• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    湖北省地方杏品種資源熒光SSR遺傳多樣性分析

    2024-11-02 00:00:00葉緣銘蔡化田瑞董志丹張豫蔣迎春吳黎明何利剛劉模發(fā)
    湖北農業(yè)科學 2024年10期

    摘要:為探明湖北省地方杏品種資源的遺傳多樣性,以湖北省24個地方杏品種為試驗材料,采用SSR分子標記結合熒光毛細管電泳技術開展研究。結果表明,來自杏、桃、扁桃和櫻桃上的14對引物共擴增出162個多態(tài)性等位基因位點,平均每個位點的等位基因數(shù)目為11.571。有效等位基因總數(shù)為90.312,平均每個位點的有效等位基因數(shù)目為6.451。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)、香農指數(shù)(I)的平均值分別為0.652、0.813、2.031,多態(tài)性信息含量(PIC)平均值為0.794,說明所選近源物種的引物具有較高的通用性,多態(tài)性豐富。在相似系數(shù)0.580處將24個品種分為3個大組,第1組由洪平杏獨立成組,第2組由榔梅、杏梅等4個品種組成,第3組由米杏、五祖杏等19個品種組成。可見,湖北省地方杏品種具有豐富的遺傳多樣性,采用SSR特異性引物可以鑒別湖北省地方杏品種。

    關鍵詞:地方杏;種質資源;熒光SSR標記;遺傳多樣性;湖北省

    中圖分類號:S662.2 文獻標識碼:A

    文章編號:0439-8114(2024)10-0097-05

    DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2024.10.017 開放科學(資源服務)標識碼(OSID):

    Abstract:To explore the genetic diversity of local apricot variety resources in Hubei Province, 24 local apricot varieties materials were taken as test materials, and SSR molecular markers combined with fluorescence capillary electrophoresis technology were used for the study. The results showed that 14 pairs of primers from apricots, peaches, almonds, and cherries amplified a total of 162 polymorphic effective allele loci, with an average of 11.571 alleles per locus. The total number of effective alleles was 90.312, with an average of 6.451 effective alleles per locus. The average values of observed heterozygosity (Ho), expected heterozygosity (He), and Shannon's information index (I) were 0.652, 0.813, and 2.031, respectively. The average value of polymorphic information content (PIC) was 0.794, indicating that the primers for the selected related species had high universality and rich polymorphism. At a similarity coefficient of 0.580, 24 varieties were divided into three large groups. The first group was independently composed of Hongping apricot, the second group consisted of four varieties including Langmei and Xingmei et al, and the third group consisted of 19 varieties including rice apricot and Wuzu apricot. It could be seen that local apricot varieties in Hubei Province had rich genetic diversity, and SSR specific primers could effectively identify Hubei local apricot varieties.

    Key words:local apricot; germplasm resources; fluorescent labeled SSR marker; genetic diversity; Hubei Province

    杏(Prunus armeniaca L.)屬于薔薇科,在世界范圍內廣泛種植,它是北半球的重要水果,也是除桃和李之外的第三大硬核水果。在所有的溫帶水果中,杏在全球產量中排名第七[1]。中國約有2 000個杏的品種和類型,有著悠久的栽培歷史,不僅是杏的原產國之一,也是世界上杏種質資源最豐富的國家[2]。普通杏是杏屬中品種最多、栽培最廣泛、經濟價值最高的一個種,它在世界各地的大部分地區(qū)種植,主要是在地中海盆地、北美和亞洲,栽培了廣泛的品種類型[3]。地方杏資源的遺傳多樣性研究對中國杏的生產和科研都具有重要意義。

    SSR標記,也稱為微衛(wèi)星DNA標記或短串聯(lián)重復序列標記,是高變DNA元件,由串聯(lián)重復的單、二、三、四核苷酸或五核苷酸基序組成,它們大量存在于高等生物的基因組中[4]。近些年,SSR標記已在野杏、地方杏和普通杏等中廣泛應用[5-9],具有高水平的多態(tài)性、位點特異性、共顯性、可重復性、PCR方便、全基因組隨機分布等優(yōu)點[10]。

