復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚生長、消化和血液生化指標(biāo)的影響

■ 國洺達(dá) 王 洋 李佳昕 朱國霞 楊 廣 白東清

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

大口黑鱸（Micropterus salmoides）是一種淡水肉食性魚類[1]，因其適應(yīng)性強(qiáng)、生長快、肉質(zhì)美，被引入中國后，產(chǎn)量日益增長，被譽(yù)為“第五大家魚[2]”。國內(nèi)外研究主要集中在大口黑鱸養(yǎng)殖技術(shù)、魚病治理、繁殖孵化和生長發(fā)育等方面，養(yǎng)殖中發(fā)現(xiàn)，幼魚攝食配合飼料易導(dǎo)致消化不好、發(fā)育停滯、飼料利用率過低、死亡率高、水環(huán)境污染嚴(yán)重、養(yǎng)殖成本高等問題[3]。為此，研究開發(fā)大口黑鱸幼魚用促消化的中草藥飼料意義重大。中草藥歷史悠久，作為一種天然物質(zhì)，具有助消化，促生長，防病治病的功效，種類繁多、毒副作用小等特點(diǎn)，被廣泛用于人類和動(dòng)物疾病的防治[4-7]。有研究發(fā)現(xiàn)，山楂、神曲、半夏在人類上具有促進(jìn)消化酶的分泌，提高抗氧化能力，增長食欲，促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，保護(hù)胃黏膜等作用，并且目前也已應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖中[8-10]。李小梅等[11]研究表明飼料中加入山楂、廣藿香等中草藥能夠增強(qiáng)草魚免疫力。薛繼鵬[12]飼喂皺紋盤鮑神曲、山楂等中草藥80 d，發(fā)現(xiàn)降低了餌料系數(shù)，且提高了免疫能力。關(guān)于半夏在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究相對較少，僅有少部分學(xué)者使用半夏進(jìn)行抑菌方面的研究，效果均不明顯。目前關(guān)于促消化中草藥在大口黑鱸養(yǎng)殖中的作用鮮有報(bào)道[13]?；诖?，在本實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上，選擇更小規(guī)格大口黑鱸幼魚為研究對象，探討促消化用復(fù)方中草藥（山楂、神曲、半夏）對大口黑鱸幼魚生能、消化及血液生化指標(biāo)的影響，為循環(huán)水條件下大口黑鱸幼魚健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)用750 尾健康大口黑鱸水花取自天津藍(lán)科水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，在水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心養(yǎng)殖、馴化20 d 后測量體重和體長，初始體質(zhì)量為（0.61±0.01） g，初始體長為（3.14±0.02） cm。

1.1.2 試驗(yàn)飼料

購于江蘇銘治生物科技有限公司的苗生元（微囊料，營養(yǎng)成分含量：水分7.04%、粗灰分12.35%、粗脂肪17.88%、粗蛋白56.67%）用于暫養(yǎng)期間飼料，正式試驗(yàn)使用通威股份有限公司的通威開口樂4 段特種魚苗種膨化配合飼料（粒徑0.3 mm，成分含量：水分6.18%、粗灰分11.63%、粗脂肪11.61%、粗蛋白51.12%）投喂6 周，第7 周開始使用通威特種魚苗專用飼料（粒徑1 mm，營養(yǎng)成分含量：水分6.05%、粗灰分12.80%、粗脂肪16.02%、粗蛋白56.81%）。

山楂、神曲、半夏均購自九州大藥房，將三種中草藥分別粉碎后過80 目篩，按6：2：2 比例混勻，參考詹富強(qiáng)[14]的中草藥方法對其進(jìn)行煎煮，待藥液冷卻后按照2.5‰、5‰、7.5‰、10.0‰噴灑到配合飼料表面，分別制成4 種不同飼料，現(xiàn)用現(xiàn)做，不噴灑組作為對照組，設(shè)定為中草藥含量為0。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

