余甘子與茶多酚、左旋肉堿配伍對高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖的預(yù)防作用

任興遠(yuǎn)，王文博，桂蘭蘭，郝潤華，王少康, ，陳希民，孫桂菊

（1.東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.中國營養(yǎng)學(xué)會營養(yǎng)與保健食品分會，北京 100069）

隨著社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展和居民生活水平提高，超重與肥胖已經(jīng)逐步成為全球共同的重大公共衛(wèi)生問題，造成了沉重的疾病負(fù)擔(dān)[1]。研究表明，肥胖及肥胖相關(guān)疾病的患病率在全球呈現(xiàn)快速上升的發(fā)展趨勢。數(shù)據(jù)顯示，全球范圍內(nèi)身體質(zhì)量指數(shù)大于25 kg/m2的成年人所占比例從1980年的男性28.8%和女性29.8%增加到2013年的男性36.9%和女性38%[2]。盡管我國肥胖的患病率在全球還處于相對較低水平，但從20世紀(jì)80年代開始，我國就已經(jīng)是世界上超重、肥胖人口最多的國家[3]。根據(jù)2020年《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告》數(shù)據(jù)顯示，目前我國有超過50%的成年居民超重或肥胖，6～17、6 歲以下兒童青少年超重肥胖率分別達(dá)19%和10.4%[4]。超重和肥胖會增加多種合并癥的發(fā)病風(fēng)險，包括2型糖尿病、心血管疾病、癌癥及睡眠呼吸障礙等[5-6]。目前治療肥胖的手段主要包括飲食、運(yùn)動、藥物和外科治療[7-9]。由于能量代謝的復(fù)雜性，僅通過增加運(yùn)動量很難降低體質(zhì)量[10]，而藥物治療與手術(shù)治療又存在著一些不良反應(yīng)[11]。因此利用功能性食品調(diào)節(jié)體質(zhì)量的方法越來越受到人們的重視。

余甘子是藏族習(xí)用藥材，為大戟科植物余甘子的干燥成熟果實(shí)，其味甘、酸、澀，但營養(yǎng)價值豐富，是國家衛(wèi)生健康委員會（原衛(wèi)生部）批準(zhǔn)的藥食同源物質(zhì)，具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳的功效，常用于治療血熱血瘀、消化不良、腹脹、咳嗽、喉痛、口干等疾病[12]。同時諸多研究顯示，余甘子還具有抗氧化[13]、抗癌[14]、抗菌抗炎[15]、降血脂[16]、降血壓[17-18]等作用。另外研究顯示，茶多酚具有調(diào)節(jié)腸道菌群和抗肥胖作用[19-20]。而左旋肉堿屬于類維生素，與動物體內(nèi)的脂肪酸代謝密切相關(guān)[21]，能夠通過低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）調(diào)節(jié)血脂水平達(dá)到減肥效果[22]。目前，對余甘子預(yù)防肥胖功效的研究尚不多見，而對余甘子與茶多酚、左旋肉堿配伍使用的研究更是鮮見報道。本實(shí)驗(yàn)旨在采用高脂飼料建立大鼠預(yù)防肥胖模型，通過單獨(dú)給予余甘子或?qū)⒂喔首优c茶多酚、左旋肉堿配伍使用，以評價余甘子的預(yù)防肥胖功效，為余甘子的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

雄性SD大鼠（SPF級，實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證號：20220004007809，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（蘇）2021-0022），體質(zhì)量（70.39±4.32）g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供（實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號碼：SCXK（滬）2022-0004）。實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)于東南大學(xué)丁家橋校區(qū)實(shí)驗(yàn)動物中心，環(huán)境：SPF級屏障；光照：12 h明暗交替；實(shí)驗(yàn)室溫度：20.0～26.0 ℃；相對濕度：40%～70%。飲用純化水，群籠飼養(yǎng)（每籠5 只），自由攝食攝水。

