地黃對(duì)斜紋夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育的影響

梁懷方 王麗 朱香鎮(zhèn) 張開心 李東陽 崔金杰 雒珺瑜 陳招榮

摘要：【目的】斜紋夜蛾是危害棉田的重要害蟲，地黃是農(nóng)田常見雜草，探索并利用地黃防治斜紋夜蛾對(duì)于棉花可持續(xù)生產(chǎn)具有重要意義?！痉椒ā糠謩e將地黃根或葉干粉混拌于斜紋夜蛾人工飼料（地黃干粉與飼料的質(zhì)量比分別為1∶3、1∶6、1∶9和1∶18），初步明確地黃對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的死亡率、發(fā)育歷期和體重的影響；進(jìn)一步采用藥膜法，研究地黃根或葉干粉的95%乙醇提取液（地黃干粉與提取溶劑的料液比分別為1∶50、1∶30和1∶10）對(duì)1～6齡斜紋夜蛾幼蟲死亡率的影響?！窘Y(jié)果】取食混有地黃根或葉干粉飼料的斜紋夜蛾幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育受到一定的影響，隨著飼料中地黃根或葉干粉含量的增大，斜紋夜蛾幼蟲死亡率升高、發(fā)育歷期延長(zhǎng)、體重降低。地黃根或葉干粉與飼料的質(zhì)量比為1∶3時(shí)，其對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的抑制效果最好。地黃根或葉提取液對(duì)低齡斜紋夜蛾幼蟲有一定抑制作用，對(duì)高齡幼蟲的毒殺作用較差，同一測(cè)定時(shí)間隨地黃提取液濃度增大，斜紋夜蛾低齡幼蟲的死亡率升高。地黃根或葉干粉與提取溶劑的料液比為1∶10時(shí)，對(duì)斜紋夜蛾1～6齡幼蟲的毒殺作用效果最好。【結(jié)論】地黃對(duì)斜紋夜蛾有一定的抑制作用，在一定范圍內(nèi)，用量越大其抑制作用越強(qiáng)，研究結(jié)果可為有效利用農(nóng)田雜草資源開發(fā)植物源殺蟲劑奠定理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：斜紋夜蛾；地黃；生長(zhǎng)發(fā)育；死亡率；干粉；提取液

Effects of Rehmannia glutinosa on the growth and development of Spodoptera litura

Abstract： [Objective] Spodoptera litura significantly impacts cotton cultivation， while Rehmannia glutinosa is a prevalent agricultural weed. The exploration and application of R. glutinosa for controlling the S. litura hold crucial relevance for the sustainable production of cotton. [Methods] The effects of root or leaf dry powder of R. glutinosa on the mortality， developmental duration， and body weight of S. litura larvae were preliminarily determined by mixing the dry powder and feed with the mass ratios of 1∶3， 1∶6， 1∶9， and 1∶18， respectively. Additionally， the influence of 95% ethanol extracts of root or leaf powder of R. glutinosa （the ratios of dry powder to solvent were 1∶50， 1∶30， and 1∶10） on the mortality of 1st to 6th instar S. litura larvae were studied by film-coating technique. [Results] The incorporation of R. glutinosa root or leaf dry powder into the larvae's diet notably affected their growth and development. An increase of the root or leaf dry power content in the diet led to higher larval mortality， extended developmental periods， and decreased body weight. The most significant inhibitory effect occurred when the mass ratio of root or leaf dry powder to feed was 1∶3. The ethanol extracts of R. glutinosa root or leaf exhibited a certain inhibitory effect on the younger larvae， while with diminished efficacy on older larvae. As the concentration of R. glutinosa extract increased， the mortality of younger larvae increased at the same testing period. Optimal toxicological effects on 1st to 6th instar larvae were observed when the root or leaf dry power of R. glutinosa to solvent ratio was 1∶10. [Conclusion] R. glutinosa shows a definitive inhibitory effect on S. litura. In a certain range， the greater dosage of R. glutinosa root or leaf dry powder has the stronger inhibitory effect. This finding lays a theoretical groundwork for the strategic utilization of agricultural weed resources in developing plant-derived insecticides.

