風(fēng)味劑對(duì)未成年圈養(yǎng)大熊貓攝食竹葉的影響

摘 要 為了探究未成年圈養(yǎng)大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）選擇性攝食的風(fēng)味機(jī)制，根據(jù)未成年圈養(yǎng)大熊貓攝食行為特點(diǎn)、熟悉的食物香氣和喜歡的食物味道，自主研制出一種未成年圈養(yǎng)大熊貓的專用風(fēng)味劑。經(jīng)專業(yè)人員的嗅感和口感品評(píng)，該風(fēng)味劑可以改善未成年圈養(yǎng)大熊貓所食竹葉的主要?dú)馕逗臀兜馈?022年6月—2023年3月，用刺黑竹（Chimonobambusa purpurea）、斑苦竹（Pleioblastus maculatus）、金佛山方竹（Chimonobambusa utilis）和八月竹（Ch. szechuanensis）的竹葉飼喂7只（3 ，4♀）1. 5歲段（15～20月齡）圈養(yǎng)大熊貓幼仔、6只（2 ，4♀）2. 5歲段（27～30月齡）和6只（3 ，3♀）4. 0歲段（45～52月齡）圈養(yǎng)大熊貓亞成體。試驗(yàn)組竹葉噴霧風(fēng)味劑，對(duì)照組竹葉不噴。試驗(yàn)期間，每天早飼和午飼時(shí)段各進(jìn)行30 min的飼喂試驗(yàn)并相互交換兩組竹葉所放位置。通過(guò)未成年圈養(yǎng)大熊貓的自由選擇攝食試驗(yàn)及其攝食過(guò)程的錄像回放，觀測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組竹葉的攝食先后順序、最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間、攝食總時(shí)長(zhǎng)、攝食竹枝數(shù)量和竹葉攝食量。結(jié)果表明：（1）風(fēng)味劑可顯著提升1. 5歲段受試大熊貓幼仔最先攝食次數(shù)的占比；（2）風(fēng)味劑可顯著增加1. 5歲段和2. 5歲段受試未成年大熊貓攝食竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間，平均增加率分別為339. 32%和102. 59%；（3）風(fēng)味劑可顯著增加1. 5歲段和2. 5歲段受試未成年大熊貓攝食竹葉的總時(shí)長(zhǎng)，平均增加率分別為310. 45%和129. 91%；（4）風(fēng)味劑可顯著提高1. 5歲段、2. 5歲段和4. 0歲段受試未成年大熊貓攝食竹枝數(shù)量，平均增食率分別為186. 20%、80. 87%和103. 12%；（5）風(fēng)味劑可顯著提高1. 5歲段、2. 5歲段和4. 0歲段受試未成年大熊貓攝食竹葉量，平均增食率分別為154. 21%、118. 02%和109. 77%。因此，專用風(fēng)味劑可以增強(qiáng)竹葉對(duì)未成年圈養(yǎng)大熊貓的誘食性，具有顯著的增食竹葉效果。

關(guān)鍵詞：大熊貓；未成年；風(fēng)味劑；竹葉；嗅感品評(píng)；口感品評(píng)；飼喂效果

中圖分類號(hào)：S864. 4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 02 - 0276 - 15

DOI：10.12375/ysdwxb.20240206

風(fēng)味劑或稱調(diào)味劑、誘食劑，因有調(diào)味和誘食的作用，早已在人的食品和多種家養(yǎng)動(dòng)物的飼料中廣泛應(yīng)用［1］6-7。動(dòng)物主要通過(guò)嗅覺(jué)和味覺(jué)感知飼料發(fā)出的風(fēng)味（氣味和味道）信息，以抉擇與自己風(fēng)味偏好一致或相近的飼料攝入［2］。不同種類的動(dòng)物，嗅覺(jué)和味覺(jué)的靈敏度有所不同，喜好的飼料香氣和味道都有所差異，攝食行為模式也不盡一致，風(fēng)味劑的原料組成、風(fēng)味類型、起效濃度和使用方式方法等因動(dòng)物種類不同而異［1］152-190。

大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）屬我國(guó)特有的珍稀獸類，深受全球人民的喜愛(ài)。近些年，隨著養(yǎng)殖技術(shù)的不斷創(chuàng)新，大熊貓的人工飼養(yǎng)種群數(shù)量呈連續(xù)增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，2018年底增至548只［3］；2020年底達(dá)到630只，其中在我國(guó)本土有571只，以國(guó)際合作方式在其他19個(gè)國(guó)家有59只［4］。哺乳期特別是哺乳后期（0. 5～1. 5歲或斷奶）的大熊貓幼仔生長(zhǎng)發(fā)育快，在人工飼養(yǎng)條件下流質(zhì)性母乳或奶粉還原乳不能滿足日益增長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求，需要逐步學(xué)會(huì)攝食固態(tài)性食物，如特制窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍、竹葉和竹稈等，其生活環(huán)境、個(gè)體生理和心理等都會(huì)發(fā)生較大變化，如何幫助大熊貓幼仔平穩(wěn)、較快地進(jìn)行食物過(guò)渡和食性轉(zhuǎn)換是此階段飼養(yǎng)管理的工作重點(diǎn)［5］，也是值得探究的科研課題。

