冠心病進(jìn)展相關(guān)基因篩選及冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)

駱金文 劉敏 于燕喬 譚宇 史大卓 馬曉娟

摘要 目的：探索冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因，并預(yù)測(cè)冠心Ⅱ號(hào)方防治冠心病的作用靶點(diǎn)。方法：從基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（GEO）下載急性心肌梗死（AMI）與穩(wěn)定型冠心病（SCAD）病人轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜，通過(guò)差異表達(dá)分析和加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（WGCNA），篩選冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因，并針對(duì)冠心病進(jìn)展相關(guān)基因進(jìn)行基因本體（GO）功能分析與京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析。從中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)下載冠心Ⅱ號(hào)方的有效成分及藥效靶點(diǎn)，與冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因進(jìn)行交集分析，獲得冠心Ⅱ號(hào)方防治冠心病的潛在靶點(diǎn)。結(jié)果：通過(guò)差異表達(dá)分析比較AMI和SCAD轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜，共獲得166個(gè)差異表達(dá)基因（DEGs）。通過(guò)WGCNA獲得與AMI相關(guān)的基因模塊Black。取DEGs與Black模塊的交集，獲得64個(gè)冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因。從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共獲得224個(gè)冠心Ⅱ號(hào)方的藥效靶點(diǎn)，將藥效靶點(diǎn)與冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因取交集，得到冠心Ⅱ號(hào)方防治冠心病的潛在作用靶點(diǎn)，即過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPARG）、單核細(xì)胞分化抗原CD14（CD14）和細(xì)胞色素P4501b1（CYP1B1）。結(jié)論：細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3（SOCS3）、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子相關(guān)蛋白（ECRP）、腫瘤壞死因子受體超家族成員10D（TNFRSF10D）、S100鈣結(jié)蛋白A9（S100A9）等64個(gè)基因可能與冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)，其中，PPARG、CD14、CYP1B1是冠心Ⅱ號(hào)方防治冠心病的潛在作用靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞 急性心肌梗死；穩(wěn)定型冠心病；冠心Ⅱ號(hào)方；轉(zhuǎn)錄組；干預(yù)靶點(diǎn)；基因篩選

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.03.002

Identification of Genes Associated with Progression of Coronary Artery Disease and Prediction of Intervention Targets of Guanxin Ⅱ Formula

LUO Jinwen， LIU Min， YU Yanqiao， TAN Yu， SHI Dazhuo， MA Xiaojuan

National Clinical Research Center for Chinese Medicine Cardiology， Xiyuan Hospital， China Academy of Chinese Medicial Sciences， Beijing 100091， China

Corresponding Author MA Xiaojuan， E-mail： abc_mxj@aliyun.com

Abstract Objective：To explore the genes related to the progression of coronary heart disease and predict the target of Guanxin Ⅱ Formula for prevention and treatment of coronary heart disease.Methods：The transcriptome expression profiles of patients with acute myocardial infarction（AMI） and stable coronary heart disease（SCAD） were downloaded from the comprehensive gene expression database（GEO）.Differential expression analysis and weighted gene co-expression network analysis（WGCNA） were used to obtain genes related to coronary heart disease progression.Gene ontology（GO） function analysis and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG） pathway enrichment analysis were performed for genes related to coronary heart disease progression.The active components and pharmacodynamic targets of Guanxin Ⅱ Formula were downloaded from the Traditional Chinese Medicine System Pharmacology Database and Analysis Platform（TCMSP） database.The genes related to the progression of coronary heart disease were analyzed，and the potential target of Guanxin Ⅱ Formula for prevention and treatment of coronary heart disease were obtained.Results：A total of 166 differentially expressed genes（DEGs） were obtained by differential expression analysis.The gene module Black related to AMI was obtained by WGCNA.The intersection of DEGs and Black modules was used to obtain 64 genes related to coronary disease progression.A total of 224 therapeutic targets of Guanxin Ⅱ Formula were obtained from TCMSP database.The potential targets of Guanxin Ⅱ Formula for prevention and treatment of coronary heart disease were obtained by intersecting therapeutic targets with genes related to the progression of coronary heart disease，including peroxisome proliferator activating receptor（PPARG），monocyte differentiation antigen CD14（CD14） and cytochrome P4501b1（CYP1B1）.Conclusion：Sixty-four genes，including cytokine signal transduction inhibitor 3（SOCS3），eosinophilic cation-associated protein（ECRP），TNFRSF10D and S100A9，might be associated with the progression of coronary heart disease.Among them，PPARG，CD14，and CYP1B1 were potential targets target of Guanxin Ⅱ Formula for prevention and treatment of coronary heart disease.