SD大鼠高脂飼料以及普通維持飼料由江蘇省蘇州市雙獅實(shí)驗(yàn)動物飼料科技有限公司提供（飼料生產(chǎn)許可證號：蘇飼證（202305005））。普通維持飼料組分為玉米、面粉、麩皮、大豆油、豆粕、魚粉、糊精、苜蓿草等，含賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸等多種氨基酸和多種礦物元素，總能量為3 700 kcal/kg。供能比為蛋白質(zhì)21.5%，脂肪11.1%，碳水化合物67.4%。高脂飼料配方：普通維持飼料59.4%、豬油15%、蔗糖15%、酪蛋白9%、麥芽糊精1.6%，總能量為4 483 kcal/kg，供能比為蛋白質(zhì)19.5%，脂肪47.2%，碳水化合物33.3%。

余甘子粉、茶多酚粉 北京市營養(yǎng)源研究所；左旋肉堿酒石酸鹽（＞99%）瑞士Lonza公司；奧利司他（≥98%）上海源葉生物科技有限公司；水合氯醛 南京金益柏生物科技有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、總蛋白以及瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素試劑盒 南京建成生物工程研究所；RNA提取液、Water Nuclease-Free、RT First Strand cDNA Synthesis Kit、SYBR Green qPCR Master Mix（None ROX）、引物 武漢塞維爾生物科技公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平 梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司；KZ-III-FP低溫研磨儀 武漢塞維爾生物科技公司；D3024R臺式高速冷凍型微量離心機(jī) 大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司；CFX熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國Bio-Rad公司；NanoDrop 2000超微量分光光度計 美國Thermo Fisher Scientific公司；ELx800光吸收酶標(biāo)儀 美國伯騰儀器有限公司；SW-CJ-1FD超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；FBZ2001-up-p標(biāo)準(zhǔn)試劑型純水儀 青島富勒姆科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 干預(yù)物制備

根據(jù)Huang Haozhou等[23]的研究方法提取余甘子粉。取20 g新鮮余甘子果肉在100 ℃的水（1∶12，g/mL）中煎煮2 次，每次1 h；以5 000×g離心15 min，取上清液在室溫下干燥，即可得到提取粉，得率約為25%。測試樣品密封儲存在陰涼干燥的地方，并在分析前通過0.22 μm尼龍過濾器過濾。茶多酚粉按照馮瑛等[24]的研究改進(jìn)后進(jìn)行提取，取30.00 g茶葉于室溫條件下用體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液解吸10 min，加入3 300 mL的沸水提取10 min，冷卻至室溫后，4 200 r/min離心10 min，取上清液，干燥后得到茶多酚粉，得率約為20%。

1.3.2 動物實(shí)驗(yàn)設(shè)計

SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，選取合格大鼠60 只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6 組，即空白對照組（NC組）、模型對照組（MC組）、陽性對照組（PC組）、余甘子組（FP組）、余甘子茶多酚配伍組（FP-GTP組）、余甘子左旋肉堿配伍組（FP-LC組），每組10 只。NC組大鼠全程予以普通維持飼料喂養(yǎng)，MC組、PC組以及各實(shí)驗(yàn)組全程予以高脂飼料喂養(yǎng)。

對大鼠進(jìn)行連續(xù)7 周的灌胃。NC組和MC組每日灌胃1 mL/100 g的羧甲基纖維素鈉。FP組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉；FP-GTP組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉和0.022 5 g/kgmb的茶多酚粉；FP-LC組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉和0.108 g/kgmb的左旋肉堿；PC組每日灌胃劑量為0.06 g/kgmb的奧利司他；各實(shí)驗(yàn)組干預(yù)物均使用羧甲基纖維素鈉溶解，灌胃體積均為1 mL/100 g。各實(shí)驗(yàn)組灌胃劑量根據(jù)各干預(yù)物人體推薦攝入量換算得到；陽性對照藥物劑量通過市售奧利司他說明書進(jìn)行人鼠比例換算得到。

