黑果分散片的制備、質(zhì)量及體外活性研究

摘 要：為了探索黑果分散片的制備工藝、質(zhì)量及其體外活性，通過單因素與正交試驗(yàn)相結(jié)合的方式考察了黑果分散片的制備工藝，采用UV法考察了黑果分散片總?cè)频暮考捌潴w外活性，采用超高效液相色譜法測(cè)定了黑果分散片中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的含量.結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑果分散片的優(yōu)選處方為微晶纖維素作稀釋劑、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮作崩解劑、75%乙醇為黏合劑、微粉硅膠作潤滑劑.分散片中總?cè)频暮繙y(cè)定方法顯色前后穩(wěn)定性符合測(cè)定要求、儀器精密度和重復(fù)性良好，總?cè)频募訕踊厥章蕿?9.48%；體外活性試驗(yàn)結(jié)果表明，黑果分散片具有一定的清除DPPH和抑制脂質(zhì)體的能力；超高效液相色譜法測(cè)定沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的加樣回收率分別為99.83%、100.69%和99.61%.優(yōu)選的制劑工藝制備的分散片，其崩解時(shí)限符合要求，總?cè)频暮繛?.42 mg/片，沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的含量分別為111.15 μg/g、940.19 μg/g、598.25 μg/g.試驗(yàn)結(jié)果為黑果分散片的應(yīng)用提供了理論依據(jù).

關(guān)鍵詞：黑果花楸；分散片；制備工藝；體外活性；超高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：TQ461" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" 文章編號(hào)：1673-9329（2024）03-0046-10

黑果花楸Aronia melanocarpa（文中簡稱黑果）又稱野櫻莓，是薔薇科腺肋花楸屬灌木，是集食用、藥用、園林和生態(tài)等價(jià)值于一身的珍貴樹種[1].其果實(shí)是一種小漿果，其中富含多種具有一種保健功效的活性物質(zhì)[3]；其花束密集且果實(shí)渾圓，成熟后呈紫黑色，擁有較強(qiáng)的抗寒、抗旱以及抗病蟲害的能力，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較好[4].黑果中原花青素和皂苷等成分含量較高[5]，具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、抗炎癥、抗腫瘤和降血糖等生理功能[6-7].

黑果原產(chǎn)于美國東北部，在歐洲已有100余年的引種栽培歷史.我國引進(jìn)較晚，但近年來越來越多的地區(qū)開始引種繁殖，其果實(shí)提取物也被廣泛應(yīng)用于食品、保健品及醫(yī)藥領(lǐng)域[8]，并于2018年9月被國家衛(wèi)生健康委員會(huì)列入新食品原料[9].分散片相對(duì)于普通片劑，有較高的生物利用度、服用方便，更適合老人、兒童和吞服困難的患者服用，具溶出和吸收快的優(yōu)點(diǎn)，具有十分廣闊的開發(fā)前景[10].本研究擬通過單因素和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法，探索黑果分散片的最佳制備工藝，并進(jìn)行含量及體外活性研究，以期為黑果分散片的應(yīng)用提供試驗(yàn)數(shù)據(jù).原花青素由沒食子酸、兒茶素、表兒茶素等單體聚合而成[11]，其中沒食子酸具有抗炎[12]、抗突變、抗氧化和抗自由基等生物學(xué)活性，兒茶素與表兒茶素均具有防治心血管疾病和預(yù)防腫瘤等多種功能[13]，本研究采用超高效液相色譜法（UPLC）測(cè)定黑果分散片中沒食子酸、兒茶素和表兒茶素的含量，以期為黑果的深度開發(fā)和綜合利用提供科學(xué)依據(jù).