    目前,杏樹上主要利用SSR標記進行遺傳多樣性分析。Hedia等[1]利用25個SSR標記,對從杏栽培地區(qū)收集的890份不同杏品種材料進行基因分型,分析了栽培杏的遺傳多樣性和遺傳資源的結構,揭示了該品種在世界范圍內的傳播歷史,證實了杏自中國和中亞的起源。何天明等[11]利用SSR標記進行了新疆栽培杏的群體遺傳結構分析;張淑青等[12]利用SSR標記對69個普通杏品種進行了遺傳多樣性分析;王玉安等[13]利用SSR標記對甘肅地方杏品種資源進行了遺傳多樣性分析。熒光SSR相對于SSR檢測技術,在檢測速度和檢測效果上都有更明顯的優(yōu)勢[14,15]。近年來,熒光SSR標記在果樹上得到應用。苑克俊等[15]利用熒光SSR標記構建杏新品系的分子身份證;王璐偉等[16]采用熒光SSR標記對79份桃種質進行遺傳多樣性分析。這些研究主要是針對普通杏、中國北方的地方杏品種資源。

    然而,對湖北省范圍內杏種質資源的研究報道較少,本研究旨在對湖北省11個縣(市)的 24份地方杏資源進行基于熒光標記的SSR遺傳多樣性分析,以期為利用中國地方杏品種進行育種改良獲得新品種提供指導。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    試驗所用24份地方杏資源葉片樣本來源于湖北省農業(yè)科學院果樹茶葉研究所金水試驗基地杏資源圃(表1)。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 基因組DNA提取 每份杏種質材料取幼嫩葉片約30 mg,液氮冷凍后研磨,采用改良CTAB法提取葉片基因組DNA,采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質量,用ND-100微量紫外分光光度計(美國Thermo)檢測純度和濃度,稀釋至50 mg/L,保存于 -20 ℃冰箱,備用。

    1.2.2 SSR引物合成 參考已報道的相關文獻,從杏、扁桃、桃、櫻桃的引物中合成18對SSR引物,篩選出14對多態(tài)性好的引物,序列見表2。由北京擎科生物科技股份有限公司合成。所有F引物的5′端合成修飾引物,可選FAM、HEX、TAMRA、ROX 4種修飾。R引物合成PAGE引物。

    1.2.3 PCR反應體系與擴增程序 PCR反應采用20 μL體系:TSINGKE金牌Mix(green)17 μL、正反向引物各1 μL,DNA模板1 μL。

    PCR反應程序為:98 ℃預變性2 min;98 ℃ 10 s,56 ℃ 10 s,72 ℃ 10 s,共35個循環(huán);72 ℃延伸5 min后4 ℃保存。4種熒光標記體系及擴增程序同上。

    1.2.4 電泳及毛細管檢測 擴增好的PCR產物zK6CLGZR2vmoJvxbJuYtDw==進行瓊脂糖凝膠電泳(2 μL樣品+6 μL溴酚藍),300 V電壓下12 min,獲取鑒定膠圖。通過膠圖確定模板濃度,加水稀釋到毛細管電泳所需濃度。將分別帶有4種熒光標記的PCR產物進行混樣,加入LIZ 500內標Marker后在ABI3730XL測序儀進行基因分型。

    1.2.5 數(shù)據(jù)處理 將經ABI3730XL測序儀測序后獲得的結果在GeneMapper 4.1軟件上進行分析,校正后進行片段大小分析,將讀取后的數(shù)據(jù)錄入Excel,進行進一步的分析。對PCR擴增沒有結果的樣品重復驗證該位點有無擴增片段。分析數(shù)據(jù)按照引物對應關系的核心堿基重復數(shù)來確定位點準確大小。每對引物單獨分析并得出數(shù)據(jù),建立原始數(shù)據(jù)矩陣。