Keywords： Spodoptera litura; Rehmannia glutinosa; growth and development; mortality; dry powder; extract

化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境和食品安全有嚴(yán)重影響。隨著時(shí)間的推移，化學(xué)農(nóng)藥的弊端逐漸暴露。受人關(guān)注的是化學(xué)農(nóng)藥的“3R”問題，即農(nóng)藥殘留（residue）、害蟲的再猖獗（resurgence）與抗性（resistance）問題[1]。化學(xué)農(nóng)藥在殺滅有害生物的同時(shí)也增加了有害生物的抗藥性，造成的最終結(jié)果不是農(nóng)藥淘汰了害蟲，而是害蟲淘汰了農(nóng)藥[2]。這些問題促使人們開始尋找化學(xué)農(nóng)藥的替代品。利用植物資源防治害蟲已成為目前防止化學(xué)農(nóng)藥濫用的最有效途徑之一[3]。越來越多的研究表明，植物源殺蟲劑防治害蟲的效果好、對(duì)昆蟲天敵無害、對(duì)環(huán)境無污染。植物源殺蟲劑的應(yīng)用不僅有利于人類的健康與社會(huì)生產(chǎn)，也有利于我國殺蟲劑市場(chǎng)有效應(yīng)對(duì)全球市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的威脅[4]。

隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整以及轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種植面積占比的增大，棉田蟲害的發(fā)生情況發(fā)生了較大變化。棉鈴蟲不再是主要的害蟲，而此前的次要害蟲有時(shí)會(huì)變成主要害蟲。斜紋夜蛾（Spodoptera litura）屬鱗翅目夜蛾科，是暴食性害蟲，具有世代多、寄主范圍廣、抗藥性強(qiáng)等特點(diǎn)。隨著環(huán)境條件的變化，近幾年來國內(nèi)各大棉區(qū)均有斜紋夜蛾發(fā)生嚴(yán)重危害的報(bào)道[5]。相關(guān)資料顯示，20世紀(jì)90年代以來斜紋夜蛾大發(fā)生頻率明顯增加，初孵幼蟲群集在葉片背部取食葉肉僅剩下葉脈和上表皮，形成“篩網(wǎng)狀”葉片；之后斜紋夜蛾分散為害，取食葉片、蕾、花和鈴，嚴(yán)重時(shí)吃光所有葉片，對(duì)棉花生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。如1995年8－9月江蘇省東北部植棉區(qū)因遭受4代斜紋夜蛾危害，棉鈴數(shù)量銳減。為有效防治斜紋夜蛾，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所采用人工接蟲的方法，測(cè)定了斜紋夜蛾對(duì)棉花的為害，結(jié)果表明，1頭斜紋夜蛾幼蟲一生能吃掉3.61片棉葉、0.97個(gè)棉蕾、0.37朵花，啃壞0.27個(gè)棉鈴；1998年8－9月4～5代斜紋夜蛾在江蘇省大暴發(fā)，受害嚴(yán)重的棉田棉花葉片、花、蕾、鈴幾乎全被吃光[6-8]。近年來，斜紋夜蛾暴發(fā)面積逐年擴(kuò)大，發(fā)生情況愈加復(fù)雜，已嚴(yán)重威脅棉花等經(jīng)濟(jì)作物的生產(chǎn)[9]。長(zhǎng)期以來，為確保作物產(chǎn)量，多用化學(xué)農(nóng)藥對(duì)斜紋夜蛾進(jìn)行防治，使斜紋夜蛾已經(jīng)對(duì)包括有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯和蘇云金桿菌在內(nèi)的多種殺蟲劑產(chǎn)生了抗性[10]。隨著科技的發(fā)展，高效、安全、低毒的新型植物源殺蟲劑表現(xiàn)出廣闊的發(fā)展前景，相關(guān)研究也多致力于利用植物中的天然殺蟲物質(zhì)來研發(fā)植物源農(nóng)藥，對(duì)害蟲進(jìn)行有效生物防治，從而減少或避免化學(xué)防治導(dǎo)致的“3R”等問題的發(fā)生[11]?，F(xiàn)階段需要尋找新的防治手段來控制斜紋夜蛾的增長(zhǎng)。