1試驗(yàn)材料與儀器

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料包括黑果（購自吉林省黑果花楸農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限責(zé)任公司），磷酸氫鈣、微晶纖維素、糊精購自上?？颠_(dá)食品工程有限公司），乳糖、預(yù)膠化淀粉（河南中泰食化有限公司），甜菊糖（天津雙味食品廠），沒食子酸、兒茶素、熊果酸、表兒茶素（成都曼斯特生物科技有限公司），PEG6000、硬脂酸鎂、滑石粉（鄭州仁恒化工產(chǎn)品有限公司），聚維酮K30、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、微粉硅膠（蘇州誠億達(dá)化工有限公司），甲醇（質(zhì)譜純，德國Merck公司），磷酸（色譜純，天津大茂化學(xué)試劑廠）和香草醛、氯仿、鹽酸（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）.

1.2試驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)儀器主要有Waters Acquity H-Class型超高效液相色譜儀（美國Waters公司），TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），SY-6DN智能片劑四用測(cè)定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司），RE-52AA隔膜真空泵（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），F(xiàn)A 2004 N電子分析天平（上海精密科學(xué)儀有限公司）和RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）.

2試驗(yàn)方法

2.1黑果分散片制備工藝的單因素試驗(yàn)

2.1.1黑果浸膏粉的制備

將黑果粉末以料液比1∶25（g/mL）加入60%乙醇溶液，于60℃，130 W條件下超聲提取2次，每次1 h，過濾，合并濾液，在60℃條件下旋蒸濃縮除醇，加蒸餾水稀釋，經(jīng)聚酰胺樹脂純化后，60℃條件下旋蒸濃縮、干燥、粉碎、過篩，得黑果浸膏粉.

2.1.2稀釋劑的選擇

按處方量100片，將15 g黑果浸膏粉分別與磷酸氫鈣、糊精、乳糖、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉按照質(zhì)量比1∶1混合，加入甜菊苷0.4 g和PVPP0.5 g，攪拌3～5 min，充分混勻，加95%乙醇作為黏合劑制軟材，過16目篩制粒，濕顆粒在60℃干燥20 min，過24目篩整粒，加入PVPP0.5 g和PEG 6000粉末0.3 g，混勻，壓片，即得黑果分散片，以顆粒吸濕率、成型率、流動(dòng)性與片劑的崩解時(shí)限為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，根據(jù)綜合評(píng)分優(yōu)選處方中的稀釋劑.

綜合指標(biāo)評(píng)分按照下面公式計(jì)算：綜合指標(biāo)評(píng)分=（吸濕率值/最大吸濕率值）×25+（最小休止角值/休止角值）×25+（成型率值/最大成型率值）×25+（最大崩解時(shí)限值/崩解時(shí)限值）×25.

其中顆粒吸濕率根據(jù)參考文獻(xiàn)[14]的方法測(cè)定：吸濕率=[（吸濕后重量-吸濕前重量）/吸濕前重量]×100%；將制備好的顆粒劑稱重，按照《中國藥典》測(cè)定顆粒成型率：成型率=（能通過一號(hào)篩但不能通過五號(hào)篩的顆粒質(zhì)量/顆粒總質(zhì)量）×100%；顆粒流動(dòng)性的測(cè)定（休止角測(cè)定）根據(jù)參考文獻(xiàn)[15]方法，tgα=h/r，r為半徑，單位cm；片劑崩解時(shí)限的測(cè)定按照《中國藥典》崩解時(shí)限檢查法進(jìn)行檢測(cè).

2.1.3崩解劑的選擇

按處方量100片，將15 g黑果浸膏粉與優(yōu)選的稀釋劑按照質(zhì)量比1∶1混合，加入甜菊苷0.4 g和不同崩解劑（羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉及PVPP）0.5 g，按照“2.1.2”方法制粒、壓片，以片劑的崩解時(shí)限和硬度為評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)選處方中的崩解劑.