Keywords acute myocardial infarction; stable coronary artery disease; Guanxin Ⅱ Formula; transcriptome; target for intervention; Identification of genes

基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)面上項(xiàng)目（No.82174214，82074418）

作者單位 1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院心血管病研究中心（北京 100091）；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院西苑醫(yī)院；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院中醫(yī)藥保健研究中心（北京 100091）

通訊作者 馬曉娟，E-mail：abc_mxj@aliyun.com

引用信息 駱金文，劉敏，于燕喬，等.冠心病進(jìn)展相關(guān)基因篩選及冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（3）：393-401.

《中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2021》研究顯示冠心病發(fā)病率和死亡率仍呈逐年上升的趨勢(shì)^［1］。雖然冠心病二級(jí)預(yù)防已取得顯著成效，但冠心病病人血運(yùn)重建后5年不良心血管事件發(fā)生率仍可達(dá)20%^［2］。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或侵蝕，繼發(fā)血栓形成，致冠狀動(dòng)脈管腔狹窄或閉塞，是急性心肌缺血的主要病理機(jī)制。穩(wěn)定性斑塊向不穩(wěn)定性斑塊發(fā)展繼而誘發(fā)冠狀動(dòng)脈血栓形成是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、多因素參與的復(fù)雜病理過(guò)程，涉及血小板活化、內(nèi)皮損傷、凝血-纖溶功能失衡、炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝紊亂等多個(gè)環(huán)節(jié)。因此，探索冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因，對(duì)于開(kāi)展冠心病預(yù)后生物標(biāo)志物研究及冠狀動(dòng)脈血栓形成的機(jī)制研究具有重要意義。

冠心病屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”“真心痛”范疇，心血瘀阻是疾病發(fā)生發(fā)展的核心機(jī)制。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，血瘀證與血液流變性改變、血液黏度增加、微循環(huán)障礙及凝血/纖溶失衡等相關(guān)^［3］。因此，臨床多采用活血化瘀中藥治療冠心病。冠心Ⅱ號(hào)方是治療冠心病血瘀證的代表方，由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香組成。臨床研究已證實(shí)，冠心Ⅱ號(hào)方治療冠心病療效顯著，可明顯增加冠狀動(dòng)脈血流量，降低全血低切黏度，降低血清膽固醇和低密度脂蛋白水平，提高冠心病病人的生活質(zhì)量，改善預(yù)后^［4-5］?！都毙孕募」Ｋ乐形麽t(yī)結(jié)合診療專家共識(shí)》《冠心病穩(wěn)定型心絞痛中醫(yī)診療專家共識(shí)》推薦冠心Ⅱ號(hào)方適用于瘀血內(nèi)阻型者^［6-9］。相關(guān)機(jī)制研究表明，冠心Ⅱ號(hào)方具有保護(hù)血管內(nèi)皮、抑制炎癥反應(yīng)、抑制血小板活化等作用^［10-11］。然而，冠心Ⅱ號(hào)方在冠心病二級(jí)預(yù)防中的作用機(jī)制尚不完全清晰。因此，本研究通過(guò)分析急性心肌梗死（AMI）病人與穩(wěn)定型冠心病（SCAD）病人之間的差異基因，篩選疾病進(jìn)展相關(guān)的基因，并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)冠狀動(dòng)脈血栓事件發(fā)生的作用靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 基于差異表達(dá)分析篩選冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因

從NCBI-GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中下載AMI病人與SCAD病人轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜GSE59867，該數(shù)據(jù)集由Maciejak等提交，采用Affymetrix公司提供的GPL6244基因芯片平臺(tái)，共包含436例外周血單個(gè)核細(xì)胞樣本轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，其中111例為AMI病人入院當(dāng)天采集的外周血樣，46例為SCAD病人的外周血樣。本研究納入157例樣本（AMI 與SCAD）進(jìn)行差異分析和加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（WGCNA），獲得疾病進(jìn)展相關(guān)基因。應(yīng)用R 3.6軟件中“l(fā)imma”包分析AMI和SCAD之間差異表達(dá)基因（DEGs），設(shè)置DEGs的篩選標(biāo)準(zhǔn)為：校正后P＜0.05，且|log₂FC|＞0.5，利用“ggplot2”包繪制DEGs的火山圖。

