• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    膠體金免疫層析法在韭菜農(nóng)藥殘留檢測中的應用研究

    2024-06-06 14:50:06張繼梅馮文霞白新明李亞莉
    甘肅農(nóng)業(yè)科技 2024年5期
    關(guān)鍵詞:快速檢測農(nóng)藥殘留韭菜

    張繼梅 馮文霞 白新明 李亞莉

    摘要:為驗證膠體金免疫層析技術(shù)在韭菜農(nóng)殘檢測中的可靠性和適用性,選用3種不同的農(nóng)殘膠體金免疫層析快速檢測產(chǎn)品(膠體金農(nóng)殘快檢試劑)檢測韭菜中腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威、三唑磷等6種農(nóng)藥殘留,并將其與色譜質(zhì)譜串聯(lián)法進行比較,對其靈敏度、假陽性率及假陰性率進行驗證評價。結(jié)果表明,在0.5 LOD的農(nóng)藥添加水平下,3種膠體金農(nóng)殘快檢試劑對實驗室空白樣品的檢測結(jié)果均為陰性;但當添加水平達到LOD或MLR時,其檢測結(jié)果均為陽性,證明膠體金農(nóng)殘快檢試劑靈敏度較高,且符合國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量要求;實驗室加標試驗和實際樣品比對試驗結(jié)果顯示,膠體金農(nóng)殘快檢技術(shù)與色譜質(zhì)譜聯(lián)用法的檢測結(jié)果均無顯著性差異(χ2 < 3. 84),其假陰性率和假陽性率均為0。故膠體金免疫層析法可在韭菜的農(nóng)殘快速檢測中應用。

    關(guān)鍵詞:韭菜;農(nóng)藥殘留;膠體金免疫層析法;快速檢測;色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

    中圖分類號:TS255.9;S633.3? ? ? ? ?文獻標志碼:A? ? ? ? ?文章編號:2097-2172(2024)05-0476-06

    doi:10.3969/j.issn.2097-2172.2024.05.016

    Study on the Application of Colloidal Gold Immunochromatography

    in the Detection of Pesticide Residues in Chinese Chives

    ZHANG Jimei 1, FENG Wenxia 1, BAI Xinming 1, LI Yali 2

    (1. Pingliang Agricultural Products Quality Safety Inspection and Testing Centre, Pingliang Gansu 744000, China;

    2.Vegetable Research Institute, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou Gansu 730070, China)

    Abstract: To validate the reliability and applicability of colloidal gold immunochromatographic technology in the detection of pesticide residues in Chinese chives, 3 different types of colloidal gold immunochromatographic rapid test products(colloidal gold pesticide rapid test reagents) were used to detect 6 types of pesticide residues, including fludioxonil, imidacloprid, thiamethoxam, carbendazim, cypermethrin, and triazophos, in Chinese chives. These results were compared with those obtained using chromatography-mass spectrometry tandem method, assessing their sensitivity, false positive rate, and false negative rate. The results showed that at 0.5 LOD pesticide addition level, all 3 colloidal gold pesticide rapid test reagents yielded negative results for laboratory controls. However, when the addition levels reached LOD or MLR, the results were positive, demonstrating high sensitivity of the colloidal gold pesticide rapid test reagents, which comply with the national standards for maximum residue limits in food. Laboratory spike tests and actual sample comparison tests showed no significant differences( χ2 < 3.84) between the colloidal gold rapid detection technology and the chromatography-mass spectrometry method, with both false negative and false positive rates being 0. Therefore, colloidal gold immunochromatographic method can be applied in the rapid detection of pesticide residues in Chinese chives.