2.1.4黏合劑的選擇

固定稀釋劑和崩解劑，選用5%PVP K30乙醇溶液、10%PVP K30乙醇溶液、PVP K30水溶液、95%乙醇、75%乙醇和水等不同黏合劑，按照“2.1.2”方法制粒、壓片，以顆粒成型率、流動(dòng)性與片劑的崩解時(shí)限為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，根據(jù)綜合評(píng)分高低優(yōu)選處方中的黏合劑.

2.1.5潤滑劑的選擇

固定稀釋劑、崩解劑和黏合劑， 選用微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉和PEG 6000等不同潤滑劑，按照“2.1.2”方法制粒、壓片，以片劑的硬度和崩解時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇合適的潤滑劑.

2.2黑果分散片制備工藝的正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以分散片的崩解時(shí)限為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用4因素3水平正交試驗(yàn)進(jìn)一步考察稀釋劑、崩解劑、潤滑劑和黏合劑的用量對(duì)分散片制備工藝的影響.具體因素水平表見表1.

2.3崩解劑加入方式的選擇

以崩解時(shí)限為評(píng)價(jià)指標(biāo)，固定其他原輔料，崩解劑內(nèi)外加入的比例為1∶0、1∶1、2∶3、3∶2、0∶1.考察內(nèi)加、外加以及內(nèi)外混合加入等不同的崩解劑加入方式對(duì)分散片制備工藝的影響.

2.4分散片中活性成分的含量測(cè)定

2.4.1熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用香草醛顯色法[16]，以熊果酸對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，其吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=5.868 2x-0.002（R2=0.999 7）.

2.4.2熊果酸對(duì)照品溶液及供試品溶液的配制

精密稱取熊果酸50.0 mg，至25 mL量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，即得熊果酸對(duì)照品溶液.稱取研碎的黑果分散片粉末1 g，至50 mL量瓶中，加氯仿30 mL超聲處理30 min，離心，取上清液即為供試品溶液.

2.4.3穩(wěn)定性考察

按“2.4.2”中方法配制成供試品溶液，按照熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法進(jìn)行顯色，分別在顯色前0、30、60、120、180、240、300 min，顯色后0、10、20、30、40、50、60 min時(shí)測(cè)定吸光度值，考察其穩(wěn)定性.

2.4.4精密度考察

取熊果酸對(duì)照品溶液適量，按照“2.4.1”的含量測(cè)定方法，在548 nm處連續(xù)6次測(cè)定吸光度.

2.4.5重復(fù)性考察

取同一批黑果分散片30片，研碎，等分6份，按照“2.4.2”配制成供試品溶液，按照“2.4.1”的含量測(cè)定方法，在548 nm處測(cè)定吸光度值.

2.4.6加樣回收率考察及分散片中總?cè)频暮繙y(cè)定

取已知含量的黑果分散片，研碎，等分6份，在每份樣品中加入相應(yīng)的對(duì)照品適量，按照“2.4.2”配制成供試品溶液，按照“2.4.1”的含量測(cè)定方法，在548 nm處測(cè)定吸光度.計(jì)算熊果酸的加樣回收率.取3批黑果分散片，按照“2.4.2”配制成供試品溶液，按照“2.4.1”的含量測(cè)定方法，在和548 nm處測(cè)定吸光度值.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每片黑果分散片中總?cè)频暮?

2.5 UPLC法測(cè)定黑果分散片中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的含量

2.5.1 UPLC分析條件

色譜柱為Acquity Uplc Hss C18（2.1×100 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：0.2%磷酸水溶液（V/V）；梯度洗脫，程序?yàn)椋?～3 min，10%A；3～5 min，10～15%A；5～8 min，15%～20%A；8～12 min，20%A；流速0.3 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量1μL；檢測(cè)波長280 nm.

2.5.2混合對(duì)照品溶液的制備

分別稱取沒食子酸、兒茶素、表兒茶素對(duì)照品各4.0 mg，用甲醇溶解于10 mL量瓶中并定容至刻度，充分搖勻后即得濃度為0.4 mg/mL的沒食子酸、兒茶素、表兒茶素對(duì)照品溶液.分別取各對(duì)照品2 mL于25 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，充分搖勻后即得混合對(duì)照品溶液.將混合對(duì)照品溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾后，進(jìn)樣分析.