采用循環(huán)水系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖，將試驗(yàn)魚隨機(jī)分為5組，養(yǎng)殖于60 cm×40 cm×35 cm 的水族缸中，分別投喂0、2.5‰、5‰、7.5‰、10.0‰復(fù)方中草藥飼料，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50 尾魚。試驗(yàn)期間24 h 連續(xù)充氣，水溫為25～28 ℃，溶解氧≥6.0 mg/L，pH 為6.8～7.5，氨氮＜0.2 mg/L，每日投喂3 次（08：00、13：00、18：00），采用表觀飽食法。每2 d換一次水，試驗(yàn)周期為8周。

1.2.2 生長指標(biāo)的測定

試驗(yàn)開始前和試驗(yàn)結(jié)束后測量每尾魚的體重、體長用于計(jì)算增重率、攝食率、特定生長率、飼料系數(shù)、臟體比、肥滿度。

增重率（WGR，%）=100×（W2-W0）/W0

攝食率（FR，%/d）=100×W1/[T×（W2+W0）/2]

特定生長率（SGR，%/d）=100×（lnW2－lnW0）/T

飼料系數(shù)（FCR）=W1/（W2-W0）

臟體指數(shù)（VSI，%）=100×Wa/Wb

肥滿度（CF，%）=100×W2/L3

式中：W0——魚初體質(zhì)量（g）；

W2——魚末體質(zhì)量（g）；

T——投喂天數(shù)（d）；

W1——平均攝食飼料總質(zhì)量（g）；

Wa——魚末內(nèi)臟質(zhì)量（g）；

Wb——魚末體質(zhì)量（g）；

L——魚末體長（cm）。

1.2.3 樣品采集

養(yǎng)殖8 周后禁食12 h 采樣，從每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)選取20 尾魚用MS-222 進(jìn)行快速麻醉，稱重，測量體長后，用一次性注射器從尾部靜脈采血置于離心管中，在4 ℃冰箱中靜置2 h 后，在4 ℃下4 000 r/min 離心10 min 收集血清，用于測定生化指標(biāo)。后在冰盤上剖開腹腔，取出胃、幽門盲囊、肝胰臟和腸道，用預(yù)冷生理鹽水清洗內(nèi)外，迅速塑封袋，凍存于-80 ℃冰箱內(nèi)備用。

1.2.4 樣品測定

淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶及血液中生化及抗氧化指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所有限公司生產(chǎn)試劑盒進(jìn)行測定。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

結(jié)果采用SPSS 26 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用單因素ANOVA 檢驗(yàn)，選擇LSD 和Duncan’s 法多重比較，P＜0.05 表示差異顯著，數(shù)據(jù)結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”來表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚生長性能的影響

由表1 可知，飼料中不同水平復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚的增重率、特定生長率、攝食率、飼料系數(shù)均有不同程度影響，但對臟體指數(shù)和肥滿度影響不顯著（P＞0.05）。

表1 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚生長性能的影響

5‰組增重率和特定生長率最高，比對照組和10.0‰ 組分別提高了10.0%、7.0%（P＜0.05），但與2.5‰組和7.5%組差別不顯著（P＞0.05）；2.5‰組和5.0‰組的攝食率顯著低于對照組和10.0‰組（P＜0.05），與7.5‰組差別不顯著（P＞0.05）；2.5‰和5.0‰組的飼料系數(shù)最低，比對照組和10.0‰組均降低了3.0%（P＜0.05）。可見從生長和飼料利用方面，5.0‰復(fù)方中草藥添加水平效果較高。

2.2 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚消化系統(tǒng)消化酶活性的影響

飼料中不同水平復(fù)方中草藥會(huì)顯著影響大口黑鱸消化系統(tǒng)消化酶活性，且影響大小與消化酶種類及不同組織有關(guān)，結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚消化酶活性的影響

由表2可知，中草藥對胃中α-淀粉酶活性影響不顯著（P＞0.05），但對幽門盲囊、腸道以及肝胰臟影響顯著，其中，2.5‰組幽門盲囊中α-淀粉酶活性比對照組提高了10%（P＜0.05）；5‰組腸道α-淀粉酶活性最高，顯著高于兩個(gè)高水平組（P＜0.05）；7.5‰組肝胰臟α-淀粉酶活性最高，比對照組提高了60%（P＜0.05）。