地黃（Rehmannia glutinosa）屬于玄參科地黃屬，是一種農(nóng)田常見雜草，但已作為中草藥資源被開發(fā)利用。隨著現(xiàn)代藥學(xué)的不斷發(fā)展以及對(duì)地黃研究的深入，地黃中越來越多的活性成分被挖掘出來，從鮮地黃、生地黃、熟地黃、地黃葉及地黃愈傷組織中，共分離鑒定出200余種化合物，主要為環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類、酚酸類等化合物[12]。其中，黃酮類和萜類為植物中的主要?dú)⑾x活性成分，黃酮類當(dāng)中的魚藤酮可對(duì)鱗翅目（如菜粉蝶幼蟲、小菜蛾）等昆蟲產(chǎn)生強(qiáng)烈觸殺作用，萜烯類當(dāng)中的苦皮藤具有典型的殺蟲效果，對(duì)黏蟲、玉米象、蝗蟲等都具有良好的抑制效果[13]。但目前關(guān)于地黃中這些活性成分對(duì)棉田鱗翅目害蟲的影響的研究報(bào)道甚少。因此，本研究以棉田害蟲斜紋夜蛾為靶標(biāo)試蟲，通過利用地黃根或葉的干粉及其提取液，探究其對(duì)斜紋夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育的影響，旨在進(jìn)一步發(fā)掘地黃的生物活性，為開發(fā)植物源農(nóng)藥奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試地黃。供試地黃采自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所東場(chǎng)試驗(yàn)基地（河南省安陽縣），成株采摘后再分別采收其根或葉，洗凈后晾曬，經(jīng)高溫烘干后磨碎成干粉，過160目（孔徑96 μm）篩，備用。

1.1.2 供試?yán)ハx。供試斜紋夜蛾由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所植物保護(hù)研究室提供。其室內(nèi)飼養(yǎng)條件：長(zhǎng)期飼喂人工飼料，光照/黑暗時(shí)間為12 h/12 h，溫度（24±1）℃，相對(duì)濕度（60±5）%；飼養(yǎng)過程未接觸任何化學(xué)農(nóng)藥。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾的生物活性測(cè)定。以生長(zhǎng)整齊一致的斜紋夜蛾初孵幼蟲為試蟲，參考彭軍等[14]的方法，采用飼喂混拌飼料的方法測(cè)試地黃根或葉干粉對(duì)斜紋夜蛾的胃毒活性。試驗(yàn)設(shè)計(jì)5個(gè)處理，（1）人工飼料（對(duì)照，CK）；（2）地黃根或葉（干粉）與飼料（干粉）的質(zhì)量比為1∶3，記為1∶3處理；（3）地黃根或葉（干粉）與飼料（干粉）的質(zhì)量比為1∶6，記為1∶6處理；（4）地黃根或葉（干粉）與飼料（干粉）的質(zhì)量比為1∶9，記為1∶9處理；（5）地黃根或葉（干粉）與飼料（干粉）的質(zhì)量比為1∶18，記為1∶18處理。

將上述5個(gè)處理的飼料配制后切塊置于24孔盒，每孔接入1頭斜紋夜蛾初孵幼蟲；每24頭為1次重復(fù)，每個(gè)處理共設(shè)置4次重復(fù)。接蟲后每天觀察斜紋夜蛾幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育情況，調(diào)查記錄各處理幼蟲的死亡數(shù)量及活蟲的發(fā)育進(jìn)度，并記載不同蟲齡的試蟲數(shù)量。以每個(gè)齡期初始活蟲數(shù)作為該齡期的基數(shù)，計(jì)算1～6齡每個(gè)齡期幼蟲以及蛹的死亡率。當(dāng)觀察到各處理下斜紋夜蛾幼蟲齡期發(fā)生變化時(shí)，將已變化蟲態(tài)的幼蟲用毛筆輕挑出養(yǎng)蟲板，逐個(gè)稱量并記錄體重?cái)?shù)據(jù)。

1.2.2 地黃提取液對(duì)斜紋夜蛾的生物活性測(cè)定。地黃提取液的制備：分別向地黃根或葉干粉中加入95%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙醇，置于（25±1）℃、200 r·min－1恒溫?fù)u床震蕩24 h，經(jīng)過濾制成植物粗提液，保存于4 ℃冰箱備用。設(shè)置料（地黃根或葉的干粉）、液（95%乙醇）比分別為1∶50、1∶30和1∶10進(jìn)行處理組試驗(yàn)。參照王歡歡等[15]的飼料藥膜法，試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)處理，即飼料中不加地黃提取液、僅加入等量清水（空白對(duì)照）、飼料中加入提取溶劑即95%乙醇、飼料中加入地黃根或葉的干粉提取液（地黃根或葉干粉與提取溶劑的料液比分別為1∶50、1∶30和1∶10）。