1.3.3 大鼠狀態(tài)觀察

觀察灌胃期間大鼠生長狀態(tài)、外貌形態(tài)和排便等情況。每天記錄投食量與剩食量，每7 d記錄一次大鼠攝食量。

1.3.4 大鼠生理指標(biāo)的檢測

灌胃期內(nèi)每7 d記錄大鼠體質(zhì)量和體長（鼻尖至肛門距離）1 次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠頸椎脫臼致死，小心分離大鼠肝、腎等臟器和腎周脂肪、睪周脂肪，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%的生理鹽水漂洗干凈，并用濾紙吸干多余水分，使用電子天平稱量質(zhì)量并記錄，而后置于-80 ℃條件下凍存，用于后續(xù)指標(biāo)檢測。

根據(jù)肝臟、腎周脂肪、睪周脂肪的質(zhì)量計算得出脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)。腎周脂肪系數(shù)、睪周脂肪系數(shù)以及肝臟系數(shù)分別為腎周脂肪質(zhì)量、睪周脂肪質(zhì)量和肝臟質(zhì)量與大鼠體質(zhì)量之比。

1.3.5 大鼠血清指標(biāo)的測定

干預(yù)7 周后，大鼠禁食不斷水12 h，以350 mg/kgmb腹腔注射水合氯醛溶液（10 g/100 mL）麻醉大鼠，腹腔動脈取血，室溫靜置30 min后，以低溫3 000 r/min離心15 min分離血清，取血清置于-20 ℃冰箱待檢。根據(jù)試劑盒的操作步驟和要求測定大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、瘦素、脂聯(lián)素和抵抗素水平。

1.3.6 大鼠肝臟指標(biāo)的測定

稱取約0.1 g肝臟組織樣本放入研缽中，加入1 mL無水乙醇，進(jìn)行冰浴勻漿，以12 000 r/min、4 ℃離心10 min，取上清液待測。根據(jù)試劑盒的操作步驟和要求測定大鼠肝臟中SOD、ALT、AST、AKP活力和MDA、TC、TG、總蛋白、HDL-C以及LDL-C的水平。

1.3.7 大鼠脂肪內(nèi)AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1mRNA表達(dá)的測定

采用Trizol法提取各組大鼠脂肪組織內(nèi)的單磷酸腺苷依賴蛋白激酶（adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase，AMPK）α-1、AMPKα-2、沉默信息調(diào)節(jié)因子1（sirtuin 1，Sitr1）的總RNA，而后將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為20 μL，反應(yīng)過程為95 ℃預(yù)變性l min，95 ℃變性15 s、58 ℃退火20 s、72 ℃延伸45 s，循環(huán)40 次。根據(jù)熔解曲線剔除異常數(shù)據(jù)，導(dǎo)入相對定量公式（2-ΔΔCt）逐個計算樣品基因的相對表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠基本特征

實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠體質(zhì)量均正常增長，精神狀態(tài)、行為活動、攝食攝水、糞便、尿液以及各腔道分泌物等均未見明顯異常。如圖1所示，各組大鼠攝食量也無明顯差異，但NC組每周能量攝入明顯低于高脂飲食干預(yù)組。

圖1 實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠攝食量及能量攝入情況Fig.1 Food intake and energy intake of rats in each group during the experimental period

各組大鼠在不同時期的體質(zhì)量變化如圖2A所示。干預(yù)開始之前，各組大鼠體質(zhì)量均衡，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。干預(yù)開始后，各組大鼠體質(zhì)量在實(shí)驗(yàn)期間均呈上升趨勢，其中MC組增長最快，其次是FP-GTP組，再次FP組和FP-LC組，PC組和NC組增長緩慢。干預(yù)4 周后，MC組大鼠體質(zhì)量高于NC組大鼠，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），說明高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖模型構(gòu)建成功。在干預(yù)7 周后，F(xiàn)P組、FP-GTP組、FP-LC組及PC組大鼠體質(zhì)量均明顯低于MC組大鼠，且除FPGTP組外，其余各組與MC組間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這說明余甘子單獨(dú)使用或與左旋肉堿配伍使用均能在一定程度上能夠控制大鼠體質(zhì)量增加。

圖2 干預(yù)物對大鼠體質(zhì)量（A）和體長（B）的影響Fig.2 Effects of interventions on body mass (A) and body length (B) of rats