    使用GenALEx軟件對24份杏資源樣本的觀測等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、香農指數(shù)(I)、觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)、無偏期望雜合度(uHe)以及固定系數(shù)(F)等多樣性指數(shù)進行分析。通過PowerMarker軟件分析獲得多態(tài)性信息含量(PIC)數(shù)據(jù),基于Nei的遺傳距離獲得聚類數(shù)據(jù),使用MEGA6軟件繪制UPGMA樹,進行聚類分析。

    2 結果與分析

    2.1 熒光SSR引物篩選

    熒光SSR標記PCR產物經毛細管電泳檢測后獲得電泳圖片和等位基因數(shù)據(jù)。圖1、圖2分別為PMS2、ASSR71標記引物在1個杏品種上的擴增產物帶型,峰型尖銳鋒利,周圍有若干小峰,無明顯雜峰,說明引物特異性較好,適合杏種質資源的相關研究。參考已報道的相關文獻,從杏、扁桃、桃、櫻桃的引物中篩選18對引物進行試驗,最終獲得14對適用于杏種質資源研究的SSR標記引物。

    2.2 不同引物的遺傳多樣性分析

    利用14對引物對24份湖北杏種質資源進行DNA擴增,共擴增出162個多態(tài)性等位基因位點(Na,表3)。其中,最小的等位基因數(shù)目為6.000(ASSR71),最大的等位基因數(shù)目為18.000(AMPA105),平均每個位點的等位基因數(shù)目為11.571。有效等位基因總數(shù)為90.312,數(shù)值變化范圍在2.887(ASSR71)~11.520(AMPA105),平均每個位點的有效等位基因數(shù)目為6.451。有效等位基因數(shù)低于觀測等位基因數(shù),表明在基因組中存在一些高頻率的等位基因。各位點的觀測雜合度(Ho)變異幅度在0.417(UDP97-402)~0.833(AMPA112),平均Ho為0.652,期望雜合度(He)在0.654(ASSR71)~0.913(AMPA105),平均He為0.813,說明試驗材料具有較高的多態(tài)性,分子標記質量較好。香農指數(shù)(I)范圍在1.302(ASSR71)~2.638(AMPA105),平均值為2.031。多態(tài)性信息含量(PIC)數(shù)值范圍在0.610(ASSR71)~0.907(AMPA105),平均值為0.794,其中所有引物的多態(tài)性信息含量均在0.600以上,說明試驗使用的引物多態(tài)性較高。由以上結果可以看出,所選的標記具有豐富的多態(tài)性,能在分子水平上準確反映各品種間的遺傳關系,同時也說明24份湖北省地方杏樣本在分子水平上具有較高的遺傳多樣性。

    2.3 聚類分析

    為了解湖北杏種質資源之間的遺傳關系,在PowerMarker中對24份資源的遺傳距離進行計算?;贜ei的遺傳距離[22],使用MEGA6軟件進行個體的UPGMA樹聚類分析(圖3)。

    根據(jù)聚類分析結果,在相似系數(shù)0.580處將24份資源分為3組。

    第1組由洪平杏獨立成組。洪平杏是杏屬內一狹域分布種,僅見于神農架林區(qū)。關于洪平杏在杏屬的分類地位一直有爭議,有學者根據(jù)形態(tài)學推測其可能為梅和杏的天然雜交種,也有學者依據(jù)形態(tài)研究認為其為梅的一個變種,另有相關形態(tài)研究表明其為一個獨立的種,但與梅的關系更近。

    第2組由榔梅、杏梅、老杏梅、桃李杏4個品種組成。其中榔梅來自丹江口市,杏梅和老杏梅來自鐘祥市,桃李杏來自大悟縣。丹江口市的榔梅與鐘祥市的杏梅沒有區(qū)分開,疑似同名異物資源。榔梅、杏梅、桃李杏3個品種親緣關系非常近。

    第3組由19個品種組成。來源于巴東縣的米杏與黃梅縣的五祖杏、大河杏(1)、大河杏(2)聚成小組,大悟縣的小麥杏與廣水市的中熟杏、秭歸縣的荷包杏與秭歸本地杏(2)聚成小組。