供試幼蟲的準(zhǔn)備。選取喂食正常人工飼料的不同齡期（1～6齡）的斜紋夜蛾幼蟲，選擇剛進(jìn)入同一齡期的生長(zhǎng)一致、活躍的幼蟲作為每個(gè)齡期的試蟲進(jìn)行試驗(yàn)。培養(yǎng)環(huán)境條件同1.1.2。

1齡、2齡和3齡斜紋夜蛾試驗(yàn)過程：在24孔板中分別加入冷卻至60 ℃左右的液態(tài)人工飼料1 mL，并放涼使其固化。然后每孔滴入100 μL不同濃度的地黃根或葉干粉提取液并均勻覆蓋于飼料表面，置于室溫下晾干后每孔接入1頭斜紋夜蛾幼蟲。

4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾試驗(yàn)過程：在12孔板中分別加入冷卻至60 ℃左右的液態(tài)人工飼料2 mL，并放涼使其固化。然后每孔滴入200 μL不同濃度的地黃根或葉干粉提取液并均勻覆蓋于飼料表面，置于室溫下晾干后每孔接入1頭斜紋夜蛾幼蟲。

接蟲后7 d內(nèi)每天觀察斜紋夜蛾幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育情況，并記錄不同處理試蟲的存活情況，計(jì)算死亡率。每24頭為1次重復(fù)，每個(gè)處理設(shè)置4次重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Microsoft Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，采用鄧肯多重范圍檢驗(yàn)法比較不同處理間的顯著性差異。用Graphpad Prism軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的影響

2.1.1 地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率的影響。由表1可以看出，取食混有地黃根或葉干粉的飼料對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率有一定的影響，隨著飼料中地黃根或葉干粉含量的增大，2～5齡斜紋夜蛾幼蟲死亡率逐漸升高。

與對(duì)照處理相比，取食混有地黃根干粉飼料的斜紋夜蛾1齡幼蟲死亡率無顯著差異，均為0%；2齡幼蟲在1∶3、1∶6和1∶9處理下的死亡率分別為75.02%、71.49%和27.44%，均顯著高于對(duì)照和1∶18處理的死亡率；3齡幼蟲在1∶3處理下的死亡率顯著高于對(duì)照（7.29%）和其他3個(gè)處理；1∶3處理下4齡幼蟲的死亡率顯著高于對(duì)照、1∶9和1∶18處理，1∶6、1∶9、1∶18處理下4齡幼蟲的死亡率均與對(duì)照處理無顯著差異；5齡幼蟲在5個(gè)處理下的死亡率均無顯著差異；1∶3、1∶6、1∶9、1∶18處理下的6齡斜紋夜蛾幼蟲死亡率均達(dá)到100%，與對(duì)照處理的死亡率（42.68%）差異顯著（表1）。

取食地黃葉干粉混拌飼料的斜紋夜蛾1齡幼蟲的死亡率與對(duì)照處理均無顯著差異。2齡幼蟲在1∶3、1∶6、1∶9和1∶18處理下的死亡率分別為76.03%、72.49%、25.48%和16.67%，均顯著高于對(duì)照處理的死亡率（0%）；3齡斜紋夜蛾在1∶3、1∶6、1∶9和1∶18處理下的死亡率均顯著高于對(duì)照處理（7.29%），其中在1∶3處理下全部死亡；1∶6處理下斜紋夜蛾幼蟲在4齡期全部死亡，1∶6和1∶9處理下的4齡斜紋夜蛾死亡率顯著高于1∶18處理和對(duì)照處理；1∶9處理下斜紋夜蛾幼蟲在5齡期全部死亡，其死亡率顯著高于1∶18處理和對(duì)照處理；1∶18處理下斜紋夜蛾幼蟲在6齡期全部死亡，其死亡率顯著高于對(duì)照處理。飼喂混有地黃根或葉干粉飼料的4個(gè)處理下斜紋夜蛾幼蟲均未發(fā)育到蛹期，而對(duì)照處理下斜紋夜蛾幼蟲可正?；迹ū?）。