    Key words: Chinese chive; Pesticide residue; Colloidal gold immunochromatography; Rapid test; Chromatography-mass spectrometry tandem method

    韭菜是一種多年生的鱗莖類蔬菜,因其氣味辛香和口感鮮美而受到眾多家庭的歡迎。但其生長期間極易感染病蟲害,導致農(nóng)殘超標問題頻發(fā)。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部等 7 部門聯(lián)合開展的食用農(nóng)產(chǎn)品“治違禁控藥殘促提升” 三年行動中韭菜作為“三棵菜”(豇豆、韭菜及芹菜)之一進行重點整治[1 ]。多個地區(qū)對市售或產(chǎn)地韭菜中農(nóng)藥殘留的監(jiān)測表明,超標農(nóng)藥包括腐霉利、氯氟氰菊酯/高效氯氟氰菊酯、毒死蜱、百菌清、甲拌磷及多菌靈7種,而市場監(jiān)督監(jiān)測發(fā)現(xiàn)的韭菜中超標農(nóng)藥則有腐霉利、克百威、甲拌磷、啶蟲脒、毒死蜱、三唑磷和吡蟲啉等 14 種[2 - 6 ]。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管司《關(guān)于國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查實施細則(2023年)的通知》中,將韭菜作為種植業(yè)產(chǎn)品監(jiān)督抽查重點品種,將腐霉利、克百威及啶蟲脒等18種禁用農(nóng)藥作為必檢項目。

    目前,在韭菜農(nóng)藥殘留快速檢測中最常用的方法是酶抑制率法,由于受到酶特異性的影響,此方法常用于檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)? ? 藥[7 - 8 ],但該方法易受酶試劑和酶活力的影響,檢測結(jié)果可信度較低[9 - 10 ]。膠體金免疫層析農(nóng)殘快檢法是以膠體金為示蹤標志物,采用特異性抗原抗體反應及側(cè)向?qū)游龅囊环N新型免疫標記分析技術(shù)[11 - 13 ],可以直觀地通過目測膠體金標志物的顯色來測得結(jié)果[14 - 16 ]。其操作快速簡便、適用廣泛、成本低、特異性強及靈敏度高,較適合基層農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測監(jiān)管機構(gòu)在果蔬采摘上市前進行自檢。

    本研究采用3個不同廠家的膠體金農(nóng)殘快檢試劑檢測了韭菜中腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威及三唑磷等6種農(nóng)藥的殘留量,同時與色譜質(zhì)譜聯(lián)用定量法進行比對,并對其靈敏度、假陰性率、假陽性率及檢測結(jié)果進行驗證評價,進而為膠體金農(nóng)殘快檢技術(shù)在韭菜質(zhì)量安全監(jiān)管和生產(chǎn)者安全自檢工作中的應用提供參考。

    1? ?材料與方法

    1.1? ?供試試劑

    指示韭菜品種為漢中冬韭(市售)。供試腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威及三唑磷等6種農(nóng)藥膠體金快檢試劑盒分別由北京勤邦科技股份有限公司、廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司、廈門海葒興儀器股份有限公司提供。腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威、三唑磷等6種農(nóng)藥的標準品由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所(天津)提供。

    1.2? ?儀器與設備

    PL602E型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、IKA■Vibrax VXR basic漩渦混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)、HR/T20MM高速冷凍離心機(湖南赫西儀器裝備有限公司)、N-EVAP-24型氮吹儀(北京康林科技有限責任公司)、Agilent 7000C氣質(zhì)聯(lián)用儀及Agilent 6460液質(zhì)聯(lián)用儀(安捷倫科技中國有限公司)。

    1.3? 檢測方法

    1.3.1? ? 膠體金免疫層析法? ? ①原理:本方法采用膠體金免疫層析原理。樣品中的農(nóng)藥(即目標物)經(jīng)提取后,在溫育過程中與膠體金標記的單克隆抗體相結(jié)合,抑制了檢測微孔中的金標抗體和試紙中檢測線(T線)上的抗原結(jié)合,從而產(chǎn)生檢測線顏色深淺的變化,通過對檢測線與對照線(C 線)顏色深淺進行比較,即可對樣品中農(nóng)藥進行快速的定性判斷[17 - 20 ]。 ②方法:取新鮮韭菜擦去泥土,剪成小于1 cm 見方的碎片作為待測樣品。稱取一定量的待測樣品于15 mL 或50 mL離心管中,加入提取液,蓋上蓋子,渦旋儀渦動或手動上下振蕩混勻,即得樣品待測液。吸取樣品待測液垂直緩慢滴入微孔中,反應8~10 min后判定結(jié)果。③ 結(jié)果判定:若T線顯色高于或者等于C線顯色,則檢測結(jié)果為陰性,表示樣品中殘留的農(nóng)藥濃度低于檢測限;若T線顯色低于C線顯色或者T線不顯色,則檢測結(jié)果為陽性,表示樣品中殘留的農(nóng)藥濃度等于或高于檢測限;若未出現(xiàn)C線,則表示操作過程不正確或試紙條已失效。