    3 小結與討論

    本研究采用熒光SSR分子標記技術分析了湖北省地方杏品種資源的遺傳變異和親緣關系。用14對SSR特異性引物擴增出豐富的多態(tài)性條帶,顯示出所用引物具有較高的鑒別湖北省地方杏品種資源的能力。SSR位點的特征指數(shù)數(shù)據(jù),如雜合度、香農指數(shù)等,揭示了湖北省地方杏品種具有豐富的遺傳變異性。本研究結果為進一步分析和利用湖北省杏品種資源提供了理論依據(jù)。

    目前,SSR熒光標記毛細管電泳技術在杏上已有應用,主要用于種質遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構建、種質鑒定、親本分析等方面。但是全世界范圍類已開發(fā)的杏SSR標記都較少,近源物種的SSR分子標記具有較高的通用性,杏種質資源的研究大多采取近源物種的SSR分子標記。本試驗選用的14對引物中,除杏引物3對外,還有近源物種桃引物7對、扁桃引物2對和櫻桃引物2對。

    14對SSR引物在24份杏種質中共檢測到162個等位基因(Na),平均每個位點11.571個;多態(tài)信息含量(PIC)為0.610~0.907,均值為0.794,本研究結果表明近緣植物SSR分子標記在杏種質資源中具有較高的通用性,與斯欽畢力格等[8]、張淑青等[12]的研究結論一致。除杏引物外,相對于扁桃、櫻桃來說,普通桃SSR引物在杏中的種質多態(tài)性最高,適合作為杏種質資源研究的SSR分子標記不足的補充。

    聚類分析結果顯示,14對引物未能將來自丹江口市的榔梅與鐘祥市的杏梅進行有效區(qū)分,兩份資源是否為同物異名資源,需要進一步研究。同名的小麥杏資源有3份,分別來自鐘祥市、大悟縣、廣水市,根據(jù)DNA擴增結果3份資源存在明顯差異,說明3份資源為同名異物資源。同名為杏梅的資源有3份,1份來自鐘祥市,另外2份來自廣水市,根據(jù)DNA擴增結果3份資源存在明顯差異,說明3份資源為同名異物資源。通過SSR分子標記擴增,有效區(qū)分了湖北省的部分同名杏品種,甚至是同一區(qū)(縣)的同名物種,對湖北省地方同名異種品種的鑒定提供了有效的篩選SSR分子標記。

    參考文獻:

    [1] HEDIA B,IVAN S,CHRISTOPHER S, et al. Genetic structure of a worldwide germplasm collection of P+fTcgAriTUbL5tG1JggT02zRy9cYGMJrUMa/TGm0ODM=runus armeniaca L. reveals three major diffusion routes for varieties coming from the species’ center of origin[J]. Frontiers in plant science, 2020,11: 1-17.

    [2] 張加延. 全國李與杏資源考察報告[J]. 中國果樹,1990(4):29-34.

    [3] HAGEN L S, CHAIB J, FADY B, et al. Genomic and cDNA microsatellites from apricot (Prunus armeniaca L.)[J]. Molecular ecology notes, 2004, 4: 742-745.

    [4] DIETHARD T. Hypervariabflity of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers[J]. Nucleic acids research, 1989, 17(16): 6463-6471.

    [5] 劉志琨,陳雪峰,王 端,等. 基于SSR標記的普通杏種質資源遺傳多樣性分析 [J/OL]. 分子植物育種, 1-22[2023-07-24].

    [6] 董勝君,溫佳星,盧彩云,等. 野杏經濟性狀SSR關聯(lián)分析及優(yōu)異等位變異挖掘 [J]. 經濟林研究, 2022, 40(2): 71-82.

    [7] 趙海娟,章秋平,馬小雪,等. 杏高通量熒光SSR檢測體系及分子身份證的構建 [J]. 分子植物育種, 2023, 21(24): 8134-8143.

    [8] 斯欽畢力格,包文泉. 用于杏種質資源遺傳多樣性分析的SSR引物的篩選 [J]. 分子植物育種, 2019, 17(5): 1551-1557.

    [9] 董勝君,王新鑫,張皓凱,等. 基于SSR標記的東北杏遺傳多樣性分析及指紋圖譜構建 [J]. 沈陽農業(yè)大學學報,2021,52(6): 668-676.