1.2 基于WGCNA篩選冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因

WGCNA是一種分析基因關(guān)聯(lián)模式的系統(tǒng)生物學(xué)方法，通過(guò)計(jì)算基因之間的相關(guān)系數(shù)，構(gòu)建無(wú)尺度網(wǎng)絡(luò)，尋找協(xié)同表達(dá)的基因模塊，探索基因模塊與臨床表型的關(guān)聯(lián)以及網(wǎng)絡(luò)中的樞紐基因^［12］。本研究利用R 3.6軟件中的“WGCNA”包完成加權(quán)共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，識(shí)別疾病進(jìn)展相關(guān)基因模塊。通過(guò)加權(quán)的相關(guān)系數(shù)計(jì)算基因與基因的相關(guān)性，構(gòu)建表達(dá)譜基因的鄰接矩陣，計(jì)算節(jié)點(diǎn)間的相異度，將鄰接矩陣轉(zhuǎn)換為拓?fù)渚仃?；使用?dòng)態(tài)剪切樹(shù)算法對(duì)基因拓?fù)渚仃囘M(jìn)行聚類，識(shí)別網(wǎng)絡(luò)模塊；通過(guò)Pearson相關(guān)分析計(jì)算模塊與疾病的關(guān)聯(lián)性，識(shí)別與疾病進(jìn)展相關(guān)性最強(qiáng)的基因模塊；最后，通過(guò)計(jì)算模塊顯著性（MS），與模塊內(nèi)的平均基因顯著性（GS），篩選模塊中的關(guān)鍵基因。

1.3 基因本體（GO）功能與京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析

利用R 3.6軟件中“BiocManager”“clusterProfiler”“pathview”等安裝包進(jìn)行GO功能和KEGG通路分析，分別對(duì)DEGs和疾病相關(guān)模塊進(jìn)行功能注釋，探討疾病進(jìn)展相關(guān)基因可能參與的病理環(huán)節(jié)。

1.4 冠心Ⅱ號(hào)方活性成分與藥效靶點(diǎn)的篩選

檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//old.tcmsp-e.com）^［13］收集冠心Ⅱ號(hào)方主要活性成分。根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)屬性，設(shè)置口服生物利用度（OB）＞30%和類藥性（DL）＞0.18，篩選有效活性成分。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得藥效成分潛在的作用靶點(diǎn)，并在UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)將藥物靶點(diǎn)進(jìn)行規(guī)范矯正，獲得與疾病靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因名。

1.5 中藥有效成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

取DEGs與AMI相關(guān)模塊基因的交集基因作為冠心病進(jìn)展相關(guān)基因。利用R 3.6軟件中的“VennDiagram”包，取冠心病進(jìn)展相關(guān)基因與冠心Ⅱ號(hào)方藥效靶點(diǎn)的交集，交集基因能夠提示冠心Ⅱ號(hào)方在冠心病二級(jí)預(yù)防中防治冠狀動(dòng)脈血栓事件發(fā)生的潛在作用靶點(diǎn)。利用Cytoscape 3.8.0軟件將藥物化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)可視化展示。

2 結(jié) 果

2.1 基于差異表達(dá)分析的冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因識(shí)別

根據(jù)DEGs篩選標(biāo)準(zhǔn)，從GSE59867芯片表達(dá)譜中共獲得166個(gè)差異表達(dá)mRNA，其中上調(diào)基因81個(gè)，下調(diào)基因85個(gè)。詳見(jiàn)圖1。差異倍數(shù)較大的基因（log₂FC＞1）包括細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3（SOCS3）、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子相關(guān)蛋白（ECRP）、染色質(zhì)蛋白（HP）、水通道蛋白9（AQP9）。