    1.3.2? ? 定量檢測法? ? 按照《植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》(GB 23200.121—2021)和《植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》(GB 23200.113—2018)規(guī)定的方法進行定量檢測。

    1.4? ?結(jié)果評價

    按照國家食藥總局公布的《食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范》,對膠體金農(nóng)殘免疫層析快速檢測試劑的靈敏度、假陽性率以及假陰性率進行評價[21 ]。

    2? ?結(jié)果與分析

    2.1? ?靈敏度試驗

    《食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量》(GB2763—2021)對韭菜中腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威及三唑磷6種農(nóng)藥最大殘留量(MRL)均有規(guī)定,不同廠家膠體金農(nóng)殘快檢試劑對不同農(nóng)藥的檢出限(LOD)在產(chǎn)品說明書中均有說明(表1)。本試驗根據(jù)膠體金農(nóng)殘快檢試劑的LOD和農(nóng)藥的MRL設置4個加標水平,即0 LOD(對照)、0.5 LOD、1.0 LOD、2.0 LOD或MRL(若LOD = MRL,則設定為2.0 LOD;若LOD < MRL,則設定為MRL),每份試驗樣品均做7個平行試驗,結(jié)果見表2。3種供試膠體金農(nóng)殘快檢試劑中,驗證的6種農(nóng)藥參數(shù)產(chǎn)品檢出限均可以達到膠體金試劑盒說明書描述的最低水平,且符合其國家最大殘留限量標準要求,6種農(nóng)藥參數(shù)的產(chǎn)品靈敏度均符合要求。

    2.2? ?加標假陽性率試驗

    選取添加水平為0 LOD、0.5 LOD的樣品進行假陽性率檢測驗證,同時采用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法確認為陰性,用膠體金農(nóng)殘快檢試劑對其假陽性率進行驗證。液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法中啶蟲脒、吡蟲啉、克百威、多菌靈的最低檢出限分別是0.33、5.30 、0.46 、0.21 μg/kg;氣相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法中腐霉利、三唑磷的最低檢出限分別是7.20 、0.87 μg/kg。從表3可以看出,3種供試膠體金農(nóng)殘快檢試劑在0 LOD、0.5 LOD添加水平的樣品中,驗證的6種農(nóng)藥參數(shù)的假陽性率均為0%。

    2.3? ?加標假陰性率試驗

    選取MRL添加水平的樣品進行假陰性率檢測驗證,同時采用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法確認為陽性,再用膠體金農(nóng)殘快檢試劑對其假陰性率進行驗證。結(jié)果表明,3種膠體金農(nóng)殘快檢試劑在MRL添加水平的樣品中,驗證的6種農(nóng)藥參數(shù)的假陰性率均為0 (表4)。

    2.4? ?實際樣品比對試驗

    隨機從當?shù)厥袌錾铣槿【虏藰悠?0份,每份樣品做7個平行試驗。先用色譜質(zhì)譜串聯(lián)定量法檢測出樣品中農(nóng)藥含量,再用膠體金農(nóng)殘快檢試劑進行定性檢測,以驗證其靈敏度、假陽性率或假陰性率,結(jié)果見表5??梢钥闯?,當農(nóng)藥殘留量高于膠體金農(nóng)殘快檢試劑檢出限時,用膠體金農(nóng)殘快檢試劑檢測結(jié)果均為陽性。實際樣品驗證的6種農(nóng)藥參數(shù)的假陽性率和假陰性率均為 0,與色譜質(zhì)譜聯(lián)用法間均無顯著差異(χ2< 3. 84)。