    [10] FORSTER B P,RUSSELL J R, ELLIS R P. Locating genotypes and genes for abiotic stress tolerance in barley: A strategy using maps, markers and the wild species[J]. New Phytol,1997,137:141-147.

    [11] 何天明,陳學森,高疆生,等.新疆栽培杏群體遺傳結構的 SSR分析[J].園藝學報,2006,33(4):809-812.

    [12] 張淑青,劉冬成,劉威生,等.普通杏品種SSR遺傳多樣性分析[J].園藝學報,2010,37(1):23-30.

    [13] 王玉安,歐巧明,陳建軍,等.甘肅地方杏品種資源的SSR遺傳多樣性分析[J].西北農業(yè)學報,2013,22(3):98-100.

    [14] 趙海娟,章秋平,馬小雪,等. 杏高通量熒光SSR檢測體系及分子身份證的構建[J]. 分子植物育種,2023,21(24): 8134-8143.

    [15] 苑克俊,牛慶霖,葛福榮,等. 利用熒光SSR標記構建杏新品系的分子身份證[J]. 北方園藝, 2018(4): 34-40.

    [16] 王璐偉,沈志軍,李賀歡,等.基于SSR熒光標記的79份桃種質遺傳多樣性分析[J].中國農業(yè)科學,2022,55(15):3002-3017.

    [17] IEZZONI A, SCHMIDT H, ALBERTINI A. Cherries (Prunus)[M]. Intl. Soc. Hort. Sci.,Wageningen, The Netherlands,1990.

    [18] CANTINI C,LEZZONI A F,LAMBOY W F, et al. DNA fingerprinting of tetraploid cherry germplasm using simple sequence repeats[J]. Journal of the Americal society for horticultural science, 2001,126(2):205-209.

    [19] BAO W, WU T, LI T, et al. Genetic diversity and population structure of Prunus mira (Koehne) from the Tibet plateau in China and recommended conservation strategies[J]. PLoS ONE, 2017,12(11): e0188685.

    [20] DIRLEWANGER E, COSSON P, TAVAUD M, et al. Development of microsatellite markers in peach [Prunus persica (L.) Batsch] and their use in genetic diversity analysis in peach and sweet cherry (Prunus avium L.)[J]. Theor Appl Genet, 2002, 105(1):127-138.

    [21] CIPRIANI G,LOT G, HUANG W G, et al. AC/GT and AG/CT microsatellite repeats in peach (Prunus persica L. Batsch) isolation, characterization and cross-species amplification in Prunus[J]. Theor Appl Genet, 1999, 99(1-2):65-72.

    [22] MASATOSHI N, FUMIO T, YOSHIO T. Accuracy of estimated phylogenetic trees from molecular data[J]. Journal of molecular evolution, 1983(19):153-170.

    收稿日期:2024-04-16

    基金項目:湖北省農業(yè)科技創(chuàng)新中心項目(2021-620-000-001-01);湖北省種業(yè)高質量發(fā)展專項資金(HBZY2023A001-52);湖北省農業(yè)科技重點課題與平臺專項(2021-620-005-003)

    作者簡介:葉緣銘(1996-),女,湖北孝感人,研究實習員,碩士,主要從事果樹資源研究,(電話)18772129249(電子信箱)1376148681@qq.com;通信作者,田 瑞(1978-),男,湖北荊門人,副研究員,碩士,主要從事果樹種質資源與遺傳育種研究,(電話)027-87770272(電子信箱)79011129@qq.com;蔡 化,(電子信箱)34582248@qq.com。

