植物油中苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品的制備與評(píng)價(jià)

摘 要：通過制備植物油中苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品，并對(duì)其均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為實(shí)驗(yàn)室制作盲樣和組織能力驗(yàn)證提供技術(shù)指導(dǎo)。以食用植物油為原料，制備2組不同濃度的苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品，每組隨機(jī)抽取10份樣品按照GB 5009.27—2016方法測(cè)定樣品中苯并[α]芘含量；將考核樣品放置在常溫環(huán)境條件下儲(chǔ)存3個(gè)月，采用上述方法測(cè)定儲(chǔ)存前后樣品中苯并[α]芘含量，以評(píng)價(jià)樣品的均勻性和穩(wěn)定性。測(cè)定結(jié)果表明，樣品的均勻性合格，樣品在3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性良好，可用于不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)植物油中苯并[α]芘能力驗(yàn)證。

關(guān)鍵詞：苯并[α]芘；均勻性；穩(wěn)定性；能力驗(yàn)證

Preparation and Evaluation of Proficiency Testing Sample of Benzo[α]pyrene in Plant Oil

CHENG Xiaoqing， PAN Tao， HUANG Zhan， XIE Kun*

（Sichuan Light Industry Research and Design Institute Co.， Ltd.， Chengdu 610084， China）

Abstract： The proficiency testing samples of benzo[α]pyrene in plant oils were prepared and evaluated for homogeneity and stability to provide technical guidance for laboratories to make blind samples and organize proficiency testing. Using edible plant oil as raw material， 2 groups of benzo[α]pyrene proficiency testing samples with different concentrations were prepared， and 10 randomly selected samples from each group were used to determine the benzo[α]pyrene content in the samples in accordance with the method of GB 5009.27—2016; the assessment samples were placed in ambient ambient conditions and stored for 3 months， and the samples before and after the storage were determined by the above method， to evaluate the homogeneity and stability of the samples. The results showed that the homogeneity of the sample was qualified and the stability of the sample was good within 3 months， which can be used for the proficiency testing of benzo[α]pyrene in plant oils in different laboratories.

Keywords： benzo[α]pyrene; uniformity; stability; proficiency testing

苯并[α]芘是一種常見的高活性間接致癌物，循環(huán)使用溫度較高的植物油或者采用高溫烹炸食物等都可能產(chǎn)生苯并[α]芘，對(duì)人體健康有很大威脅。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》（GB 2762—2022）規(guī)定采用GB 5009.27—2016對(duì)食品中苯并[α]芘的含量進(jìn)行測(cè)定，食用油脂及其制品中苯并[α]芘的最大限量為10 μg·kg-1[1]。

通過開展植物油中苯并[α]芘測(cè)定能力驗(yàn)證，對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)食品中苯并[α]芘含量的技術(shù)能力進(jìn)行評(píng)估，可幫助實(shí)驗(yàn)室了解實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的技術(shù)能力和實(shí)驗(yàn)室管理水平，發(fā)現(xiàn)日常檢測(cè)中可能存在的問題，提高檢測(cè)工作質(zhì)量。而能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性是準(zhǔn)確評(píng)價(jià)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的技術(shù)水平的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]，也是檢測(cè)機(jī)構(gòu)評(píng)價(jià)和挑選能力驗(yàn)證項(xiàng)目的重要依據(jù)[3]。因此，組織能力驗(yàn)證的關(guān)鍵是能力驗(yàn)證樣品的制備和對(duì)所制備的能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性的驗(yàn)證[4]。

目前較少見到關(guān)于苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品制備的相關(guān)資料。本文通過制備植物油中苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品，并對(duì)樣品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試，為食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室制備苯并[α]芘質(zhì)控樣和組織開展能力驗(yàn)證提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市購食用植物油，規(guī)格5 kg/桶。

甲苯（C7H8）、乙腈（CH3CN）、正己烷（C6H14）、二氯甲烷（CH2Cl2），均為色譜純，賽孚瑞化工邯鄲有限公司；苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)品（C20H12，CAS號(hào)50-32-8），含量99.80%，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書號(hào)71100，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；苯并[α]芘檢測(cè)專用小柱（分子印跡柱），深圳逗點(diǎn)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20A高效液相色譜儀，日本島津；BSA223S、BT125D電子天平（感量分別為0.01 mg和1 mg），賽多利斯；LC-SPE-24+固相萃取儀，上海力辰邦西儀器科技有限公司；N1-50氮吹濃縮儀，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司。

1.3 樣品制備

（1）濃度選擇。從檢測(cè)技術(shù)和考核關(guān)鍵點(diǎn)角度考慮，本次實(shí)驗(yàn)計(jì)劃制備2組不同濃度的樣品，低濃度組樣品的濃度設(shè)計(jì)為檢測(cè)方法GB 5009.27—2016[5]的3倍定量限左右，高濃度組樣品參考GB 2762—2022[1]中油脂及其制品的限量值要求，濃度設(shè)計(jì)在10 μg·kg-1左右。

