腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的價(jià)值

劉永生

（內(nèi)蒙古自治區(qū)精神衛(wèi)生中心檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特，010010）

胰腺癌在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率在所有惡性腫瘤中的位置雖然不在前列，但是病死率一直居高不下，嚴(yán)重影響患者的身心健康。胰腺癌發(fā)病早期無(wú)典型癥狀，早期診斷率比較低，往往錯(cuò)過最佳診治階段[1]。同時(shí)由于腫瘤灶體積、范圍等還較小，難以通過影像學(xué)與臨床癥狀進(jìn)行確認(rèn)[2]。研究表明，除基礎(chǔ)疾病、職業(yè)暴露、年齡、性別、遺傳因素，生活行為也是胰腺癌的重要危險(xiǎn)因素之一，與胰腺癌的發(fā)病率有關(guān)[3]。盡管手術(shù)切除、化學(xué)療法和放射療法在胰腺癌的治療中應(yīng)用較廣泛，但是由于腫瘤頻繁的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其總體的治療效果有限，為此進(jìn)行早期診斷具有重要價(jià)值[4-5]。腫瘤標(biāo)志物是臨床診療惡性腫瘤的重要參考，也是胰腺癌診療的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[6]。癌胚抗原（CEA）、糖類抗原199（CA199）是由胎兒、胎盤、消化道、支氣管黏膜等產(chǎn)生的糖蛋白。正常人中血清癌胚抗原與糖類抗原199的含量很低，但是在炎癥性疾病、腫瘤患者的血清中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，尤其是在惡性腫瘤患者中的含量非常高。AFF3的全名為AF4/FMR2 家族成員3，具有調(diào)節(jié)DNA轉(zhuǎn)錄等作用，對(duì)于一些腫瘤定位的判斷具有重要價(jià)值[7]。miRNAs是當(dāng)前研究的重點(diǎn)，miRNAs是真核生物中不具有編碼功能的小分子物質(zhì)，主要發(fā)揮表觀遺傳學(xué)的功能[8]。miR-429與胰腺癌癥患者的轉(zhuǎn)移狀態(tài)高度相關(guān)，由此推測(cè)miR-429在胰腺癌的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移中也應(yīng)該發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能[9]。本文具體探討與分析了腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的價(jià)值，以促進(jìn)胰腺癌的早期檢出，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月—2022年12月內(nèi)蒙古自治區(qū)精神衛(wèi)生中心接受檢驗(yàn)的105例胰腺癌患者作為胰腺癌組，同期選取在內(nèi)蒙古自治區(qū)精神衛(wèi)生中心接受檢驗(yàn)的105例胰腺良性結(jié)節(jié)作為良性組。在胰腺癌組中，平均腫瘤最大直徑（4.10±0.21）cm；病理類型：鱗癌80例，腺癌25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；組織學(xué)分化：高分化35例，低分化25例，中分化45例；臨床分期：Ⅰ期55例，Ⅱ期35例，Ⅲ期15例。胰腺癌組與良性組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。本研究經(jīng)內(nèi)蒙古自治區(qū)精神衛(wèi)生中心醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者知情同意本研究并簽署知情同意書。

表1 胰腺癌組與良性組一般資料比較 [（）/n（%）]

表1 胰腺癌組與良性組一般資料比較 [（）/n（%）]

注：1 mm Hg≈0.133 kPa。

組別例數(shù)（n）性別年齡（歲）空腹血糖（mmol/L）男女身體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）收縮壓（mm Hg）心率（次/min）舒張壓（mm Hg）胰腺癌組10555（52.38）50（47.62）58.21±4.5522.82±2.86123.11±12.3882.47±5.6975.38±5.675.69±0.21良性組10554（51.43）51（48.57）58.58±4.5722.19±3.19123.87±11.2782.76±6.3575.20±4.695.62±0.66 t/χ20.0190.5881.5070.4650.3490.2511.036 P 0.8900.5570.1330.6420.7290.8020.132

