)胞，與其他來源（如骨髓、脂肪） 的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，具有更好的親神經(jīng)特性[40-41]。繼承親本細(xì)胞的親神經(jīng)特性，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源的EVs具有明顯與神經(jīng)發(fā)生相關(guān)的轉(zhuǎn)錄組特征[42]。研究[43]發(fā)現(xiàn)，SHED外泌體可抑制6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)的作用。但遺憾的是，目前外泌體在牙髓神經(jīng)再生方面的研究尚處于起步階段，相關(guān)的報道極少且涉及的機(jī)制研究非常有限。Chen等[23]將包載了SCAP的膠原支架，聯(lián)合負(fù)載了牙髓組織外泌體的牙基質(zhì)植入豬牙根管，埋入裸鼠皮下2個月后，可觀察到在新形成的牙髓樣組織中神經(jīng)元標(biāo)志物髓鞘堿性蛋白101（myelin basic protein 101，MBP101） 和神經(jīng)絲蛋白-200 （neurofilament-200，NF200） 的陽性表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)類似于神經(jīng)細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞。Zhang等[15]的研究顯示，HERS來源的外泌體在體外能提高SCAP神經(jīng)元標(biāo)志物巢蛋白（Nestin） 和NF200的表達(dá)水平，體內(nèi)模型形成的牙髓樣組織中亦可見MBP101和NF200的表達(dá)，說明HERS來源的外泌體具有促進(jìn)細(xì)胞神經(jīng)分化的能力，推測該作用與Wnt/β-catenin通路的激活有關(guān)。盡管目前已明確牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體和HERS外泌體可促進(jìn)神經(jīng)元標(biāo)志蛋白的表達(dá)，但新生組織中是否形成神經(jīng)元和神經(jīng)纖維，以及這些神經(jīng)組織能否發(fā)揮感覺功能，仍有待進(jìn)一步驗證。

3.4 參與成骨向分化

在牙髓修復(fù)與再生的過程中，伴隨著根尖周骨組織的愈合。以往的研究主要集中于探索DPSCs和SHED來源外泌體對動物顱骨[44-45]、下頜骨[46]和牙周骨[34，47]缺損的治療效果，在根尖周病變中對根尖周骨質(zhì)修復(fù)的研究尚未見報道。牙髓干細(xì)胞外泌體可通過聯(lián)合外源性細(xì)胞[44] （如BMMSCs、DPSCs或DPLSCs等） 移植或招募內(nèi)源性細(xì)胞[34，45-46，48]，使新骨形成增多、密度增加，從而加速骨愈合。亦有研究[47]表明，牙髓細(xì)胞系產(chǎn)生的外泌體可抑制破骨細(xì)胞形成，有利于骨缺損修復(fù)。牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體促進(jìn)細(xì)胞成骨向分化的機(jī)制研究較為深入， 涉及l(fā)ncRNA[49]、cirRNA[17]、miRNA[17，49-50]、端粒酶活性[51]和線粒體氧化磷酸化[44]等方面，并與AMPK[34]、TLR[49]、Wnt/β-catenin[52]和BMP/Smad[48，52]信號通路的激活相關(guān)。由于牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體具有招募內(nèi)源性干細(xì)胞、促進(jìn)細(xì)胞遷移、提高細(xì)胞成骨活性和抑制破骨細(xì)胞形成的作用，應(yīng)用牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體修復(fù)牙髓壞死伴嚴(yán)重根尖周骨質(zhì)破壞的病例，可能是一種有效的治療策略。在修復(fù)較大區(qū)域的骨缺損時，外泌體通常與支架聯(lián)合應(yīng)用，不同的支架類型和成分對外泌體釋放和功能的影響亦值得未來研究關(guān)注。

4 小結(jié)與展望

目前，牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體對牙髓再生的機(jī)制研究，主要集中在其攜帶的非編碼RNA和蛋白，通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的多條信號通路，影響細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和分化行為。然而，外泌體如何對靶細(xì)胞的膜信號分子進(jìn)行特異性識別和膜融合，以及細(xì)胞內(nèi)信號通路上下游元件間的具體調(diào)控機(jī)制，仍有待深入探索。值得一提的是，除了牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體、SHED聚合體或牙髓組織外泌體外，HERS來源外泌體作為影響牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞分化的重要介質(zhì)，亦有望為基于外泌體的牙髓再生策略提供新的選擇。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。

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（ 本文編輯 王姝 ）

[基金項目] 廣東省自然科學(xué)基金（2023A1515012554）