道地中藥材金果欖種子育苗技術(shù)

司海倩 封海東 劉三波 韓明清 馬兆成 游景茂 張澤志

摘要：以金果欖（Tinosporae Radix）基原植物青牛膽［Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep.］實(shí)生種子進(jìn)行大棚育苗，并檢測一、二年生金果欖種苗的農(nóng)藝性狀及二年生金果欖種苗干燥塊根的古倫賓含量。對一年生金果欖種苗噴施MS營養(yǎng)液，檢測其農(nóng)藝性狀并分析各性狀之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，金果欖種苗株高、主根長、塊根隨種植時(shí)間呈增長趨勢，二年生苗葉片數(shù)在6—7月無明顯增加；種苗葉形指數(shù)、塊根形指數(shù)分別在5月齡、17月齡后無明顯變化；二年生金果欖種苗干燥塊根EP理論塔板數(shù)均>5 000、古倫賓含量均>2%，水分含量均<13.0%，符合藥典規(guī)定。MS營養(yǎng)液處理促進(jìn)了一年生金果欖種苗株高增長、葉片數(shù)增加和塊根的形成，種苗株高、葉寬、莖粗與地下塊根鮮重呈顯著正相關(guān)，塊根鮮重與塊根縱徑、塊根橫徑、塊根形指數(shù)呈顯著正相關(guān)，塊根橫徑、塊根縱徑、塊根形指數(shù)之間均呈極顯著正相關(guān)。葉形指數(shù)與葉長、葉寬之間無相關(guān)關(guān)系，而塊根形指數(shù)與塊根縱、橫徑之間呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞：道地中藥材；金果欖（Tinosporae Radix）；葉面肥；種子；育苗技術(shù)

中圖分類號(hào)：S567.23+9? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2024）06-0125-06

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2024.06.020 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Seed seedling cultivation technology of authentic Chinese medicinal material Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep.

SI Hai-qian1， FENG Hai-dong1， LIU San-bo2， HAN Ming-qing3， MA Zhao-cheng4， YOU Jing-mao5， ZHANG Ze-zhi1

（1.Shiyan Academy of Agricultural Sciences， Shiyan? 442000， Hubei， China；2.China Resources Sanjiu （Huangshi） Pharmaceutical Co.， Ltd.， Huangshi? 435000， Hubei，China；3.Hubei Jinshuiyuan Agricultural Development Co.， Ltd.， Shiyan? 442000，Hubei，China；4.Wuhan University， Wuhan? 430070， China；5.Institute of Chinese Herbal Medicines， Hubei Academy of Agricultural Sciences，Enshi? 445000，Hubei，China）

Abstract： The seeds of Tinospora sagittata （Oliv.）Gagnep.， the original plant of Tinosporae Radix， were grown in the greenhouse，? and the agronomic traits of the annual and biennial Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep. seedlings and the content of columbin in the dry block roots of the biennial Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep. seedlings were detected. MS nutrient solution was sprayed on the annual Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep. seedlings to detect their agronomic characters and analyze the correlation between the characters. The results showed that the plant height， taproot length and block root increased with planting time， while the leaf number of biennial seedlings did not increase significantly from June to July； leaf shape index and block root shape index had no significant change after 5 months of age and 17 months of age， respectively； the theoretical number of EP plates， the content of columbin and the water content of the dried block roots of the biennial Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep. seedlings were all > 5 000， >2% and <13.0%，respectively， which were in line with the provisions of pharmacopoeia. The seedling height， leaf number and block root formation of annual Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep. seedlings were increased under MS nutrient solution treatment， respectively. And plant height， leaf width and stem diameter were significantly positively correlated with underground block root fresh weight， block root fresh weight was significantly positively correlated with block root longitudinal diameter， block root transverse diameter and block root shape index， and block root transverse diameter， block root longitudinal diameter and tuber shape index were extremely significantly positively correlated with each other. The leaf shape index had no correlation with leaf length and width， but the block root shape index had positive correlation with longitudinal diameter and transverse diameter of block root.