根據(jù)未成年圈養(yǎng)大熊貓攝食行為的特點(diǎn)、熟悉的食物香氣和喜歡的食物味道，在研究圈養(yǎng)大熊貓幼仔喜食的母乳和“盆盆奶”的風(fēng)味特征與香氣成分［6?9］基礎(chǔ)上，模擬未成年圈養(yǎng)大熊貓喜食食物的風(fēng)味特征，采用多種食品級(jí)單體風(fēng)味原料，經(jīng)過(guò)多次配方篩選與生產(chǎn)工藝流程的改進(jìn)，在國(guó)內(nèi)外率先自主研制出未成年圈養(yǎng)大熊貓專用風(fēng)味劑，于2022年6月在中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心臥龍神樹坪基地（以下簡(jiǎn)稱“臥龍神樹坪基地”）和2022年10月—2023年3月在中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心都江堰基地（以下簡(jiǎn)稱“都江堰基地”）進(jìn)行了飼喂試驗(yàn)，測(cè)試了未成年圈養(yǎng)大熊貓專用風(fēng)味劑的實(shí)際飼喂效果。

1 材料與方法

1. 1 供試材料

1. 1. 1 竹種及部位選取

刺黑竹（Chimonobambusa purpurea）產(chǎn)于四川省崇州市文井江鎮(zhèn)，竹齡3 年，葉齡1～2 年；斑苦竹（Pleioblastus maculatus）產(chǎn)于四川省都江堰市蒲陽(yáng)街道辦原向峨鄉(xiāng)，竹齡3年以上，葉齡1～2年；金佛山方竹（Chimonobambusa utilis）和八月竹（Ch. szechua?nensis）均產(chǎn)于四川省汶川縣三江鎮(zhèn)，竹齡2年，葉齡2個(gè)月～1年2個(gè)月。上述4種竹子均為人工栽培，竹葉新鮮，葉片舒展，呈嫩綠色至深綠色，均屬都江堰基地和臥龍神樹坪基地每次飼喂試驗(yàn)時(shí)的當(dāng)期常喂竹種。試驗(yàn)時(shí)從購(gòu)回的同捆竹子中挑選出新鮮、干凈和枝繁葉茂的竹子頂部（包括竹稈、所有竹枝及其葉片和葉柄）作為試驗(yàn)用材，砍去無(wú)枝葉或枝葉較少的部分竹稈。隨機(jī)分成竹子種類和根數(shù)相同、竹稈粗細(xì)和枝葉數(shù)量大致相近的對(duì)照組和試驗(yàn)組，分別對(duì)兩組稱質(zhì)量，記錄為喂前質(zhì)量。試驗(yàn)組竹子在竹稈底部和中部竹節(jié)位置貼上口序紙作為標(biāo)記，便于觀察、識(shí)別，向試驗(yàn)組的竹葉噴霧風(fēng)味劑，而對(duì)照組竹子的竹節(jié)不貼口序紙，竹葉也不噴風(fēng)味劑。

1. 1. 2 專用風(fēng)味劑

專用風(fēng)味劑是由多種食品級(jí)呈香和呈味原料調(diào)制而成，奶香，味甜，液態(tài)，噴霧使用。

1. 2 受試動(dòng)物

受試19只未成年大熊貓圈養(yǎng)于臥龍神樹坪基地和都江堰基地，臨床健康狀況良好，基本信息詳見(jiàn)表1。日糧以竹子為主，以特制窩窩頭（配合性精飼料）、胡蘿卜和蘋果為輔，自由采食和飲水，圈舍內(nèi)隨意活動(dòng)，按照臥龍神樹坪基地和都江堰基地既定的飼養(yǎng)規(guī)程進(jìn)行日常飼喂和管理，在每次飼喂試驗(yàn)開始前先由固定的飼養(yǎng)員照常喂給一些規(guī)定的食物，并非在嚴(yán)重饑餓狀態(tài)下進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。