2.2 基于WGCNA的冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因模塊識(shí)別

利用WGCNA包中的“pickSoftThreshold”函數(shù)篩選軟閾值，無(wú)尺度擬合指數(shù)R²＝0.9時(shí)，選取軟閾值β＝16，構(gòu)建出的網(wǎng)絡(luò)符合無(wú)尺度標(biāo)準(zhǔn)。基于動(dòng)態(tài)剪切樹(shù)的算法，設(shè)置最小模塊的基因數(shù)目為20個(gè)，模塊相似度大于0.75，繪制分層聚類樹(shù)，最終獲得14個(gè)模塊，分別用不同顏色表示，其中Grey模塊代表未被聚集歸類的基因（見(jiàn)圖2）?；赑earson相關(guān)性分析方法，計(jì)算不同模塊與疾病之間的相關(guān)性。詳見(jiàn)圖3。模塊Black（515個(gè)基因）與AMI顯著相關(guān)（r＝0.58，P＜0.05），提示模塊Black可能與冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)。根據(jù)GS值篩選Black模塊中的關(guān)鍵基因，前10個(gè)關(guān)鍵基因分別是腫瘤壞死因子受體超家族成員10D（TNFRSF10D）、脫唾液酸糖蛋白受體2（ASGR2）、極長(zhǎng)鏈?；o酶A脫氫酶（ACADVL）、α-1，3-N-乙酰半乳糖氨基轉(zhuǎn)移酶（GBGT1）、AQP9、肥大細(xì)胞表達(dá)膜蛋白1（MCEMP1）、S100鈣結(jié)合蛋白A9（S100A9）、SOCS3、STAB1、黃素還原酶（BLVRB）。

2.3 DEGs與Black模塊的功能和通路富集分析

對(duì)DEGs進(jìn)行GO和KEGG富集分析，探討其在冠心病疾病進(jìn)展過(guò)程中參與的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)通路。GO富集分析結(jié)果顯示，DEGs顯著富集于碳水化合物結(jié)合（carbohydrate binding）、MHC蛋白復(fù)合物結(jié)合（MHC protein complex binding）、RAGE受體結(jié)合（RAGE receptor binding）、cargo受體激活（cargo receptor activity）等生物學(xué)過(guò)程。KEGG通路富集分析顯示，DEGs主要富集于抗原處理和呈遞（antigen processing and presentation）、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（natural killer cell mediated cytotoxicity）、造血細(xì)胞譜系（hematopoietic cell lineage）等通路。詳見(jiàn)圖4、圖5。這些結(jié)果表明DEGs主要通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，參與冠心病疾病進(jìn)展。

對(duì)Black模塊進(jìn)行功能注釋和通路富集分析，Black模塊主要富集于Toll樣受體結(jié)合（Toll-like receptor binding）、脂肽結(jié)合（lipopeptide binding）、超氧化物生成NADPH氧化酶活化劑活性（superoxide generating NADPH oxidase activator activity）、低密度脂蛋白顆粒受體活性（low-density lipoprotein particle receptor activity）等生物學(xué)過(guò)程。KEGG富集分析結(jié)果顯示，Black模塊富集于中性粒細(xì)胞胞外陷阱形成（neutrophil extracellular trap formation）、FcγR介導(dǎo)的吞噬作用（Fc gamma R-mediated phagocytosis）、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化（lipid and atherosclerosis）、B細(xì)胞受體信號(hào)通路（B cell receptor signaling pathway）、糖解與糖代謝合成（glycolysis/gluconeogenesis）等信號(hào)通路。詳見(jiàn)圖6、圖7。這些結(jié)果表明Black模塊主要通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、糖脂代謝、氧化應(yīng)激等參與冠心病疾病進(jìn)程。

2.4 冠心Ⅱ號(hào)方活性成分與藥物靶點(diǎn)的篩選

從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得丹參活性成分65種、川芎活性成分7種、赤芍活性成分29種、紅花活性成分22種、降香活性成分37種。獲得丹參作用靶點(diǎn)140個(gè)、川芎作用靶點(diǎn)30個(gè)、赤芍作用靶點(diǎn)102個(gè)、紅花作用靶點(diǎn)222個(gè)、降香作用靶點(diǎn)84個(gè)，經(jīng)合并、去重、UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)規(guī)范后，共獲得冠心Ⅱ號(hào)方的藥效靶點(diǎn)224個(gè)。

2.5 冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)疾病進(jìn)展的潛在作用靶點(diǎn)