（2）制備方法。將食用植物油分裝為2桶，每桶為2 L，分別加入1 mg·mL-1的苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液直至樣品分別達(dá)到設(shè)計(jì)濃度，手動(dòng)振蕩3次，每次10 min，然后放置于室溫條件下磁力攪拌。48 h后采用棕色玻璃樣品瓶進(jìn)行定量分裝（每瓶約25 g），在分裝的過程中一直保持?jǐn)嚢?。為保證樣品的均勻性，每個(gè)濃度水平樣品均由能力驗(yàn)證工作小組成員在實(shí)驗(yàn)室（環(huán)境控制：溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度≤60%RH）進(jìn)行制備和定量分裝，放入玻璃樣品瓶中密封，制備成能力驗(yàn)證樣品。分裝后的樣品，粘貼唯一性編號(hào)，并做好記錄。樣品編號(hào)為“23-QXXX”“23-GXXX”，字母“Q”“G”不用于區(qū)分兩組樣品，每個(gè)樣品標(biāo)識(shí)的“XXX”為3個(gè)隨機(jī)數(shù)字，每個(gè)樣品的標(biāo)識(shí)均具有唯一性。樣品組別僅可通過樣品分配表判斷，實(shí)驗(yàn)室無法從樣品編號(hào)獲得樣品組別信息。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 苯并[α]芘檢測(cè)

樣品中苯并[α]芘含量依據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯并（a）芘的測(cè)定》（GB 5009.27—2016）[5]采用高效液相色譜法測(cè)定。儀器條件：熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)為384 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為406 nm；色譜柱為Shim-pack GIST C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱箱溫度為40 ℃；柱流速為1.0 mL·min-1；流動(dòng)相為乙腈+水（9+1）。

稱取0.4 g（精確到0.001 g）試樣，加入5 mL正己烷，渦旋混合0.5 min，待凈化。采用苯并[α]芘分子印跡柱，依次用5 mL二氯甲烷及5 mL正己烷活化柱子。將待凈化液轉(zhuǎn)移進(jìn)柱子，待液面降至柱床時(shí)，用6 mL正己烷淋洗柱子，棄去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。將凈化液在40 ℃下氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確吸取0.4 mL乙腈渦旋復(fù)溶0.5 min，過微孔濾膜后供液相色譜測(cè)定。分別加0.02 mL濃度為100 ng·mL-1標(biāo)準(zhǔn)使用液到2組樣品中，然后按上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以測(cè)定樣品加標(biāo)回收率。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

1.4.2 樣品均勻性檢驗(yàn)

從制備好的2組不同濃度水平樣品中各隨機(jī)抽取10份樣品用于均勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2次。在短時(shí)間內(nèi)由同一測(cè)試人員使用GB 5009.27—2016的測(cè)試方法，在相同測(cè)試條件下對(duì)樣品的苯并[α]芘含量進(jìn)行檢測(cè)。

依據(jù)《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》（CNAS—GL003：2018）[6]，采用單因子方差統(tǒng)計(jì)分析法，通過F檢驗(yàn)對(duì)2組樣品的濃度水平進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。若F＜自由度為（f1， f2）及給定顯著性水平α（通常為0.05）的臨界值，則表明樣品內(nèi)和樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。

1.4.3 樣品穩(wěn)定性檢驗(yàn)

由于苯并[α]芘為較穩(wěn)定化合物，且實(shí)驗(yàn)期間為高溫天氣，因此將樣品在室溫條件下存放3個(gè)月后測(cè)試其含量變化來驗(yàn)證長(zhǎng)期貯存條件下樣品的穩(wěn)定性。從兩組樣品中各取3瓶樣品放置于室溫條件下3個(gè)月后對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣品在重復(fù)性條件下檢測(cè)2次，驗(yàn)證樣品的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

檢測(cè)結(jié)果采用t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。以均勻性試驗(yàn)所得結(jié)果為參比數(shù)據(jù)，采用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)。當(dāng)t值小于顯著性水平α（0.05）自由度為n1+n2-2的臨界值，則表明2個(gè)平均值之間無顯著性差異，即制備樣品穩(wěn)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)控結(jié)果

苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1，2組質(zhì)控樣品的加標(biāo)回收率分別為85%和87%。

2.2 均勻性檢驗(yàn)

由表1和表2可知，對(duì)2組共20個(gè)樣品的40個(gè)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，樣品1的F值為2.96，樣品2的F值為1.13。根據(jù)自由度及給定顯著性水平α（通常α=0.05），從F表查詢得到臨界值為3.02，2組樣品的F值均＜3.02，說明2組樣品的組內(nèi)和組間不存在顯著性差異，樣品的均勻性符合能力驗(yàn)證的要求。

2.3 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

如表3所示，將室溫存儲(chǔ)3個(gè)月后的2組各3個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果與3個(gè)月前的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，計(jì)算得t值分別為1.319和1.444。當(dāng)顯著性水平α=0.05，自由度為（n1+n2-2）時(shí)，查表得t臨界值為2.063 9，2組樣品的t值均＜2.063 9。穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果表明，樣品存放3個(gè)月后測(cè)得的結(jié)果與3個(gè)月前的檢測(cè)結(jié)果之間不存在顯著性差異，樣品的穩(wěn)定性符合要求。

3 結(jié)論

本研究制備了2組不同濃度的食用油苯并[α]芘能力驗(yàn)證樣品，均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)顯示，2組樣品的均勻性和穩(wěn)定性均滿足能力驗(yàn)證要求，可為各個(gè)實(shí)驗(yàn)室制作盲樣考核和能力驗(yàn)證樣品提供數(shù)據(jù)參考。

參考文獻(xiàn)

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GB 5009.27—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[6]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南：CNAS—GL003：2018[EB/OL].（2020-09-08）[2024-01-08].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2018/03/889121.shtml.

作者簡(jiǎn)介：成曉情（1981—），女，湖北天門人，碩士，工程師。研究方向：食品質(zhì)量安全及檢測(cè)技術(shù)。

通信作者：謝坤（1989—），男，四川成都人，碩士，工程師。研究方向：食品質(zhì)量安全及檢測(cè)技術(shù)。E-mai1：xiekun@sclii.com。