豬圓環(huán)病毒2型疫苗的應(yīng)用和研發(fā)進(jìn)展

王鵬，沈偉楨，周斌

(1. 南京江北新區(qū)農(nóng)村工作管理服務(wù)中心，江蘇 南京 211899；2. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095)

豬圓環(huán)病毒(PCV)是一種單鏈環(huán)狀DNA病毒，屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是已知最小的動物病毒之一[1]，根據(jù)全基因組核苷酸序列可分為PCV1型(PCV1)、2型(PCV2)、3型(PCV3)和4型(PCV4)4個血清型，PCV2又可細(xì)分為a～h 8個亞型[2]。豬對PCV2具有較強(qiáng)的易感性，4周齡斷奶仔豬最易感，常引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)，臨床表現(xiàn)多樣，漸進(jìn)性消瘦或生長遲緩是最常見的癥狀，易與其他病原混合感染，大大提高病豬的死亡率[3]。豬圓環(huán)病毒病于1991年在加拿大首次被發(fā)現(xiàn)，之后世界各國均有大量報道[4-5]，我國自2001年首次分離到PCV2以來，浙江、山東、廣東、河南等省份先后均有該傳染病流行的報道發(fā)生。目前為止，PCV2經(jīng)歷過2次重大抗原變異：2003年，PCV2b亞型在全球大部分地區(qū)取代PCV2a亞型成為主導(dǎo)毒株；2012年，中國、韓國等部分地區(qū)的PCV2b亞型開始被PCV2d亞型取代。

全球各國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)正遭受著PCV2引起的嚴(yán)重影響與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此疫苗接種被視為預(yù)防該病的最有效手段并逐漸成為近年來的主要關(guān)注點(diǎn)之一。在此背景下，傳統(tǒng)滅活疫苗、亞單位疫苗、嵌合疫苗和合成肽疫苗陸續(xù)問世并投入使用，同時實(shí)驗(yàn)室也致力于開發(fā)新型活載體疫苗、核酸疫苗等，商業(yè)疫苗的投入使用和實(shí)驗(yàn)室疫苗的不斷優(yōu)化在防控PCV2感染和提高豬群生長性能發(fā)揮了重要作用。然而，疫苗佐劑的篩選、PCV2d的流行也為疫苗的研發(fā)提出了新的挑戰(zhàn)。

1 PCV2疫苗的應(yīng)用現(xiàn)狀

自2006年開始進(jìn)入我國市場的PCV2商業(yè)疫苗(表1，表2)均有報道表明可顯著降低PMWS感染豬的臨床病理表現(xiàn)并改善其生長性能[6]。在接種疫苗后，豬群的平均日增重和瘦肉產(chǎn)量百分比有所提高，增加了飼料轉(zhuǎn)化率并降低了接種疫苗豬群的藥物成本。目前我國商業(yè)化的PCV2疫苗主要可以分為2類：滅活疫苗和以衣殼(Cap)蛋白作為免疫原的亞單位疫苗。然而，滅活疫苗通常是在豬腎傳代細(xì)胞系(PK-15)中生產(chǎn)，有著病毒滴度低的缺點(diǎn)[7]；亞單位疫苗可在大腸桿菌或桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn)，但需要昂貴的超離心或?qū)游黾兓痆8]。因此，目前研究的重心逐漸偏向于成本更低、安全性更高并且保護(hù)作用更持久的活載體疫苗和核酸疫苗。