Key words： authentic Chinese medicinal material； Tinosporae Radix； leaf fertilizer； seed； seedling cultivation technology

金果欖（Tinosporae Radix）是秦巴山區(qū)道地中藥材之一，首載于清代《百草鏡》，塊根連珠狀，又稱九連子、地苦膽等［1-3］。金果欖以干燥塊根入藥，具有清熱解毒、利咽、消腫止痛等功效［4］，是中國傳統(tǒng)中藥材，主要分布于湖北、四川、貴州、廣西等地［5，6］?！吨腥A人民共和國藥典》2020年版收錄金果欖基原植物的干燥塊根有2種，分別為防己科植物青牛膽（Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep.）和金果欖（Tinospora capillipes Gagnep.）［7］。馮世鑫等［8］研究指出，青牛膽多產(chǎn)于湖北、湖南、四川等省份，塊根外表皮褶皺多，內(nèi)截面呈淺黃色，質(zhì)地較疏松；金果欖主要產(chǎn)于廣西、福建、廣東和海南等省份，塊根外表皮較光滑，內(nèi)截面顏色呈深黃色，質(zhì)地較致密。金果欖為中國一些少數(shù)民族習(xí)用藥物［9］，抗菌鎮(zhèn)痛、降血糖、解毒等作用顯著，成為了研究熱點(diǎn)［8，10，11］。

金果欖一般在海拔315～2 085 m處的黃壤土、疏林、石灰土林下群居或生于山上巖石旁邊的紅壤地中，年日照時(shí)數(shù)1 000～1 400 h，年有效積溫5 600～6 100 ℃，年降水量1 100～1 400 mm［8，12］。由于金果欖受環(huán)境影響較大［13］，而金果欖分布較廣［14］，不同產(chǎn)地金果欖在藥材性狀、化學(xué)成分含量等方面差異較大［6］。李一圣等［14］比較不同產(chǎn)地的金果欖藥用成分發(fā)現(xiàn)，重慶市、陜西省漢中市、廣西省崇左市和四川省達(dá)州市萬源市所產(chǎn)金果欖古倫賓（C20H22O6）含量較高，而廣西省桂林市、湖南省邵陽市和云南省楚雄市的金果欖古倫賓含量則相對較低。胡奇志等［15］從金果欖生物堿類成分的指紋圖譜中確定了8個(gè)共有峰，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的金果欖在生物堿類成分上有差異，且不同產(chǎn)地金果欖HPLC（高效液相色譜）指紋圖譜和鹽酸藥根堿與鹽酸巴馬汀含量也存在差異。馮世鑫等［8］對廣西、江西、湖南、湖北等10個(gè)省份的青牛膽質(zhì)量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)湖北省武當(dāng)山金果欖中鹽酸巴馬汀含量最高。同時(shí)，由于不同產(chǎn)地金果欖質(zhì)量不一，基原植物青牛膽降血糖效果優(yōu)于金果欖［8］，這也導(dǎo)致臨床應(yīng)用和相關(guān)中藥制劑質(zhì)量穩(wěn)定性存在差異［14］。

此外，金果欖生長緩慢、對環(huán)境要求苛刻［12］，野生資源采挖較多、生長周期長，近年來用量猛增，野生資源難以滿足市場需求，價(jià)格日益上漲，人工種植或撫育勢在必行［16］。然而，金果欖采用叢生芽［5］、半木質(zhì)化枝條［10］、稍老莖節(jié)［17，18］等繁殖成本較高。金果欖種子雖然因萌發(fā)抑制物［19］而具有明顯的休眠期，自然萌發(fā)、繁殖困難［5，18］，但可通過人工沙藏、植物生長調(diào)節(jié)劑處理等措施，打破休眠，保持種子發(fā)芽率達(dá)80%以上［19］。此外，金果欖植株生長和活性物質(zhì)還受光照影響［8］，這也導(dǎo)致人工栽培對金果欖可持續(xù)、高質(zhì)量發(fā)展具有重要影響［20］。

鑒于此，本試驗(yàn)采用人工采種、沙藏等方式，在湖北省十堰市湖北金水源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司金果欖種子種苗繁育大棚基地進(jìn)行大棚育苗。探討一、二年生金果欖種子種苗農(nóng)藝性狀，并檢測二年生金果欖種苗干燥塊莖的古倫賓含量。同時(shí)，分析葉面肥對一年生金果欖農(nóng)藝性狀的影響及其相關(guān)性，探討金果欖種子種苗培育及生長特點(diǎn)，以期為秦巴山區(qū)道地中藥材金果欖種子種苗高效培育提供相關(guān)生產(chǎn)技術(shù)參考。

