酸處理?酶制劑對杏鮑菇菌渣還原糖和纖維素降解的影響

王巖　于洪敏　李娟　劉艷　江國托

摘要 為探究酸處理（酸濃度、時間、溫度）、酶制劑（纖維素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶）對杏鮑菇菌渣的影響，以河北采集的杏鮑菇菌渣為原料，以總還原糖含量為研究指標，通過主成分分析方法研究影響杏鮑菇菌渣酸處理的因素；以中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量為響應(yīng)值，開展正交試驗，分析酶制劑對其的影響。結(jié)果表明：40 ℃條件下，2%和3%酸濃度處理隨時間的延長會降解總還原糖；60 ℃條件下，酸濃度的增加可以減緩總還原糖的降解；80 ℃條件下，1%和2%酸濃度處理可以促進多糖的降解，提高總還原糖含量。根據(jù)主成分分析結(jié)果可知，溫度與總還原糖含量呈正相關(guān)，是影響杏鮑菇菌渣多糖降解的最主要因素。正交試驗結(jié)果表明，木聚糖酶添加量和纖維素酶添加量是影響中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維降解的最主要因素，最優(yōu)酶解配方為纖維素酶85 U/mL、木聚糖酶220 U/mL、葡聚糖酶40 U/mL，說明菌渣經(jīng)酸、酶處理后可作為反芻飼料。

關(guān)鍵詞 杏鮑菇菌渣；酸處理；酶制劑；還原糖；纖維素

中圖分類號 S548 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2024）08-0086-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.08.020

Effects of Acid Treatment and Enzymatic Hydrolysis on Reducing Sugar and Cellulose Degradation of Pleurotus eryngii Residue

WANG Yan，YU Hong-min，LI Juan et al

（Dalian Sanyi Animal Medicine Co.，Ltd.，Dalian，Liaoning 116036）

Abstract In order to explore the effects of acid treatment （acid concentration，time and temperature），enzyme preparations （cellulase，xylanase，β-glucanase） on Pleurotus eryngii fungus residue.The experiment used the mushroom residue of Pleurotus eryngii collected in Hebei Province as the raw material，total reducing sugar content as the research index，the factors affecting the acid treatment of P.eryngii residue were analyzed by principal component analysis.At the same time，the effects of enzyme preparation on the reduction of neutral detergent cellulose and acid detergent cellulose were analyzed by orthogonal test.At 40 °C，2% and 3% acid concentrations would degrade the content of reducing sugar with time.At 60 °C，the increase of acid concentration could slow down the degradation of total? reducing sugar.At 80 ℃，1% and 2% acid concentrations could promote the degradation of polysaccharides and increase the content of total reducing sugar.According to the principal component analysis，temperature was the most important factor affecting the content of reducing sugar of P.eryngii slag.The orthogonal test results showed that the degradation of? xylanase and cellulase were the main factors affecting the reduced amount of neutral detergent cellulose and acid detergent cellulose respectively.The optimal enzymolysis formula was cellulase 85 U/mL，xylanase 220 U/mL and glucanase 40 U/mL.These results indicated that the bacterial residue after acid and enzyme treatment has nutritional value as a ruminant feed.

Key words Pleurotus eryngii residue;Acid treatment;Enzyme preparation;Reducing sugar;Cellulose

食用菌在收獲后的培養(yǎng)基質(zhì)稱為菌渣，由于食用菌的栽培大多以木屑、玉米芯、秸稈、棉籽殼、甘蔗渣等為培養(yǎng)基質(zhì)，因此含有大量的真菌菌絲體蛋白、半纖維素、纖維素、木質(zhì)素以及氮、磷、鉀、維生素等以及蘑菇分泌的用于降解底物的胞外水解酶、氧化酶，是潛在的反芻飼料來源［1］。菌渣的生產(chǎn)速度遠遠超過現(xiàn)有的應(yīng)用需求，預(yù)計到2026年全世界產(chǎn)量將達到2 084萬t［2］。作為一種木質(zhì)纖維素材料，菌渣可作為生產(chǎn)生物燃料和其他生物材料的還原糖來源，但要通過預(yù)處理去除木質(zhì)素和半纖維素并破壞纖維素的晶體結(jié)構(gòu)，以克服菌渣中粗纖維、木質(zhì)素等成分很難被動物直接利用的問題［3-4］，從而實現(xiàn)纖維素的有效轉(zhuǎn)化。