復(fù)方中草藥顯著提高胃中脂肪酶活性，2.5‰～10.0‰分別比對照組提高110%、172%、94%、72%（P＜0.05）；7.5‰組幽門盲囊中脂肪酶活性最高，比對照組提高了12%（P＜0.05）；復(fù)方中草藥顯著提高腸道中脂肪酶活性，分別比對照組提高了110%、295%、452%、316%（P＜0.05），其中7.5‰組腸道中酶活性最高；2.5‰～7.5‰肝胰臟中脂肪酶活性顯著高于對照和最高水平組（P＜0.05），其中5.0‰組最高，比對照組提高了93%。

5.0‰組胃中蛋白酶活性最高，顯著高于其余各組，比對照組提高了20%（P＜0.05）；而復(fù)方中草藥對幼魚幽門盲囊蛋白酶活性影響不顯著（P＞0.05）；5.0‰～7.5‰組腸道中酶活性分別比對照組提高了70%、59%（P＜0.05），而10.0‰組酶活性顯著降低（P＜0.05）；10。0‰組肝胰臟中蛋白酶活性最高，顯著高于兩個(gè)低水平組，其中比對照組提高了50%（P＜0.05）。

同時(shí)可以看出，不同組織酶活性大小不同，α 淀粉酶活性肝胰臟＞幽門盲囊＞胃＞腸道，脂肪酶和蛋白酶也是以肝胰臟為最高。不同水平中草藥可以影響不同組織中酶活性的分泌。

可見，從促消化角度考慮，復(fù)方中草藥添加水平以5.0‰為宜。

2.3 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚血液抗氧化能力的影響

由表3 可知，一定水平復(fù)方中草藥會(huì)顯著提高大口黑鱸幼魚血液抗氧化能力（P＜0.05）。與對照組相比，5.0‰組幼魚血液中的總抗氧化能力（T-AOC）提高了12%（P＜0.05），70.5‰和5.0‰組的超氧化物歧化酶（SOD）活性分別提高了14%和13%（P＜0.05），7.5‰和10.0‰組谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性分別提高了23%和12%（P＜0.05）；而中草藥添加組均可以顯著降低血液中丙二醛（MDA）含量，其中2.5‰MDA 含量最低，比對照組降低了157%（P＜0.05）?？梢?，復(fù)方中草藥添加組均可有效提高大口黑鱸幼魚抗氧化能力。

表3 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚血液生化及抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚血液生化指標(biāo)的影響

由表3 可知，飼料中一定水平復(fù)方中草藥會(huì)顯著影響大口黑鱸幼魚血液中總蛋白、葡萄糖、總膽固醇、三酰甘油以及低密度脂蛋白膽固醇的含量（P＜0.05）。與對照相比，5.0‰組總蛋白含量顯著降低，只與7.5‰組差別不顯著（P＞0.05）；2.5‰和5.0‰組葡萄糖含量顯著升高，分別比對照組提高了66%、169%（P＜0.05）；5.0‰和7.5‰組血液的總膽固醇含量顯著降低，分別比對照組降低了65%、51%（P＜0.05）；5.0‰和7.5‰三酰甘油含量顯著降低，分別比對照組降低了30%、45%（P＜0.05）；2.5‰和5‰組低密度脂蛋白膽固醇含量分別比對照組降低了51%、43%(P＜0.05)。可見從脂類代謝水平上來看，5.0‰復(fù)方中草藥具有較好降脂效果。

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚生長的影響

中草藥能夠有效促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物對營養(yǎng)物質(zhì)的利用率和機(jī)體代謝以及生長發(fā)育[15]。在本試驗(yàn)中，5.0‰復(fù)方中草藥時(shí)能夠有效促進(jìn)大口黑鱸的生長和飼料利用。這與國內(nèi)的一些關(guān)于復(fù)方中草藥在水產(chǎn)動(dòng)物上的究結(jié)果相似。王晨穎[16]發(fā)現(xiàn)，飼料中加入8‰神曲、金銀花等復(fù)方中草藥可顯著提高花鱸增重率和特定生長率，且顯著降低了飼料系數(shù)。楊旭紅等[17]發(fā)現(xiàn)，飼料中加入0.75%敗醬、羅摩等復(fù)方中草劑可顯著提高美國牛蛙終末體重。但曲木等[18]發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)第14天和第21天，飼料中野菊花、黨參和黃芪顯著降低黃顙魚增重率。推測原因可能與中草藥種類、配方、給藥方式、水產(chǎn)動(dòng)物種類等因素有關(guān)。