各組大鼠在不同時期的體長變化如圖2B所示。干預(yù)開始之前，各組大鼠體長均衡，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。干預(yù)開始之后，隨著時間的延長，各組大鼠正常生長，體長也逐漸增加。截至干預(yù)結(jié)束，各組大鼠體長一直無差異，說明高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖并用不同干預(yù)物進(jìn)行灌胃不會對大鼠的生長發(fā)育造成顯著的影響。

2.2 余甘子對大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)的影響

干預(yù)7 周后各組大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)差異如表1所示。MC組予以高脂飼料喂養(yǎng)后導(dǎo)致大鼠發(fā)生肥胖，與NC組相比，MC組睪周脂肪、腎周脂肪質(zhì)量明顯增加，相應(yīng)的脂肪系數(shù)也明顯高于NC 組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0 0 1），而肝臟質(zhì)量雖高于NC組，但肝臟系數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明高脂飲食誘導(dǎo)大鼠發(fā)生肥胖不會導(dǎo)致大鼠的肝臟出現(xiàn)水腫、充血或增生肥大等不良生理反應(yīng)。

表1 干預(yù)物對大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)的影響Table 1 Effects of interventions on fat coefficients and liver coefficients in rats

與MC組相比，F(xiàn)P組、FP-GTP組、FP-LC組及PC組大鼠腎周脂肪質(zhì)量均較低，腎周脂肪系數(shù)也較低，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。此外，F(xiàn)P組和PC組大鼠睪周脂肪質(zhì)量和睪周脂肪系數(shù)顯著低于MC組外（P＜0.05），F(xiàn)P-GTP組、FP-LC組大鼠睪周脂肪質(zhì)量和睪周脂肪系數(shù)與M C 組大鼠間差異并不顯著（P＞0.05）。同時，各干預(yù)組肝臟質(zhì)量與肝臟系數(shù)與MC組之間也無顯著差異（P＞0.05）。

從上述結(jié)果看，使用余甘子并與茶多酚、左旋肉堿配伍對大鼠進(jìn)行干預(yù)，能夠?qū)Υ笫篌w內(nèi)脂肪分布造成顯著影響，降低大鼠體內(nèi)腎睪周圍脂肪堆積。

2.3 余甘子對大鼠脂代謝指標(biāo)的影響

2.3.1 余甘子對大鼠血清和肝臟中脂質(zhì)水平的影響

實(shí)驗(yàn)干預(yù)7 周后，大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的變化如圖3所示，MC組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平均高于NC組，HDL-C水平低于NC組，且具有顯著性差異（P＜0.001）。與MC組相比，F(xiàn)P組、FP-LC組、PC組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著下降（P＜0.05、P＜0.001），HDL-C水平顯著增加（P＜0.05、P＜0.001）。而FP-GTP組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平雖低于MC組，HDL-C水平高于MC組，但差異并不顯著（P＞0.05）。

圖3 大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C濃度的變化Fig.3 Changes in serum TC,TG,HDL-C and LDL-C levels in rats

對大鼠進(jìn)行解剖后取肝臟組織勻漿，測量肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，結(jié)果如圖4所示，肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平變化情況與血清中變化情況相同。MC組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平均高于NC組，HDL-C水平低于NC組，且具有顯著性差異（P＜0.001）。與MC組相比，F(xiàn)P組、PC組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平均顯著下降（P＜0.001），HDL-C水平顯著增加（P＜0.001）。而FP-LC組和FP-GTP組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平雖低于MC組，HDL-C水平高于MC組，但差異整體上并不顯著（P＞0.05）。

圖4 大鼠肝臟TC、TG、HDL-C、LDL-C含量的變化Fig.4 Changes in TC,TG,HDL-C and LDL-C levels in rat liver

大鼠血清和肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平變化結(jié)果顯示，高脂飲食能夠造成大鼠TC、TG、LDL-C水平升高，HDL-C水平降低，而使用余甘子或?qū)⒂喔首雍妥笮鈮A配伍使用能夠改善高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠血脂紊亂的現(xiàn)象。同時結(jié)果還顯示FP-GTP組降低TC、TG、LDL-C水平的效果差異并不顯著（P＞0.05），這說明余甘子與茶多酚配伍使用干預(yù)效果并不顯著。