    3? ?討論與結(jié)論

    目前在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作中最常用的農(nóng)殘檢測方法有儀器定量法和快速定性法[8 ]。儀器定量法主要適用于在專業(yè)實驗室開展農(nóng)殘檢測工作,其檢測成本較高、耗時長,對檢測人員專業(yè)技術(shù)水平要求較高;速測定性法應用最為廣泛的是酶抑制率法,主要針對果蔬中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測,該方法穩(wěn)定性和重復性較差,且不能滿足國家最大殘留限量要求[16 ]。與儀器定量法和酶抑制率速測法相比,膠體金農(nóng)殘速測法可在15 min內(nèi)可完成從樣品前處理到測得結(jié)果的檢測工作,具有操作簡單、靈敏度高、特異性強等特點,可作為蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測方法對蔬菜中的農(nóng)藥殘留在基層從源頭上進行科學控制[22 ]。但由于不同種類蔬菜中的農(nóng)藥殘留限量值不同,在實際應用過程中,若產(chǎn)品的檢出限高于農(nóng)藥最大殘留限量值,則會造成部分陽性樣品出現(xiàn)漏檢的問題[7 ],并且在一些特殊樣品(如茶鮮葉)的檢測中容易出現(xiàn)假陰性[20 ]。本研究中所采用的不同膠體金農(nóng)殘試劑卡僅限于檢測韭菜中某種特定農(nóng)藥殘留,在檢測韭菜中多種農(nóng)藥殘留時存在檢測成本高、任務大、時間長等問題。為了節(jié)約檢測成本,提高檢測效率,需要研發(fā)檢測多種農(nóng)藥殘留的多組分膠體金農(nóng)殘速測產(chǎn)品,同時還應排除不同農(nóng)藥間的交叉反應[11, 22 - 23 ]。

    本研究采用不同廠家的膠體金農(nóng)殘快檢試劑檢測韭菜中腐霉利、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、克百威及三唑磷6種農(nóng)藥的殘留,并用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對其靈敏度、假陰性率、假陽性率及檢測結(jié)果進行驗證評價。研究結(jié)果表明,實驗室空白樣品在0.5 LOD的農(nóng)藥添加水平下,北京勤邦科技股份有限公司、廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司、廈門海葒興儀器股份有限公司等3個生產(chǎn)廠家的膠體金農(nóng)殘快檢試劑的檢測結(jié)果均為陰性;但當添加水平達到LOD或MLR時,其檢測結(jié)果均為陽性,證明膠體金農(nóng)殘快檢試劑靈敏度較高,符合國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量要求。膠體金農(nóng)殘速測法和色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對隨機抽取的實際樣品進行比對試驗,2種方法的檢測結(jié)果一致,假陽性率和假陰性率均為0,且無顯著性差異(χ2 < 3. 84),這與占繡萍等[14 ]、陳美蓮等[9 ]的研究結(jié)果一致。總之,用膠體金農(nóng)殘快檢試劑檢測韭菜中農(nóng)藥殘留是可靠的,農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測監(jiān)管機構(gòu)可用該方法在韭菜采摘上市前進行自檢,從而達到控制韭菜中農(nóng)藥殘留超標的目的。

    參考文獻:

    [1] 關(guān)于印發(fā)《食用農(nóng)產(chǎn)品“治違禁? ?控藥殘? ?促提升”三年行動方案》的通知[J].? 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公報,2021(7):6-9.

    [2] 馬新耀,劉? ?嬌,李? ?偉,等.? 基于食品安全指數(shù)法和危害物風險系數(shù)法評估山西省韭菜中農(nóng)藥殘留的風險[J].? 中國蔬菜,2022,42(7):92-97.

    [3] 溫雅君,肖志勇,馬? ?嘯,等.? 韭菜中農(nóng)藥殘留狀況調(diào)查與分析[J].? 食品安全質(zhì)量檢測學報,2020,11(13):4231-4235.

    [4] 劉霞麗,姚曉潔,寧亞萍,等.? 河南省韭菜中農(nóng)藥殘留情況分析及膳食暴露評估[J].? 中國食品衛(wèi)生雜志,2023,35(2):230-236.

    [5] 劉淑梅,秦淑國,武? ?可,等.? 宿州市市售韭菜和芹菜中農(nóng)藥殘留及暴露風險[J].? 食品安全導刊,2020,

    14(24):129-131+134.

    [6] 曾? ?靜,喬雄梧.? 我國近年蔬菜水果中農(nóng)藥殘留超標狀況淺析[J].? 農(nóng)藥學學報,2023,25(6):1206-1221.