菌渣處理可分為傳統(tǒng)的溶劑提取方法和綠色高效的物理提取方法。其中，溶劑提取方法有堿水解和酸水解，物理提取方法有酶水解、熱水解和超聲提取。酸水解和熱水解一般結(jié)合使用，破壞纖維素的致密結(jié)構(gòu)，降低結(jié)晶性［5］和聚合度，將纖維素分解成葡萄糖，將半纖維素分解為木糖等可溶性糖類［6-7］。目前研究較多的是高溫水解［8-9］，低溫水解相關(guān)研究較少。低溫（小于100 ℃）對設(shè)備要求較低，操作安全，節(jié)約成本。Wu等［8］研究表明酸水解獲得的還原糖產(chǎn)量高于堿水解與酶制劑處理，酸處理可作為

將菌渣中的木質(zhì)纖維素轉(zhuǎn)化為糖的一種經(jīng)濟、高效方法。酶制劑處理條件溫和，可以降低纖維素的含量。目前低溫（小于100 ℃）酸處理對杏鮑菇菌渣的影響程度尚不清楚，纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶對菌渣纖維素的降解程度研究較少，因此通過酸濃度、時間和溫度3個方面，以總還原糖含量為研究指標，通過主成分分析探究影響杏鮑菇菌渣酸處理的主要因素；以中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量為研究指標，通過正交試驗探究酶制劑對杏鮑菇菌渣纖維素的降解情況，以期為促進食用菌菌渣的循環(huán)利用、增加反芻動物飼料原料來源提供科學(xué)依據(jù)，為蘑菇工業(yè)副產(chǎn)品的綜合利用及利用水解產(chǎn)物殘渣生產(chǎn)生物肥料提供一條重要途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 杏鮑菇菌渣。

杏鮑菇菌渣采集于河北省廊坊市，采收后3 d內(nèi)寄到大連三儀動物藥品有限公司實驗室。收到菌渣后，立即切成約1 cm×1 cm大小，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中30 ℃烘干，使用多功能粉碎機粉碎后，過60目篩備用。

1.1.2 主要試劑。

硫酸（丹東市龍海試劑廠）；3，5-二硝基水楊酸（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；氫氧化鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；酒石酸鉀鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；無水亞硫酸鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；無水葡萄糖（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）等；纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶均由江蘇三儀科研質(zhì)量控制中心提供。

1.2 主要儀器

高速多功能粉碎機（型號CS-700，永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司）、電熱鼓風(fēng)干燥箱（型號DHG-9240A，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、分析天平（型號FA2004，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、全自動凱氏定氮儀（型號K1100，山東海能科學(xué)儀器有限公司）、紫外可見分光光度計（型號TU-1810，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、離心機（型號TDZ5-WS，長沙湘智離心機儀器有限公司）等。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗設(shè)計。

1.3.1.1 菌渣基本成分。試驗前對菌渣基本成分進行檢測。

1.3.1.2 酸處理菌渣。

根據(jù)文獻［10］方法，結(jié)合生產(chǎn)工藝的可操作性，取粉碎后的干燥菌渣10 g置于250 mL燒杯中，分別加入1%、2%和3%硫酸10 mL，攪拌均勻后置于40 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中反應(yīng)。1、2、3 h時每個酸濃度各取2份，5 000 r/min 離心10 min取上清，測定總還原糖含量。按照相同方法進行60和80 ℃不同濃度酸處理。

