茶多酚對老齡蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、肝臟脂質(zhì)代謝及細胞因子的影響

高賽甲 孫相俞

摘? 要：為了考察茶多酚對老齡蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、肝臟脂質(zhì)代謝及細胞因子的影響，本試驗選擇360羽50周齡的海蘭灰蛋雞，隨機分為2組，每組9個重復，每個重復20羽（5羽/籠），分別飼喂對照日糧和基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg茶多酚后制成的試驗日糧，試驗為期10周。結(jié)果顯示：日糧中添加500 mg/kg茶多酚對蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、肝臟重量、肝臟相對重量、肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達及肝臟細胞因子基因的表達無顯著影響（P＞0.05）；茶多酚可以顯著降低肝臟甘油三酯（triglyceride，TG）的含量（P＜0.05），顯著提高血漿TG含量（P＜0.05）。試驗表明，日糧中添加茶多酚可通過增加肝臟中脂肪的向外轉(zhuǎn)運，降低肝臟中脂肪的積累，從而降低蛋雞肝臟的健康風險。

關(guān)鍵詞：茶多酚；蛋品質(zhì)；脂肪代謝；細胞因子；蛋雞

中圖分類號：S816.79 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）02-0078-06

雞的腸道、肝臟、生殖系統(tǒng)和骨骼的健康是蛋雞高產(chǎn)的保障。肝臟是蛋雞合成和貯存脂肪的主要器官，大量脂肪在肝臟中沉積會引發(fā)脂肪肝，增加脂質(zhì)氧化損傷的風險。蛋雞，特別是老齡蛋雞易發(fā)生氧化應激導致的產(chǎn)蛋率下降過快[1]以及脂肪肝等問題，給養(yǎng)殖企業(yè)造成不小的經(jīng)濟損失。人類醫(yī)學和營養(yǎng)學的研究表明，脂肪的過度沉積會導致自由基生成增加，肝臟細胞ATP生成減少，引起細胞凋亡，而且自由基還會直接或間接誘導促炎細胞因子基因的表達，反過來促炎細胞因子會進一步誘導活性氧類（reactive oxygen species，ROS）的生成[2]。茶多酚是從綠茶葉中提取的一種天然多酚類活性物質(zhì)，占茶葉的12％以上。已有不少研究考察了茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能[3-4]、蛋品質(zhì)[3-10]、抗氧化能力[4，11-12]和脂質(zhì)代謝[3，10]的影響。茶多酚具有抗氧化的生物學活性，其作用機制可能是對超氧陰離子自由基、羥自由基、單線態(tài)氧及過氧化氫等的清除，從而阻止脂質(zhì)自由基的傳播擴散[2]。研究表明，在日糧中添加綠茶粉可以降低蛋雞的腹脂率，下調(diào)脂肪合成相關(guān)基因[脂肪酸合酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、乙酰輔酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）、硬脂酰輔酶A去飽和酶1（stearyl coenzyme A dehydrogenase-1，SCD1）]的表達水平，上調(diào)脂肪分解相關(guān)基因[?；o酶A氧化酶1（acyl coenzyme A oxidase-1，ACOX1）]的表達水平[10]。然而，何俊金等[3]發(fā)現(xiàn)在飼料中添加大劑量的茶多酚（666、1 333和2 666 mg/kg）雖然降低了老齡蛋雞（65～75周齡）血漿甘油三酯（triglyceride，TG）含量，但對肝臟FAS、低密度脂蛋白受體（low-density lipoprotein receptor，LDLR）和極低密度脂蛋白受體（very low density lipoprotein recepto，VLDLR）基因的表達無顯著影響。Yuan等[5，11]還發(fā)現(xiàn)，添加茶多酸可以緩減飼料中釩引起的氧化應激和炎癥反應。由于直接參與肝臟脂肪代謝的基因較多，且現(xiàn)有研究結(jié)果之間存在差異，有必要進一步研究茶多酚保護蛋雞肝臟健康的具體機制。

1? 材料與方法

1.1 試驗材料

茶多酚純度≥60％，購自湖南美可達生物資源股份有限公司。

1.2 試驗動物及日糧

試驗動物為50～60周齡的海蘭灰蛋雞，參照蛋雞場商品飼料的營養(yǎng)水平配制基礎(chǔ)日糧。基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設計與飼養(yǎng)管理

試驗采用單因子完全隨機試驗設計。對照組蛋雞飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組即茶多酚組蛋雞喂給在基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg茶多酚（以有效成分計）后配制成的試驗日糧。將360羽海蘭灰蛋雞（50周齡）隨機分為2組，每組9個重復，每個重復20羽（5羽/籠），初始產(chǎn)蛋率基本一致。飼養(yǎng)管理程序按蛋雞場相關(guān)規(guī)定進行。

1.4 生產(chǎn)性能指標

產(chǎn)蛋性能、平均蛋重、料蛋比等指標的測定參考NY/T 823—2004《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》[13]推薦的方法進行。