1. 3 自由選擇攝食試驗(yàn)方法

清掃（洗）試驗(yàn)用大熊貓圈舍的內(nèi)舍，然后間隔擺放事先備好的對(duì)照組和試驗(yàn)組竹子，開啟攝像機(jī)錄像，放入受試大熊貓，關(guān)閉試驗(yàn)用內(nèi)舍的所有出入口，全部人員離開內(nèi)舍，鎖門，任大熊貓自由選擇攝食。試驗(yàn)歷時(shí)30 min，結(jié)束后放出受試大熊貓，從內(nèi)舍中取出受試大熊貓食后剩余的對(duì)照組和試驗(yàn)組竹子，分別稱質(zhì)量，記錄為食后質(zhì)量，然后觀測(cè)竹枝被食枝數(shù)。試驗(yàn)期間在每天的早飼時(shí)段（09：00—10：00）和午飼時(shí)段（14：00—15：00）各進(jìn)行1次試驗(yàn)。每次飼喂試驗(yàn)都要相互交換對(duì)照組和試驗(yàn)組竹子的擺放位置，以消除兩組竹子的擺放位置對(duì)受試大熊貓攝食兩組竹葉的影響。對(duì)照組或試驗(yàn)組竹子在試驗(yàn)內(nèi)舍里的擺放位置距受試大熊貓入口較遠(yuǎn)者即為下文中的“遠(yuǎn)處”，距入口較近者即為“近處”。“青露”和“青花”、“茅茅”和“寶元”、“青寶”和“青仔”、“滿滿”和“南小月”、“巧月”和“皓月”多數(shù)飼喂試驗(yàn)都是2只一起進(jìn)行，但有時(shí)一只幼仔或亞成體在樹上休息等原因不能被喚回，也進(jìn)行了單只的飼喂試驗(yàn)。此外，其他幼仔或亞成體因個(gè)體較大而試驗(yàn)內(nèi)舍面積相對(duì)較小，只能進(jìn)行單只試驗(yàn)。通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)記錄和錄像回放，記錄每次30 min試驗(yàn)過(guò)程中大熊貓最先攝食組別（對(duì)照組或試驗(yàn)組）的次數(shù)和連續(xù)攝食時(shí)間。專用風(fēng)味劑飼喂未成年圈養(yǎng)大熊貓?jiān)囼?yàn)的地點(diǎn)、日期、時(shí)間和供試竹種等信息見(jiàn)表2。

1. 4 竹葉風(fēng)味的品評(píng)方

從選好的、即將進(jìn)行飼喂試驗(yàn)的供試竹枝上隨機(jī)多點(diǎn)摘取若干整片新鮮竹葉，所采樣品可代表受試大熊貓當(dāng)次試驗(yàn)所食的竹葉。竹葉樣品在裝有冰袋的保溫箱中運(yùn)輸，在冰箱中-18 ℃保存。鑒于研究人員已對(duì)大熊貓所食的斑苦竹鮮葉［10］、刺黑竹鮮葉和八月竹鮮葉［11］進(jìn)行過(guò)氣味品評(píng)，因此，僅以金佛山方竹鮮葉為例，研究對(duì)照組和試驗(yàn)組竹葉的風(fēng)味差異情況。

將采集的金佛山方竹葉隨機(jī)分成葉片數(shù)量相同、大小相近的對(duì)照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組葉片在葉柄部貼口序紙作為標(biāo)記，然后向整個(gè)葉片噴霧風(fēng)味劑，噴霧的方法和劑量同飼喂試驗(yàn)。每位專業(yè)品評(píng)小組成員單獨(dú)品評(píng)，先進(jìn)行嗅感氣味品評(píng)，后進(jìn)行口感味道品評(píng)，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)［6，10?11］。氣味的相對(duì)強(qiáng)弱采用10分定義的標(biāo)度方法計(jì)分：“0”表示“不存在的”；“2”表示“微微的”；“4”表示“輕微的”；“6”表示“明確的”；“8”表示“顯著的”；“10”表示“非常顯著的”［10?11］。每個(gè)氣味品評(píng)指標(biāo)的最終得分結(jié)果是去掉1個(gè)最高評(píng)分和1個(gè)最低評(píng)分后的算術(shù)平均值。

1. 5 受試大熊貓攝食竹枝的計(jì)數(shù)方法

若竹枝上的竹葉被食，可肉眼觀察到葉片、葉柄和竹枝上遺留的咬切痕跡，據(jù)此可計(jì)數(shù)出受試大熊貓攝食的竹枝數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)只計(jì)從竹稈的籜環(huán)上直接長(zhǎng)出的竹枝，不計(jì)從大竹枝上分出的小細(xì)枝。凡竹枝上有1個(gè)以上（含1個(gè)）葉片留有的咬切痕跡，均計(jì)為1個(gè)攝食竹枝。

