一例鵪鶉大腸桿菌病的診治

劉風(fēng)波 馮曉東 連亮亮

摘? 要：文章對(duì)鵪鶉疑似大腸桿菌病進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確診，通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物，并結(jié)合綜合防制措施以預(yù)防鵪鶉大腸桿菌病。

關(guān)鍵詞：鵪鶉大腸桿菌??；實(shí)驗(yàn)室確診；藥敏試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：S854.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2024）02-0068-03

鵪鶉大腸桿菌病是由埃希大腸桿菌（Escherichi coli）感染鵪鶉引起的一種常見(jiàn)病。該病一年四季均可發(fā)生，可感染各年齡段鵪鶉，一般6月齡后的鵪鶉發(fā)病率較高，雖不會(huì)引起大群暴發(fā)性死亡，但對(duì)產(chǎn)蛋率及蛋品質(zhì)影響很大，加之反復(fù)發(fā)作，往往會(huì)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。大腸桿菌廣泛分布于自然界中，畜禽都易感染。該病主要通過(guò)消化道感染鵪鶉，發(fā)生的主要原因是飼養(yǎng)密度過(guò)大，籠舍消毒不徹底，衛(wèi)生條件差。飼養(yǎng)管理不善，飼養(yǎng)環(huán)境長(zhǎng)期潮濕不潔，氣溫突變，過(guò)度炎熱及疫苗接種造成的應(yīng)激反應(yīng)，都能誘發(fā)該病和加重病情；某些疾病，如新城疫、呼吸道病，常并發(fā)或繼發(fā)感染。

1? 材料和方法

1.1 病例來(lái)源

本地養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的2月齡鵪鶉發(fā)病，送檢時(shí)已死亡。問(wèn)診得知鵪鶉?yán)咨〖S，產(chǎn)蛋率下降，產(chǎn)軟殼蛋、破殼蛋增多，戶主曾滴鼻點(diǎn)眼接種新城疫疫苗，并在飲水中添加環(huán)丙沙星進(jìn)行控制，不見(jiàn)好轉(zhuǎn)。

臨床上，發(fā)病鵪鶉消瘦，上下眼瞼腫脹，兩腿前后伸張，肛門(mén)周?chē)q毛污穢不堪。剖檢發(fā)現(xiàn)，尸體眼前房積膿；肝腫脹，呈暗紅色；肝臟、心臟表面均有一層灰白色纖維素性薄膜覆蓋；膽囊腫大，膽汁充盈；小腸脹氣，黏膜增厚；肺腸充血出血；輸卵管腫脹；卵巢變形。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂，普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，伊紅美藍(lán)瓊脂，三糖鐵瓊脂，甲基紅試劑，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯，革蘭染液。藥敏片包括阿莫西林（amoxicillin，AMX）、氨芐西林（ampicillin，SU）、頭孢噻肟（ceftizoxime，CTX）、頭孢他啶（ceftazidime，CED）、頭孢曲松鈉（ceftriaxone sodium，CFX）、卡那霉素（kanamycin，K）、慶大霉素（gentamicin，GM）、氟苯尼考（florfenicol，F(xiàn)F）、泰樂(lè)菌素（tylosin，TL）、硫酸紅霉素（erythromycin sulfate，E）、利福平（rifampicin，RA）、氧氟沙星（ofloxacin，OFL）、諾氟沙星（norfloxacin，NOR）、環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、恩諾沙星（enophthalmin，ENR），均為自制[1]，密封低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

無(wú)菌條件下，取發(fā)病鵪鶉的肝、心臟切片樣本，分別劃線接種于普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板及營(yíng)養(yǎng)肉湯，于37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。

1.4 涂片染色鏡檢

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落涂布于載玻片上，革蘭染色，在油鏡下觀察菌落形態(tài)。

1.5 生化試驗(yàn)[2]

1.5.1 糖類(lèi)分解試驗(yàn)

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落，隨后接種于各種糖培養(yǎng)基上，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

1.5.2 硫化氫試驗(yàn)

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于37 ℃恒溫箱培養(yǎng)6～8 h。用無(wú)菌接種針蘸取純培養(yǎng)物，沿管壁作穿刺三糖鐵培養(yǎng)基，37 ℃下培養(yǎng)24 h，隨后觀察培養(yǎng)基顏色變化。

1.5.3 甲基紅試驗(yàn)

取1.5.2培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物，接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，取出后加甲基紅試劑3滴，觀察培養(yǎng)基顏色變化。

1.5.4 運(yùn)動(dòng)力檢查

滅菌接種針蘸取1.5.2培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物，垂直刺進(jìn)半固體培養(yǎng)基的瓊脂柱中間直至管底，置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)18 h，而后取出檢查。

1.6 動(dòng)物試驗(yàn)

選取體重18～20 g小白鼠4只做動(dòng)物試驗(yàn)。挑取普通瓊脂平板上的單個(gè)菌落接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)6～8 h，取1 mL菌液，用生理鹽水10倍稀釋，每只小鼠腹腔接種0.2 mL稀釋的菌液，飼養(yǎng)觀察結(jié)果。

1.7 藥敏試驗(yàn)

采用紙片瓊脂擴(kuò)散法（Baner-Kirby建立的K-B法）[3]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

