北五味子繁殖技術(shù)1)

張順捷，劉剛，顏冰，郭玉蘭，孟黎明

(黑龍江省林副特產(chǎn)研究所，黑龍江牡丹江157011)

北五味子[Schisandrachinesis(Tuncz.) Baill.]也稱五味子，為五味子科五味子屬多年生落葉木質(zhì)藤本植物，因果實(shí)甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名。北五味子主產(chǎn)地為遼寧、黑龍江、吉林等省，俄國東部大部分地區(qū)，韓國和日本東北部也有分布[1]。北五味子屬約30種，主產(chǎn)于亞洲東部和東南部，我國約有19種，美國東南部有1種分布。中國藥典2000年版收載有2種五味子：五味子[Schisandrachinensis(Turcz.) Baill.]及華中五味子(S.sphenantheraRehd. et Wils.)，前者收載為五味子(俗稱北五味子)，后者收載為南五味子?！侗静菥V目》中記載：“五味子今有南北之分，南產(chǎn)者色紅，北產(chǎn)者色黑，入滋補(bǔ)藥，必用北者為良”[2]。北五味子自古以來就受到我國醫(yī)藥工作者的高度重視，是著名的滋補(bǔ)性中藥，以果實(shí)和種子入藥，有效成分為木脂素類化合物，還含有萜類、有機(jī)酸、多糖類等化學(xué)成分。北五味子具有降酶保肝、保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、抗愛滋病毒、抗腫瘤、抗衰老、抑制膽固醇生物合成等作用[1,3]。北五味子還含有多種營養(yǎng)成分，具有豐富的營養(yǎng)價值，為第三代新興果品，其果實(shí)在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料[4]。北五味子育種與栽培技術(shù)的研究，是解決擴(kuò)大北五味子資源量的措施之一。為了保護(hù)野生資源和滿足越來越大的生產(chǎn)需要，我國從20世紀(jì)90年代開始開始重視北五味子的人工栽培研究，系統(tǒng)地開展了規(guī)范化栽培、資源收藏評價、新品種選育研究；并選育出我國第一個北五味子無性系新品種“紅珍珠”[5]。因?yàn)闆]有成熟的無性繁殖體系，這一優(yōu)良品種得不到推廣。

1 播種育苗技術(shù)

北五味子的人工栽培中，因沒有成熟的無性繁殖體系，而采用有性繁殖的方法，用種子繁殖的五味子苗，根系發(fā)達(dá)長勢旺，芽苞飽滿，有較強(qiáng)的生命力，移栽成活率高。

1.1 種子處理

9月中旬，采收成熟的果實(shí)，搓去果皮果肉，漂除癟粒，用清水浸泡3d，將種皮上的果肉泡凈，清洗干凈，用1∶3的細(xì)濕河沙(多菌靈500倍液消毒處理)混合拌勻，種沙的濕度為55％，以用手捏成團(tuán)不滴水，輕晃散開為宜。將拌勻的種子放入透氣的編織袋中，選擇背風(fēng)向陽不積水地塊，挖50～80cm深的土坑中，用土覆蓋20cm，在封凍前澆透水，注意種子保持濕度，自然越冬即可。播種前10天左右將種子取出，保持濕度進(jìn)行催芽處理，當(dāng)80％種子裂嘴或露出胚芽即可播種。

1.2 圃地選擇

苗圃地最好選擇地勢平坦，水源方便，排水良好，土壤疏松、肥沃的沙壤土和黑腐殖土為好，做到深耕、細(xì)耙、畝施腐熟好的農(nóng)家肥5 000kg，做床寬1.1m，高15cm的苗床，長度適地塊而定。

1.3 播種

播種采用條播或撒播均可。條播按行距15～20cm，開溝深3cm，將種子均勻撒入溝內(nèi)，每畝用種量在6～8kg。播后覆蓋2cm厚細(xì)土，鎮(zhèn)壓，上蓋一層松針或草簾，澆透水，保持濕度，防止干旱。為防止幼苗發(fā)生立枯病和其它病害，在播種后結(jié)合澆水噴施800～1 000倍代森鋅或敵克松水劑防病。當(dāng)出苗率達(dá)到70％時撤除覆蓋物，待幼苗長到5～6cm時，真葉形成，適時松土除草。適當(dāng)進(jìn)行葉面施肥和病蟲害防治。