1.3.1.3 酶制劑處理菌渣。

根據(jù)預(yù)試驗的酶制劑添加量，選擇纖維素酶添加量（45、65、85 U/mL）、木聚糖酶添加量（180、200、220 U/mL）和β-葡聚糖酶添加量（40、60、80 U/mL）進行3因素3水平正交試驗。取9個100 mL三角瓶，分別加入5 g 經(jīng)處理的干燥菌棒粉，加入15 mL水，酶制劑按照正交表添加量依次加入，蓋上瓶塞后，于100 r/min、50 ℃的搖床中振蕩水解。試驗24 h時，試樣按照張安榮［11］的方法處理，處理后測定中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量。

1.3.2 測定指標與方法。

菌渣的成分鑒定采用國標方法，具體如下：水分含量GB/T 6435—2014，粗脂肪含量GB/T 6433—2006，粗蛋白含量GB/T 6432—2018，中性洗滌纖維含量GB/T 20806—2006，酸性洗滌纖維含量NY/T 1459—2007，木質(zhì)素含量GB/T 20805—2006，鈣含量GB/T 6436—2018，磷含量GB/T 6437—2018。

總還原糖含量檢測參照張美江［12］的二硝基水楊酸法，杏鮑菇菌渣中含有大量的酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維以及木質(zhì)素。二硝基水楊酸法是在堿性條件下與總還原糖發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)物煮沸后在540 nm下有吸收，故通過比色法測定總還原糖含量。

分別取1 mg/mL葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 置于15 mL試管，用去離子水補足1.0 mL；分別加入DNS試劑2.0 mL，沸水浴加熱5 min，流水冷卻，用去離子水定容至15.0 mL，在540 nm波長下測定吸光度，繪制葡萄糖標準曲線。以吸光度為橫坐標，以葡萄糖濃度為縱坐標，標準曲線方程為Y=0.064 6X+0.006 3（R2=0.999）。樣品檢測方法：將酸解液樣品適當(dāng)稀釋，使糖濃度為0.1～1.0 mg/mL；取稀釋后的樣品溶液1.0 mL 置于15 mL試管中，加入DNS 試劑2.0 mL，沸水煮沸5 min，冷卻后用去離子水補足15.0 mL，在540 nm 波長下測定吸光度。根據(jù)葡萄糖濃度的標準曲線，計算出樣品總還原糖含量。

1.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)間的比較采用Duncan模型進行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，同時使用該軟件中皮爾遜相關(guān)系數(shù)確定各因素間相關(guān)性；應(yīng)用XLSTAT軟件對各影響因素進行主成分分析（principal component analysis，PCA）和聚類分析。使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行正交試驗設(shè)計及方差分析，使用Excel軟件進行數(shù)據(jù)計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 營養(yǎng)成分分析

對河北地區(qū)收集的杏鮑菇菌渣進行營養(yǎng)成分分析，結(jié)果顯示：水分含量49.93%，粗蛋白含量8.57%，粗脂肪含量2.48%，鈣和磷含量共0.77%，中性洗滌纖維含量66.09%，酸性洗滌纖維含量45.01%，木質(zhì)素含量9.26%。含量較高的營養(yǎng)成分為粗蛋白、纖維素和木質(zhì)素，其中鈣和磷含量基本滿足奶牛的需要量［12］。該試驗測得的營養(yǎng)成分含量在宮福臣［13］調(diào)研的食用菌菌渣營養(yǎng)成分范圍內(nèi)，具有一定的指導(dǎo)意義。

