邢臺地區(qū)蛋雞養(yǎng)殖場中禽白血病病毒的檢測與分析

摘要：為了了解邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中禽白血病病毒（ALV）感染情況及禽白血病病亞群的流行情況。本試驗于2022年1月—2024年3月采集邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料組織檢測樣本共計1 244份，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（EILSA）檢測樣品中禽白血病病毒感染情況及亞群的流行情況。結果顯示，不同蛋雞養(yǎng)殖場中的ALV p27抗原總陽性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清樣品中的ALV p27抗原陽性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢，ALV p27抗原陽性樣本中分別檢出A/B亞群、J亞群、E亞群3種亞群，以ALV -J亞群流行為主，ALV-E亞群檢測率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢。為進一步研究蛋雞養(yǎng)殖場中ALV流行病調查與凈化提供參考依據(jù)。

關鍵詞：蛋雞；禽白血病病毒；p27抗原；酶聯(lián)免疫吸附試驗（EILSA）

禽白血?。╝vian leukosis，AL）是危害禽類養(yǎng)殖業(yè)主要的病毒性疾病之一，該病主要由禽白血病不同亞群病毒（avian leukosis virus，ALV）引起禽類的禽骨髓細胞性白血病、淋巴細胞性白血病、成髓細胞性白血病和成紅細胞性白血病等多種腫瘤疾病的總稱[1]。禽白血病主要的傳染源是病雞和帶毒雞，尤其是帶毒雞不表現(xiàn)明顯臨床癥狀容易被忽視，同時該病可垂直傳播，也是導致該病在我國養(yǎng)殖場流行的主要因素之一，臨床以引起禽類腫瘤疾病、免疫抑制及生產(chǎn)性能下降等為常見，嚴重者可以導致死亡，嚴重危害我國養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展[2-4]。ALV根據(jù)感染宿主范圍、結構抗原差異性及囊膜特性可以分為11個亞群（A、B、C、D、J 、K、E、F、G、H 和 I），我國養(yǎng)禽業(yè)以ALV-A、B 和 J 為主，其中ALV-J 在我國各地區(qū)不同類型種雞群中的流行最為嚴重，雞群感染ALV-J日益增加并形成地區(qū)性流行[5-7]。因此，對雞群中ALV-J凈化具有重要的意義。為進一步分析ALV在邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中感染情況和亞群的流行情況，本研究針對邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中的ALV-J進行了檢測和分析其亞群的流行情況，為進一步研究蛋雞養(yǎng)殖場中ALV-J流行病調查與凈化提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1病料來源

2022年1月—2024年3月采集邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測樣本共計1 244份，其中2022年采集的病料組織樣本456份，2023年采集的病料組織檢測樣本478份，2024年1月—3月份采集病料組織檢測樣本310份。

1.2 主要試劑

禽白血病P27抗原ELISA檢測試劑盒、ALV亞群（A、B、C、D、E、J）ELISA檢測試劑盒，均購自北京天之泰生物科技有限公司；樣品采集管、采血針、采血管，均購石家莊豐悅生生物科技有限公司。

1.3 病料組織樣品的處理

將采集邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的病料檢測樣本共計1 244進行處理，對采集血液離心（2 500 r/min，5 min）制備血漿樣本，4 ℃保存?zhèn)錂z；蛋清樣本（500倍稀釋）和胎糞樣本（PBS處理）等，在-80 ℃條件下反復凍融3次后備檢，將采集的病料組織樣本進行編號，分裝及在-80 ℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 ALVp27抗原的ELISA檢測

取1.3中處理好的肛拭子、血清、蛋清及胎糞病理組織樣本，參照ALVp 27抗原ELISA檢測試劑盒的說明書對上述樣品檢測結果判定，分析邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中蛋雞ALV的陽性率，陽性率計算公式如下，陽性率=檢出陽性樣本/檢查樣本總數(shù)×100%。

1.5 ALV亞群檢測

取1.4中ALVp 27抗原ELISA檢測陽性的樣品，按照EILSA檢測ALV亞群（A、B、C、D、E、J）試劑盒說明書對ALV亞群進行檢測，并參照試劑盒說明書進行結果判定，并分析的邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中蛋雞ALV亞群攜帶情況。

2 結果

2.1 ALV-p27抗原ELISA檢測結果

2022年1月—2024年3月采集邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測樣本共計1 244份，采用參照ALVp 27抗原ELISA檢測試劑盒EILSA 進行樣品中ALV p27抗原檢測。結果由表2可知，2022年1月—2024年3月不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的ALV p27抗原總陽性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清檢測樣品中的ALV p27抗原陽性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢。

2.2 ALV亞群的檢測結果

2022年1月—2024年3月采集邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測樣本中分別檢測出95份、70份、44份ALV p27抗原陽性樣品，分別對ALV p27抗原陽性樣品進行ALV亞群的測定，并統(tǒng)計在（肛拭子、血清、蛋清及胎糞）樣品中的分布情況。 結果由表3可知，2022年1月-2024年3月邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中ALV亞群流行情況有A/B亞群、J亞群、E亞群3個亞群，以ALV -J亞群流行為主，經(jīng)過統(tǒng)計2022年1月-2024年3月邢臺地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中ALV-E亞群檢測率出現(xiàn)逐年升高的趨勢。

3 討論

禽白血?。ˋLV）是一種危害養(yǎng)禽業(yè)免疫抑制性傳染病，該病原具有11個亞群，其中J 亞群對禽類的致病力最強其威脅最大，ALV-J 首次在英國發(fā)現(xiàn)的新型外源性病毒，該病毒初期主要感染肉用型種雞，隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展蛋用型種雞感染率也呈現(xiàn)日趨升高，甚至造成地區(qū)性流行[8-9]。近幾年，國內關于地方品種雞感染ALV-J報道逐漸增多。ALV-J對肉用、蛋用型雞及其他相關品種的雞均具有較強的致病性和傳染性，對養(yǎng)雞業(yè)危害較大[2]。因此，對不同品種的種雞進行ALV-J凈化，對減少禽白血病的垂直傳播具有重要的意義。本試驗研究表明，2022年1月—2024年3月不同蛋雞養(yǎng)殖場中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的ALV p27抗原總陽性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清檢測樣品中的ALV p27抗原陽性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢。說明該地區(qū)規(guī)模化蛋雞場中存在ALV流行情況，應該對蛋雞進行ALV檢測并進行淘汰陽性蛋雞，建立有效的綜合防控措施，進行有效的綜合防控。國內相關研究表明在蛋雞場中以ALV以J亞群流行比較多[10]，為主，本試驗通對ALV p27抗原陽性樣本進行ALV亞群的檢測，共檢測出 3種亞群，以ALV -J亞群流行為主，與上述報道的一致。相關研究表明ALV-E亞群一般屬于內源性感染，但是在蛋雞也存在一定的致病性[11-12]，但是同時檢測出ALV-E亞群，呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，應該引起重視，在蛋雞養(yǎng)殖過程中應該對ALV-E進行檢測與凈化，淘汰陽性的雞群。因此，禽白血病目前沒有有效的疫苗進行預防，在蛋雞養(yǎng)殖過程中應該進行定期檢測，尤其是種雞的檢測，淘汰陽性種雞，凈化種群。■

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