2.3.2 余甘子對大鼠血清中瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平的影響

瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素均是由脂肪組織分泌的相關(guān)脂肪細(xì)胞因子，研究顯示肥胖發(fā)生后瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平會發(fā)生改變[25-26]：血清中瘦素與抵抗素水平與動物脂肪組織大小呈正比[27]，在肥胖時會升高；而脂聯(lián)素水平則與體質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)[28]。

干預(yù)7 周后，各組大鼠血清中瘦素、抵抗素和脂聯(lián)素水平差異如表2所示。與NC組相比，MC組大鼠血清瘦素、抵抗素的水平明顯升高，脂聯(lián)素水平下降，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），說明高脂飲食喂養(yǎng)大鼠造成大鼠肥胖后，大鼠血清中瘦素、抵抗素水平升高，脂聯(lián)素水平下降。與MC組相比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠的瘦素、抵抗素水平下降，且除FP-GTP組外，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清脂聯(lián)素水平也高于MC組，接近NC組的水平，且除FP-GTP組外，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各組大鼠血清中瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平差異說明使用余甘子干預(yù)可在一定程度上預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肥胖。

表2 干預(yù)對大鼠瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素的影響Table 2 Effects of interventions on serum concentrations of leptin,lipocalin and resistin in rats

2.4 余甘子對大鼠脂肪組織AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的mRNA表達(dá)影響

如表3所示，MC組與NC組相比，大鼠脂肪組織AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的mRNA表達(dá)下調(diào)，但差異并不顯著（P＞0.05），說明高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖可能不會使AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的表達(dá)發(fā)生改變。然而與MC組相比，F(xiàn)P組及各配伍組大鼠脂肪組織內(nèi)AMPKα-2的表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05、P＜0.001），說明余甘子提取物可能通過影響AMPKα-2基因的表達(dá)進(jìn)而預(yù)防高脂飼料對大鼠造成的肥胖。

表3 干預(yù)物對大鼠脂肪組織mRNA表達(dá)的影響Table 3 Effects of interventions on mRNA expression AMPKα-1,AMPKα-2 and Sitr1 in adipose tissues of rats

2.5 余甘子對大鼠肝損傷水平影響

肝細(xì)胞受損后會造成細(xì)胞膜通透性增加，導(dǎo)致分布于肝細(xì)胞線粒體和細(xì)胞質(zhì)中的AST大量釋放到血液中[29]。肝損傷還會導(dǎo)致肝臟中肝酶活力升高，AKP和ALT大量釋放到血液中，導(dǎo)致AKP和ALT活力上升[30-31]。SOD活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA含量的高低又間接反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。同時當(dāng)動物機(jī)體發(fā)生慢性肝實(shí)質(zhì)性損傷如急性肝炎、肝硬化等時，會導(dǎo)致肝細(xì)胞合成蛋白質(zhì)功能障礙，引起總蛋白減少。所以結(jié)合大鼠肝臟AKP、AST、ALT、SOD活力和MDA、總蛋白水平的差異，可以說明各組間大鼠肝臟的受損情況。

干預(yù)7 周后，各組大鼠肝臟勻漿中AKP、AST、ALT、MDA、SOD水平差異如表4所示。與NC組相比，MC組予以高脂飼料喂養(yǎng)后，造成了大鼠肥胖，導(dǎo)致大鼠肝臟內(nèi)AKP、AST、ALT、MDA水平上升，SOD活力下降，且各項指標(biāo)之間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），說明大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激失衡，出現(xiàn)氧化損傷，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟損傷。與MC組相比，余甘子及各配伍組大鼠肝臟內(nèi)AKP、AST、ALT、MDA水平下降，SOD活力上升，但只有FP組各項指標(biāo)均接近于NC組，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.001），而其余各組雖然ALT、MDA水平下降，SOD活力有所上升，但與MC組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。各實(shí)驗(yàn)組大鼠AKP活力均有所下降，且接近于NC組水平，各組的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.001）；而對于AST，各實(shí)驗(yàn)組大鼠活力均下降，且接近于NC組水平，除FP-GTP組外，各組與MC組差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.001）。這說明余甘子提取物可預(yù)防肥胖對大鼠肝臟造成的氧化應(yīng)激和臟器損傷，其中以FP組效果最好。然而各組間總蛋白水平并無顯著性差異，說明高脂飲食引起的肝損傷并不嚴(yán)重，并未出現(xiàn)慢性肝實(shí)質(zhì)性損害。