1. 6 數(shù)據(jù)處理與分析

最先攝食次數(shù)的占比=最先攝食次數(shù)/同一位置所放的總次數(shù)×100%。

最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間是指圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體連續(xù)攝食竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間，包括嗅聞、摘葉、咬切、咀嚼和吞咽等一系列完整的攝食行為鏈，如此往復(fù)循環(huán)，其間沒(méi)有游走、攀爬、休息和排便等非攝食行為。動(dòng)物對(duì)某種食物不間斷地連續(xù)攝食的時(shí)間越長(zhǎng)，可說(shuō)明越喜食該食物。

品評(píng)或測(cè)試指標(biāo)的算術(shù)平均值=有效品評(píng)或每次測(cè)試指標(biāo)所得數(shù)據(jù)之和/有效品評(píng)或測(cè)試次數(shù)。

試驗(yàn)組測(cè)試指標(biāo)的增加數(shù)（量）=試驗(yàn)組測(cè)試指標(biāo)數(shù)據(jù)-對(duì)照組測(cè)試指標(biāo)數(shù)據(jù)。

試驗(yàn)組測(cè)試指標(biāo)的增加率=試驗(yàn)組測(cè)試指標(biāo)的增加數(shù)（量）/對(duì)照組測(cè)試指標(biāo)數(shù)據(jù)×100%。

竹葉攝食量=竹子的喂前質(zhì)量-竹子的食后質(zhì)量。

平均每只受試大熊貓的攝食竹葉量或攝食竹枝數(shù)=攝食竹葉量或攝食竹枝數(shù)/受試大熊貓只數(shù)。

試驗(yàn)組和對(duì)照組竹子的食后質(zhì)量均不包含竹子在30 min試驗(yàn)期間內(nèi)自然蒸發(fā)的粗水分質(zhì)量。

試驗(yàn)組和對(duì)照組的所得數(shù)據(jù)通過(guò)GraphPadPrism 8. 0. 2軟件進(jìn)行配對(duì)t 檢驗(yàn)，顯著水平α=0. 05，極顯著水平α=0. 01。

2 結(jié)果

2. 1 供試金佛山方竹葉的風(fēng)味品評(píng)

2. 1. 1 嗅感品評(píng)結(jié)果

經(jīng)專業(yè)人員對(duì)金佛山方竹整片鮮葉的嗅感品評(píng)，對(duì)照組竹葉和噴有風(fēng)味劑的試驗(yàn)組竹葉的整體氣味指標(biāo)、主要香氣指標(biāo)和主要韻調(diào)指標(biāo)品評(píng)結(jié)果見(jiàn)表3。整體氣味指標(biāo)品評(píng)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組竹葉氣味強(qiáng)度和透發(fā)性的品評(píng)得分均值明顯高于對(duì)照組（plt;0. 05）。香氣指標(biāo)品評(píng)結(jié)果顯示，奶香、青香分別在試驗(yàn)組和對(duì)照組竹葉中得分最高，試驗(yàn)組竹葉的奶香、甜氣（plt;0. 01）及油脂氣（plt;0. 05）均顯著高于對(duì)照組；而對(duì)照組竹葉的青香明顯強(qiáng)于試驗(yàn)組（plt;0. 05）。韻調(diào)指標(biāo)品評(píng)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組竹葉的多汁感略強(qiáng)于對(duì)照組，但差異不顯著（pgt;0. 05），可能因噴有風(fēng)味劑所致；對(duì)照組竹葉的新鮮感和嫩感明顯強(qiáng)于試驗(yàn)組，差異分別為極顯著（plt;0. 01）和顯著（plt;0. 05）。

2. 1. 2 口感品評(píng)結(jié)果

專業(yè)人員對(duì)金佛山方竹鮮葉的咀嚼口感品評(píng)結(jié)果表明：對(duì)照組竹葉具有明顯的青葉味和木質(zhì)感，微苦，干澀；試驗(yàn)組竹葉具有明顯的甜味和木質(zhì)感，青葉味、苦味和澀味均有所減弱，略帶奶香味。