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡在30～70歲；②胰腺癌組符合胰腺癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；③良性組病理診斷為胰腺結(jié)節(jié)良性；④臨床、病理資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心腦血管疾病的患者；②伴有基因疾病的患者；③合并肝組織、腎組織等器官疾病的患者；④合并嚴(yán)重自身免疫系統(tǒng)疾病患者；⑤合并有血液系統(tǒng)疾病的患者；⑥合并其他惡性腫瘤的患者；⑦妊娠與哺乳期婦女；⑧合并有遺傳代謝性疾病的患者。

1.3 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199檢測(cè)

清晨抽取胰腺癌組與良性組患者的空腹外周靜脈血4 mL，靜置20 min后，采用離心機(jī)在4 ℃ 離心后（3 000 r/min離心10 min），取上層血清，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清CEA、AFF3、CA199含量，分別由上海西唐生物科技有限公司、上海酶聯(lián)公司、大連TAKARA公司提供試劑盒（批號(hào)分別為20838114、20448914、34149821），按照說(shuō)明書操作。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）調(diào)查胰腺癌組與良性組患者的性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、收縮壓、心率、舒張壓、空腹血糖。（2）重點(diǎn)調(diào)查胰腺癌組患者的臨床病理特征，包括病理類型、組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。（3）CEA正常參考范圍0.0～10.0 ng/mL，AFF3參考范圍0.0～40.0 μg/L，CA199參考范圍0.0～50.0 U/mL。同時(shí)，提取血清的DNA，采用熒光定量PCR方法檢測(cè)血清miR-429相對(duì)表達(dá)水平，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為miR-429相對(duì)表達(dá)水平為健康人群的3倍及以上。聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)：血清miR-429、CEA、AFF3、CA199任一一項(xiàng)判斷為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以EXCEL 2022整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 22.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，診斷價(jià)值分析采用受試者操作特征（ROC）曲線分析，0.5＜ROC曲線下面積（AUC）≤0.7有較低準(zhǔn)確性，在0.7＜AUC≤0.9有一定準(zhǔn)確性，0.9＜AUC＜1.0有較高準(zhǔn)確性。數(shù)據(jù)一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)，Kappa值越大，表示一致性越好，Kappa≤0.2為差，0.2＜Kappa≤0.4為一般，0.4＜Kappa≤0.6為中等，0.6＜Kappa≤0.8為好，Kappa＞0.8為非常好，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平比較

胰腺癌組的血清CEA、AFF3、CA199含量顯著高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），血清miR-429相對(duì)表達(dá)水平與良性組相比也顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平比較 （）

表2 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平比較 （）

注：CEA，癌胚抗原；CA199，糖類抗原199。

組別例數(shù)CA199（U/mL）CEA（ng/mL）AFF3（μg/L）miR-429胰腺癌組10590.43±4.1163.44±4.03 89.47±13.586.77±0.26良性組10528.66±2.43 3.79±0.3425.36±3.351.98±0.17 t 132.566151.133 46.967158.003 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)陽(yáng)性率比較

胰腺癌組的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)陽(yáng)性率為74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，顯著高于良性組的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,見表3。

表3 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)陽(yáng)性率比較 [n（%）]

2.3 相關(guān)性分析

在胰腺癌210例患者中，Pearson相關(guān)分析顯示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平與組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等存在相關(guān)性（P＜0.05），見表4。

表4 胰腺癌患者血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平與病理特征的相關(guān)性 （n=105）

2.4 聯(lián)合診斷價(jià)值

在胰腺癌組與良性組210例患者中，腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判斷為胰腺癌104例，腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鑒別診斷胰腺癌的敏感度與特異度分別為98.10%（103/105）、99.05%（104/105），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為99.04%（103/104），陰性預(yù)測(cè)值為98.11%（104/106），Kappa檢驗(yàn)分析聯(lián)合診斷的一致性為0.874，ROC分析顯示腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的最大曲線下面積為0.920，具體情況見表5與圖1。

圖1 腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的曲線下面積

表5 腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的敏感度與特異度 （n=210）

3 討論

3.1 胰腺癌患者多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達(dá)