表1 國內(nèi)PCV2商品疫苗匯總

表2 國內(nèi)進(jìn)口PCV2疫苗匯總

2 傳統(tǒng)疫苗

2.1 滅活疫苗

滅活疫苗由于病原微生物已經(jīng)完全滅活，在使用安全性和儲存穩(wěn)定性等方面相比弱毒疫苗有優(yōu)勢，還具有對母源抗體的中和作用不敏感的優(yōu)點(diǎn)。最早的PCV2滅活疫苗是法國梅里亞公司于2006年研發(fā)的PCV2全病毒滅活疫苗Circovac?[9-11]，疫苗通過歐盟認(rèn)證，是世界上首個以輕石蠟油為佐劑的PCV2疫苗，同時Circovac?可用于繁育母豬和3周齡以上仔豬，也是目前唯一一個既適用于母豬又適用于仔豬的PCV2疫苗。它能有效降低感染仔豬各組織器官中的病毒載量，降低病毒血癥的發(fā)生并減輕病毒組織器官的負(fù)荷和病毒散播，促進(jìn)新生仔豬的生長發(fā)育。我國最早的PCV2滅活疫苗是南京農(nóng)業(yè)大學(xué)姜平教授科研團(tuán)隊(duì)研發(fā)的PCV2滅活疫苗(SH株)[12]。目前國內(nèi)滅活疫苗主要基于SH株、LG株、ZJ/C株、DBN-SX07株等毒株研制，均屬于PCV2b亞型，在本質(zhì)上沒有區(qū)別[13]。

2.2 弱毒疫苗

由于弱毒疫苗毒力容易返強(qiáng)、致弱毒株毒力評價難度較大等問題，截至目前為止市場上還沒有針對PCV2的弱毒疫苗。Fenaux等[14]在PK-15細(xì)胞中連續(xù)傳代PCV2分離株達(dá)120代后，對第1代病毒(VP1)和最后1代病毒(VP120)在生物學(xué)特性、遺傳特征上通過試驗(yàn)進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)從第1代到第120代的過程中，整個病毒基因組發(fā)生了2處核苷酸變異：C328G和A573C。這2處變異導(dǎo)致Cap蛋白第110位的脯氨酸變?yōu)楸彼?P110A)，第191位的精氨酸變?yōu)榻z氨酸(R191S)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這些突變增強(qiáng)了PCV2的體外生長能力并減弱了體內(nèi)感染能力，這一發(fā)現(xiàn)對研發(fā)出有效的PCV2弱毒疫苗的具有重要指導(dǎo)作用。

3 基因工程疫苗

3.1 亞單位疫苗

目前商業(yè)PCV2亞單位疫苗的設(shè)計和研發(fā)主要基于ORF2所編碼的Cap蛋白，它是PCV2的主要結(jié)構(gòu)蛋白和免疫保護(hù)性抗原，具有中和性表位和誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)的潛力[15-16]。目前國際市場上有3種PCV2亞單位疫苗，分別是CircoFlex?，Circument?和Porcilis PCV?[17]。它們都利用桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)ORF2制成，經(jīng)滅活和純化后病毒樣顆粒(VLPs)在形態(tài)上與PCV2顆粒相同[8]。一項(xiàng)試驗(yàn)同時評估了Circovac?、CircoFlex?和Porcilis PCV?，結(jié)果表明，與商業(yè)化滅活疫苗相比，亞單位疫苗CircoFlex?和Porcilis PCV?表現(xiàn)出更低的病毒載量和散播，更溫和的組織病理學(xué)病變，更高水平的PCV2特異性中和抗體和細(xì)胞介導(dǎo)免疫[18]。王琳琳等[19]利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)Cap蛋白，采用水性佐劑制備成滅活疫苗，仔豬免疫后精神、食欲和行為活動均正常，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)抗體效價在1∶400～1∶800，具有良好的免疫原性和安全性，可作為預(yù)防PCVAD的候選疫苗。Xi等[20]通過大腸桿菌表達(dá)重組Cap蛋白，在中性緩沖液中自組裝成與完整PCV2病毒相似的VLPs。通過試驗(yàn)證明該蛋白具有良好的免疫原性，能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，并保護(hù)機(jī)體免受PCV2-SH毒株的感染，而且生產(chǎn)成本較低，是一種具有潛在競爭力的亞單位疫苗。目前國內(nèi)注冊上市的亞單位疫苗有正圓臻、圓柯欣、圓臻清、圓環(huán)力康、易圓凈等。

3.2 重組載體疫苗

重組載體疫苗利用基因工程技術(shù)以減毒活病毒或細(xì)菌作為基因表達(dá)載體，將編碼特定病原微生物免疫原性蛋白的基因插入載體中，輸入機(jī)體后在體內(nèi)表達(dá)免疫原性蛋白，從而激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答，預(yù)防相應(yīng)病原微生物的感染[21]。當(dāng)前PCV2重組載體疫苗主要有腺病毒載體疫苗、偽狂犬病毒載體疫苗以及桿狀病毒載體疫苗[22]。