2.2 酸處理對杏鮑菇菌渣總還原糖含量的影響

2.2.1 不同溫度下總還原糖含量在不同酸濃度下隨時間的變化。

40 ℃下總還原糖含量在不同酸濃度下隨時間的變化如表1所示。由表1可知，40 ℃下，1%酸濃度處理杏鮑菇菌渣在不同時間點總還原糖含量無顯著差異；2%和3%酸濃度時，同一酸濃度下杏鮑菇菌渣總還原糖含量隨時間的延長呈現(xiàn)下降趨勢，1 h時總還原糖含量最高，分別為6.24和6.44 mg/mL。這表明40 ℃條件下1%酸濃度處理杏鮑菇菌渣的總還原糖含量受時間的影響不顯著，2%和3%酸濃度處理后杏鮑菇菌渣中的總還原糖隨時間的延長發(fā)生降解［13］。同一時間點，1 h時總還原糖含量隨酸濃度的提高而升高，1 h時3%酸濃度處理總還原糖含量最高，為6.44 mg/mL；2和3 h 時，總還原糖含量隨酸濃度的提高而降低。

60 ℃下杏鮑菇菌渣總還原糖含量在不同酸濃度下隨時間的變化如表2所示。由表2可知，同一酸濃度下，總還原糖含量隨時間的延長呈先增加后下降的趨勢，2 h時總還原糖含量最高，1%、2%、3%酸濃度處理分別為7.81、11.14和9.52 mg/mL。60 ℃下，與2 h時相比，酸處理3 h時總還原糖發(fā)生了降解，其中1%酸濃度下總還原糖降解率最多，為5.89%；其次是2%和3%酸濃度，分別為5.39%和4.41%，表明60 ℃下酸濃度的增加可以減緩總還原糖的降解。同一時間點，1 h時總還原糖含量隨著酸濃度的升高而升高，最高值為8.74 mg/mL；2 h和3 h時，總還原糖含量隨著酸濃度的增加呈先上升后下降的趨勢，2%酸濃度處理總還原糖含量較高，分別為11.14和10.54 mg/mL。

80 ℃下杏鮑菇菌渣總還原糖含量在不同酸濃度下隨時間的變化如表3所示。由表3可知，同一酸濃度下總還原糖含量的變化趨勢存在差異。1%酸濃度處理杏鮑菇菌渣的總還原糖含量隨時間的延長而升高；2%酸濃度處理后的總還原糖含量隨著時間的變化而逐漸升高，3 h時總還原糖含量最高，為20.49 mg/mL；3%酸濃度處理后的總還原糖含量隨著時間的變化而先升高后下降，3%酸濃度處理3 h時總還原糖發(fā)生降解，2 h 時總還原糖含量最高，為17.51 mg/mL。這表明當(dāng)溫度升高到80 ℃時，1%酸濃度處理促使多糖降解速率減緩，2%酸濃度處理可以促進多糖的降解，提高總還原糖的含量，而3%酸濃度處理3 h時總還原糖發(fā)生降解。同一時間點，總還原糖含量均隨著酸濃度的升高而先升高后降低，2 h時1%、2%、3%酸濃度處理的總還原糖含量最高，分別為17.19、18.59和17.51 mg/mL；3 h時，80 ℃時各個酸濃度處理后的總還原糖均發(fā)生降解，2 h可以實現(xiàn)有效的預(yù)處理。

2.2.2 酸濃度、時間、溫度和總還原糖含量的主成分分析。

通過分析以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酸濃度、時間和溫度不同條件下均對總還原糖含量有影響。為了分析3個因素對總還原糖含量的影響程度，對酸濃度、時間、溫度和總還原糖含量進行主成分分析。主成分分析是將原坐標軸旋轉(zhuǎn)為相互正交的坐標軸，根據(jù)貢獻率大小選擇主成分，貢獻率越大，解釋指標能力越強；幾個主成分的貢獻率之和（累計貢獻率）越大，越能全面解釋原數(shù)據(jù)，主成分個數(shù)的選擇根據(jù)累計貢獻率而定［14］。變量的余弦平方值反映變量在不同主成分上的相關(guān)性程度，最大值所在的主成分與該變量的相關(guān)性最強。不同主成分之間無相關(guān)性，同一主成分的變量間存在正相關(guān)和負相關(guān)關(guān)系［15］。樹狀圖聚類分析是通過計算樣品間的聚類統(tǒng)計量（距離 、相關(guān)系數(shù)等）將相關(guān)性最大的樣品聚在一起［16］。