2? 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)特性

普通瓊脂平板上長(zhǎng)出形態(tài)凸起、光滑濕潤(rùn)、灰白色、半透明、邊緣整齊、有特殊的糞便樣臭味的大菌落。麥康凱瓊脂平板上長(zhǎng)出粉紅色大菌落，稍凸起，表面光滑濕潤(rùn)，菌落邊緣波狀。伊紅美藍(lán)瓊脂平板上為圓形藍(lán)紫色菌落，中心為紫黑色帶金屬光澤。肉湯呈均勻渾濁，管底有黏液樣沉淀物。

2.2 染色鏡檢結(jié)果

油鏡下觀察到單個(gè)散在的兩端鈍圓的革蘭陰性短桿菌。

2.3 生化培養(yǎng)

2.3.1 分離菌發(fā)酵特點(diǎn)

分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、甘露醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生靛基質(zhì)，不發(fā)酵蔗糖。

2.3.2 培養(yǎng)基變化

培養(yǎng)基顏色無(wú)變化，未產(chǎn)生硫化氫。

2.3.3 培養(yǎng)液變化

培養(yǎng)液為黃色，甲基紅試驗(yàn)為陰性。

2.3.4 運(yùn)動(dòng)力觀察

檢查見(jiàn)由穿刺線向四周擴(kuò)散生長(zhǎng)，周?chē)呐囵B(yǎng)基變渾濁，該菌具有運(yùn)動(dòng)力。

2.4 動(dòng)物試驗(yàn)

小鼠接種菌液后，在18 h內(nèi)全部死亡。取死亡小鼠心臟和肝臟切片樣本、腹水樣本，制成抹片，革蘭染色鏡檢，并將樣本劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。鏡檢結(jié)果為兩端鈍圓的革蘭陰性短小桿菌，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基表面有粉紅色、稍凸起、表面光滑濕潤(rùn)、菌落邊緣波狀的大菌落。與從原發(fā)病鵪鶉的樣本中分離出的菌株形態(tài)一致。綜上試驗(yàn)結(jié)果可判斷，從原發(fā)病鵪鶉中分離出的細(xì)菌為致病性大腸桿菌[4]。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。按以下標(biāo)準(zhǔn)判定[5]：抑菌圈直徑大于20 mm為極度敏感；抑菌圈直徑大于15 mm且不超過(guò)20 mm為高度敏感；抑菌圈直徑大于10 mm且不超過(guò)15 mm為中度敏感；抑菌圈直徑大于0且不超過(guò)10 mm為耐藥。

3? 分析與討論

3.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

本研究表明，引起本地養(yǎng)殖戶2月齡鵪鶉發(fā)病的致病性大腸桿菌對(duì)頭孢噻肟（CTX）、頭孢曲松鈉（CFX）、慶大霉素（GM）和頭孢他啶（CED）極度敏感，對(duì)氟苯尼考（FF）高度敏感，對(duì)阿莫西林（AMX）、氨芐西林（SU）、卡那霉素（K）、泰樂(lè)菌素（TL）、硫酸紅霉素（E）、利福平（RA）、氧氟沙星（OFL）、諾氟沙星（NOR）、環(huán)丙沙星（CIP）和恩諾沙星（ENR）耐藥。因此，頭孢菌素類(lèi)抗生素、胺基糖苷類(lèi)抗生素、氯霉素類(lèi)抗生素可作為治療藥物。

3.2 大腸桿菌病發(fā)病原因分析

3.2.1 環(huán)境因素

飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、管理不當(dāng)與大腸桿菌病有著密切的關(guān)系。當(dāng)舍內(nèi)空氣不好，陰暗潮濕，塵埃過(guò)重，飼料飲水等被大腸桿菌污染時(shí)，易使大腸桿菌通過(guò)呼吸道和消化道感染鵪鶉，從而引起發(fā)病。部分養(yǎng)殖戶未對(duì)設(shè)施進(jìn)行消毒，或者對(duì)消毒工作不重視，大量重復(fù)地濫用藥物，致耐藥菌株產(chǎn)生。大多數(shù)養(yǎng)殖戶在鵪鶉群發(fā)病時(shí)，便“病急亂投醫(yī)”，也不考慮藥物是否有效，或者一旦有效，便長(zhǎng)時(shí)間大量使用同一種抗菌藥，結(jié)果導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性增加，鵪鶉的免疫力急劇下降，最后不但不能治療疾病，反而造成耐藥菌株種類(lèi)超標(biāo)[6]，造成大腸桿菌的發(fā)生與流行。

3.2.2 應(yīng)激因素

在正常情況下鵪鶉的腸道內(nèi)存在大量的大腸桿菌，舍內(nèi)也廣泛存在大腸桿菌，當(dāng)飼養(yǎng)管理、環(huán)境衛(wèi)生條件變差，特別是鵪鶉群受到環(huán)境因素的影響，如高溫，轉(zhuǎn)群，驚嚇，飼養(yǎng)密度過(guò)大，突然更換飼料，機(jī)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變而使抵抗力下降，導(dǎo)致大腸桿菌病發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1] 陸承平．獸醫(yī)微生物學(xué)[M]．5版．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2013.

[2] 姚火春．獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]．2版．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004.

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