將DEGs與Black模塊取交集，獲得64個(gè)交集基因，這些基因可能在冠心病疾病進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用（見(jiàn)圖8）。將冠心Ⅱ號(hào)方藥效靶點(diǎn)與疾病進(jìn)展關(guān)鍵基因取交集，獲得冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)冠心病進(jìn)展的潛在作用靶點(diǎn)。冠心Ⅱ號(hào)方可能通過(guò)作用于過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPARG）、單核細(xì)胞分化抗原CD14（CD14）和細(xì)胞色素P4501b1（CYP1B1）在冠心病二級(jí)預(yù)防中發(fā)揮作用，其中，作用于PPARG的中藥成分最多。詳見(jiàn)圖9。

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂、血栓形成是急性心血管事件的主要病理基礎(chǔ)，因此，穩(wěn)固斑塊、預(yù)防血栓形成是冠心病二級(jí)預(yù)防的關(guān)鍵。易損斑塊與冠狀動(dòng)脈血栓形成涉及血小板活化、內(nèi)皮損傷、凝血-纖溶功能失衡、炎癥反應(yīng)等多個(gè)病理環(huán)節(jié)，然而調(diào)控的關(guān)鍵基因尚不明確。本研究通過(guò)分析AMI病人和SCAD病人外周血單個(gè)核細(xì)胞的基因表達(dá)譜，篩選出與冠心病進(jìn)展相關(guān)的基因，這些基因可能參與易損斑塊破裂或侵蝕及繼發(fā)血栓形成，是急性冠狀動(dòng)脈血栓事件的潛在干預(yù)靶點(diǎn)。

本研究通過(guò)對(duì)GSE59867數(shù)據(jù)集中AMI病人和SCAD病人轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜進(jìn)行差異表達(dá)分析和WGCNA，篩選獲得64個(gè)冠心病進(jìn)展相關(guān)的關(guān)鍵基因，其中，SOCS3、ECRP、AQP9差異倍數(shù)較大，ASGR2、MCEMP1、S100A9、STAB1、BLVRB等是Black模塊中的關(guān)鍵基因，顯著與AMI相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與SCAD病人相比，AMI病人SOCS3基因表達(dá)水平顯著上調(diào)，這與既往的研究結(jié)果^［14］一致。SOCS3主要通過(guò)抑制酪氨酸蛋白激酶（JAK）-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT3），參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡的負(fù)反饋調(diào)節(jié)^［15-16］。劉金平等^［17］發(fā)現(xiàn)上調(diào)血管平滑肌細(xì)胞SOCS3的表達(dá)可抑制STAT3的激活與磷酸化，以降低白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）及細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等細(xì)胞因子的表達(dá)水平，抑制炎癥反應(yīng)。AMI病人體內(nèi)SOCS3基因表達(dá)升高是急性期炎癥反應(yīng)增強(qiáng)的結(jié)果，SOCS3可作為冠心病進(jìn)展相關(guān)的候選炎癥標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。ECRP是嗜酸性粒細(xì)胞活化后所釋放的強(qiáng)堿性顆粒蛋白，能夠反映嗜酸性粒細(xì)胞的活化程度，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，可促進(jìn)TNF-α的表達(dá)，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡^［18］。Jiang等^［19］在AMI病人的冠狀動(dòng)脈血栓中發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，表明嗜酸性粒細(xì)胞的活化與血栓形成有關(guān)。此外，研究發(fā)現(xiàn)，ECRP表達(dá)水平與冠心病病人不良心血管事件風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，可作為冠心病預(yù)后的生物標(biāo)志物^［20-22］。然而，關(guān)于ECRP在易損斑塊和血栓形成中的作用機(jī)制研究較少，成為未來(lái)進(jìn)一步研究的方向。ASGR2的生物功能主要與代謝相關(guān)，參與脂肪酸氧化、脂類合成與代謝、蛋白質(zhì)糖基化等過(guò)程。S100A9是一種鈣結(jié)合蛋白，主要在髓樣細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)，也可在炎癥、氧化應(yīng)激等刺激后的非髓系細(xì)胞中表達(dá)。在細(xì)胞內(nèi)，S100A9通過(guò)與Ca^2＋結(jié)合調(diào)節(jié)p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，引起白細(xì)胞遷移^［23］。在細(xì)胞外，S100A9對(duì)炎性細(xì)胞具有很強(qiáng)的趨化活性，通過(guò)增強(qiáng)粒細(xì)胞集落刺激因子的合成，促進(jìn)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞募集^［24］。S100A9還通過(guò)上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子表達(dá)促進(jìn)單核/巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附，通過(guò)增強(qiáng)血管通透性促進(jìn)單核/巨噬細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移^［25-26］。關(guān)于MCEMP1、STAB1和BLVRB在冠心病進(jìn)展中作用機(jī)制的研究，文獻(xiàn)報(bào)道較少，或可成為未來(lái)研究的新方向。