表4 干預(yù)物對大鼠肝臟AKP、AST、ALT、MDA、SOD及總蛋白水平的影響Table 4 Effects of interventions on levels of AKP,AST,ALT,MDA,SOD and total protein levels in rat liver

3 討論

余甘子含有豐富的多糖類、多酚類、鞣質(zhì)類、黃酮類和三萜類等藥用成分，兼具藥用價值高和安全性好的特點(diǎn)[32]。同時作為新食品原料，在食品領(lǐng)域逐漸得到廣泛應(yīng)用。目前，國內(nèi)余甘子的加工產(chǎn)品主要有果脯、蜜餞、腌制品、果酒、果汁、果醬、果干、凍干片、果茶、袋泡茶、余甘粉、含片、喉片、保健三勒漿、口服液、糖果等[33-38]。本研究用余甘子作為干預(yù)物并與茶多酚和左旋肉堿配伍使用，探討其對高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖的預(yù)防作用，為余甘子保健功能的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

本研究通過高脂飼料建立大鼠預(yù)防肥胖模型，并分別使用余甘子、余甘子與茶多酚配伍、余甘子與左旋肉堿配伍對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行干預(yù)，以研究余甘子的預(yù)防肥胖功效。對MC組給予高脂飼料喂養(yǎng)7 周后，其體內(nèi)TC、TG、LDL-C水平，體質(zhì)量、內(nèi)臟脂肪質(zhì)量及其系數(shù)均顯著高于NC組，HDL-C水平低于NC組，這與肥胖患者血脂水平改變情況[39-41]相同，說明高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖成功。

研究還發(fā)現(xiàn)，7 周的灌胃實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠均正常生長，精神狀態(tài)、行為活動、攝食攝水、糞便、尿液以及各腔道分泌物等均未見明顯異常，說明僅使用余甘子干預(yù)或與茶多酚或左旋肉堿配伍使用均不會對大鼠生長產(chǎn)生任何副作用。與MC組相比，在余甘子的調(diào)節(jié)作用下，F(xiàn)P組大鼠體質(zhì)量顯著下降，腎周脂肪和睪周脂肪含量也顯著降低，血清中TC、TG、LDL-C、瘦素、抵抗素水平顯著降低，HDL-C、脂聯(lián)素水平升高；肝臟內(nèi)TC、TG、LDL-C水平下降，HDL-C水平上升。說明余甘子干預(yù)能夠改善高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠血脂紊亂的現(xiàn)象，影響脂代謝相關(guān)指標(biāo)。AMPK信號通路可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、氧化還原平衡、線粒體自噬等，外周組織中的AMPK的激活可以抑制脂質(zhì)的合成[42-43]。AMPK是由α、β、γ亞基組成的三聚體，α亞基包括α1和α2亞型。AMPKα-1廣泛存在于人類各組織器官中，而AMPKα-2在骨骼肌、心臟和肝臟等臟器中表達(dá)較高。此次研究也發(fā)現(xiàn)了經(jīng)過余甘子干預(yù)的肥胖大鼠脂肪組織內(nèi)AMPKα-2的表達(dá)顯著上調(diào)，這也證明了余甘子具有抑制大鼠體質(zhì)量增加、調(diào)節(jié)大鼠血脂異常指標(biāo)的作用，并通過AMPK信號通路調(diào)節(jié)能量穩(wěn)態(tài)，改善肥胖大鼠體內(nèi)脂肪堆積的現(xiàn)象，進(jìn)而達(dá)到預(yù)防肥胖功效。同時肝臟內(nèi)AKP、AST、ALT、MDA活力下降，SOD活力上升，說明余甘子提取物可預(yù)防肥胖對大鼠肝臟造成的氧化應(yīng)激和臟器損傷；然而肝臟中TP水平無明顯改變，說明高脂飲食并未造成嚴(yán)重的肝損傷，尚未影響肝臟合成蛋白質(zhì)的能力。