2. 2 最先攝食的觀察

通過(guò)對(duì)風(fēng)味劑飼喂試驗(yàn)中未成年圈養(yǎng)大熊貓自由選擇最先攝食對(duì)照組或試驗(yàn)組竹葉的現(xiàn)場(chǎng)觀察，結(jié)合飼喂試驗(yàn)錄像回放的確認(rèn)，結(jié)果見(jiàn)表4。通過(guò)對(duì)7只1. 5歲段（15～20月齡）圈養(yǎng)大熊貓幼仔攝食4種竹葉的共計(jì)73次飼喂試驗(yàn)觀察，發(fā)現(xiàn)最先攝食噴有風(fēng)味劑的試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)計(jì)56次，而最先攝食未噴風(fēng)味劑的對(duì)照組竹葉的次數(shù)計(jì)17次，最先攝食試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)比最先攝食對(duì)照組竹葉的次數(shù)多39次。由于試驗(yàn)內(nèi)舍面積較小，大熊貓常有“就近取食”的行為習(xí)慣，并非先嗅聞、比較對(duì)照組和試驗(yàn)組竹葉氣味后再選擇性攝食，大熊貓幼仔最先攝食試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹葉與其所放的位置可能密切相關(guān)。若以放于“遠(yuǎn)處”的試驗(yàn)組竹葉被最先攝食的頻次或占比來(lái)評(píng)價(jià)風(fēng)味劑的誘導(dǎo)攝食效果較為客觀、合理，因?yàn)榇笮茇堄鬃谢騺喅审w進(jìn)入試驗(yàn)內(nèi)舍后，首先與“近處”的對(duì)照組竹葉相遇，然后才是“遠(yuǎn)處”的試驗(yàn)組竹葉。在73次試驗(yàn)中，放于“遠(yuǎn)處”的試驗(yàn)組竹葉共計(jì)32次，其中有18次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比為56. 25%；而放于“遠(yuǎn)處”的對(duì)照組竹葉共計(jì)41次，其中僅有3次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比僅為7. 32%。試驗(yàn)組和對(duì)照組的這種占比經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)兩組間差異極顯著（plt;0. 01），由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑對(duì)1. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔具有明顯的誘導(dǎo)攝食效果。

通過(guò)對(duì)6 只2. 5 歲段（27～30 月齡）圈養(yǎng)大熊貓亞成體攝食4種竹葉的共計(jì)39次單只飼喂試驗(yàn)觀察，發(fā)現(xiàn)最先攝食試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)計(jì)22次，而最先攝食對(duì)照組竹葉的次數(shù)計(jì)17次，最先攝食試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)比最先攝食對(duì)照組竹葉的次數(shù)多5次。在39 次試驗(yàn)中，放于“遠(yuǎn)處”的試驗(yàn)組竹葉共計(jì)17次，其中有3次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比為17. 65%；而放于“遠(yuǎn)處”的對(duì)照組竹葉共計(jì)22次，其中也有3 次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比為13. 64%。雖然試驗(yàn)組的這種占比高于對(duì)照組，但經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)兩組間的差異不顯著（pgt;0. 05），可能與就近取食的攝食行為習(xí)慣有關(guān)。

通過(guò)對(duì)6 只4. 0 歲段（45～52 月齡）圈養(yǎng)大熊貓亞成體攝食2種竹葉的共計(jì)52次飼喂試驗(yàn)觀察，發(fā)現(xiàn)最先攝食試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)計(jì)30次，而最先攝食對(duì)照組竹葉的次數(shù)計(jì)22次，最先攝食試驗(yàn)組竹葉的次數(shù)比最先攝食對(duì)照組竹葉的次數(shù)多8次。在52次試驗(yàn)中，放于“遠(yuǎn)處”的試驗(yàn)組竹葉共計(jì)24次，其中5次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比為20. 83%；而放于“遠(yuǎn)處”的對(duì)照組竹葉共計(jì)28次，其中3次是被最先攝食，在總次數(shù)中的占比僅為10. 71%。雖然試驗(yàn)組的這種占比高于對(duì)照組，但經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)兩組間的差異不顯著（pgt;0. 05），可能也與就近取食的攝食行為習(xí)慣有關(guān)。

2. 3 最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間

通過(guò)對(duì)圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體連續(xù)攝食對(duì)照組或試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間觀測(cè)，可得知圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體更喜食哪個(gè)組的竹葉，這一指標(biāo)在30 min的測(cè)試歷程中具有唯一性，可作為評(píng)價(jià)風(fēng)味劑飼喂效果的一種重要指標(biāo)。通過(guò)96次飼喂試驗(yàn)全程錄像的回放觀測(cè)，所得最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間數(shù)據(jù)及其統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知，通過(guò)對(duì)7只1. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔共計(jì)65次的錄像回放觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓連續(xù)攝食試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間為900. 08 s，而連續(xù)攝食對(duì)照組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間為204. 88 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間均值比對(duì)照組長(zhǎng)695. 20 s，試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間的平均增加率達(dá)339. 32%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可大幅度增加1. 5歲段受試大熊貓對(duì)4種竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間。

通過(guò)對(duì)6只2. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體共計(jì)31次的錄像回放觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓連續(xù)攝食試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間為638. 42 s，而連續(xù)攝食對(duì)照組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間為315. 13 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間均值比對(duì)照組長(zhǎng)323. 29 s，試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間的平均增加率達(dá)102. 59%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可大幅度增加2. 5歲段受試大熊貓對(duì)3種竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間。

