正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選醋紅大戟炮制工藝

摘要：目的 采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選醋制紅大戟炮制工藝。方法 以3-羥基巴戟醌含量、蘆西定含量、醇浸出物含量、飲片外觀性狀為指標(biāo)，以醋水比、煮制火候、干燥溫度作為醋煮紅大戟的考察因素；以加水稀釋量、炒制溫度、炒制時(shí)間、作為醋炙紅大戟的考察因素，采用正交實(shí)驗(yàn)法，按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020版方法測(cè)定3-羥基巴戟醌含量、蘆西定含量、醇浸出物含量及飲片外觀性狀。結(jié)果 優(yōu)選醋制紅大戟炮制工藝，醋煮：20%醋，400℃火候煮制，70℃烘干；醋炙：20%醋和60%水稀釋的醋水混合液，在100 ℃下炒制 10 min。最佳醋制炮制工藝為后者。結(jié)論 優(yōu)選的紅大戟醋制炮制工藝合理可行，可為紅大戟的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了理論科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：紅大戟；醋制工藝；醋煮法；醋炙法；正交實(shí)驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2024）07-0067-06

紅大戟［Knoxia roxburghii（Spreng.）M.A.Rau］是茜草科（Rubiaceae）紅芽大戟屬（Knoxia）多年生草本植物，分布于云南、廣西、貴州等地區(qū)?！吨袊?guó)藥典》（2020版）收載紅大戟以塊根入藥，其性寒，味苦，歸肺、脾、腎經(jīng)，具有瀉水逐飲、消腫散結(jié)之功效，可用于水腫脹滿，胸腹積水，痰飲積聚，氣逆咳喘，二便不利，癰腫瘡毒，瘰疬痰核［1］。據(jù)本草考證，紅大戟始見(jiàn)于民國(guó)時(shí)期的《藥物出產(chǎn)辨》［2］。歷代的重要本草，像《本草經(jīng)集注》、《嘉祐本草》、《本草圖經(jīng)》、《證類本草》和《本草綱目》等也有相關(guān)記載，并對(duì)其形態(tài)、產(chǎn)地、性能、功用等諸多方面進(jìn)行了較為詳細(xì)的論述，有的還繪有藥圖。因其藥材外皮紫紅而狀如獸牙，故又有“紅牙大戟”之稱［3］。紅大戟主要含有蒽醌類成分和萜類、黃酮苷和色原酮苷類等非蒽醌類成分［4-6］。

炮制是制備中藥飲片的一門傳統(tǒng)技術(shù)，在炮制過(guò)程中藥物的形態(tài)變化、性質(zhì)變化、性能變化及添加輔料等不同的炮制方法均會(huì)對(duì)中藥的臨床療效產(chǎn)生影響［7］。醋制是指以醋為輔料進(jìn)行藥物炮制的常用方法，歷代醫(yī)家對(duì)有毒中藥的炮制極為重視，近年來(lái)醋制減毒的中藥炮制工藝眾多，諸如大戟科甘遂［8］、狼毒［9］、商陸科商陸［10］等醋制后可以緩和藥物偏盛的性味，降低毒副作用。相關(guān)文獻(xiàn)表明紅大戟化學(xué)成分中的蘆西定具有遺傳性毒性［11］，認(rèn)為醋制能緩和其毒烈之性，醋制后能緩和峻瀉作用。故就紅大戟醋制對(duì)所含有毒成分的含量是否有所改變?yōu)橹笜?biāo)展開(kāi)實(shí)驗(yàn)研究。

歷版《中國(guó)藥典》對(duì)紅大戟的炮制有著不同規(guī)定，最早在《中國(guó)藥典》1963年版一部收載有“紅大戟”和“醋紅大戟”兩種飲片［12］。但在現(xiàn)行的2020版藥典中并無(wú)醋制的要求，其中收載的加工方法為秋、冬兩季采挖，除去須根，洗凈，置沸水中略燙，干燥。在全國(guó)各地執(zhí)行的地方炮制規(guī)范中，對(duì)于紅大戟是否醋制，也沒(méi)有明確的規(guī)定，各地依然并存“醋制”和“生用”兩種方法。而在《云南省中藥飲片炮制規(guī)范》1986年版和《浙江省中藥炮制規(guī)范》2005版中就有醋紅大戟的炮制要求。在《中華本草》中紅大戟的醋制有醋煮和醋炙兩種炮制方法，本研究以《中華本草》記載的醋紅大戟炮制方法為依據(jù)開(kāi)展紅大戟醋制工藝研究，為紅大戟現(xiàn)代藥理研究及配方顆粒的制備奠定基礎(chǔ)、為其用藥安全補(bǔ)充理論依據(jù)。