同時，F(xiàn)P-LC組大鼠體質(zhì)量較MC組也有所下降，腎周脂肪和睪周脂肪含量顯著降低，這說明余甘子與左旋肉堿配伍使用調(diào)節(jié)大鼠血脂異常指標(biāo)的作用也十分顯著；但在預(yù)防肥胖功效方面，效果不如僅用余甘子進(jìn)行干預(yù)的FP組。雖然有研究顯示，茶多酚能夠通過調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪吸收和代謝達(dá)到預(yù)防肥胖功效[44-45]，但此次研究結(jié)果顯示，F(xiàn)P-GTP組大鼠體質(zhì)量雖然也低于MC組大鼠，但差異不具顯著性，各項指標(biāo)結(jié)果也顯示余甘子與茶多酚配伍使用不具有預(yù)防肥胖功效。這可能是由于配伍使用后二者存在某種拮抗作用影響了其本身預(yù)防肥胖的效果，亦或是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)干預(yù)時間為7 周，還不足以使FPGTP組大鼠的各項指標(biāo)發(fā)生顯著變化，具體機(jī)制還有待研究。

本次實(shí)驗(yàn)中PC組使用臨床常見減肥藥奧利司他對肥胖大鼠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示其減肥效果十分顯著。奧利司他作為一種脂抑素的衍生產(chǎn)物，通過抑制胃腸道的胰脂肪酶，阻止三酰甘油水解為游離脂肪酸和單酰基甘油酯，減少腸腔黏膜對膳食中脂肪（三酰甘油）的吸收，促使脂肪排除體外[46]。目前已有研究顯示，有些酚類物質(zhì)也可以通過降低消化道對胰脂肪酶的活性抑制脂肪吸收，阻止其進(jìn)去體內(nèi)沉積[47]。余甘子的主要功效成分為酚類物質(zhì)，主要包括沒食子酸鞣質(zhì)類和逆沒食子酸鞣質(zhì)類等鞣質(zhì)類化合物、沒食子酸類衍生物和黏酸類衍生物等酚酸類化合物、槲皮素和山柰酚等黃酮類化合物[48]。因此余甘子預(yù)防肥胖的機(jī)制可能與奧利司他相似，通過酚類物質(zhì)降低消化道對胰脂肪酶的活性達(dá)到預(yù)防肥胖的功效。此外，越來越多的研究證明沒食子酸具有強(qiáng)大的抗肥胖能力[49-50]，能夠減少肥胖人群的脂質(zhì)過度儲存，還能特異性靶向脂肪組織，抑制脂肪的生成。另有人群調(diào)查研究結(jié)果顯示[51]，肥胖人群槲皮素攝入量明顯低于正常人群，高槲皮素攝入水平可降低肥胖風(fēng)險，隨著槲皮素攝入水平的增加，肥胖率具有降低的趨勢。因此余甘子的減肥功效可能與其主要功效成分對脂質(zhì)代謝的影響有關(guān)，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

研究證實(shí)了余甘子通過控制肥胖大鼠TC、TG、LDL-C、瘦素、脂聯(lián)素水平的升高，改善肥胖大鼠的血脂水平，并降低肥胖大鼠的體質(zhì)量、內(nèi)臟脂肪質(zhì)量及其系數(shù)，達(dá)到預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肥胖的效果，且效果優(yōu)于余甘子與茶多酚或左旋肉堿配伍使用。同時研究也證實(shí)了余甘子可以作為綠色、天然、安全、高效的預(yù)防肥胖的食品，為余甘子的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持。