若將上述2個(gè)年齡階段共計(jì)96次的錄像回放觀測(cè)數(shù)據(jù)合并計(jì)算，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓連續(xù)攝食試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間為815. 58 s，連續(xù)攝食對(duì)照組竹葉的最長(zhǎng)時(shí)間僅為240. 48 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間均值比對(duì)照組長(zhǎng)575. 10 s，試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間的平均增加率達(dá)239. 15%。結(jié)果表明專用風(fēng)味劑可大幅度增加1. 5歲段和2. 5歲段受試大熊貓對(duì)4種竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間。

2. 4 攝食總時(shí)長(zhǎng)

動(dòng)物在一定時(shí)間內(nèi)有食物比選的條件下對(duì)某種食物攝食總時(shí)間越長(zhǎng)，也可說(shuō)明越喜食該食物，因此，通過(guò)對(duì)圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體攝食對(duì)照組和試驗(yàn)組竹葉總時(shí)間長(zhǎng)短的觀測(cè)，也可得知圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體比較喜食哪個(gè)組的竹葉。在30 min的測(cè)試歷程中，除“青露”2次、“青花”1次、“茅茅”3次和“寶元”1次均只攝食試驗(yàn)組竹葉外，其余均間斷性攝食對(duì)照組或試驗(yàn)組竹葉，不時(shí)穿插非攝食行為。攝食總時(shí)長(zhǎng)是若干完整攝食行為鏈的時(shí)間之和，其中包括最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間，這也是評(píng)價(jià)風(fēng)味劑飼喂效果的另一重要指標(biāo)。

通過(guò)對(duì)7只1. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔共計(jì)65次飼喂試驗(yàn)的錄像回放觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)為1 236. 02 s，攝食對(duì)照組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)為301. 14 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)均值比對(duì)照組長(zhǎng)934. 88 s，試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)的平均增加率達(dá)310. 45%（表5）。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可大幅度增加1. 5歲段受試大熊貓對(duì)4種竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)。

通過(guò)對(duì)6只2. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體共計(jì)31次飼喂試驗(yàn)的錄像回放觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)為1 065. 81 s，攝食對(duì)照組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)為463. 58 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)均值比對(duì)照組長(zhǎng)602. 23 s，試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)的平均增加率達(dá)129. 91%（表5）。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑也可大幅度增加2. 5歲段受試大熊貓對(duì)3種竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)。

若將上述2個(gè)年齡階段共計(jì)96次飼喂試驗(yàn)的錄像回放觀測(cè)數(shù)據(jù)合并計(jì)算，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)為1 181. 05 s，攝食對(duì)照組竹葉的總時(shí)長(zhǎng)僅為353. 59 s，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)均值比對(duì)照組長(zhǎng)827. 46 s，試驗(yàn)組竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)的平均增加率達(dá)234. 02%。結(jié)果表明專用風(fēng)味劑也可大幅度增加1. 5歲段和2. 5歲段受試大熊貓對(duì)4種竹葉的攝食總時(shí)長(zhǎng)。

2. 5 攝食竹枝數(shù)

圈養(yǎng)大熊貓幼仔或亞成體攝食的竹枝數(shù)可作為評(píng)價(jià)風(fēng)味劑飼喂效果的一種直觀和輔助性指標(biāo)。通過(guò)對(duì)15只未成年圈養(yǎng)大熊貓共計(jì)96次飼喂試驗(yàn)的攝食竹枝的計(jì)數(shù)，所得數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析詳見(jiàn)表6。

由表6可知，經(jīng)7只1. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔的44次飼喂試驗(yàn)攝食竹枝的計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹枝數(shù)為78. 16枝，攝食對(duì)照組竹枝數(shù)為27. 31枝，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食量為50. 85枝，試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食率達(dá)186. 20%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可大幅度提高1. 5歲段受試大熊貓對(duì)刺黑竹、斑苦竹、金佛山方竹和八月竹的攝食竹枝數(shù)。

經(jīng)6只2. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體的39次飼喂試驗(yàn)攝食竹枝的計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹枝數(shù)為124. 62枝，攝食對(duì)照組竹枝數(shù)為68. 90枝，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食量為55. 72 枝，試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食率為80. 87%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可提高2. 5歲段受試大熊貓對(duì)斑苦竹、刺黑竹、八月竹和金佛山方竹的攝食竹枝數(shù)。

經(jīng)2只4. 0歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體的13次飼喂試驗(yàn)攝食竹枝的計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹枝數(shù)為105. 62枝，攝食對(duì)照組竹枝數(shù)為52. 00枝，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食量為53. 62 枝，試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食率達(dá)103. 12%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑也可大幅度提高4. 0歲段受試大熊貓對(duì)斑苦竹的攝食竹枝數(shù)。