3.2.1 桿狀病毒載體疫苗

昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(BEVS)已成熟應(yīng)用于多種蛋白的表達(dá)中，為疫苗研發(fā)提供了大量原材料，適用于多基因表達(dá)設(shè)計和大規(guī)模的無血清培養(yǎng)條件下的重組蛋白生產(chǎn)[23]。He等[24]利用桿狀病毒感染的家蠶幼蟲和大腸桿菌BL21(DE3)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了PCV2 Cap蛋白，通過ELISA證實(shí)了產(chǎn)生的VLPs的免疫原性，表明桿狀病毒感染的家蠶幼蟲表達(dá)系統(tǒng)是獲得PCV2 VLPs的良好選擇，具有開發(fā)低成本、高效疫苗的潛力。Xu等[25]針對PRRSV GP5蛋白和PCV2 Cap蛋白利用BEVS構(gòu)建了重組BacSC-Dual-GP5-Cap疫苗，其能產(chǎn)生相當(dāng)高的病毒中和滴度并誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，是抵抗兩者感染的潛在二價亞單位疫苗。目前國內(nèi)上市的桿狀病毒表達(dá)Cap蛋白的載體疫苗有國藥集團(tuán)動物保健股份有限公司的圓力康和揚(yáng)州優(yōu)邦生物藥品有限公司的圓立優(yōu)[22]。

3.2.2 腺病毒載體疫苗

腺病毒載體疫苗通過將保護(hù)性抗原基因重組到腺病毒基因組中構(gòu)建而成，具有簡單構(gòu)建和誘導(dǎo)體液免疫、黏膜免疫和細(xì)胞免疫的優(yōu)勢[26]。Li等[27]構(gòu)建了分泌型重組腺病毒和非分泌型重組腺病毒，ELISA和病毒中和試驗(yàn)(VNT)結(jié)果表明，分泌型重組腺病毒誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答明顯高于PCV2-SH菌株，并且在PCV2攻毒試驗(yàn)中病毒載量顯著降低，表明分泌型重組腺病毒疫苗比商業(yè)滅活疫苗PCV2-SH菌株能引起更強(qiáng)的免疫應(yīng)答和更好的保護(hù)作用，是一種潛在的PCVAD候選疫苗。為了降低腺病毒蛋白的免疫原性，Li等[28]構(gòu)建了用Intron A、WPRE修飾和CD40L、GMCSF修飾的PCV2腺病毒載體疫苗，這類修飾后的疫苗誘導(dǎo)了更強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，提供了比未修飾疫苗更好的保護(hù)作用。然而，腺病毒的靶向性差，首過效應(yīng)強(qiáng)，且不能整合到靶細(xì)胞的基因組DNA中并穩(wěn)定表達(dá)外源基因，因此只有不斷優(yōu)化腺病毒載體以提高其特異性和安全性，才能最大限度發(fā)揮它的潛在應(yīng)用價值[29]。

3.2.3 偽狂犬病毒活載體疫苗

偽狂犬病毒(PRV)因其基因組結(jié)構(gòu)獨(dú)特、宿主覆蓋范圍廣泛和生物安全性，已成為研發(fā)活載體疫苗的重要工具。將表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組偽狂犬病毒構(gòu)建疫苗模型，可以預(yù)防包括偽狂犬病在內(nèi)的多種疾病，實(shí)現(xiàn)一針多防的目的，而且能簡化免疫過程、降低成本，在商業(yè)和應(yīng)用前景上具有潛在優(yōu)勢[30]。Zheng等[31]構(gòu)建了一種表達(dá)PCV2 Cap蛋白和白細(xì)胞介素18(IL-18)的重組偽狂犬病毒，用PRV-ORF2- IL18、PRV- ORF2、PRV HB98或滅活的PCV2免疫小鼠，ELISA、VNT、異性淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞分析顯示，PRV-ORF2-IL18在小鼠中可誘導(dǎo)高滴度的血清中和抗體，并產(chǎn)生具有較強(qiáng)的細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答。PRV-ORF2 - IL18免疫可保護(hù)小鼠免受PRV-Fa毒株的致命攻擊，并顯著降低PCV2病毒血癥的數(shù)量。PRV-ORF2-IL18重組病毒可能是預(yù)防豬PCV2和PRV感染的一種有吸引力的候選疫苗。