2 組織培養(yǎng)技術(shù)

2.1 供試材料

在5～6月，選取生長健壯的北五味子的嫩莖段、葉片、葉柄作為外植體。

2.2 試驗(yàn)方法

將采回來的嫩莖段、葉片、葉柄用流水沖洗4～5h，然后將葉片、葉柄和嫩莖段切開移到超凈工作臺上，先用75％酒精浸泡1min，取出后用無菌水沖洗2～3次，再用0.1％升汞溶液消毒，嫩莖段和葉柄消毒10min，葉片消毒5min，目的是為了防止葉片表皮受損傷。取出后用無菌水沖洗5次，然后將嫩莖段和葉柄切成1.0cm左右的小段，葉片切成1.0cm2的小塊，按無菌操作要求，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種后將培養(yǎng)瓶置于20～26℃，光照12 h/d，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 1x的條件下培養(yǎng)。誘導(dǎo)愈傷組織后，按誘導(dǎo)培養(yǎng)基的種類，接種到愈傷組織分化培養(yǎng)基上。在25℃,12～14h光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

2.3 培養(yǎng)基組成

以MS為基本培養(yǎng)基，其中附加不同種類和濃度的細(xì)胞分裂素6-BA,KT和生長素NAA,2,4-D,IBA，組成不同種類的培養(yǎng)基，pH值為5.8，瓊脂粉9.0g/L， MS基本培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30.0g/L。培養(yǎng)基配置成后注入50mL三角瓶，每三角瓶注入20mL培養(yǎng)液，瓶口用錫箔紙封蓋，在121℃條件下滅菌15min。

當(dāng)基本培養(yǎng)基為MS時，加入一定濃度的2,4-D和IBA時對北五味子的嫩莖段、葉片和葉柄有利于愈傷組織的誘導(dǎo)，并且對于北五味子的三個部位的外植體來說，誘導(dǎo)效果最佳的培養(yǎng)基是MS+KT0.1mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D1.0mg/L+IBA0.1mg/L，并且葉片的誘導(dǎo)效果要明顯好于嫩莖段和葉柄誘導(dǎo)效果。一定濃度的IBA有利于葉片和嫩莖段愈傷組織的誘導(dǎo)，而當(dāng)濃度過高時則對葉片和嫩莖段愈傷組織的誘導(dǎo)有抑制作用，誘導(dǎo)的最佳IBA濃度是0.3mg/L ；當(dāng)采用同種分化培養(yǎng)基時，不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基對分化率有一定的影響，嫩莖段是進(jìn)行北五味子組織培養(yǎng)研究最佳的外植體；最好的生根培養(yǎng)基是N_6+NAA0.6mg/L+IBA2.0mg/L[6]。生根培養(yǎng)基為1/4MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L+AC0.5mg/L，生根率達(dá)到93.48％，平均根長達(dá)3.5cm，在煉苗培養(yǎng)中，珍珠巖∶蛙石(1∶l)的混合基質(zhì)上移栽成活率最高[7]。

[1]Hancke JL,Burgos RA,Ahumada F.Schisandrachinensis(Turcz.) Baill[J]. Fitoterapia,1999,70(5): 451-471.

[2]周以良. 黑龍江樹木志[M]. 哈爾濱: 黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社,1986: 238.

[3]Opletal L,Sovova H,Bartlova M. Dibenzo[a,c]cycloo-ctadiene lignans of the genusSchisandra: importance,isolation and determination[J]. J. Chromatography B.,2004,812(4): 357-371.

[4]李愛民,孫憲波,谷萬良. 北五味子的利用與栽培概述[J]. 特產(chǎn)研究,1993(1): 36-38.

[5]李愛民,王玉蘭,艾軍,等. 北五味子新品種“紅珍珠”選育報(bào)告[J]. 特產(chǎn)研究,2000(1): 31-35.

[6]武立丹. 北五味子組織培養(yǎng)研究[D].延邊大學(xué),2009.

[7]吳玲娜. 華中五味子組織培養(yǎng)及其次生代謝物的分析研究[D].中南林業(yè)科技大學(xué),2008.

1)黑龍江省財(cái)政自擬項(xiàng)目(2011-01)