根據(jù)以上數(shù)據(jù)，對其進行主成分分析，如圖1所示。變量的余弦平方值如表4所示。對不同酸濃度、時間和溫度處理的杏鮑菇菌渣總還原糖含量進行樹狀圖聚類分析，如圖2所示。樹狀圖聚類結(jié)果有利于解釋主成分分析中樣品的變化趨勢。

由圖1可知，主成分1貢獻率為48.69%，主成分2貢獻率為25.00%，累計貢獻率為73.69%。結(jié)合表4可知，主成分1的變量有總還原糖含量和溫度，且都位于主成分1的正方向，表明總還原糖含量與溫度呈正相關(guān)關(guān)系；時間位于主成分2正方向，酸濃度屬于主成分3，表明溫度對總還原糖含量的影響最大。

由圖2可知，不同條件處理的杏鮑菇菌渣總還原糖含量可分為3類，且按照溫度聚類，分別為40、60和80 ℃。圖1分為3個部分（虛線劃分），3個部分沿著主成分1從左向右移動，80 ℃區(qū)域位于主成分正方向，表明溫度對總還原糖含量的影響起主要作用，總還原糖含量隨著溫度的升高而增加。

為了分析酸濃度和時間對杏鮑菇菌渣總還原糖含量的影響程度，對80 ℃數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析，結(jié)果如表5所示。由表5可知，總還原糖含量與時間顯著相關(guān)（P<0.05），總還原糖含量與酸濃度未達到顯著相關(guān)（P>0.05），表明除了溫度外時間是影響總還原糖含量的第二主要因素。

2.3 酶制劑對杏鮑菇菌渣纖維素降解的影響

以中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量為響應(yīng)值，進行正交試驗，結(jié)果如表6所示。由表6可知，中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量最大的是第7組，中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量分別為23.05%和18.63%，其對應(yīng)的工藝條件為A3B3C1。從極差R可以看出，3個因素對中性洗滌纖維減少量影響的主次順序為木聚糖酶添加量＞纖維素酶添加量＞葡聚糖酶添加量，3個因素對酸性洗滌纖維減少量影響的主次順序為纖維素酶添加量＞木聚糖酶添加量＞葡聚糖酶添加量。同時可以看出，最佳酶制劑添加方案為纖維素酶85 U/mL、木聚糖酶220 U/mL、葡聚糖酶40 U/mL。

由表7～8可知，纖維素酶添加量和木聚糖酶添加量對中性洗滌纖維減少量和酸性洗滌纖維減少量均具有顯著影響，而β-葡聚糖酶添加量對其沒有顯著影響。由此可見，纖維素酶和木聚糖酶是降解杏鮑菇菌渣纖維素的主要酶制劑。

3 討論

從蘑菇副產(chǎn)品中提取的多糖大致可分為酸性殘多糖、堿性殘多糖和酶殘多糖3類［17］。Qiao等［9］在120 ℃下用6%稀硫酸預(yù)處理菌渣120 min后還原糖含量最高為267.57 g/kg。Zhu等［18］為了提高成本效益和避免環(huán)境問題，用堿和酸預(yù)處理與酶水解相結(jié)合的方法處理菌渣，總還原糖含量為230 mg/g，堿處理試驗發(fā)現(xiàn)溫度和氫氧化鉀濃度的影響比預(yù)處理時間更顯著，經(jīng)石灰預(yù)處理的菌渣在低溫（50 ℃）下隨著時間的延長有釋放更多糖的潛力。Zhang等［19］采用熱堿提取法將香菇菌渣在90 ℃下提取300 min并進行2次脫鹽后的總糖含量為58.1%，顯著高于用熱水提取的總糖含量（4.76%）和超聲波+酶提取的總糖含量（14.39%），原因可能是堿容易破壞多糖與細胞壁或細胞間物質(zhì)之間的結(jié)合，從而促進細胞內(nèi)多糖的釋放。Wu等［8］研究發(fā)現(xiàn)用酸提取的還原糖含量高于用氫氧化鈉、氫氧化鈣和熱水提取的還原糖含量。Corrêa等［3］用纖維素酶和β-葡萄糖苷酶酶解菌渣，產(chǎn)生（77.5±4.0）μmol/L的總還原糖。