3.3 合成肽疫苗

合成肽疫苗是一種僅含有免疫決定簇的短肽疫苗，將根據(jù)病原體蛋白質(zhì)的氨基酸序列合成的保護(hù)性短肽與載體結(jié)合，再加入佐劑制備而成[32]。Jeong等[33]根據(jù)來自歐洲、北美洲和亞洲的不同分離株的氨基酸序列比對來構(gòu)建Cap蛋白的氨基酸序列并合成小肽，使用氫氧化鋁、氧化鈷和脂質(zhì)體為佐劑制備疫苗，結(jié)果表明以脂質(zhì)體佐劑制備的合成肽疫苗免疫效果較好，但整體保護(hù)作用較當(dāng)前商品疫苗略差一些。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)姜平教授研究團(tuán)隊(duì)深入分析PCV2免疫保護(hù)抗原和抗原表位后，確定并篩選出由50～51個氨基酸組成的2條多肽序列，成功研制出PCV2合成肽疫苗[34]。疫苗免疫保護(hù)效力達(dá)100%，免疫持續(xù)期4個月，為防控PCVAD提供了又一種重要手段。

3.4 核酸疫苗

核酸疫苗能夠直接引入編碼特定抗原蛋白的DNA或RNA到免疫動物的細(xì)胞中，通過宿主細(xì)胞的表達(dá)機(jī)制轉(zhuǎn)化和翻譯外源核酸，形成的抗原蛋白刺激機(jī)體產(chǎn)生針對該抗原蛋白的免疫反應(yīng)，最終達(dá)到預(yù)防或治療某種疾病的目的[35]。Sylla等[36]利用pEGFP-N1載體構(gòu)建PCV2 Cap基因重組疫苗，對80只BALB/c小鼠以2周的間隔接種pEGFP-Cap、LG株疫苗、pEGFP- N1載體或PBS 3次，然后用PCV2攻毒。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種pEGFP-Cap的小鼠通過誘導(dǎo)高度特異的血清IgG抗體和細(xì)胞因子(γ干擾素和白細(xì)胞介素10)，以及較小的PCV2病毒載量，有效地保護(hù)了小鼠免受PCV2感染。因此，這項(xiàng)研究表明，重組pEGFP- Cap可顯著減輕小鼠的PCV2感染，并提供證據(jù)證明DNA疫苗可以替代針對PMWS的PCV2疫苗。由于外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)調(diào)控和在細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移機(jī)制研究尚不完善，可能會引起意外的免疫反應(yīng)和其他問題，因此核酸疫苗的安全性和有效性還需進(jìn)一步研究驗(yàn)證，這是目前核酸疫苗研究僅限于實(shí)驗(yàn)室研究的主要瓶頸原因之一[35]。

3.5 嵌合疫苗

嵌合疫苗能夠?qū)?種或多種病原體的基因組或片段通過基因工程技術(shù)連接或替換，形成的重組基因能夠表達(dá)2種或更多的病原體抗原，然后再通過傳統(tǒng)方法設(shè)計和制造滅活疫苗、弱毒疫苗和亞單位疫苗等[37]。美國富道公司將致病性PCV2中的ORF 2片段置換不致病的PCV1中的ORF 2片段，構(gòu)建了PCV1-2嵌合病毒并將其制成滅活疫苗。多次試驗(yàn)表明，嵌合病毒滅活疫苗能夠?yàn)樨i群提供較好的免疫防護(hù)，特別是在抑制病毒和降低病毒血癥的效果上有著顯著的優(yōu)勢。目前該疫苗已經(jīng)在美國、加拿大、丹麥和墨西哥等國家獲得注冊并被廣泛使用[38-39]。國內(nèi)市場上現(xiàn)有的PCV2嵌合疫苗為2019在我國注冊上市的碩騰公司生產(chǎn)的PCV1-2型嵌合體滅活疫苗。