藥典規(guī)定的醋制分為醋煮法和醋炙法，為優(yōu)化和規(guī)范紅大戟的炮制工藝，本研究采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)醋紅大戟炮制程度及表征炮制品質(zhì)量的量化指標(biāo)等進(jìn)行考察，以確保醋制紅大戟飲片的質(zhì)量。擬以外觀顏色、醇浸出物、3-羥基巴戟醌、蘆西定的含量為指標(biāo)，醋煮法選擇醋水比、煮制火候、干燥溫度三個(gè)因素［13］；醋炙法以炒制溫度、炒制時(shí)間、加水稀釋量三個(gè)因素［14-15］，研究醋制紅大戟炮制工藝，對(duì)紅大戟醋煮和醋炙工藝進(jìn)行優(yōu)選，以期為紅大戟醋制飲片的生產(chǎn)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；電子天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）；AR224CN電子天平（奧豪斯儀器有限司）；SK7210HP超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；HWS-24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；電磁爐（佛山市富士寶電器科技有限公司）；電灶（昆明飛龍電器廠）；藥材粉碎機(jī)（中南制藥機(jī)械廠）；Waters e2695型高效液相色譜儀（蘇州邦鑫電子技術(shù)有限司）。

1.2 材料 紅大戟藥材｛購(gòu)自云南省大理州，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)邱斌正高級(jí)工程師鑒定為茜草科紅芽大戟屬植物紅大戟［Knoxia roxburghii（Spreng.）M.A.Rau］的干燥塊根｝。老陳醋［山西老陳醋集團(tuán)有限公司，濃度：6 g·（100 mL）-1］，3-羥基巴戟醌對(duì)照品（中國(guó)食品藥品鑒定研究院，批號(hào)：111962-201301，純度為93.7%）、蘆西定對(duì)照品（中國(guó)食品藥品鑒定研究院，批號(hào)：111960-201301，純度為97.2%）、流動(dòng)相甲醇為色譜純、提取用甲醇及冰醋酸溶液為分析純、純水為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平的設(shè)計(jì) 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合實(shí)際考察，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，醋煮紅大戟選取干燥溫度（A）、醋水比（B）、煮制火力（C）3個(gè)因素；醋炙紅大戟選取炒制溫度（A）、炒制時(shí)間（B）、加水稀釋量（C）3個(gè)因素，以確定合理的炮制工藝參數(shù)。因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1和表2。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法 醋煮法 取凈紅大戟藥材500 g，共9份，置煮制容器內(nèi)，按表1設(shè)定組合條件。具體操作方法為：9份樣品均加入相應(yīng)量的醋水混合液拌勻，悶潤(rùn)2 h，于電磁爐和電灶上控制火候，加熱煮至醋水液被吸盡，取出，晾至6～7成干時(shí)切厚片，烘干，編號(hào)為1-9。

醋炙法 取凈紅大戟9份，每份200ｇ分別置于9個(gè)容器內(nèi)，按表2設(shè)定組合條件.具體操作方法為：9份樣品均分別加入醋（20%醋+水），拌勻，悶潤(rùn)（2 h），置炒藥機(jī)中控制溫度炒制，取出放涼，編號(hào)為1～9。