對于酸處理，不同處理條件下杏鮑菇菌渣總還原糖含量的主要影響因素不同。筆者通過主成分分析發(fā)現(xiàn)，影響杏鮑菇菌渣酸處理的主要因素是溫度和時間。張美江［12］研究表明總還原糖含量的影響因素依次為溫度、酸濃度、時間，酸濃度對預(yù)處理的影響不顯著，原因首先可能與試驗的酸濃度和溫度有關(guān)。隨著溫度的升高，提高酸濃度可以促進總還原糖的產(chǎn)生，故高酸濃度處理要對應(yīng)設(shè)置高溫度。其次，這還可能與料水比有關(guān)，較高的含水量可能會提高酸作用面積，提高其影響程度。黃民鳳［20］采用熱水浸提法提取金針菇多糖，發(fā)現(xiàn)影響提取的因素依次為時間、料液比、溫度。結(jié)合此試驗結(jié)果可知，酸改變了溫度對還原糖提取的影響。關(guān)于酶制劑對菌渣纖維素降解的研究較少。王樂樂等［21］研究表明菌酶協(xié)同發(fā)酵可以改善菌渣發(fā)酵飼料品質(zhì)。在酶制劑選擇上，馬冰清等［22］處理香菇菌渣所用的酶制劑為纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶，酶總添加量為660 U/g，3種酶的添加比例為3∶2∶1。張安榮［11］利用纖維素酶、木聚糖酶和β-半乳糖苷酶協(xié)同發(fā)酵菌渣，中性洗滌纖維降解率為23.69%。此研究中性洗滌纖維的最大降解率達34.88%，其原因一是所用酶制劑不同，二是菌渣具有不同的酶系統(tǒng)，對木質(zhì)纖維素具有不同的水解效率，因此影響了木質(zhì)素結(jié)構(gòu)的破壞程度。

4 結(jié)論

不同溫度下酸濃度及處理時間對杏鮑菇菌渣總還原糖含量的影響不同，不同溫度有不同的適宜酸濃度和時間。40 ℃時，適合1%酸濃度，高濃度酸會降解產(chǎn)生的總還原糖；60 ℃時，酸濃度的增加可以減緩總還原糖的降解；80 ℃時，1%和2%酸濃度處理促進多糖的降解，提高總還原糖的含量。根據(jù)主成分分析結(jié)果可知，該試驗條件下溫度是影響杏鮑菇菌渣預(yù)處理的最主要因素，其次為時間，≤80 ℃條件下預(yù)處理菌渣時酸濃度不宜過高。纖維素酶添加量和木聚糖酶添加量對杏鮑菇菌渣纖維素降解的影響顯著。綜上所述，菌渣酸處理可后不溶性多糖水解成可發(fā)酵糖，酶處理可降解纖維素。

參考文獻

［1］ PAREDES C，MEDINA E，MORAL R，et al.Characterization of the different organic matter fractions of spent mushroom substrate［J］.Commun Soil Sci Plant Anal，2009，40（1/2/3/4/5/6）：150-161.

［2］ LEONG Y K，VARJANI S，LEE D J，et al.Valorization of spent mushroom substrate for low-carbon biofuel production：Recent advances and developments［J］.Bioresour Technol，2022，363：128012.

［3］ CORRA R C G，DA SILVA B P，CASTOLDI R，et al.Spent mushroom substrate of Pleurotus pulmonarius：A source of easily hydrolyzable lignocellulose［J］.Folia Microbiol，2016，61（5）：439-448.

［4］ ZHU H，SHENG K，YAN E，et al.Extraction，purification and antibacterial activities of a polysaccharide from spent mushroom substrate［J］.Int J Biol Macromol，2012，50（3）：840-843.