1 金果欖生物學(xué)特征

以金果欖基原植物青牛膽為研究對象。青牛膽，藤本，葉片全緣、卵狀箭形、先端銳尖、基部圓耳狀箭形，葉互生，葉柄短。莖細(xì)長、綠色，根長，塊根黃色［1，21］，不規(guī)則圓塊狀，表面棕黃色或淡褐色，粗糙不平，有深皺紋。質(zhì)堅(jiān)硬，不易擊碎、破開，橫斷面淡黃白色，導(dǎo)管束略呈放射狀排列，色較深。氣微，味苦。雌雄異株［5］，腋生圓錐花序。

果實(shí)球形，果皮粉紅色，表面光滑，種子由果皮、果肉包裹，種子乳白色、呈半球形，腹面向內(nèi)凹陷、有孔、外部有凸起小齒（圖1），千粒重82.45～97.72 g。

2 材料與方法

2.1 金果欖種子處理與播種

金果欖種子由湖北金水源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司提供。2020年10月20日，在健壯、無病蟲害的多年生金果欖植株上采集成熟漿果。去除果皮果肉（圖1），用80 mg/L赤霉素（GA3）處理種子6 h，置于70%乙醇溶液中消毒1～2 min，最后用清水清洗3次，置于細(xì)沙中沙藏50 d。細(xì)沙濕度保持在60%左右，種子與細(xì)沙的體積比為1∶3。

2020年12月9日播種，穴播，間距4～5 cm，覆蓋深度3 cm，用種量247.5～292.5 kg/hm2，基質(zhì)濕度長期控制在50%～70%。同時(shí)剔除不完整、有病蟲害的種子，確保種子發(fā)芽率達(dá)80%以上，種苗外觀形態(tài)如圖1所示。

2.2 苗床整理

湖北金水源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司金果欖種子種苗繁育大棚基地育苗情況如圖2所示。播種前，清除苗床雜物，鋪細(xì)沙10 cm、整平，再鋪5 cm厚度基質(zhì)、整平，采用72%百菌清粉劑對大棚進(jìn)行消毒，苗床排灌方便。苗床基質(zhì)預(yù)先按照硫酸鉀復(fù)合肥750 kg/hm2、有機(jī)肥3 000 kg/hm2，拌入大棚基質(zhì)內(nèi)，立即澆濕澆透。播種后，再鋪上一層基質(zhì)，厚度3 cm，立即澆濕澆透。防止基質(zhì)失水快、夏季暴曬死苗，出苗前，大棚搭建透光率為30%～40%的遮陽網(wǎng)，苗床溫度為15～28 ℃。

2.3 方法

2020年12月9日，選擇同等大小、無病蟲害的金果欖種子60粒，按照株行距5 cm×5 cm，單獨(dú)做種子育苗試驗(yàn)，具體育苗方法同“2.1”和“2.2”所述。

2021年3月20日，選擇植株性狀一致、生長健壯、無病蟲害的一年生3葉齡金果欖種子種苗，在設(shè)施大棚內(nèi)栽培10株?；|(zhì)為普通育苗基質(zhì)+石英砂，體積比為4∶1，葉面肥為常用MS培養(yǎng)基的營養(yǎng)液20倍稀釋液，4—6月每月以10 mL/株噴施1次。以未使用葉面肥為對照（CK）。

2.4 數(shù)據(jù)檢測與整理

2021—2022年3—7月，每月25日采用1/100電子游標(biāo)卡尺、卷尺、1/1 000天平進(jìn)行生物農(nóng)藝性狀檢測。其中，2022年3—7月，將二年生種苗地下塊莖送往華潤三九（黃石）藥業(yè)有限公司，按照2020版《中華人民共和國藥典》［7］中的方法（通則0512），采用高效液相色譜儀（型號(hào)E26952998）測定古倫賓含量和水分含量。采用Excel軟件整理數(shù)據(jù)，葉形指數(shù)=葉片長/葉片寬，塊莖形指數(shù)=塊莖縱徑/塊莖橫徑。2021年7月20日，檢測噴施MS營養(yǎng)液的金果欖幼苗農(nóng)藝性狀。采用SAS軟件分析種苗農(nóng)藝性狀相關(guān)性，采用SigmaPlot 10.0軟件制圖。