    www.av在线官网国产| 免费观看的影片在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| av免费观看日本| 日韩中字成人| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 1000部很黄的大片| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲成人av在线免费| 91狼人影院| 国产午夜精品论理片| 国产精品99久久久久久久久| 不卡视频在线观看欧美| 国产亚洲精品av在线| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产精品人妻久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩视频在线欧美| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲在线自拍视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 免费看av在线观看网站| 成人鲁丝片一二三区免费| 午夜激情欧美在线| 亚洲人与动物交配视频| 国产美女午夜福利| 三级国产精品片| 韩国高清视频一区二区三区| 国产麻豆成人av免费视频| 99热6这里只有精品| 成人av在线播放网站| 国产淫片久久久久久久久| 乱系列少妇在线播放| 国产成人aa在线观看| 亚洲成人久久爱视频| a级毛色黄片| 91精品国产九色| 精品久久久久久成人av| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品久久电影中文字幕| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产色婷婷99| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产免费男女视频| 国产精品国产高清国产av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产一区二区在线观看日韩| 91av网一区二区| av国产免费在线观看| 成人三级黄色视频| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲av.av天堂| 国产一区亚洲一区在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品人妻久久久影院| 国产精品三级大全| 18禁在线播放成人免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 最近中文字幕高清免费大全6| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一区二区三区免费毛片| 亚洲欧美日韩高清专用| 麻豆乱淫一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品一区蜜桃| 国产高清三级在线| 欧美97在线视频| 国产视频首页在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| www.av在线官网国产| 午夜福利在线在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产av一区在线观看免费| 日韩高清综合在线| 久久国内精品自在自线图片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲成人久久爱视频| 免费看日本二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 成人欧美大片| 国产一区有黄有色的免费视频 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美日韩在线观看h| 婷婷六月久久综合丁香| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品女同一区二区软件| 99九九线精品视频在线观看视频| 青青草视频在线视频观看| 美女内射精品一级片tv| 国产淫片久久久久久久久| 久久精品久久久久久久性| 国产久久久一区二区三区| 国产免费又黄又爽又色| 伦精品一区二区三区| 插逼视频在线观看| 1000部很黄的大片| 精品人妻视频免费看| 免费av毛片视频| 国产精品人妻久久久影院| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美色视频一区免费| 免费看av在线观看网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产av码专区亚洲av| 神马国产精品三级电影在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 色噜噜av男人的天堂激情| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 久久久国产成人免费| 国产成人aa在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产av码专区亚洲av| 身体一侧抽搐| 国产精品无大码| 97超视频在线观看视频| 国国产精品蜜臀av免费| videossex国产| 精品无人区乱码1区二区| 日韩欧美国产在线观看| 国产亚洲精品av在线| 黄片wwwwww| 一区二区三区高清视频在线| 中文天堂在线官网| 欧美日韩精品成人综合77777| 床上黄色一级片| 69人妻影院| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人美女网站在线观看视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 少妇丰满av| 淫秽高清视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品一区二区三区视频在线| 国产69精品久久久久777片| 人人妻人人澡欧美一区二区| ponron亚洲| 少妇丰满av| 舔av片在线| 一本久久精品| 国产一级毛片在线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品.久久久| 亚洲精品亚洲一区二区| av免费在线看不卡| 日本爱情动作片www.在线观看| 在现免费观看毛片| 一级av片app| 一级毛片aaaaaa免费看小| 精品国产露脸久久av麻豆 | 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产精品人妻久久久久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲av男天堂| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 最后的刺客免费高清国语| 韩国高清视频一区二区三区| 黄色欧美视频在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 久久99蜜桃精品久久| 久久久久久伊人网av| 国产成人a∨麻豆精品| 一区二区三区四区激情视频| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品一区蜜桃| 国产伦一二天堂av在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 日韩成人伦理影院| 高清视频免费观看一区二区 | 一本一本综合久久| 亚洲精品456在线播放app| 精品久久久久久久久久久久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日韩成人伦理影院| 我的老师免费观看完整版| 国产一区二区三区av在线| 免费av毛片视频| 麻豆国产97在线/欧美| 我要搜黄色片| 性插视频无遮挡在线免费观看| 日本一二三区视频观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产精品久久久久久久电影| 午夜日本视频在线| 精华霜和精华液先用哪个| 国产亚洲最大av| 嫩草影院入口| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲色图av天堂| ponron亚洲| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 97在线视频观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久99精品国语久久久| 