若將上述3 個(gè)年齡階段的96 次飼喂試驗(yàn)觀測(cè)數(shù)據(jù)合并計(jì)算，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹枝數(shù)為100. 75 枝，攝食對(duì)照組竹枝數(shù)為47. 55枝，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食量為53. 20枝，試驗(yàn)組竹枝數(shù)的平均增食率達(dá)111. 88%。結(jié)果表明專用風(fēng)味劑可大幅度提高未成年圈養(yǎng)大熊貓對(duì)刺黑竹、斑苦竹、金佛山方竹和八月竹的攝食竹枝數(shù)。

2. 6 竹葉攝食量

竹葉攝食量是評(píng)價(jià)風(fēng)味劑飼喂效果的關(guān)鍵指標(biāo)。通過(guò)19 只未成年圈養(yǎng)大熊貓共計(jì)119 次為期30 min的飼喂試驗(yàn)，所得數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析見(jiàn)表7。

由表7可知，經(jīng)7只1. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔攝食4種竹葉的共計(jì)47次飼喂試驗(yàn)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉為269. 36 g，攝食對(duì)照組竹葉為105. 96 g，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的平均增食量為163. 40 g，試驗(yàn)組竹葉的平均增食率達(dá)154. 21%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑可大幅度提高1. 5歲段受試大熊貓對(duì)刺黑竹、斑苦竹、金佛山方竹和八月竹的竹葉攝食量。

經(jīng)6只2. 5歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體攝食4種竹葉的共計(jì)39次單只飼喂試驗(yàn)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉為524. 36 g，攝食對(duì)照組竹葉為240. 51 g，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的平均增食量為283. 85 g，試驗(yàn)組竹葉的平均增食率達(dá)118. 02%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑也可大幅度提高2. 5歲段受試大熊貓對(duì)斑苦竹、刺黑竹、八月竹和金佛山方竹的竹葉攝食量。

經(jīng)6只4. 0歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體攝食2種竹葉的共計(jì)33次飼喂試驗(yàn)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉為468. 79 g，攝食對(duì)照組竹葉為223. 48 g，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的平均增食量為245. 31 g，試驗(yàn)組竹葉的平均增食率達(dá)109. 77%。由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑也可大幅度提高4. 0歲段受試大熊貓對(duì)八月竹、斑苦竹的竹葉攝食量。

若將上述3個(gè)年齡階段的飼喂試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)合并計(jì)算，發(fā)現(xiàn)平均每次試驗(yàn)每只受試大熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉為408. 23 g，攝食對(duì)照組竹葉為182. 65 g，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間差異極顯著（plt;0. 01）。試驗(yàn)組竹葉的平均增食量為225. 58 g，試驗(yàn)組竹葉的平均增食率達(dá)123. 50%。結(jié)果表明專用風(fēng)味劑可大幅度提高未成年圈養(yǎng)大熊貓對(duì)刺黑竹、斑苦竹、金佛山方竹和八月竹的竹葉攝食量。

3 討論

從上述結(jié)果可知，專用風(fēng)味劑可改變竹葉原有的一些主要?dú)馕逗臀兜馈Ｍㄟ^(guò)對(duì)1. 5歲段、2. 5歲段和4. 0 歲段未成年圈養(yǎng)大熊貓多次短期4 種常喂竹葉自由選擇的攝食試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)專用風(fēng)味劑對(duì)1. 5 歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔具有一定的誘導(dǎo)攝食作用，可顯著增加1. 5 歲段圈養(yǎng)大熊貓幼仔和2. 5 歲段圈養(yǎng)大熊貓亞成體對(duì)竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間和攝食總時(shí)長(zhǎng)，可顯著提高1. 5 歲段、2. 5 歲段和4. 0 歲段未成年圈養(yǎng)大熊貓的攝食竹枝數(shù)和竹葉攝食量。