    [7] 章? ?慧,豐東升,張唯誼,等.? 膠體金法快速檢測蔬菜中噠螨靈、咪鮮胺、嘧霉胺殘留的應用研究[J].? 上海農(nóng)業(yè)學報,2021,37(2):121-126.

    [8] 陸? ?萍,顧心悅,仇婷婷,等.? 膠體金農(nóng)殘快速檢測技術(shù)應用初探[J].? 上海農(nóng)業(yè)科技,2023,53(1):25-26.

    [9] 陳美蓮,章? ?慧,豐東升,等.? 膠體金法快速檢測蔬菜中多菌靈·吡蟲啉和啶蟲脒的應用研究[J].? 安徽農(nóng)業(yè)科學,2020,48(22):193-197.

    [10] 徐為霞,郭智廣,王毅紅.? 農(nóng)藥殘留速測試劑盒在實際應用中的問題分析[J].? 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2019,

    29(13):1650-1652;1655.

    [11] 羅俊霞,張? ?剛,申戰(zhàn)賓,等.? 膠體金免疫層析技術(shù)應用于農(nóng)藥殘留檢測的研究進展[J].? 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全,2022,20(1):41-49.

    [12] 謝桂芳,賴? ?飛,王藝蓉,等.? 膠體金免疫層析法在食品快速檢測中的應用研究進展[J].? 食品安全導刊,2023,16(32):181-185.

    [13] 賴? ?萃,曾光明,黃丹蓮,等.? 基于免疫膠體金標記技術(shù)的檢測研究及其在堆肥中的應用展望[J].? 分析化學,2010,38(6):909-914.

    [14] 占繡萍,劉? ?彬,黃蘭淇,等.? 應用膠體金法檢測葉類蔬菜中吡蟲啉、多菌靈、啶蟲脒、噻蟲嗪的殘留量分析[J].? 農(nóng)藥科學與管理,2021,42(10):24-27.

    [15] 葉? ?茂,沈曉玲,陳青舟,等.? 膠體金免疫層析法同時檢測果蔬中四種農(nóng)藥殘留[J].? 食品工業(yè)科技,2023,44(6):300-308.

    [16] 吉美奇,王維力,石三俊,等.? 膠體金免疫層析法快速檢測果蔬中的三唑酮及其代謝物殘留[J].? 食品安全質(zhì)量檢測學報,2022,13(14):4519-4526.

    [17] 鄧家軍,楊琳芬,張富生,等.? 膠體金免疫層析法與酶抑制率法快速檢測果蔬中農(nóng)藥殘留比較研究[J].? 安徽農(nóng)業(yè)科學,2021,49(4):191-197.

    [18] 倪詩瑤,劉欠欠.? 草莓農(nóng)藥殘留快速檢測方法對比分析[J].? 上海農(nóng)業(yè)科技,2022,52(1):30-32.

    [19] 韋? ?盈,李? ?川,符郁馥,等.? 芒果中農(nóng)藥殘留膠體金免疫層析快速檢測方法的建立與應用[J].? 食品安全導刊,2023,17(25):102-105;109.

    [20] 王彧婕,馮德建,馮? ?雙,等.? 吡蟲啉和啶蟲脒膠體金免疫層析法試紙條性能評估及應用效果探究[J].? 食品安全質(zhì)量檢測學報,2024,15(3):133-140.

    [21] 食藥總局公布食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范[J].? 中國食品學報,2017,17(3):162.

    [22] 潘喜芳,黃全書,施顯超,等.? 膠體金免疫層析法在豇豆農(nóng)藥殘留檢測中的應用[J].? 現(xiàn)代食品,2023,

    29(4):31-33.

    [23] 梁才英.? 膠體金免疫層析技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測中的應用[J].? 食品安全導刊,2023,17(6):175-178.