精品久久国产蜜桃| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品人妻熟女av久视频| 国产91av在线免费观看| 日韩一区二区视频免费看| 国产毛片a区久久久久| ponron亚洲| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 一个人免费在线观看电影| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美97在线视频| 国产精品国产高清国产av| av免费观看日本| 麻豆国产97在线/欧美| 一区二区三区免费毛片| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 成人综合一区亚洲| 国产成人freesex在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲精品自拍成人| 欧美一区二区国产精品久久精品| 五月玫瑰六月丁香| 99久久无色码亚洲精品果冻| av女优亚洲男人天堂| 成人无遮挡网站| 国产真实乱freesex| 国产免费又黄又爽又色| 熟女电影av网| 男女啪啪激烈高潮av片| 精品午夜福利在线看| 搡老妇女老女人老熟妇| 春色校园在线视频观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产色爽女视频免费观看| 欧美潮喷喷水| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av熟女| 国产美女午夜福利| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 赤兔流量卡办理| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩欧美精品v在线| 国产成年人精品一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 午夜老司机福利剧场| 久久久久性生活片| 亚洲av成人精品一区久久| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女国产视频在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 日韩欧美精品免费久久| 麻豆av噜噜一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | av卡一久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 乱系列少妇在线播放| 国产成人a区在线观看| 日韩国内少妇激情av| 国产极品精品免费视频能看的| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美性猛交黑人性爽| 中文字幕熟女人妻在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 天天躁日日操中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 免费黄色在线免费观看| 国产在视频线在精品| 国产精品一区二区在线观看99 | 免费在线观看成人毛片| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品野战在线观看| 熟女电影av网| 男人舔女人下体高潮全视频| 成年女人永久免费观看视频| 一级毛片我不卡| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 成人欧美大片| 国产免费福利视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲精品成人久久久久久| 观看美女的网站| 最近的中文字幕免费完整| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产片特级美女逼逼视频| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美高清成人免费视频www| 国产成人freesex在线| 中文欧美无线码| 最近最新中文字幕免费大全7| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久久久久久国产电影| kizo精华| 日本黄大片高清| 热99在线观看视频| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久久久久久久黄片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久精品久久久久久久性| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| ponron亚洲| 99在线人妻在线中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美极品一区二区三区四区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 1000部很黄的大片| 美女国产视频在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 能在线免费看毛片的网站| 欧美成人精品欧美一级黄| 麻豆成人av视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 国产在视频线精品| 国产av一区在线观看免费| 国产乱人视频| 亚洲av成人av| 亚洲欧美清纯卡通| 丝袜喷水一区| 国产精品久久久久久久电影| 午夜日本视频在线| 综合色av麻豆| 国产视频内射| 搞女人的毛片| 日本五十路高清| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品一区www在线观看| 精品久久久噜噜| 精品熟女少妇av免费看| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品久久精品一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 中文天堂在线官网| 毛片一级片免费看久久久久| 联通29元200g的流量卡| 日韩欧美精品v在线| 日本欧美国产在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久久成人免费电影| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 色5月婷婷丁香| 精品一区二区免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 伦理电影大哥的女人| 久久人人爽人人爽人人片va| 特大巨黑吊av在线直播| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精品熟女久久久久浪| 少妇熟女aⅴ在线视频| 精品午夜福利在线看| 国产v大片淫在线免费观看| 身体一侧抽搐| 日本av手机在线免费观看| 久久久久性生活片| 熟女电影av网| 色综合站精品国产| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产高清不卡午夜福利| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩一区二区三区影片| 欧美人与善性xxx| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 99在线人妻在线中文字幕| 在线免费观看不下载黄p国产| kizo精华| 久久99蜜桃精品久久| 一个人免费在线观看电影| 欧美极品一区二区三区四区| 最近中文字幕2019免费版| 少妇人妻一区二区三区视频| 免费av毛片视频| 亚洲四区av| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美又色又爽又黄视频| 深爱激情五月婷婷| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 99热精品在线国产| 国产三级中文精品| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品伦人一区二区| 亚洲成色77777| 久久久久久久久大av| 一区二区三区乱码不卡18| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲真实伦在线观看| 午夜福利在线观看吧| 亚洲在线观看片| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 