2.5.3分散片供試品溶液的制備

取黑果分散片粉末0.35 g，置于10 mL量瓶中加入甲醇，130W超聲溶解20 min后，加甲醇定容至刻度，靜置10 min后取上清液，用0.22 μm微孔濾膜過濾即得分散片供試品溶液.

2.5.4線性關(guān)系考察

取混合對(duì)照品溶液適量，稀釋成濃度為3.2、6.4、9.6、12.8、16.0、19.2 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1 μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，分別以沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程分別為：y=8 200x-6 432.3（R2=0.999 2）；y=2 583.2x-4 452.6（R2=0.999 4）；y=3 795.9x-5 848.5（R2=0.999 7）.

2.5.5儀器精密度試驗(yàn)

取2.5.2中混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)行6次，并記錄峰面積.

2.5.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批黑果分散片粉末適量，按2.5.3方法配制成分散片供試品溶液，分別于1、2、3、4、5、6 h進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，并記錄峰面積.

2.5.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批黑果分散片粉末適量，分別按2.5.3方法配制成分散片供試品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)行6次，并記錄峰面積.

2.5.8檢測(cè)限與定量限的確定

將混合對(duì)照品溶液不斷稀釋，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，當(dāng)主峰與噪音信號(hào)強(qiáng)度比為3時(shí)即為檢測(cè)限，當(dāng)主峰與噪音信號(hào)強(qiáng)度比為10時(shí)即為檢測(cè)限.

2.5.9加樣回收率試驗(yàn)及樣品含量測(cè)定

取同一批黑果分散片適量，充分研碎成粉末，取6份粉末，每份0.1 g，分別置于10 mL量瓶中，按2.5.3方法制備供試品溶液，每份中加入與供試品溶液中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品溶液，甲醇定容至刻度，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄峰面積并計(jì)算回收率.

取三批不同黑果分散片各適量，按2.5.3中方法制備分散片供試品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量.

2.6黑果分散片的體外活性測(cè)試

2.6.1 DPPH·清除率的測(cè)定

取黑果分散片適量，研碎，按照“2.4.2”方法配制成質(zhì)量濃度為2.34、4.68、7.02、9.36、11.70 mg/mL的供試品溶液.將維生素C配制成質(zhì)量濃度分別為6.0、12.0、18.0、24.0、30.0 μg/mL的對(duì)照溶液.按照參考文獻(xiàn)[17]的方法，以50%乙醇為參比，在517 nm處測(cè)定A樣品、A空白和A對(duì)照.計(jì)算供試品溶液和維生素C溶液對(duì)DPPH·的清除率[17]，

清除率/%=［（A空白－A樣品+A對(duì)照）/A空白］×100%.

2.6.2抗脂質(zhì)體過氧化能力的測(cè)定

吸取“2.6.1”中的黑果分散片供試品溶液和維生素C溶液適量，按照參考文獻(xiàn)[18]的方法，在波長535 nm處測(cè)定A樣品和A空白，計(jì)算供試品溶液和維生素C溶液抗脂質(zhì)體過氧化能力[18]，

抑制率/%=［（A空白-A樣品）/A空白］×100%.

3試驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1黑果分散片制備工藝的單因素試驗(yàn)結(jié)果

3.1.1稀釋劑選擇的試驗(yàn)結(jié)果

選用磷酸氫鈣、糊精、乳糖、微晶纖維素和預(yù)膠化淀粉作稀釋劑，試驗(yàn)結(jié)果見表2，顯示微晶纖維素作稀釋劑綜合評(píng)分最高，綜合考察成型率、吸濕率、流動(dòng)性和崩解時(shí)間，因此選用微晶纖維素作為稀釋劑.