胰腺癌的病死率一直比較高，胰腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與一些遺傳和環(huán)境因素有關(guān)，手術(shù)、放療和化療是目前胰腺癌患者的主要治療方法。胰腺癌患者的5年生存率很低，因?yàn)閺?fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)很高[10]。此外，促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展的遺傳機(jī)制目前還沒有得到很好的理解[11]。因此，迫切需要尋找新的胰腺癌早期診斷的生物學(xué)標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物的血清學(xué)檢測(cè)具有動(dòng)態(tài)性、方便性、快速性、簡(jiǎn)便性、非介入性等優(yōu)勢(shì)，能對(duì)腫瘤的早期診斷及鑒別做出判斷[12]。本研究顯示胰腺癌組的血清CEA、AFF3、CA199含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），血清miR-429相對(duì)表達(dá)水平與對(duì)照組相比也顯著增加（P＜0.05）；胰腺癌組的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)陽(yáng)性率為74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，顯著高于對(duì)照組的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%（P＜0.05），表明胰腺癌多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達(dá)。從機(jī)制上分析，CEA是很早開始應(yīng)用于惡性腫瘤鑒別診斷的標(biāo)志物之一，在胰腺癌患者中的應(yīng)用也比較高，是存在于惡性腫瘤組織中的一種基因編碼于19號(hào)染色體上胎兒性糖蛋白[13]。CA199是一種哺乳動(dòng)物組織中普遍存在的糖蛋白，可作為胰腺癌特異性較強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物[14]。AFF3屬于高度保守的核轉(zhuǎn)錄因子laf4/mllt2基因家族，在多種腫瘤的發(fā)生與淋巴系統(tǒng)發(fā)育中發(fā)揮重要作用。miRNA抑制腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，通過與靶基因mRNA的3'-UTR區(qū)堿基位點(diǎn)特異性配對(duì)引起靶基因mRNA的降解或翻譯抑制，從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。miR-429也是多種惡性腫瘤的生物標(biāo)志物，在惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)與不良預(yù)后明顯呈正相關(guān)[15]。

3.2 腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌具有很高的價(jià)值，與患者的病理特征存在相關(guān)性

腫瘤標(biāo)志物是當(dāng)前診斷癌癥的有效標(biāo)志物，CA199是多種腫瘤的重要特異性標(biāo)志物。CA199是一種糖鏈抗原，含有大量的糖基，在多種惡性腫瘤中的含量明顯升高[16]。AFF3廣泛存在于在人類的生殖系統(tǒng)上皮細(xì)胞、上呼吸道黏膜細(xì)胞、腎遠(yuǎn)曲小管細(xì)胞中，當(dāng)機(jī)體發(fā)生惡性腫瘤，AFF3可顯著表達(dá)上升。在所有類型的惡性癌癥腫瘤中，miRNAs都被發(fā)現(xiàn)在機(jī)體內(nèi)表達(dá)調(diào)控失調(diào)，發(fā)揮致癌或腫瘤抑制功能[17-18]。目前大量研究分析表明，機(jī)體內(nèi)多種癌癥腫瘤細(xì)胞的增殖、發(fā)生發(fā)展進(jìn)程及患者預(yù)后生存率等均與microRNA密切相關(guān)[19-20]。本研究顯示，在胰腺癌210例患者中，Pearson相關(guān)分析顯示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達(dá)水平與組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等存在相關(guān)性（P＜0.05）；依據(jù)腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判斷為胰腺癌104例，腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鑒別診斷胰腺癌的敏感度與特異度分別為98.10%（103/105）、99.05%（104/105），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為99.04%（103/104），陰性預(yù)測(cè)值為98.11%（104/106），Kappa檢驗(yàn)分析聯(lián)合診斷的一致性為0.874，ROC分析顯示腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌的最大曲線下面積為0.920，表明腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌具有很高的價(jià)值。由于經(jīng)費(fèi)問題與一定的倫理問題，本次研究沒有納入健康人群進(jìn)行分析，調(diào)查人數(shù)過少，分析的指標(biāo)比較少，沒有進(jìn)行單一指標(biāo)的診斷學(xué)分析，也沒有進(jìn)行影像學(xué)判斷分析，結(jié)果存在一定的偏倚，將在后續(xù)研究中增加樣本和分組，深入探討血清miR-429、CEA、AFF3、CA199在胰腺癌的診斷價(jià)值。

綜上所述，胰腺癌多伴隨有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達(dá)，與患者的病理特征存在相關(guān)性，腫瘤標(biāo)志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯(lián)合診斷胰腺癌具有很高的敏感度與特異度。