免费人成在线观看视频色| 男女啪啪激烈高潮av片| 日本免费a在线| 国产乱来视频区| 麻豆成人av视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久久欧美国产精品| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产精品合色在线| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜激情福利司机影院| 国产精品不卡视频一区二区| 两个人的视频大全免费| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产色婷婷99| 日本色播在线视频| 男插女下体视频免费在线播放| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美丝袜亚洲另类| 中文字幕av在线有码专区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久韩国三级中文字幕| 国产午夜精品一二区理论片| 看非洲黑人一级黄片| 美女cb高潮喷水在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品一及| 久久久久网色| 最近中文字幕2019免费版| 免费大片18禁| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲乱码一区二区免费版| 嫩草影院入口| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产成年人精品一区二区| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费观看在线日韩| 天美传媒精品一区二区| 91在线精品国自产拍蜜月| kizo精华| 我的女老师完整版在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲精品aⅴ在线观看| 观看美女的网站| 嘟嘟电影网在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲最大av| 久久人妻av系列| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国内精品宾馆在线| 波野结衣二区三区在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产精品伦人一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久人人爽人人爽人人片va| 99热这里只有精品一区| 中文天堂在线官网| 日日干狠狠操夜夜爽| 黄色欧美视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产v大片淫在线免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 欧美zozozo另类| 高清视频免费观看一区二区 | 视频中文字幕在线观看| 久久久欧美国产精品| 国产成人精品婷婷| 别揉我奶头 嗯啊视频| 日本黄大片高清| 最后的刺客免费高清国语| 国产伦理片在线播放av一区| 99热网站在线观看| 午夜激情福利司机影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久久国产a免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线观看av片永久免费下载| 春色校园在线视频观看| 欧美+日韩+精品| 国产亚洲91精品色在线| 老司机福利观看| 男人舔奶头视频| 熟女人妻精品中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 男女国产视频网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 精品午夜福利在线看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| h日本视频在线播放| 国产高清国产精品国产三级 | 超碰av人人做人人爽久久| 日韩欧美在线乱码| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 亚洲成人中文字幕在线播放| av视频在线观看入口| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| av免费观看日本| 成人二区视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国模一区二区三区四区视频| 久久久久久久久中文| 久久久久久久午夜电影| 欧美高清性xxxxhd video| 最新中文字幕久久久久| 亚洲人与动物交配视频| 色网站视频免费| 好男人视频免费观看在线| 亚洲av二区三区四区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 不卡视频在线观看欧美| 九色成人免费人妻av| 内射极品少妇av片p| 我的女老师完整版在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 日本-黄色视频高清免费观看| 嫩草影院新地址| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久久久国产网址| 久久精品影院6| 亚洲av成人精品一区久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美不卡视频在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美97在线视频| 精品一区二区免费观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产色片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 一级毛片电影观看 | av在线亚洲专区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品久久久噜噜| 色吧在线观看| 高清在线视频一区二区三区 | 精品久久久久久电影网 | 日韩av不卡免费在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 白带黄色成豆腐渣| 高清av免费在线| 成人一区二区视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 成年av动漫网址| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品福利在线免费观看| 99久国产av精品国产电影| 国产午夜福利久久久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| kizo精华| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲无线观看免费| 九色成人免费人妻av| 九九爱精品视频在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久久久久久国产电影| av播播在线观看一区| 国产精品一区www在线观看| 国产老妇女一区| 天天躁日日操中文字幕| 久久鲁丝午夜福利片| 一级毛片久久久久久久久女| 天天一区二区日本电影三级| 一级二级三级毛片免费看| 久久久久久久久中文| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费黄色在线免费观看| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品一区二区性色av| 成人午夜高清在线视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久精品国产自在天天线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 久久久午夜欧美精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩欧美在线乱码| 97在线视频观看| 免费看光身美女| 精品免费久久久久久久清纯| 成人一区二区视频在线观看| 乱人视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久精品94久久精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 美女xxoo啪啪120秒动态图|