肉制品中酸性紅和誘惑紅含量測定盲樣考核探究

薛曉偉

摘 要：目的：通過參加實驗室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，證實并提高實驗室的著色劑測定能力。方法：參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35—2023），優(yōu)化了提取方法和色譜條件，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果：肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定結(jié)果分別為1.92 mg·kg-1 、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1。結(jié)論：盲樣考核結(jié)果滿意，本實驗室具備一定的著色劑檢測能力。

關(guān)鍵詞：酸性紅；誘惑紅；高效液相色譜法

Validation of the Determination Ability of Acid Red and Alluring Red in Meat Products

Abstract： Objective： To confirm and improve the ability of the laboratory to determine the acid red and alluring red in meat products by participating in CNAS field assessment. Method： According to the GB 5009.35—2023， the extraction method and chromatographic conditions were optimized， and external standard method was used for quantification. Result： The determination results of acid red and alluring red in meat products were1.92 mg·kg-1 and?5.37 mg·kg-1，the true values of blind samples were 2.07 mg·kg-1 and 5.35 mg·kg-1，respectively. Conclusion： The result of blind sample examination is satisfactory， and the laboratory has certain capabilities in detecting colorants.

Keywords： acid red; alluring red; high-performance liquid chromatography

肉制品含有豐富的營養(yǎng)成分，對人體健康有益。隨著生活水平的逐步提升，人們的要求也越來越高。除了最基本的衛(wèi)生要求外，也會對色、香、味有所要求[1]。而合成色素因具有改善色澤的特點，在現(xiàn)代食品加工業(yè)中有非常廣泛的應(yīng)用[2]。但合成色素大多數(shù)是由苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品經(jīng)化學(xué)合成而來，具有潛在的致瀉性、臟器功能損害與致癌性，因此對化學(xué)色素的檢測監(jiān)管相當(dāng)重要[3]。針對合成著色劑含量檢測，部分文獻(xiàn)、專利中已經(jīng)有過相關(guān)的報道，且我國也有相應(yīng)的檢測標(biāo)準(zhǔn)。但GB 5009.35—2023中樣品前處理過程過于復(fù)雜，試驗所用時間較長，在日常面對大批量的檢驗任務(wù)時效率太低。本文通過優(yōu)化提取方法和色譜條件，使得方法的實用性更強(qiáng)，能有效排除基質(zhì)干擾，同時顯著提高回收率。

盲樣考核是對未知樣品進(jìn)行測定，是為了驗證實驗室檢測能力，確保日常檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠而必須進(jìn)行的一項質(zhì)量控制活動。它是中國合格評定國家認(rèn)可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）和中國計量認(rèn)證（China Metrology Accreditation，CMA）認(rèn)證評審的考核內(nèi)容，能直接反映實驗室儀器設(shè)備和人員檢測技術(shù)的實際水平和出具報告的能力[4-7]。本次盲樣評估是通過參加實驗室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，檢驗實驗室的著色劑檢測能力，提高實驗室在著色劑檢測技術(shù)上的競爭力。本實驗參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35—2023），優(yōu)化了提取方法和色譜條件，采用外標(biāo)法定量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

酸性紅（1 000 ?g·mL-1）、誘惑紅（1 000 ?g·mL-1），北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司；甲醇（色譜純）；乙酸銨（色譜純）；無水乙醇（分析純）；氨水（分析純）；超純水；XS204梅特勒-托利多電子天平；IKA? MS3漩渦混合器；HC-3018高速離心機(jī)；KQ-500DE 超聲波清洗器；戴安U3000 高效液相色譜儀（DAD 檢測器）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），序列號：USCL134794；流動相A為20 mmol·L-1乙酸銨溶液，B為甲醇；梯度洗脫；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。檢測器：二極管陣列檢測器波長范圍400～800 nm，檢測波長：520 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取0.5 mL酸性紅、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，加超純水定容至10 mL，得到酸性紅、誘惑紅質(zhì)量濃度均為50 ?g·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別吸取一定量的上述混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液于容量瓶中，用超純水定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度分別為0.2 ?g·mL-1、0.5 ?g·mL-1、1.0 ?g·mL-1、2.0 ?g·mL-1、5.0 ?g·mL-1和10.0 ?g·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.3 樣品制備