3.1.2崩解劑選擇的試驗(yàn)結(jié)果

由于黑果浸膏粉黏性較大，選擇加入崩解劑促進(jìn)分散片的崩解和分散.結(jié)果見表3，發(fā)現(xiàn)三種崩解劑中，加入PVPP后，崩解時(shí)間最短，效果最好，所以選用PVPP作為崩解劑.

3.1.3黏合劑選擇的試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過篩選得到適宜的黏合劑，結(jié)果見表4.發(fā)現(xiàn)選用75%乙醇作為黏合劑時(shí)，利于制粒，又不影響片劑的崩解，且綜合評(píng)分最高.所以選用75%乙醇作為黏合劑.

3.1.4潤滑劑選擇的試驗(yàn)結(jié)果

固定稀釋劑為微晶纖維素，崩解劑為PPVP，黏合劑為75%乙醇，制粒、壓片，試驗(yàn)結(jié)果見表5，可以看出選用微粉硅膠作為潤滑劑時(shí)，效果最好，所以選用微粉硅膠作為潤滑劑.

3.2黑果分散片制備工藝的正交試驗(yàn)結(jié)果

按100片處方量，取黑果浸膏粉及各輔料適量，其中稀釋劑種類、崩解劑種類和黏合劑種類均為單因素試驗(yàn)中的最佳結(jié)果，其他各影響因素按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，正交試驗(yàn)結(jié)果見表6.

由正交試驗(yàn)結(jié)果得出，影響黑果分散片崩解時(shí)限的各因素中Dgt;Agt;Bgt;C，崩解劑的用量對(duì)分散片影響最為顯著，制備分散片最佳條件為A2B1C3D2.即每100片黑果分散片中，按1∶1比例混合浸膏粉與微晶纖維素，75%乙醇作為黏合劑在分散片制備過程中分批適量加入，加入量為浸膏粉和稀釋劑總量的20%，加入1gPPVP為崩解劑，加入0.4 g微粉硅膠作為潤滑劑.

3.3崩解劑加入方式選擇的試驗(yàn)

結(jié)果見表7，當(dāng)崩解劑內(nèi)加∶外加為1∶1時(shí)，崩解既發(fā)生在顆粒內(nèi)部，又發(fā)生在顆粒之間，崩解效果良好.分散片的最佳制備工藝為將充分粉碎的原輔料過80～100目篩備用.稱取15 g黑果浸膏粉、15 g微晶纖維素和0.5 g交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，充分?jǐn)嚢杌靹?，加入溶?.4 g甜菊苷的75%乙醇作為黏合劑制軟材，過16目篩制粒，60℃左右干燥20 min，24目篩整粒，加入0.5 g交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和0.4 g微粉硅膠，充分混勻，用11 mm淺圓沖壓片，制成100片，片重約為0.32 g.按照《中國藥典》進(jìn)行檢測(cè).片劑硬度和崩解時(shí)限均符合規(guī)定.

3.4分散片中總?cè)坪繙y(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

3.4.1穩(wěn)定性考察的試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定黑果分散片中總?cè)茣r(shí)，供試品溶液在顯色前300 min內(nèi)的吸光度值為0.461～0.470、顯色后在60 min內(nèi)的吸光度值為0.456～0.465，RSD值均lt;3.0%，滿足含量測(cè)定的要求.

3.4.2精密度及重復(fù)性考察的試驗(yàn)結(jié)果

連續(xù)6次測(cè)定熊果酸對(duì)照品溶液的吸光度值，供試品溶液中熊果酸的6次吸光度分別為0.473、0.469、0.467、0.468、0.471和0.465，平均值為0.468，RSD值為0.55%.結(jié)果表明儀器精密度良好.供試品溶液中總?cè)频奈舛确謩e為0.461、0.463、0.465、0.459、0.465和0.456，平均值為0.461，RSD為0.71%，結(jié)果表明該方法具有良好的重復(fù)性.