3.2 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚消化酶活性的影響

消化酶的活性影響水產(chǎn)動(dòng)物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和利用的情況[19]。本試驗(yàn)中，與對照組相比，飼料中復(fù)方中草藥一定程度上提高了大口黑鱸的消化酶活性，但不同組織、不同消化酶所受影響不同。冒樹泉等[20]發(fā)現(xiàn)，飼喂黃芪和黃柏可顯著提高大鱗副泥鰍腸道與肝胰腺中脂肪酶的活力。劉玉廷[21]發(fā)現(xiàn)，10.0‰黃芩、百合等復(fù)方中草藥投喂泥鰍可使腸道中胃蛋白酶、淀粉酶活性極顯著提高。解文麗[22]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加魚腥草、白頭翁等中草藥對花鰻鱺腸道蛋白酶活性無顯著影響，這些結(jié)論均與本試驗(yàn)結(jié)果相似。分析其原因可能與山楂作用有關(guān)，山楂可消食開胃，增加消化酶的分泌，加強(qiáng)脂肪酶和蛋白酶的活性[23]。

3.3 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚抗氧化能力的影響

水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的酶類抗氧化系統(tǒng)包括SOD、T-AOC、MDA以及GSH-Px等，SOD和GSH-Px可共同作用減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)引起的細(xì)胞損傷，MDA 是水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)后的主要組成成分，對魚體有害[24-26]。本試驗(yàn)中，復(fù)方中草藥可以有效提高大口黑鱸幼魚抗氧化能力，其中5.0‰組顯著提高血液中T-AOC 和SOD 活性，7.5‰和10.0‰組時(shí)可顯著提高血液中GSH-Px 活性（P＜0.05），所有中草藥添加組均可顯著降低血液中MDA 含量（P＜0.05）。楊政高[27]發(fā)現(xiàn)，投喂山楂等中草藥顯著提高珍珠龍膽石斑魚SOD 活性。狄大可［28］發(fā)現(xiàn)，投喂茯苓和山萸肉等中草藥可提高褐籃子魚抗氧化能力，這些結(jié)果均可以相互印證。

3.4 復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚血液生化指標(biāo)的影響

總蛋白能夠反映機(jī)體對蛋白質(zhì)吸收、代謝和利用情況[29]。血糖反映水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體營養(yǎng)狀況，是水產(chǎn)動(dòng)物面對應(yīng)激情況的主要能量來源，因此，在保持葡萄糖動(dòng)態(tài)平衡的基礎(chǔ)上，適量地提高血液中的葡萄糖水平有利于增強(qiáng)魚體的抗應(yīng)激能力[30]。三酰甘油和總膽固醇能夠反映魚體內(nèi)血脂代謝狀況[31]，低密度脂蛋白膽固醇的含量可以反映機(jī)體對脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的情況[32]。在本試驗(yàn)中，5.0‰復(fù)方中草藥顯著降低大口黑鱸幼魚血液中總蛋白含量，提高葡萄糖含量，顯著降低膽固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白膽固醇含量。低密度脂蛋白膽固醇含量顯著降低，表明降低了代謝水平，但同時(shí)也減少了疾病的發(fā)生[33]。齊茜[34]等得出，金銀花、桑葉和紫草混合可使閃光鱘血糖升高。李金龍等[35]研究表明，飼喂山楂等中草藥可有效降低黃鱔血脂含量。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥一定程度上起到提高大口黑鱸幼魚生長、消化、機(jī)體抗氧化能力和有效降脂的作用。建議在大口黑鱸幼魚飼料中山楂、神曲和半夏（比例6：2：2）添加水平為5‰～7.5‰。