2.1.2 地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾發(fā)育歷期的影響。由表2可以看出，取食混有地黃根或葉的干粉飼料對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期有一定的影響。隨著飼料中地黃根干粉含量的增加，斜紋夜蛾3～4齡幼蟲的發(fā)育歷期呈延長(zhǎng)趨勢(shì)；隨著飼料中地黃葉干粉含量的增加，斜紋夜蛾1齡幼蟲的發(fā)育歷期呈延長(zhǎng)趨勢(shì)，3～4齡幼蟲的發(fā)育歷期有所縮短。

取食混有地黃根干粉飼料的1齡斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期均與對(duì)照處理無顯著差異；2齡、3齡和4齡斜紋夜蛾幼蟲均在1∶3處理下的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理；5齡斜紋夜蛾幼蟲在1∶3和1∶6處理下的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理；6齡斜紋夜蛾幼蟲在1∶6、1∶9和1∶18處理下的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理，而1∶3處理下6齡幼蟲的發(fā)育歷期與對(duì)照處理差異不顯著，是由于1∶3處理?xiàng)l件下，幼蟲很快死亡，無法正常生長(zhǎng)發(fā)育。

取食混有地黃葉干粉飼料的斜紋夜蛾1齡幼蟲的發(fā)育歷期均與對(duì)照處理無顯著差異。1∶3、1∶6、1∶9和1∶18處理下2齡斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期均顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理，1∶3處理下2齡斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于其他4個(gè)處理；3齡斜紋夜蛾幼蟲在1∶3處理下全部死亡，無法進(jìn)行正常生長(zhǎng)發(fā)育，與對(duì)照處理的斜紋夜蛾發(fā)育情況差異明顯，其他3個(gè)地黃葉干粉處理下3齡斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理；4齡斜紋夜蛾幼蟲在1∶6處理下全部死亡，1∶9處理下4齡幼蟲只能存活2.25 d；1∶18處理下5齡斜紋夜蛾幼蟲的發(fā)育歷期顯著長(zhǎng)于對(duì)照處理；6齡斜紋夜蛾幼蟲在1∶18處理下全部死亡。對(duì)照處理下斜紋夜蛾幼蟲可正常發(fā)育至化蛹，經(jīng)地黃根或葉干粉處理后的試蟲無法完成生長(zhǎng)發(fā)育。

2.1.3 地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾幼蟲體重的影響。由表3可知，取食混有地黃根或葉干粉的飼料對(duì)斜紋夜蛾幼蟲體重有一定的影響。隨著混拌飼料中地黃根或葉干粉含量的增大，對(duì)斜紋夜蛾3～6齡幼蟲體重的抑制作用越明顯。與對(duì)照處理相比，1∶3、1∶6、1∶9和1∶18處理?xiàng)l件下取食混有地黃根干粉混拌飼料的斜紋夜蛾3齡、4齡、5齡和6齡幼蟲的體重均顯著降低，1∶3處理下3齡、4齡、5齡和6齡幼蟲的體重最低。取食混有地黃葉干粉混拌飼料的斜紋夜蛾3齡、4齡、5齡存活幼蟲的體重顯著下降，而對(duì)照處理下斜紋夜蛾幼蟲可正常發(fā)育至化蛹，蛹重為394.90 mg。

2.2 地黃提取液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率的影響

2.2.1 提取溶劑對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率的影響。由于本研究利用95%乙醇作為提取溶劑進(jìn)行地黃提取液的制備，研究地黃根或葉提取液對(duì)斜紋夜蛾不同齡期幼蟲死亡率的影響。因此，試驗(yàn)前先檢測(cè)95%乙醇對(duì)供試幼蟲是否具有抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果（圖1）表明，處理后1 d、2 d、3 d、4 d和5 d，95%乙醇處理下斜紋夜蛾1～6齡幼蟲的死亡率均與對(duì)照處理均無顯著差異。