3. 1 未成年圈養(yǎng)大熊貓攝食竹葉的風(fēng)味機(jī)制探討

試驗(yàn)組竹葉在噴霧風(fēng)味劑后，增強(qiáng)了竹葉氣味的強(qiáng)度和透發(fā)性，利于氣味擴(kuò)散，便于受試未成年圈養(yǎng)大熊貓嗅覺(jué)感知，還增添了顯著的奶香香氣，奶香香氣屬未成年大熊貓熟悉并喜歡的香氣類型［6］，可激發(fā)未成年大熊貓攝食竹葉的欲望，誘導(dǎo)受試未成年圈養(yǎng)大熊貓前去攝食，使得“遠(yuǎn)處”試驗(yàn)組竹葉被最先攝食的次數(shù)占比高于“遠(yuǎn)處”的對(duì)照組竹葉（表4），由此可見(jiàn)，專用風(fēng)味劑具有一定的誘導(dǎo)攝食作用。大熊貓具有甜味受體基因［12?13］，圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體喜食的母乳［6］、“盆盆奶”［7］、特制窩窩頭［14］、蘋果和胡蘿卜［15］等食物均有明顯的甜味，這是大熊貓幼仔和亞成體對(duì)食物中甜味敏感的具體例證。試驗(yàn)組竹葉在噴霧風(fēng)味劑之后滿足了受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體對(duì)甜味的味覺(jué)偏好，也減少了竹葉原有的苦味和澀味對(duì)受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體攝食的負(fù)面影響，會(huì)被受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體認(rèn)知為安全且樂(lè)意攝食，因此受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體大幅度地增加對(duì)試驗(yàn)組竹葉的最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間和攝食總時(shí)長(zhǎng)（表5），大幅度地增加攝食竹枝數(shù)（表6）和竹葉攝食量（表7），而較少地選擇位置相鄰的對(duì)照組竹葉攝食。

3. 2 風(fēng)味劑飼喂效果的影響因素

從表5、表6和表7可知，有些指標(biāo)的觀測(cè)結(jié)果出現(xiàn)一定程度的差異，可能是受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體的年齡、性別、個(gè)體、供試竹種、飼喂試驗(yàn)時(shí)期和地點(diǎn)等不同所致。如表7中1. 5歲段受試圈養(yǎng)大熊貓幼仔對(duì)試驗(yàn)組竹葉的平均增食率為154. 21%，2. 5 歲段亞成體為118. 02%，4. 0 歲段亞成體為109. 77%，呈逐步下降趨勢(shì)，可能是隨著未成年圈養(yǎng)大熊貓的年齡增長(zhǎng)，該風(fēng)味劑的誘食效應(yīng)減弱，換言之，該風(fēng)味劑對(duì)初步學(xué)習(xí)攝食竹葉的大熊貓幼仔而言，誘食效果更佳。表6中“漫漫”（♀）和“深深”（♀）為一對(duì)雌性雙胞胎，在相同環(huán)境條件下每天早飼或午飼時(shí)段輪換進(jìn)行1次單只飼喂試驗(yàn)，試驗(yàn)組斑苦竹枝的平均增食率分別為130. 28%和91. 15%，相差較大，可能由個(gè)體差異引起。表5 中“青寶”（♀）和“青仔”（ ）為一對(duì)異性雙胞胎，在完全相同的環(huán)境條件下二者一起進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，通過(guò)攝食過(guò)程的錄像回放觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組竹葉最長(zhǎng)連續(xù)攝食時(shí)間的平均增加率分別為160. 06% 和85. 47%，相差近1倍，可能由性別不同引起。表7 中“ 漫漫”在2022 年10月31日—2022年11月7日先后用斑苦竹和刺黑竹進(jìn)行單只飼喂試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)斑苦竹葉和刺黑竹葉的平均增食率分別為85. 71% 和181. 25%，相差1 倍多，可能由竹種不同引起。

本研究用4種常喂竹葉噴霧風(fēng)味劑的方法，對(duì)7只1. 5歲段、6只2. 5歲段和6只4. 0歲段未成年圈養(yǎng)大熊貓進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，用多項(xiàng)指標(biāo)評(píng)價(jià)了風(fēng)味劑的飼喂效果，取得了差異顯著的試驗(yàn)結(jié)果，證明了食物風(fēng)味在圈養(yǎng)大熊貓幼仔和亞成體選擇性攝食中的重要性，開啟了大熊貓攝食風(fēng)味機(jī)制的新探索，為解決大熊貓不愿攝食或攝食不足的實(shí)際問(wèn)題提供了新思路和新方法，仍需詳盡和深入地試驗(yàn)探究。

致謝：在專用風(fēng)味劑的研制過(guò)程中，承蒙成都大帝漢克生物科技有限公司喻麟董事長(zhǎng)和李小兵總經(jīng)理的大力支持；西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院的包清彬教授、西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院的曾凡坤教授、成都大帝漢克生物科技有限公司的李松柏高級(jí)工程師、鄧虹高級(jí)工程師、李志忠工程師及趙仁仟同志多次參加風(fēng)味品評(píng)；在專用風(fēng)味劑的飼喂試驗(yàn)中得到中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心魏榮平教授級(jí)高級(jí)工程師的悉心指導(dǎo)，譚成彬、吳凱、徐翔、童建華、湯濤、潘超、衡科和瞿祖鳳等同仁的參與和幫助，以及吳勁旭老師核定了供試竹種的學(xué)名，在此一并深表謝意！

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基金項(xiàng)目：大熊貓國(guó)際合作資金項(xiàng)目（林護(hù)發(fā)［2017］115號(hào)）；四川省科技計(jì)劃重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（2019YFS0462）