冠心Ⅱ號(hào)方是郭士魁名老中醫(yī)和陳可冀院士等研制的治療冠心病的代表方藥，全方由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香五味藥配伍組成，共奏活血化瘀、理氣通絡(luò)之效。高會(huì)麗等^［27］研究發(fā)現(xiàn)，冠心Ⅱ號(hào)可減少犬急性心肌梗死范圍、增加冠狀動(dòng)脈血流量，具有抗心肌缺血的作用。Zhao等^［28］發(fā)現(xiàn)冠心Ⅱ號(hào)方可抑制大鼠缺血/再灌注模型心肌細(xì)胞凋亡，具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。張梅等^［29］發(fā)現(xiàn)冠心Ⅱ號(hào)可降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清總膽固醇、TNF-α、血栓素B₂（TXB₂）等因子水平。此外，冠心Ⅱ號(hào)還具有抗氧化、抗血小板聚集等作用^［11］。然而，冠心Ⅱ號(hào)方的基礎(chǔ)研究主要是藥效研究，相關(guān)作用機(jī)制研究較少，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)展方面。因此，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，預(yù)測(cè)冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)冠心病疾病進(jìn)展的作用靶點(diǎn)，潛在的作用靶點(diǎn)包括PPARG、CD14和CYP1B1。PPARG是調(diào)控炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子，具有抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)控糖脂代謝等作用^［30-32］。敲除小鼠體內(nèi)PPARG基因后，白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子表達(dá)顯著上調(diào)^［33］。既往研究顯示，PPARG通過(guò)抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）和c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的活性，降低下游炎性因子的釋放，從而緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)^［34-35］。CD14屬于細(xì)胞表面糖蛋白，是脂多糖（LPS）的重要受體，主要由單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。CD14在人體內(nèi)有兩種存在形式：一種是位于單核細(xì)胞表面的膜結(jié)合型CD14，通過(guò)與LPS結(jié)合刺激單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1、IL-6等致炎因子^［36］；另一種是游離于血清中的可溶性CD14。朱京偉等^［37］發(fā)現(xiàn)AMI病人血清可溶性CD14水平顯著高于不穩(wěn)定型心絞痛病人，而不穩(wěn)定型心絞痛病人CD14水平又高于穩(wěn)定型心絞痛病人，提示CD14與冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)，血清可溶性CD14水平的高低可反映冠心病的病變程度。CYP1B1是一種細(xì)胞色素P450單加氧酶，參與各種內(nèi)源性底物的代謝，包括脂肪酸、類固醇激素和維生素^［38］。趙麗華等^［39］發(fā)現(xiàn)，CYP1B1基因敲除可緩解小鼠高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制炎性因子的表達(dá)，改善胰島素抵抗。炎癥反應(yīng)貫穿動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展，炎癥反應(yīng)加劇是穩(wěn)定性斑塊向不穩(wěn)定性斑塊發(fā)展的啟動(dòng)機(jī)制。結(jié)合文獻(xiàn)分析，本研究推測(cè)冠心Ⅱ號(hào)可能通過(guò)作用于PPARγ、CD14和CYP1B1抑制炎癥反應(yīng)，從而在冠心病二級(jí)預(yù)防中發(fā)揮作用。

4 小 結(jié)

綜上所述，本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析結(jié)合既往文獻(xiàn)報(bào)道，篩選獲得冠心病疾病進(jìn)展相關(guān)基因，這些基因主要與炎癥反應(yīng)、糖脂代謝有關(guān)，為易損斑塊、冠狀動(dòng)脈血栓形成相關(guān)的機(jī)制研究提供新思路。本研究還通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析獲得冠心Ⅱ號(hào)方干預(yù)冠心病疾病進(jìn)展的潛在靶點(diǎn)，為冠心Ⅱ號(hào)方相關(guān)分子機(jī)制研究指出了新方向。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告編寫(xiě)組.中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2021概要［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2022，37（6）：553-578.