2.2.2 地黃提取液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率的影響。將地黃提取液分為根提取液和葉提取液，不同濃度下的提取液皆可對(duì)斜紋夜蛾1齡、2齡和3齡幼蟲產(chǎn)生一定的抑制作用（圖2和圖3）。較低濃度（1∶30和1∶50處理）的地黃根或葉提取液對(duì)4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲的毒殺作用同對(duì)照處理相比無顯著差異，高濃度（1∶10處理）的有顯著毒殺作用。同一調(diào)查時(shí)間，隨著地黃根提取液濃度增大，斜紋夜蛾1～3齡幼蟲的死亡率升高（圖2）；隨著地黃葉提取液濃度增大，斜紋夜蛾1～5齡幼蟲的死亡率逐漸升高（圖3）。

地黃根提取液1∶50、1∶30和1∶10處理后1 d、3 d、5 d和7 d，斜紋夜蛾1齡、2齡幼蟲的死亡率均顯著高于對(duì)照處理（圖2A～B）；在處理后1～7 d，1∶10與1∶30處理下3齡斜紋夜蛾幼蟲的死亡率無顯著差異，但二者均顯著高于對(duì)照處理和1∶50處理（圖2C）；1∶10處理后1～7 d，4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲的死亡率均顯著高于對(duì)照、1∶30和1∶50處理；1∶30和1∶50處理后1～7 d，4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲的死亡率均與對(duì)照處理無顯著差異（圖2D～F）。

中高濃度（1∶30、1∶10）地黃葉提取液處理后5 d，斜紋夜蛾1齡幼蟲的死亡率均達(dá)到100%，毒殺效果明顯；低濃度（1∶50）處理后5 d，斜紋夜蛾1齡幼蟲的死亡率達(dá)到66.67%（圖3A）。1∶10、1∶30和1∶50處理后1 d、3 d、5 d和7 d，斜紋夜蛾1齡、2齡、3齡幼蟲的死亡率均顯著高于對(duì)照處理（圖3A～C）。1∶10處理后1 d、3 d、5 d和7 d，4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲的死亡率均顯著高于對(duì)照處理、1∶30與1∶50處理，1∶30和1∶50處理下4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲的死亡率同對(duì)照處理無顯著差異（圖3D～F）。

3 討論

植物源農(nóng)藥中含有的有效化學(xué)成分一般都是自然界本身的產(chǎn)物，在整個(gè)自然循環(huán)中存在一定的降解途徑，不會(huì)隨食物鏈而濃縮富集[16]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)很多植物體內(nèi)均有殺蟲活性物質(zhì)的存在。Mu？觡oz等[17]發(fā)現(xiàn)2 400余種植物具有控制有害生物的活性，其中1 000多種具有殺蟲活性、39種有殺螨活性、279種有忌避活性、31種可以阻礙昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育。目前，就具有有效殺蟲生物活性的植物而言，研究較為成熟的有魚藤、雷公藤、除蟲菊、印楝等。楝科、菊科、豆科、衛(wèi)矛科和大戟科等30多科植物皆可作為植物源殺蟲劑的提取原料[18]。

本研究分別將地黃根或葉干粉與人工飼料混拌后飼喂斜紋夜蛾幼蟲，隨著人工飼料中地黃根或葉干粉含量的增加，供試斜紋夜蛾幼蟲的死亡率上升、發(fā)育進(jìn)程延緩、體重降低。李春英等[19]利用飼料混毒法探究何首烏干粉對(duì)棉鈴蟲幼蟲的生物活性，結(jié)果表明何首烏干粉處理后試蟲一直處于幼蟲狀態(tài)直至死亡，何首烏干粉具有明顯的抑制生長(zhǎng)發(fā)育的作用。彭軍等[14]利用黃頂菊的花和莖混拌飼料飼喂棉鈴蟲和斜紋夜蛾，發(fā)現(xiàn)試蟲的體重降低。這些都與本研究的結(jié)果基本一致。

宋萍萍等[20]利用5種傘形科植物提取物探究其對(duì)斜紋夜蛾的生物活性，結(jié)果表明這5種植物提取物對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的拒食活性和胃毒活性相對(duì)較高。Fragoso等[21]的研究表明，煙草水提取物對(duì)番茄小食心蟲幼蟲的毒殺活性更強(qiáng)，可以降低幼蟲羽化前階段的存活率。馮崗[22]研究了小果博落回的乙醇提取液對(duì)黏蟲3齡幼蟲的殺蟲活性，發(fā)現(xiàn)其提取液對(duì)黏蟲3齡幼蟲有較強(qiáng)的毒殺抑制作用，與本研究中發(fā)現(xiàn)的地黃根或葉的乙醇提取液對(duì)低齡斜紋夜蛾幼蟲有一定毒殺作用的結(jié)果基本一致。