    收稿日期:2024 - 02 - 29

    基金項目:國家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蘭州綜合試驗站項目(CARS-23-G-19);甘肅省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管專項資金(甘農(nóng)財發(fā)〔2023〕86號)。

    作者簡介:張繼梅(1985 — ),女,甘肅鎮(zhèn)原人,助理農(nóng)藝師,主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與風險評估研究工作。Email: 805415735@qq.com。

    通信作者:李亞莉(1977 — ),女,甘肅天水人,副研究員,主要從事蔬菜育種研究工作。Email: yaligsau@163.com。

    猜你喜歡
    快速檢測農(nóng)藥殘留韭菜
    “割韭菜”用英語怎么說?
    英語世界(2023年11期)2023-11-17 09:24:46
    風云變幻——赫章韭菜坪
    萵苣和韭菜
    蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測前處理方法對比研究
    農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量控制中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的應用
    基于近紅外光譜法的藜麥脂肪含量快速檢測
    我國農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留的困境
    利福平和異煙肼耐藥基因突變快速檢測方法在結(jié)核病中的應用
    淺談化學發(fā)光免疫分析方法與應用進展
    淺析食品安全檢測中關(guān)于微生物快速檢測的方法
    成年人黄色毛片网站| 搞女人的毛片| 国产黄片美女视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 十八禁网站免费在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 性欧美人与动物交配| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品久久久久久久电影 | 国内精品久久久久久久电影| 久久人妻av系列| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲真实伦在线观看| 免费av毛片视频| 国产伦人伦偷精品视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 最新美女视频免费是黄的| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲五月天丁香| 青草久久国产| av黄色大香蕉| 一级黄色大片毛片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 最近在线观看免费完整版| 成年女人毛片免费观看观看9| 日日夜夜操网爽| 精品福利观看| av欧美777| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 成年人黄色毛片网站| 久久伊人香网站| netflix在线观看网站| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 最近视频中文字幕2019在线8| tocl精华| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品福利观看| 久久亚洲精品不卡| 天美传媒精品一区二区| 女警被强在线播放| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 18+在线观看网站| 日本成人三级电影网站| 一区福利在线观看| 欧美性感艳星| 午夜激情欧美在线| 怎么达到女性高潮| 亚洲成人免费电影在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 欧美黑人欧美精品刺激| 狠狠狠狠99中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费无遮挡裸体视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av熟女| 无人区码免费观看不卡| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 免费在线观看成人毛片| 国内精品久久久久久久电影| 桃红色精品国产亚洲av| 性色avwww在线观看| 一本一本综合久久| av女优亚洲男人天堂| 国内精品久久久久久久电影| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲专区中文字幕在线| 色在线成人网| www.色视频.com| 亚洲av免费在线观看| 变态另类丝袜制服| 国产一区在线观看成人免费| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩免费av在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 午夜福利成人在线免费观看| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲精品成人久久久久久| 极品教师在线免费播放| 久久草成人影院| 亚洲无线观看免费| 成人三级黄色视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线播放国产精品三级| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲激情在线av| 亚洲五月天丁香| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 精品欧美国产一区二区三| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美乱色亚洲激情| 色噜噜av男人的天堂激情| 狠狠狠狠99中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx| 久久精品国产综合久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 乱人视频在线观看| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产精品合色在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 色综合婷婷激情| 97碰自拍视频| 观看美女的网站| 两人在一起打扑克的视频| 18+在线观看网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一个人免费在线观看电影| 美女高潮的动态| 无限看片的www在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 日本免费a在线| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲无线观看免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产高清有码在线观看视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲一区二区三区色噜噜| 天堂√8在线中文| 精品一区二区三区视频在线 | 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲欧美98| 人人妻人人看人人澡| 久久久久亚洲av毛片大全| 露出奶头的视频| 两人在一起打扑克的视频| 欧美+日韩+精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲五月天丁香| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 日韩精品青青久久久久久| 久久精品影院6| 久9热在线精品视频| 99热这里只有是精品50| av天堂在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费看日本二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 嫩草影院入口| 窝窝影院91人妻| 波多野结衣高清无吗| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲色图av天堂| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 免费看十八禁软件| 淫妇啪啪啪对白视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 18禁在线播放成人免费| 