［2］ STONE G W，KAPPETEIN A P，SABIK J F，et al.Five-year outcomes after PCI or CABG for left main coronary disease［J］.N Engl J Med，2019，381（19）：1820-1830.

［3］ 陳可冀，史大卓，徐浩，等.冠心病穩(wěn)定期因毒致病的辨證診斷量化標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，31（3）：313-314.

［4］ 徐睿，黃熙，李源，等.冠心Ⅱ號(hào)治療冠心病心絞痛的臨床觀察［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，24（4）：17-19.

［5］ 甘洪全，黃熙，田新橋，等.冠心Ⅱ號(hào)湯劑對(duì)健康男性冠脈血流和心臟收縮舒張功能的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，24（9）：785-789.

［6］ 黃慧明，張濤.精制冠心片在不穩(wěn)定性心絞痛治療中的應(yīng)用價(jià)值及對(duì)miR-143及miR-145表達(dá)的影響分析［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020，38（3）：81-83;87.

［7］ 李黔云，萬(wàn)啟南，段艷蕊.冠心Ⅱ號(hào)方治療冠心病穩(wěn)定性心絞痛臨床觀察［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2015，36（8）：30-31.

［8］ 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)心血管病分會(huì).冠心病穩(wěn)定型心絞痛中醫(yī)診療指南［J］.中醫(yī)雜志，2019，60（21）：1880-1890.

［9］ 陳可冀，張敏州，霍勇.急性心肌梗死中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識(shí)［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，34（4）：389-395.

［10］ 黃熙，趙健蕾，張紅敏，等.冠心二號(hào)方劑對(duì)健康人冠脈血流量的影響以及對(duì)大鼠心肌缺血再灌注模型抗心肌細(xì)胞凋亡的作用［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（5）：206.

［11］ 張金艷，李貽奎，趙樂(lè)，等.冠心Ⅱ號(hào)不同組分配伍對(duì)體外血栓形成、血小板聚集和鎮(zhèn)痛作用的影響［J］.中藥藥理與臨床，2010，26（1）：1-3.

［12］ LANGFELDER P，HORVATH S.WGCNA：an R package for weighted correlation network analysis［J］.BMC Bioinformatics，2008，9：559-569.

［13］ RU J L，LI P，WANG J N，et al.TCMSP：a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines［J］.Journal of Cheminformatics，2014，6：13.

［14］ MENG H，WANG X，RUAN J，et al.High expression levels of the SOCS3 gene are associated with acute myocardial infarction［J］.Genet Test Mol Biomarkers，2020，24（7）：443-450.

［15］ SOBAH M L，LIONGUE C，WARD A C.SOCS proteins in immunity，inflammatory diseases，and immune-related cancer［J］.Front Med，2021，8：727987.

［16］ XU G，YANG F，DING C L，et al.MiR-221 accentuates IFN s anti-HCV effect by downregulating SOCS1 and SOCS3［J］.Virology，2014，462-463：343-350.

［17］ 劉金平，向水，董念國(guó)，等.細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及其機(jī)制［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2012，（4）：581-584.

［18］ CHANG K C，LO C W，F(xiàn)AN T C，et al.TNF-alpha mediates eosinophil cationic protein-induced apoptosis in BEAS-2B cells［J］.BMC Cell Biology，2010，11：6.

［19］ JIANG P，WANG D Z，REN Y L，et al.Significance of eosinophil accumulation in the thrombus and decrease in peripheral blood in patients with acute coronary syndrome［J］.Coronary Artery Disease，2015，26（2）：101-106.

［20］ FRACASSI F，NICCOLI G，SCALONE G，et al.Prognostic role of multiple biomarkers in stable patients undergoing fractional flow reserve-guided coronary angioplasty［J］.J Cardiovasc Med，2016，17（9）：687-693.

［21］ NICCOLI G，CALVIERI C，F(xiàn)LEGO D，et al.Allergic inflammation is associated with coronary instability and a worse clinical outcome after acute myocardial infarction［J］.Circ Cardiovasc Interv，2015，8（8）：e002554.