本研究將地黃根或葉干粉的乙醇提取液分別作用于斜紋夜蛾幼蟲，發(fā)現(xiàn)其對(duì)斜紋夜蛾1齡和2齡幼蟲有一定的毒殺效果。這可能是由于低齡幼蟲比較脆弱，對(duì)乙醇提取液中活性成分的敏感性更高，較低的毒性就能呈現(xiàn)出較強(qiáng)的殺蟲效果。地黃干粉對(duì)斜紋夜蛾1～6齡幼蟲都有一定的抑制作用，可能是因?yàn)檫@種作用是長(zhǎng)期累積的效應(yīng)。藥膜法和飼喂混拌飼料這2種方法較為簡(jiǎn)便，可直觀地看出供試幼蟲的存活率及生長(zhǎng)發(fā)育情況。利用飼料混拌植物干粉進(jìn)行飼喂，可以探究干粉對(duì)供試幼蟲持續(xù)性的毒殺或抑制作用；而利用提取液進(jìn)行研究，可以在短時(shí)間內(nèi)反映出植物提取液對(duì)供試幼蟲的毒殺活性。但用不同的提取溶劑進(jìn)行提取液的制備，可能會(huì)對(duì)植物活性成分的提取率造成不同的影響；同時(shí)藥膜法也有一定的缺陷，利用藥膜法探究提取液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲死亡率和體重的影響時(shí)，因高齡斜紋夜蛾幼蟲會(huì)進(jìn)入暴食期，在取食完飼料上方的藥膜后，整個(gè)蟲體鉆進(jìn)飼料內(nèi)部，進(jìn)而繼續(xù)取食正常的人工飼料完成生長(zhǎng)發(fā)育，從而導(dǎo)致提取液對(duì)大齡斜紋夜蛾幼蟲未表現(xiàn)出較明顯的抑制作用。飼料混拌法可能會(huì)使試蟲在取食混有干粉的人工飼料時(shí)產(chǎn)生不適應(yīng)的情況，不能明確地黃造成斜紋夜蛾死亡的作用方式是拒食作用還是胃毒作用。這2種方法皆有利弊，可在后期針對(duì)不同的蟲齡選擇不同的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行進(jìn)一步探究。不同提取溶劑、不同試驗(yàn)方法等的結(jié)果可能會(huì)產(chǎn)生差異，后期尚需進(jìn)一步系統(tǒng)研究。此外，植物提取液中的化學(xué)成分尚不明確，需要進(jìn)一步測(cè)定，在已知化學(xué)成分的基礎(chǔ)上嘗試人工合成。大多數(shù)植物源殺蟲劑存在藥效慢、殘效期短、易分解等弊端，所以在后續(xù)研究中可與化學(xué)農(nóng)藥輪換使用或進(jìn)行復(fù)配，以減少化學(xué)農(nóng)藥的用量，延緩斜紋夜蛾抗藥性的產(chǎn)生。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，隨著人工飼料中地黃根或葉干粉含量的增加，供試斜紋夜蛾幼蟲的死亡率上升、發(fā)育進(jìn)程延緩、體重降低。地黃根或葉干粉與飼料的質(zhì)量比為1∶3時(shí)，其對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的抑制作用效果最優(yōu)。隨地黃根提取液濃度增大，在同一調(diào)查時(shí)間（處理后1 d、3 d、5 d和7 d），斜紋夜蛾1～3齡幼蟲的死亡率升高；隨地黃葉提取液濃度增大，斜紋夜蛾1～5齡幼蟲的死亡率升高。不同濃度下的地黃根或葉提取液皆可對(duì)斜紋夜蛾1齡、2齡和3齡幼蟲產(chǎn)生一定的抑制作用；地黃根或葉干粉與提取溶劑的料液比為1∶10（高濃度）處理下可對(duì)4齡、5齡和6齡斜紋夜蛾幼蟲產(chǎn)生明顯的毒殺活性。

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