3.4.3加樣回收率考察及分散片中總?cè)坪繙y(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

熊果酸的平均加樣回收率為97.90%～100.66%，其平均回收率為99.48%，RSD值為1.08%.結(jié)果見表8，表明此測(cè)定方法加樣回收率良好.3批黑果分散片總?cè)频暮繛?3.9 mg/片、14.4 mg/片和14.2 mg/片，平均值為14.2 mg/片.

3.5 UPLC法測(cè)定黑果原花青素分散片中沒食子酸、兒茶素和表兒茶素含量的試驗(yàn)結(jié)果

3.5.1 UPLC分析條件的確定

在2.5.1條件下沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的保留時(shí)間分別為2.003 min、7.074 min、10.673 min，與相鄰峰分離度均大于1.5，結(jié)果見圖1.

3.5.2儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果

吸取混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)行6次，記錄峰面積，沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的峰面積分別為240 047～249 334、74 184～78 374、113 311～119 850，RSD分別為1.39%、2.01%、1.88%，結(jié)果表明儀器精密度良好.

3.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

吸取供試品溶液，分別于1、2、3、4、5、6 h進(jìn)樣1 μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，并記錄峰面積，沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的峰面積分別在22 505～23 871、78 496～81 262、71 506～73 351，RSD分別為2.29%、1.04%和1.05%，結(jié)果表明供試品溶液穩(wěn)定性良好.

3.5.4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

吸取供試品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)行6次，并記錄峰面積，沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的峰面積分別在23 222～24 401、74 915～75 235、71 591～72 673，RSD分別為1.95%、1.34%和0.60%，結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好.

3.5.5檢測(cè)限與定量限的試驗(yàn)結(jié)果

將混合對(duì)照品溶液不斷稀釋進(jìn)樣分析，以信噪比S/N=3、S/N=10所對(duì)應(yīng)的濃度作為各對(duì)照品的檢測(cè)限和定量限，試驗(yàn)結(jié)果表明沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的檢測(cè)限分別為0.075、0.053和0.14 μg/mL，定量限分別為0.18、0.14和0.33 μg/mL.

3.5.6加樣回收率測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

取黑果分散片粉末適量（沒食子酸、兒茶素、表兒茶素含量已知），分成6份，每份0.1 g，制成供試品溶液，分別加相應(yīng)量的對(duì)照品溶液適量，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表9.

3.5.7樣品含量測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

取三批不同黑果分散片粉末適量，分別制成供試品溶液，進(jìn)樣1μL，超高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表10.

3.6黑果分散片體外活性測(cè)試的試驗(yàn)結(jié)果

3.6.1 DPPH·清除率測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

以黑果分散片的質(zhì)量濃度或維生素C質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，清除率為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，黑果分散片的回歸方程為y=27.424 x+37.572（R2=0.976 9），IC50值為453.17 μg/mL.維生素C的回歸方程為y=3.073 1 x-3.642 8（R2=980 1），IC50值為17.46 μg/mL.試驗(yàn)結(jié)果表明黑果分散片對(duì)DPPH·具有一定的清除能力，但明顯弱于維生素C.

3.6.2抗脂質(zhì)體過氧化能力測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

以黑果分散片的質(zhì)量濃度或維生素C質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，黑果分散片的回歸方程為y=42.315x+17.112（R2=0.981 9），IC50值為777.22 μg/mL.維生素C的回歸方程為y=1.797 6x+8.467 6（R2=0.967 8），IC50值為23.10 μg/mL.試驗(yàn)結(jié)果表明黑果分散片具有一定的抗脂質(zhì)體過氧化能力，但明顯弱于維生素C.