［5］ LYND L R，LASER M S，BRANSBY D，et al.How biotech can transform biofuels［J］.Nat Biotechnol，2008，26：169-172.

［6］ 蔡靈燕，馬玉龍，麻曉霞.復(fù)合酶耦合酶解酸處理后玉米秸稈的研究［J］.高分子通報，2016（1）：60-67.

［7］ 史穎.食用菌菌糠生產(chǎn)蛋白飼料［D］.北京：北京化工大學(xué)，2018.

［8］ WU S，LAN Y，WU Z，et al.Pretreatment of spent mushroom substrate for enhancing the conversion of fermentable sugar［J］.Bioresour Technol，2013，148：596-600.

［9］ QIAO J J，ZHANG Y F，SUN L F，et al.Production of spent mushroom substrate hydrolysates useful for cultivation of Lactococcus lactis by dilute sulfuric acid，cellulase and xylanase treatment［J］.Bioresour Technol，2011，102（17）：8046-8051.

［10］ 魏煒，孫舶洋，潘俊，等.響應(yīng)曲面法對玉米秸稈稀酸水解還原糖條件的優(yōu)化［J］.沈陽建筑大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，35（6）：1136-1142.

［11］ 張安榮.菌酶協(xié)同發(fā)酵杏鮑菇菌糠工藝優(yōu)化及其營養(yǎng)價值評定［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2021.

［12］ 張美江.平菇菌糠稀硫酸—酶法水解工藝的研究［D］.天津：天津大學(xué)，2009.

［13］ 宮福臣.平菇菌糠飼料成分的分析及營養(yǎng)價值評定［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

［14］ 陳佩.主成分分析法研究及其在特征提取中的應(yīng)用［D］.西安：陜西師范大學(xué)，2014.

［15］ 陶思羽.基于主成分分析和粗糙集的聚類分析在經(jīng)濟指標數(shù)據(jù)中的應(yīng)用［D］.長春：吉林大學(xué)，2012.

［16］ 楊天偉，張霽，李濤，等.基于主成分分析和聚類分析的不同產(chǎn)地絨柄牛肝菌紅外光譜鑒別研究［J］.光譜學(xué)與光譜分析，2016，36（6）：1726-1730.

［17］ GUO J，ZHANG M，F(xiàn)ANG Z.Valorization of mushroom by-products：A review［J］.J Sci Food Agric，2022，102（13）：5593-5605.

［18］ ZHU H J，LIU J H，SUN L F，et al.Combined alkali and acid pretreatment of spent mushroom substrate for reducing sugar and biofertilizer production［J］.Bioresour Technol，2013，136：257-266.

［19］ ZHANG Y，LIU W，XU C，et al.Characterization and antiproliferative effect of novel acid polysaccharides from the spent substrate of shiitake culinary-medicinal mushroom Lentinus edodes （Agaricomycetes） cultivation［J］.Int J Med Mushrooms，2017，19（5）：395-403.

［20］ 黃民鳳.金針菇菌渣多糖的提取純化及功能評價［D］.長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

［21］ 王樂樂，秦榮艷，阿不夏合滿·穆巴拉克，等.菌酶協(xié)同發(fā)酵香菇菌糠復(fù)合制劑的篩選研究［J］.飼料研究，2022，45（17）：58-63.

［22］ 馬冰清，張忠，吳迪，等.香菇菌糠高溫高壓-復(fù)合酶降解工藝優(yōu)化及提取物的生物活性［J］.食用菌學(xué)報，2021，28（4）：27-38.

基金項目 2019年大連市青年科技之星項目（2019RQ146）。

作者簡介 王巖（1991—），女，遼寧朝陽人，工程師，碩士，從事微生物酶制劑飼料研究。*通信作者，教授，博士，博士生導(dǎo)師，從事分子免疫學(xué)與獸醫(yī)學(xué)研究。

收稿日期 2023-04-06；修回日期 2023-06-06