1.5 蛋品質(zhì)指標

試驗開始和60周齡時，每個重復選擇3枚雞蛋，測定蛋殼強度、蛋重、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃比色、蛋黃重、蛋殼重和蛋殼厚度。

1.6 樣本收集

60周齡時，每個重復選擇1羽體重接近群體平均值的蛋雞，翅靜脈采血5 mL，肝素鈉抗凝，分離血漿，－20 ℃保存?zhèn)溆?。采血后頸椎脫臼處死，取肝臟稱重，并于肝臟左葉中部取肝臟組織保存于滅菌離心管中，液氮冷凍，于－80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 肝臟和血漿中TG含量的測定

肝臟及血漿中TG含量的測定參照萬建美[14]的方法進行。

1.8 肝臟炎性細胞因子及脂質(zhì)代謝基因相對表達量的測定

肝臟總RNA的提取、cDNA的合成及real-time PCR均采用大連Takara公司的試劑盒，并按使用說明書操作?；蚣耙镄蛄袇⒖? ? ?萬建美[14]推薦的方法。PCR擴增反應及定量采用Applied Biosystems 7 900 HT Real Time PCR系統(tǒng)進行，程序如下：95 ℃ 30 s；40個循環(huán)（95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s）；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。采用384孔板，每個樣本測定3個平行。采用2-ΔΔCt法計算基因的相對表達水平（以對照組為1），數(shù)據(jù)標準化的參照為內(nèi)參基因β-ACTIN和GAPDH的Ct的幾何平均數(shù)[15-16]。

1.9 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以“平均值±標準差”表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS Vol.22.0統(tǒng)計軟件的一般線性模型進行，以P＜0.05作為顯著性差異判斷標準。

2? 結(jié)果

2.1 茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能的影響見表2。由表2可知，日糧中添加500 mg/kg的茶多酚對老齡蛋雞的產(chǎn)蛋率、蛋重和料蛋比均無顯著影響? ? （P＞0.05）。

2.2 茶多酚對蛋品質(zhì)的影響

茶多酚對蛋品質(zhì)的影響見表3。由表3可見，添加茶多酚對蛋品質(zhì)指標無顯著影響（P＞0.05）。

2.3 茶多酚對肝臟和血漿TG含量的影響

茶多酚對肝臟和血漿TG含量的影響見表4。由表4可見，日糧中添加茶多酚極顯著降低了肝臟TG含量（P＜0.01），極顯著增加了血漿TG含量，但對肝臟重量和肝臟相對重量無顯著影響（P＞0.05）。

2.4 茶多酚對肝臟脂肪代謝相關(guān)基因及細胞因子基因表達的影響

茶多酚對肝臟脂肪代謝相關(guān)基因表達和細胞因子基因表達的影響分別見圖1和圖2。由圖1和圖2可知，日糧中添加茶多酚不會顯著影響肝臟脂肪代謝相關(guān)基因的表達水平（P＞0.05），也不會顯著影響肝臟中的促炎細胞因子的表達水平（P＞0.05）。

3? 討論

3.1 茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

有關(guān)茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)影響的研究結(jié)果并不一致。本研究的結(jié)果表明，日糧中添加茶多酚對老齡蛋雞的生產(chǎn)性能（產(chǎn)蛋率、蛋重和料蛋比）和蛋品質(zhì)（蛋殼厚度、蛋殼強度、哈夫單位和蛋黃比色）無顯著影響。汪小紅等[4]也發(fā)現(xiàn)，日糧中添加茶多酚（40、80、200或400 mg/kg）對產(chǎn)蛋率、料蛋比、蛋殼厚度、蛋殼強度、哈夫單位和蛋黃比色無顯著影響，但是添加400 mg/kg茶多酚可顯著降低蛋重，添加200 mg/kg苯多酚能夠顯著降低料蛋比。賴興富等[17]通過薈萃分析發(fā)現(xiàn)，茶多酚對蛋雞的使用效果受茶多酚添加量、蛋雞周齡及所處生理狀態(tài)的影響。當茶多酚的添加量在200 mg/kg左右時，產(chǎn)蛋率提高的結(jié)果居多，但隨著添加量的進一步提高，可能會對蛋雞生產(chǎn)性能產(chǎn)生不利影響。另外，茶多酚的添加效果還受蛋雞的周齡、機體自由基穩(wěn)態(tài)狀況和脂肪代謝狀況的影響。茶多酚添加量過高及蛋雞肝臟脂肪含量并不是特別高可能是本試驗中添加茶多酚對老齡蛋雞產(chǎn)蛋性能無顯著影響的原因。