3 結(jié)果與分析

3.1 一、二年生金果欖種苗地上部莖葉生長情況

由表1可知，一、二年生金果欖種苗越長越高，莖粗僅在第2年7月可生長至（2.098±0.412） mm，葉片數(shù)在第2年6月、7月增至（34±8）片，葉長、葉寬在第1年6月后均進(jìn)入緩慢生長時(shí)期，且一年生種子種苗葉形指數(shù)在5月為（2.35±0.13），其后變化不明顯。表明金果欖種子成熟后，立即采用赤霉素、沙藏處理，能夠快速促使種子解除休眠，種苗生長速度快。種苗出苗3個(gè)月后，葉長達(dá)10 cm左右，葉寬達(dá)4 cm左右，形狀基本穩(wěn)定，而株高和葉片數(shù)還在增加。因此，在發(fā)展金果欖種苗或大田栽培時(shí)，應(yīng)當(dāng)做好搭架，通過修剪株高，才能為批量繁育金果欖種子種苗、高產(chǎn)栽培帶來管理上的便利。

3.2 一、二年生金果欖種苗地下部塊根生長情況

由金果欖種子育苗試驗(yàn)（表2）發(fā)現(xiàn)，一年生金果欖種子種苗3—7月僅有主根，無塊根。而二年生金果欖種子種苗不僅有主根，也有明顯的塊根，且塊根生長迅速，塊根形指數(shù)5月為（3.28±2.08），之后開始無明顯增長。推測人工培育金果欖種子種苗時(shí)，二年生苗大田栽培不僅可以提高種苗成活率、塊根產(chǎn)量，也為滿足種植效益帶來便利。此外，二年生金果欖種苗塊根形指數(shù)僅檢測至7月，塊根的縱橫徑隨土壤結(jié)構(gòu)、種植年限是否會(huì)引起變化，還需進(jìn)一步深入研究。

3.3 二年生金果欖種苗干燥塊根藥用成分含量檢測分析

《中華人民共和國藥典》2020版指出，金果欖干燥塊根理論板數(shù)按古倫賓峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500，古倫賓含量不得少于1.0%，水分含量不得超過13.0%［7］。由二年生金果欖種苗3—7月干燥塊根的高效液相色譜檢測與結(jié)果分析可知，二年生金果欖種苗干燥塊根EP理論塔板數(shù)、古倫賓含量均是藥典的1倍或以上，而水分含量均小于13.0%（圖3、表3）。這表明湖北金水源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司的金果欖品種適宜該地區(qū)發(fā)展，人工繁育種子種苗較好，藥用價(jià)值高。

3.4 營養(yǎng)液對一年生金果欖種苗的影響

噴施3次10 mL/株的MS營養(yǎng)液20倍稀釋液后，對一年生金果欖種苗地上部農(nóng)藝性狀的影響如表4所示，與對照相比，一年生金果欖種苗株高、葉片數(shù)、莖粗、葉長、葉寬、葉形指數(shù)均有所增加。由表5可知，一年生金果欖種苗噴施MS營養(yǎng)液后，與對照相比，加速了種苗塊根的形成，且植株鮮重也相對增加。表明人工培育金果欖種苗時(shí)，可通過人工噴施葉面肥促進(jìn)種苗生長發(fā)育，加速金果欖種苗塊根形成，進(jìn)而影響塊根形指數(shù)，但塊根是否符合優(yōu)質(zhì)種苗生產(chǎn)及種苗移栽大田后是否符合藥材生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，還需要進(jìn)一步研究。

3.5 MS營養(yǎng)液處理的金果欖種苗農(nóng)藝性狀之間的相關(guān)性分析

由表6可知，噴施3次10 mL/株的MS營養(yǎng)液20倍稀釋液后，一年生金果欖種子種苗株高、葉寬分別與塊根鮮重、地下鮮重呈顯著正相關(guān)（P<0.05）；莖粗和葉長與地上鮮重呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與塊根縱徑、塊根形指數(shù)呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）；莖粗和葉片還分別與塊根橫徑、塊根鮮重呈顯著正相關(guān)（P<0.05），且葉長與塊根橫徑呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）；地上鮮重與塊根鮮重、塊根縱徑、塊根形指數(shù)呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與塊根橫徑呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）；塊根鮮重與塊根縱徑、塊根橫徑、塊根形指數(shù)呈顯著正相關(guān)（P<0.05），塊根橫徑、塊根縱徑、塊根形指數(shù)之間均呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）。此外，葉片數(shù)、葉形指數(shù)與各農(nóng)藝性狀均無顯著相關(guān)關(guān)系。