日本黄色片子视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品国产三级普通话版| 亚洲欧美日韩高清专用| 免费在线观看日本一区| 亚洲 国产 在线| 免费大片18禁| 成人亚洲精品av一区二区| av天堂中文字幕网| 最新中文字幕久久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久久久久黄片| 日韩有码中文字幕| 少妇高潮的动态图| 变态另类丝袜制服| 欧美成人免费av一区二区三区| 婷婷亚洲欧美| 五月玫瑰六月丁香| 国产视频内射| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产成年人精品一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美乱妇无乱码| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日本与韩国留学比较| 亚洲七黄色美女视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久精品影院6| 黄色片一级片一级黄色片| 一区二区三区国产精品乱码| 色哟哟哟哟哟哟| 午夜福利18| 国产精品久久久久久久电影 | 一本久久中文字幕| 色综合站精品国产| 内射极品少妇av片p| 欧美+日韩+精品| 精品福利观看| 搡老岳熟女国产| 国产高清激情床上av| 国产av不卡久久| 一本一本综合久久| 在线观看免费午夜福利视频| e午夜精品久久久久久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 91九色精品人成在线观看| av在线蜜桃| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精品 国内视频| 女人被狂操c到高潮| 一区二区三区国产精品乱码| 999久久久精品免费观看国产| 婷婷六月久久综合丁香| 性色av乱码一区二区三区2| 久99久视频精品免费| 亚洲av成人精品一区久久| 波野结衣二区三区在线 | 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲五月天丁香| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 精品久久久久久久久久久久久| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美一区二区亚洲| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲欧美日韩无卡精品| 99精品久久久久人妻精品| 国产成+人综合+亚洲专区| 午夜免费观看网址| 欧美一级毛片孕妇| 两个人的视频大全免费| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲精品久久国产高清桃花| 中文资源天堂在线| 久久久成人免费电影| 国产成人aa在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 波多野结衣高清作品| 成年免费大片在线观看| 亚洲成人久久性| 天美传媒精品一区二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精华一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩欧美国产在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 51午夜福利影视在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 成人国产一区最新在线观看| www.www免费av| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美午夜高清在线| 国产精品久久久久久久久免 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 中国美女看黄片| 午夜视频国产福利| 国产主播在线观看一区二区| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产高清在线一区二区三| 天天添夜夜摸| 啦啦啦韩国在线观看视频| 一本精品99久久精品77| www日本在线高清视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产乱人伦免费视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲av不卡在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 在线看三级毛片| 日本成人三级电影网站| 观看美女的网站| 一级毛片女人18水好多| 久久久久久久久大av| 最新在线观看一区二区三区| 91字幕亚洲| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲自拍偷在线| 国产亚洲精品久久久com| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 黄色片一级片一级黄色片| 精品不卡国产一区二区三区| 日韩av在线大香蕉| 国产成+人综合+亚洲专区| 长腿黑丝高跟| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 青草久久国产| 国产老妇女一区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产成人啪精品午夜网站| 午夜福利在线在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品国产高清国产av| 少妇的逼好多水| 内地一区二区视频在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲国产色片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 嫩草影院精品99| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲精品成人久久久久久| 国产成人aa在线观看| 熟女电影av网| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产 一区 欧美 日韩| eeuss影院久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品女同一区二区软件 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一区二区三区免费毛片| 亚洲色图av天堂| 欧美性感艳星| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久久久久大av| 成人无遮挡网站| 深爱激情五月婷婷| 色在线成人网| 亚洲片人在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 手机成人av网站| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美国产日韩亚洲一区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99热6这里只有精品| 一级毛片高清免费大全| av天堂在线播放| 国产主播在线观看一区二区| 国产欧美日韩一区二区精品| a级一级毛片免费在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一区二区三区免费毛片| 国产精品永久免费网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品久久久久久久毛片微露脸| www.