［22］ NICCOLI G，SCHIAVINO D，BELLONI F，et al.Pre-intervention eosinophil cationic protein serum levels predict clinical outcomes following implantation of drug-eluting stents［J］.European Heart Journal，2009，30（11）：1340-1347.

［23］ ZHOU Y，HANN J，SCHENTEN V，et al.Role of S100A8/A9 for cytokine secretion，revealed in neutrophils derived from ER-Hoxb8 progenitors［J］.International Journal of Molecular Sciences，2021，22（16）：8845.

［24］ DE FILIPPO K，NEILL D R，MATHIES M，et al.A new protective role for S100A9 in regulation of neutrophil recruitment during invasive pneumococcal pneumonia［J］.FASEB J，2014，28（8）：3600-3608.

［25］ PRUENSTER M，KURZ A R M，CHUNG K J，et al.Extracellular MRP8/14 is a regulator of β₂integrin-dependent neutrophil slow rolling and adhesion［J］.Nature Communications，2015，6：6915.

［26］ ALTWEGG L A，NEIDHART M，HERSBERGER M，et al.Myeloid-related protein 8/14 complex is released by monocytes and granulocytes at the site of coronary occlusion：a novel，early，and sensitive marker of acute coronary syndromes［J］.European Heart Journal，2007，28（8）：941-948.

［27］ 高會(huì)麗，李貽奎，仝燕，等.冠心Ⅱ號(hào)系列組方對(duì)犬急性心肌缺血保護(hù)作用的比較研究［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（5）：1-4.

［28］ ZHAO J，HUANG X，TANG W，et al.Effect of orirntal herbal prescription Guan-Xin-Er-Hao on cornory flow in healthy volunteers and anti-apoptosis on myocardial ischemia-reperfusion in rat models［J］.Phytother Res，2007，21（10）：926-931.

［29］ 張梅，溫進(jìn)坤，陳興，等.冠心Ⅱ號(hào)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂、TNF-α、NO及TXA₂/PGI₂影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2008，15（1）：20-21;26.

［30］ JOSEPHINE S R，DAVID H I，JENS L，et al.A role of peroxisome proliferator-activated receptorγ in non-alcoholic fatty liver disease［J］.Basic Clin Pharmacol，2019，124（5）：528-537.

［31］ JABBARI P，SADEGHALVAD M，REZAEI N.An inflammatory triangle in sarcoidosis：PPAR-γ，immune microenvironment，and inflammation［J］.Expert Opin Biol Ther，2021，21（11）：1451-1459.

［32］ YAO X，JIANG Q，DING W，et al.Interleukin 4 inhibits high mobility group box^-1 protein-mediated NLRP3 inflflammasome formation by activating peroxisome proliferator-activated receptor-γ in astrocytes［J］.Biochem Bioph Res Co，2019，509（2）：624-631.

［33］ 郭方圓.PPARγ在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用及其機(jī)制研究［D］.武漢：華中科技大學(xué)，2015.

［34］ ZHANG Y，HUANG X，ZHOU J，et al.PPARγ provides antiinflammatory and protective effects in intrahepatic cholestasis of pregnancy through NF-κB pathway［J］.Biochem Bioph Res Co，2018，504（4）：834-842.

［35］ PRINZ E，AVIRAM S，ARONHEIM A.WDR62 mediates TNFα-dependent JNK activation via TRAF2-MLK3 axis［J］.Mol Biol Cell，2018，29（20）：2470-2480.

［36］ WON Y，YANG J I，PARK S，et al.Lipopolysaccharide binding protein and CD14，cofactors of Toll-like receptors，are essential for low-grade inflammation-induced exacerbation of cartilage damage in mouse models of posttraumatic osteoarthritis［J］.Arthritis Rheumatol，2021，73（8）：1451-1460.

［37］ 朱京偉，劉成玉.冠心病病人血清sCD14和hs-CRP變化及其臨床意義［J］.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，44（2）：156-157;161.

［38］ KWON Y J，SHIN S，CHUN Y J.Biological roles of cytochrome P450 1A1，1A2，and 1B1 enzymes［J］.Arch Pharm Res，2021，44（1）：63-83.

［39］ 趙麗華，劉小聰，馮婧，等.CYP1B1在成年肥胖小鼠巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)及組織炎癥中的作用［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，34（3）：242-244;249.

（收稿日期：2022-11-02）

（本文編輯 王雅潔）