3.6 MS營養(yǎng)液處理的金果欖種苗葉片、塊根的線性回歸分析

噴施3次10 mL/株的MS營養(yǎng)液20倍稀釋液后，一年生金果欖種苗葉形指數(shù)與葉長、葉寬之間無相關(guān)關(guān)系（圖4），塊根形指數(shù)與塊根縱徑、塊根橫徑之間呈正相關(guān)（圖5）。由圖4可知，MS營養(yǎng)液處理的金果欖種苗葉形指數(shù)與葉長、葉寬之間的直線回歸方程分別為y=2.54+2.64x（R2=0.48，P>0.05）、y=4.83-0.46x（R2=0.16，P>0.05）。由圖5可知，MS營養(yǎng)液處理的金果欖種苗塊根形指數(shù)與塊根縱徑、塊根橫徑之間的直線回歸方程分別為y=0.71x-0.02（R2=0.99，P<0.01）、y=0.01+0.17x（R2=0.98，P<0.01）。

4 小結(jié)與討論

金果欖屬秦巴山區(qū)道地中藥材，人工繁育中藥材金果欖，不僅能夠滿足市場貨源供應(yīng)需求，也為保存金果欖種源，減少金果欖人工種植成本和防止野生資源破壞提供重要途徑。本試驗(yàn)結(jié)果表明，金果欖種子成熟后，通過人工繁育能夠快速出苗，且出苗率高，適宜推廣應(yīng)用。一、二年生金果欖種子育苗株高、主根長、塊根隨著繁育時(shí)間的延長而增長，表明金果欖農(nóng)藝性狀與產(chǎn)量有關(guān)，與楊玉霞等［4］、楊秀全等［20］的研究結(jié)果一致。葉片數(shù)在第2年6—7月進(jìn)入緩慢生長狀態(tài)，種苗葉形指數(shù)在5月齡和塊根形指數(shù)在17月齡時(shí)均基本穩(wěn)定。

金果欖為多年生藥用植物，富含古倫賓，具有抗炎、抗腫瘤和抑制肝藥代謝酶等活性［22］。金果欖在培育過程中，其地下塊根大小、數(shù)量不盡相同，且不同地區(qū)的金果欖藥用價(jià)值存在差異。楊秀全等［20］研究湖北、湖南等12個(gè)地區(qū)栽種2年3個(gè)月后的金果欖發(fā)現(xiàn)，湖南省龍山縣金果欖古倫賓含量未達(dá)到藥典要求，江西省安遠(yuǎn)縣和貴州省從江縣金果欖古倫賓含量較高，其他地區(qū)金果欖古倫賓含量均在1.01%～2.61%。本試驗(yàn)根據(jù)2020版《中華人民共和國藥典》［7］對二年生金果欖種子種苗進(jìn)行檢測后，發(fā)現(xiàn)金果欖干燥塊根EP理論塔板數(shù)均>5 000、古倫賓含量均>2%，水分含量均<13.0%，符合藥典規(guī)定，說明金果欖適宜在秦巴山區(qū)種植。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，一年生金果欖種苗在噴施MS營養(yǎng)液后，促進(jìn)了種苗株高的增長、葉片數(shù)的增加，并加速了種苗塊根的形成，提高了生物量。這表明金果欖可通過噴施葉面肥的方式改善植株生長發(fā)育狀況。同時(shí)，一年生金果欖種子種苗株高、葉寬、莖粗與地下塊根鮮重呈正相關(guān)，而塊根鮮重與塊根縱徑、塊根橫徑、塊根形指數(shù)呈正相關(guān)，且塊根橫徑、塊根縱徑、塊根形指數(shù)之間均呈極顯著正相關(guān)。這與大棚內(nèi)一、二年生金果欖種子種苗試驗(yàn)結(jié)果一致。此外，在MS營養(yǎng)液的處理下，一年生金果欖種苗葉片數(shù)、葉形指數(shù)與各農(nóng)藝性狀無顯著相關(guān)關(guān)系，葉形指數(shù)與葉長、葉寬之間也無顯著相關(guān)關(guān)系，而塊根形指數(shù)與塊根縱徑、塊根橫徑之間呈極顯著正相關(guān)關(guān)系。表明金果欖種苗葉片與其他農(nóng)藝性狀無顯著相關(guān)關(guān)系，塊根與地上株高、莖粗有顯著相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，中藥材金果欖種子種苗培育時(shí)，需要提前做好種子處理。育苗后，應(yīng)當(dāng)及時(shí)人工搭架，根據(jù)金果欖種子種苗農(nóng)藝性狀與產(chǎn)量有相關(guān)關(guān)系的原則，合理管理地上植株，適量噴施葉面肥，促進(jìn)種苗生長發(fā)育。

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