4結(jié)論

本試驗(yàn)對(duì)黑果分散片的制備工藝進(jìn)行了研究，通過考察稀釋劑、崩解劑、黏合劑、潤滑劑的種類以及制劑過程中崩解劑的加入方式，確定黑果分散片的最佳制備工藝.試驗(yàn)結(jié)果表明選用微晶纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、75%乙醇、微粉硅膠分別作為稀釋劑、崩解劑、黏合劑和潤滑劑，經(jīng)過單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化后的分散片制備工藝為將黑果浸膏粉與微晶纖維素1∶1混合，內(nèi)加崩解劑總質(zhì)量50%的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，加入溶有適量甜菊苷的75%乙醇制軟材，制粒、干燥、整粒，再混入崩解劑總質(zhì)量50%的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和適量微粉硅膠，充分混勻，用11 mm淺圓沖壓片，制成分散片，片重為0.32 g.經(jīng)此工藝制備的黑果分散片硬度和崩解時(shí)限均符合《中國藥典》規(guī)定.黑果分散片中總?cè)坪繙y(cè)定時(shí)，供試品溶液穩(wěn)定性良好，儀器精密度和方法重復(fù)性符合要求，熊果酸的平均加樣回收率為99.48%，3批黑果分散片中總?cè)频暮科骄鶠?.42 mg/片.UPLC法測(cè)定結(jié)果表明沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的線性關(guān)系、精密度和穩(wěn)定性均良好，回收率結(jié)果表明該方法可行，由于目標(biāo)成分均顯弱酸性，在水中加入了體積分?jǐn)?shù)為0.2%的磷酸作為流動(dòng)相，可有效抑制電離，專屬性較高，黑果分散片中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素含量分別為111.15、940.19、598.25 μg/g.體外活性測(cè)定試驗(yàn)表明黑果分散片具有一定的抗氧化能力.試驗(yàn)結(jié)果為黑果進(jìn)一步開發(fā)利用提供了依據(jù).

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[責(zé)任編輯：劉紅霞]

Preparation， Quality and in Vitro Activity of Dispersible Tablets of Aronia melanocarpa

LIU Junyu，WANG Xiaolin，ZHONG Fangli，CHEN Hao

（ Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin，Jilin，132022，China）

Abstract：

The process for the preparation of Aronia melanocarpa dispersible tablets and their in vitro activity were explored. A combination of one-way and orthogonal tests was used to examine the preparation process， the content and in vitro activity of total triterpenes， and to determine the content of gallic acid， catechin， and epicatechin in the A. melanocarpa dispersible tablets by ultra-high-performance liquid chromatography. Microcrystalline cellulose as diluent， crosslinked polyvinylpyrrolidone as disintegrant， 75% ethanol as binder and micronised silica gel as lubricant were the preferred prescriptions for the A. melanocarpa dispersible tablets. The method for the determination of total triterpenes in the dispersible tablets showed that the stability before and after colour development was in accordance with the requirements of the assay， the precision and reproducibility of the instrument were good， and the recoveries of the total triterpenes were 99.48%. The results of the in vitro activity test showed that the Aronia melanocarpa dispersible tablets had the ability to scavenge DPPH and inhibit liposomes. The dispersible tablets prepared by the preferred formulation process have a disintegration time limit in accordance with the requirements and a total triterpene content of 1.42 mg/tablet. Ultra-high performance liquid chromatography （UPLC） was performed on an Acquity Uplc Hss C18 column with methanol （A）-0.2% aqueous phosphoric acid （B） as the mobile phase in a gradient elution.The recoveries of orotate， catechin and epicatechin were 99.3% at the detection wavelength of 280nm. The spiked recoveries of gallic acid， catechin， and epicatechin were 99.83%， 100.69%， and 99.61%， respectively. The contents of the three components were determined and analysed as 111.15 μg/g， 940.19 μg/g and 598.25 μg/g， respectively.The results of the test provide a basis for the application of the A. melanocarpa dispersible tablets.

Key words：

Aronia melanocarpa; dispersed tablet; preparation process; in vitro activity; ultra performance liquid chromatography