2.3 檢測(cè)項(xiàng)目

2.3.1 外觀性狀 2020版《中國(guó)藥典》中紅大戟飲片外觀性狀為切面皮部紅褐色，木部棕黃色；周邊紅褐色或紅棕色，粗糙。質(zhì)堅(jiān)實(shí)。醋制后紅大戟色澤加深，具醋氣。傳統(tǒng)外觀性狀評(píng)價(jià)是以經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為主，是不易量化和說(shuō)明的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。故選其作為正交實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。依據(jù)《中國(guó)藥典》及各地方炮制規(guī)范對(duì)醋紅大戟進(jìn)行外觀色澤評(píng)分，醋煮紅大戟評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：黑褐色10分；深褐色9分；黃褐色8分。醋炙紅大戟評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：深褐色10分；棕褐色9分；黃褐色8分。對(duì)各組醋紅大戟飲片進(jìn)行打分，計(jì)算各飲片得分。結(jié)果見(jiàn)表3和表5。

2.3.2 浸出物含量測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》2020版（通則2201）項(xiàng)下冷浸法測(cè)定，以95%乙醇為溶劑。

2.3.3 3-羥基巴戟醌含量測(cè)定 色譜條件：色譜柱（Phenyl-Ether 4.6×250 mm 5μL）；甲醇-1%冰醋酸（75∶25）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。在此色譜條件下，3-羥基巴戟醌理論塔板數(shù)在3000以上。

對(duì)照品溶液的配制：精密稱定3-羥基巴戟醌對(duì)照品0.05 mg，加甲醇定容至置2 mL容量瓶中，搖勻。即得3-羥基巴戟醌對(duì)照品溶液（25 μg/mL）。

供試品溶液配制：取醋制后各組紅大戟藥材適量，粉碎，過(guò)40目篩。精密稱定各組樣品粉末1 g，置具塞錐形瓶中，用移液管精密移取20 mL甲醇加入錐形瓶中，稱重，超聲處理30min，放冷，稱重，用甲醇將減少的重量補(bǔ)足，搖勻，用濾紙過(guò)濾，取續(xù)濾液，用0.22 μL的微孔濾膜過(guò)濾。即得供試品溶液，醋煮和醋炙色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

2.3.4 蘆西定含量測(cè)定 色譜條件：色譜柱（Phenyl-Ether 4.6×250mm 5 μL）；甲醇-1%冰醋酸（75∶25）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。在此色譜條件下，蘆西定理論塔板數(shù)在3000以上。

對(duì)照品溶液配制：精密稱定蘆西定對(duì)照品0.11 mg，置2 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。即得3-羥基巴戟醌對(duì)照品溶液（55 μg/mL）

供試品溶液制備：精密稱定各組樣品粉末約1 g，置具塞錐形瓶中，用移液管精密移取20 mL甲醇，稱重，超聲處理60 min，放冷，稱重，用甲醇將減少的重量補(bǔ)足，搖勻，用濾紙過(guò)濾，取續(xù)濾液，用0.22 μL的微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液，醋煮和醋炙色譜圖見(jiàn)圖3和圖4。

2.4 綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 采用綜合評(píng)分評(píng)價(jià)醋紅大戟工藝，權(quán)衡傳統(tǒng)外觀質(zhì)量、醇浸出物含量和3-羥基巴戟醌、蘆西定含量對(duì)醋煮紅大戟飲片質(zhì)量的影響，確定3-羥基巴戟醌、蘆西定含量的加權(quán)系數(shù)分別為0.3，外觀性狀加權(quán)系數(shù)為0.2，醇浸出物加權(quán)系數(shù)為0.2。綜合評(píng)分按以下公式計(jì)算：綜合質(zhì)量評(píng)分=3-羥基巴戟醌含量得分×0.3+蘆西定含量得分×0.3+外觀性狀得分×0.2+醇浸出物量得分×0.2。（各指標(biāo)評(píng)分為它們的隸屬度，指標(biāo)隸屬度=指標(biāo)值-指標(biāo)最小值/指標(biāo)最大值-指標(biāo)最小值）。

2.5 結(jié)果 紅大戟浸出物、3-羥基巴戟醌、蘆西定含量正交實(shí)驗(yàn)成分測(cè)定和外觀性狀評(píng)分結(jié)果及見(jiàn)表3、表5；方差分析結(jié)果見(jiàn)表4、表6。