準(zhǔn)確稱取試樣2 g（精確至0.00l g），置于50 mL具塞離心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，渦旋1 min，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，渦旋混勻，于80 ℃水浴超聲30 min，8 000 r·min-1離心5 min，取10 mL上清液于50 ℃氮氣濃縮至近干，準(zhǔn)確加入2 mL pH值為9.0的乙酸銨緩沖溶液溶解，溶液用針筒過濾器，孔徑0.45 μm的濾膜過濾，棄去5滴濾液，取續(xù)濾液作為待測液。空白試驗同上。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的選擇

選取已知酸性紅和誘惑紅含量的鹵肉陽性樣品，以乙醇氨水溶液為提取劑，在相同提取時間下，比較不同溫度超聲水浴的提取效率，實驗結(jié)果如表1所示。當(dāng)溫度≥80 ℃后，提取效果趨于穩(wěn)定，回收率≥92%，符合《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）要求。綜合考慮節(jié)約能效以及實驗安全問題，決定選擇80 ℃水浴超聲提取方式。

2.2 流動相的選擇

試驗以甲醇和20 mmol·L-1乙酸銨溶液為流動相，以色譜圖為依據(jù)，考察了不同洗脫梯度對實驗的影響，在保證分離效果的情況下，綜合考慮酸性紅和誘惑紅保留時間、峰形、峰面積以及靈敏度等因素，選擇流動相梯度比例如表2所示。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按1.2.2項方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程及相關(guān)系數(shù)。酸性紅：y=0.463 1x-0.063 7（r=0.999 6）；誘惑紅：y=0.429 9x-0.010 7（r=0.999 9）。在質(zhì)量濃度為0.2～10.0 μg·mL-1 時，酸性紅、誘惑紅的峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 方法驗證

2.4.1 回收率試驗

稱取鹵肉陰性樣品9份，添加3個不同水平的酸性紅和誘惑紅混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液（50 ?g·mL-1）進(jìn)行回收率實驗：第1、2、3份加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.04 mL，第 4、5、6份加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.08 mL，第7、8、9份加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.40 mL。回收率測定結(jié)果見表3。由3表可知，回收率符合國家標(biāo)準(zhǔn)《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢驗》（GB/T 27404—2008）附錄F要求[5]。

2.4.2 精密度試驗

取回收試驗鹵肉加標(biāo)樣品3份（每個水平各1份），連續(xù)測定6次，記錄峰面積，計算精密度。結(jié)果見表4。

2.4.3 檢出限確定

稱取鹵肉陰性樣品1份，取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液（50 ?g·mL-1）0.01 mL，按試樣分析步驟處理測定，目標(biāo)物各組分色譜峰信噪比：酸性紅為S/N=8.2（＞3），誘惑紅為S/N=12.3（＞3）。由實驗結(jié)果可知，當(dāng)稱樣量為2 g，各目標(biāo)組分的方法檢出限為酸性紅：0.3? mg·kg-1，誘惑紅：0.3? mg·kg-1。

2.5 盲樣考核試驗

實驗室盲樣考核能力驗證一般以《ISO13528實驗室間能力比對試驗》經(jīng)典Z值法評估實驗室的檢驗檢測水平，Z值的大小代表實驗室的結(jié)果與中位值的偏離程度，而符號“+”和“-”代表與中位值的偏離方向，一般|Z|≤1為結(jié)果滿意[6]。

本次對盲樣進(jìn)行檢測，稱取兩份盲樣考核鹵肉制品進(jìn)行試驗，采用已建立的方法進(jìn)行測試，做2次平行試驗。酸性紅和誘惑紅測定結(jié)果分別為1.92 mg·kg-1、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1，Z值分別為-0.65和0.17，|Z|均小于1，結(jié)果均為滿意。

2.6 方法應(yīng)用

隨機(jī)抽取市內(nèi)各大市場及商超的鹵肉樣品共30批次，應(yīng)用本方法進(jìn)行合成著色劑的測定。其中1份樣品檢出酸性紅，檢出濃度為0.92 mg·kg-1，其余29批均未檢出。該方法更適用于實驗室日常大批量的監(jiān)督抽檢任務(wù)。

3 結(jié)論

盲樣考核能夠在一定程度上評價實驗室的管理水平和檢測者的綜合檢測能力。本次參加實驗室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，準(zhǔn)確性較高，考核結(jié)果為滿意。本研究總結(jié)了該盲樣評估試驗的實驗過程，優(yōu)化后的方法簡便高效、精密度好，回收率高，能準(zhǔn)確且快速地測定鹵肉制品中著色劑的含量。

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