熟女人妻精品国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲五月婷婷丁香| 日本熟妇午夜| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成年版毛片免费区| 热99在线观看视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| a在线观看视频网站| 免费在线观看日本一区| 嫩草影视91久久| 久久亚洲真实| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费看十八禁软件| 波多野结衣巨乳人妻| av国产免费在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲成av人片在线播放无| 在线观看一区二区三区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 最好的美女福利视频网| 最近最新免费中文字幕在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 91av网一区二区| 欧美成狂野欧美在线观看| 在线观看舔阴道视频| 少妇的逼好多水| 亚洲在线观看片| 免费电影在线观看免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久久久精品电影| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 可以在线观看的亚洲视频| av在线蜜桃| 亚洲最大成人手机在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 岛国视频午夜一区免费看| 色av中文字幕| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 精华霜和精华液先用哪个| 国产成人欧美在线观看| 精品人妻1区二区| 99精品久久久久人妻精品| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美日韩黄片免| 欧美成狂野欧美在线观看| 精品国产亚洲在线| 99riav亚洲国产免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 俺也久久电影网| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 在线观看午夜福利视频| 全区人妻精品视频| 久久九九热精品免费| 动漫黄色视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美色视频一区免费| 国内精品美女久久久久久| 一本一本综合久久| 不卡一级毛片| 男插女下体视频免费在线播放| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产私拍福利视频在线观看| 女警被强在线播放| 婷婷精品国产亚洲av| 精品久久久久久久末码| 亚洲中文字幕日韩| 国产亚洲精品久久久com| 国产99白浆流出| 1024手机看黄色片| 日韩欧美 国产精品| 国产淫片久久久久久久久 | av中文乱码字幕在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 最近视频中文字幕2019在线8| 韩国av一区二区三区四区| 国产精品女同一区二区软件 | 看黄色毛片网站| 久久久精品欧美日韩精品| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 黄色成人免费大全| 成人无遮挡网站| 在线天堂最新版资源| 毛片女人毛片| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人aa在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 女警被强在线播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 在线看三级毛片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 99精品在免费线老司机午夜| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 一个人看视频在线观看www免费 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲激情在线av| 亚洲av成人精品一区久久| 99在线人妻在线中文字幕| 成人精品一区二区免费| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品国产高清国产av| 岛国在线免费视频观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲成人免费电影在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 中出人妻视频一区二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国产精品久久电影中文字幕| 国内精品一区二区在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 精品国内亚洲2022精品成人| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美精品啪啪一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产av麻豆久久久久久久| 日韩欧美三级三区| 亚洲avbb在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 免费在线观看影片大全网站| 禁无遮挡网站| 免费av不卡在线播放| 国产精品女同一区二区软件 | 一区二区三区免费毛片| 色老头精品视频在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| av专区在线播放| 欧美黑人欧美精品刺激| av黄色大香蕉| 热99在线观看视频| 婷婷丁香在线五月| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久性生活片| 在线观看av片永久免费下载| 久久久国产成人免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 午夜免费激情av| 一级黄色大片毛片| 18美女黄网站色大片免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 看黄色毛片网站| 草草在线视频免费看| www国产在线视频色| 全区人妻精品视频| 99国产综合亚洲精品| 成人一区二区视频在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一区二区三区免费毛片| 久久久久久人人人人人| 少妇的丰满在线观看| 日本 av在线| 国产色爽女视频免费观看| 国产成人福利小说| 在线观看舔阴道视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 成人特级黄色片久久久久久久| 女警被强在线播放| 午夜福利欧美成人| 黑人欧美特级aaaaaa片| 黄色视频,在线免费观看| 欧美日韩精品网址| 亚洲国产色片| 91av网一区二区| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 天天一区二区日本电影三级| 性色avwww在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久久久久大av| 麻豆一二三区av精品| 两个人视频免费观看高清| 国产极品精品免费视频能看的| 午夜激情福利司机影院| 少妇丰满av| 午夜精品一区二区三区免费看| 叶爱在线成人免费视频播放| h日本视频在线播放| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产真实伦视频高清在线观看 | 精品一区二区三区视频在线 | 国产高清三级在线| 舔av片在线| 成年版毛片免费区| 国产淫片久久久久久久久 | 天堂动漫精品| 中文字幕av在线有码专区| а√天堂www在线а√下载| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 波多野结衣高清作品| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产成人影院久久av| 欧美三级亚洲精品| 国产69精品久久久久777片| 国产精品一及| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品亚洲一级av第二区| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲片人在线观看| 午夜视频国产福利| 嫩草影院入口| 日韩精品青青久久久久久| svipshipincom国产片| 国产黄a三级三级三级人| 一个人看视频在线观看www免费 | av中文乱码字幕在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 九九热线精品视视频播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产麻豆成人av免费视频| 热99在线观看视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久亚洲真实| 97碰自拍视频| 精品福利观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产黄色小视频在线观看| 欧美日韩黄片免| 91麻豆av在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产淫片久久久久久久久 | 久久精品影院6| 色老头精品视频在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 久久亚洲精品不卡| 久久久久久久久中文| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产男靠女视频免费网站| 两个人看的免费小视频| 搡老妇女老女人老熟妇|