3.2 茶多酚對蛋雞肝臟脂質(zhì)代謝及細胞因子基因表達的影響

肝臟是家禽合成和貯存脂肪的主要器官。綜合前人的研究可以證實，氧化應激是造成老齡蛋雞產(chǎn)蛋性能衰退[1]和肝臟健康問題的主要原因。本試驗表明，日糧中添加500 mg/kg茶多酚，可顯著降低老齡蛋雞肝臟TG含量，增加血漿TG含量。盧垚[18]的研究也表明，日糧中添加? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 300 mg/kg的茶多酚可以降低蛋雞肝臟TG含量，同時也能降低血清的TG水平。另一項研究也表明，在飼料中添加1 333或2 666 mg/kg茶多酚，可降低血清低密度脂蛋白和TG的含量，通過激活AMPK途徑調(diào)節(jié)膽固醇的代謝，調(diào)節(jié)雞蛋中膽固醇的含量[3]。在調(diào)控血清TG含量方面，本研究的結(jié)果與前人結(jié)果并不一致。在基因表達層面，有的研究發(fā)現(xiàn)茶多酚上調(diào)了調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達水平[18]，下調(diào)了脂肪合成酶等脂肪合成相關(guān)基因的表達水平，同時上調(diào)了脂肪分解相關(guān)基因的表達水平[10]。然而，本研究卻發(fā)現(xiàn)茶多酚對老齡蛋雞肝臟脂肪代謝相關(guān)基因的表達水平并無顯著影響，這與何俊金等[3]的研究結(jié)果是一致的。另外，由于脂肪沉積與ROS及促炎細胞因子之間存在密切的相互聯(lián)系，但是未見有研究考察茶多酚對肝臟促炎細胞因子的影響。然而，本研究的結(jié)果并未發(fā)現(xiàn)日糧中添加茶多酚對老齡蛋雞肝臟促炎細胞因子基因的表達有顯著的影響，這可能與試驗中蛋雞并未處于明顯的肝臟健康問題或氧化應激狀態(tài)有一定的關(guān)系。由此看來，茶多酚對蛋雞肝臟脂質(zhì)代謝的影響可能仍是以抗氧化作用為主，對脂質(zhì)合成或分解、脂肪轉(zhuǎn)運的調(diào)節(jié)和肝臟炎性因子的調(diào)節(jié)因生理狀態(tài)不同而存在差異。

4? 結(jié)論

茶多酚可通過降低肝臟中脂肪的積累，增加肝臟中脂肪的向外轉(zhuǎn)運，從而降低蛋雞肝臟因氧化應激導致的健康風險，但對肝臟脂肪代謝和炎癥狀態(tài)的影響存在條件性。

參考文獻

[1] DEVINE P J，PERREAULT S D，LUDERER U．Roles of reactive oxygen species and antioxidants in ovarian toxicity[J]．Biology of Reproduction，2012，86（2）：27.

[2] 方允中，顧景范，郭長江．自由基營養(yǎng)學[M]．北京：科學出版社，2015.

[3] 何俊金，王建萍，丁雪梅，等．飼糧中添加高劑量茶多酚對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和脂質(zhì)代謝的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2018，30（11）：4601-4610.

[4] 汪小紅，武書庚，崔耀明，等．茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和抗氧化能力的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2017，29（1）：193-201.

[5] 原澤鴻．茶多酚對飼喂含釩飼糧蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和腸道健康的影響及機理的研究[D]．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2016.

[6] 張揚．蛋雞飼糧添加茶多酚提取物對雞蛋品質(zhì)影響的研究[D]．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2016.

[7] 杜潔明．茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋清品質(zhì)的影響研究[D]．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2019.

[8] 杜潔明，張克英，王建萍，等．茶多酚對雞蛋品質(zhì)、蛋白凝膠特性、微觀結(jié)構(gòu)及蛋清微量元素含量的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2019，31（3）：1326-1333.

[9] 王曉翠．綠茶多酚調(diào)控蛋雞產(chǎn)蛋后期雞蛋清品質(zhì)的機制[D]．北京：中國農(nóng)業(yè)科學院，2020.

[10] 王秋實．日糧中添加綠茶粉對雞蛋品質(zhì)和蛋雞脂肪代謝的影響[D]．合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學，2016.

[11] YUAN Z H，ZHANG K Y，DING X M，et al．Effect of tea polyphenols on production performance，egg quality， and hepatic antioxidant status of laying hens in vanadium-containing diets[J]．Poultry Science，2016，95（7）：1709-1717.

[12] 張玉，武書庚，王晶，等．茶多酚、維生素E和吡咯喹啉醌二鈉對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響[J]．中國畜牧雜志，2016，52（19）：27-32.

[13] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部．家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法：NY/T 823-2004[S]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[14] 萬建美．蛋氨酸來源和水平對產(chǎn)蛋雞肝臟蛋氨酸及脂質(zhì)代謝的影響[D]．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2016.

[15] LIVAK K J，SCHMITTGEN T D．Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔ CT Method[J]．Methods，2001，25（4）：402-408.

[16] VANDESOMPELE J，D E PRETER K，PATTYN F，et al．Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes[J]．Genome Biology，2002，3（7）：research0034.

[17] 賴興富，陳佳靜，鄭江霞，等．日糧中添加茶多酚對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)影響的Meta分析[J]．中國家禽，2019，41（16）：58-64.

[18] 盧垚．茶多酚降低雞蛋膽固醇效果及其機制研究[D]．重慶：西南大學，2019.