根據(jù)方差分析，對(duì)綜合評(píng)分影響大小的因素進(jìn)行分析，醋煮法因素主次順序?yàn)椋捍姿?gt;煮制火候>干燥溫度，結(jié)合直觀分析，優(yōu)先最佳醋煮工藝方案是：A3B3C3，即每500 g藥材加入20%醋，醋水比為1∶12的醋水混合液，拌勻，悶潤(rùn)，400℃煮至醋汁吸盡，晾至六成干，切厚片，70℃烘干。醋炙法因素主次順序?yàn)椋撼粗茣r(shí)間>炒制溫度>加水稀釋量，結(jié)合直觀分析，優(yōu)選最佳醋炙工藝方案是：A2B1C3，即每500 g藥材加入20%醋和60%水稀釋的醋水混合液，拌勻，悶潤(rùn)，炒干，取出放涼。

2.6 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

2.6.1 醋煮紅大戟驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取紅大戟藥材，除去雜質(zhì)，取約500 g，平行3份，按正交實(shí)驗(yàn)所得最佳工藝確定的醋水比例、浸潤(rùn)時(shí)間、煮制火候，將凈紅大戟與相應(yīng)量的醋水混合液拌勻，悶潤(rùn)，于電磁爐上控制火候，加熱煮至醋水液被吸盡，取出，晾至6～7成干時(shí)切厚片，烘干，稱定醋紅大戟重量，計(jì)算收率。評(píng)價(jià)外觀性狀，測(cè)定醇浸出物、3-羥基巴戟醌、蘆西定含量。3批醋煮紅大戟飲片制備過(guò)程見(jiàn)表7，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表8。

2.6.2 醋炙紅大戟驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取紅大戟藥材，除去雜質(zhì)，取約500 g，平行3份，按正交實(shí)驗(yàn)所得最佳工藝確定的炒制溫度、炒制時(shí)間、加水稀釋量，將凈紅大戟與輔料拌勻，潤(rùn)透，炒炙，晾涼，并稱定醋炙紅大戟重量，計(jì)算收率。評(píng)價(jià)外觀性狀，測(cè)定醇浸出物、3-羥基巴戟醌、蘆西定含量。3批醋煮紅大戟飲片制備過(guò)程見(jiàn)表9，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表10。

以上驗(yàn)證結(jié)果表明，采用兩種優(yōu)選工藝炮制的樣品性狀及醇浸出物、3-羥基巴戟醌、蘆西定含量均較穩(wěn)定，表明加工工藝較穩(wěn)定。對(duì)比兩種炮制方法，優(yōu)選出醋制紅大戟最佳炮制工藝為：每500 g藥材加入20%醋和60%水稀釋的醋水混合液，拌勻，悶潤(rùn)，炒制，取出放涼。

3 結(jié)論

紅大戟應(yīng)用廣泛，具有較高的藥用價(jià)值，歷代炮制方法多為生用，即除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥。本實(shí)驗(yàn)選擇醋制的炮制方法，研究紅大戟多指標(biāo)質(zhì)量的穩(wěn)定性和可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，醋煮紅大戟的醋水比例、煮制火力、干燥溫度均對(duì)其飲片質(zhì)量有一定影響，但無(wú)顯著性影響。醋炙紅大戟的3個(gè)考察因素也沒(méi)有顯著影響。究其原因，可能有以下兩點(diǎn)：第一，考察因素的選擇不夠準(zhǔn)確，輔料品質(zhì)與用量、炮制火候、干燥溫度的確定等因素存在一定的影響。第二，此前均無(wú)紅大戟是否需要醋制的規(guī)范與要求，因紅大戟與其功效相似，不同科屬的京大戟?jiǎng)e名音同形近，且京大戟有醋制要求，猜測(cè)兩種藥材存在品種混亂，誤用誤記的現(xiàn)象。但京大戟醋制減毒之功已被證實(shí)，而紅大戟醋制后減毒與否缺少實(shí)驗(yàn)研究和臨床檢驗(yàn)，還需要對(duì)其進(jìn)行更全面系統(tǒng)的研究。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)醋制后紅大戟主要成分含量有所變化，其毒性成分蘆西定含量在醋制后降低，但紅大戟減毒機(jī)制還需進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本次研究表明優(yōu)選的紅大戟醋制炮制工藝合理可行，可為紅大戟的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了理論科學(xué)依據(jù)。

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