4 PCV2聯(lián)合疫苗

聯(lián)合疫苗是指將2個或2個以上的疫苗抗原通過混合、聯(lián)合或同時施用的方式進(jìn)行免疫接種，從而實(shí)現(xiàn)預(yù)防多個疾病的疫苗。聯(lián)合疫苗尤其是多聯(lián)疫苗在研制和臨床試驗(yàn)過程中，應(yīng)該充分考慮各種組分之間的相互作用以及它們對聯(lián)合疫苗安全性和有效性的可能影響[40]。國內(nèi)市場上現(xiàn)有的PCV2聯(lián)合疫苗種類分為PCV2型、豬肺炎支原體二聯(lián)疫苗和PCV2型、副豬嗜血桿菌二聯(lián)疫苗，已獲批的國產(chǎn)疫苗有圓支優(yōu)、圓支康、圓支泰、圓支必寧等。陳昌海等[41]對PCV2滅活疫苗和豬瘟病毒凍干活疫苗聯(lián)合免疫效果進(jìn)行了評估，結(jié)果表明2種疫苗聯(lián)合接種并未影響相應(yīng)抗體的產(chǎn)生，反而在一定程度上發(fā)揮了協(xié)同作用，促進(jìn)了2種抗體在豬群個體間的穩(wěn)定分布。張召等[42]對豬瘟活疫苗、PCV2型基因工程疫苗和豬肺炎支原體滅活疫苗3種疫苗聯(lián)合免疫的可行性進(jìn)行評價，發(fā)現(xiàn)3種疫苗之間互不干擾，聯(lián)合免疫效果與單苗免疫一致，而且接種后的豬群在生長性能上表現(xiàn)更優(yōu)，證明三者聯(lián)合免疫安全有效。

5 佐劑在PCV2疫苗中的應(yīng)用

針對各種疫苗接種所需的佐劑而言，其效用與原理各有差異，故而在決定或挑選某種特定疫苗所用的佐劑的過程中，必須全面權(quán)衡靶動物種類、疫苗免疫原性質(zhì)、需要激活的免疫類型、免疫應(yīng)答的途徑以及期望達(dá)到的免疫效果等多方面因素[43]。目前PCV2商品疫苗的佐劑主要為化學(xué)佐劑和分子佐劑兩大類[44]，在滅活疫苗、亞單位疫苗、合成肽疫苗等類型的疫苗中都有廣泛的應(yīng)用。趙本進(jìn)等[45]使用水包油佐劑Merckinade SDA 25、HS1010和雙向佐劑Montanide ISA 206制成PCV2滅活疫苗，對3種疫苗的穩(wěn)定性、黏度、接種仔豬后的有效性和安全性進(jìn)行評估。結(jié)果表明，佐劑Montanide lSA 206相較Merckinade SDA 25可誘導(dǎo)更高水平抗體效價，考慮到佐劑產(chǎn)品的成熟度，確定滅活疫苗使用Montanide ISA 206。孫瑩慧等[46]將重組的PCV2 Cap蛋白與與氫氧化鋁膠佐劑、ISA 15 AVG佐劑和IMS 251C VG佐劑混合制備疫苗，并選擇PCV2陰性仔豬(14日齡)開展動物安全性檢驗(yàn)和免疫效力檢驗(yàn)。研究結(jié)果顯示，使用佐劑ISA 15A VG制備的亞單位疫苗，在接種仔豬后可刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平的體液免疫應(yīng)答。劉新月等[47]將IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、臺灣細(xì)菌鞭毛、卡波姆、多糖共8種佐劑與適量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗，采用小鼠試驗(yàn)初步檢驗(yàn)疫苗安全性及免疫效果，篩選出較優(yōu)的佐劑進(jìn)行仔豬免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)，研究結(jié)果表明油佐劑ISA 61 VG佐劑和水佐劑GEL 02 PR制備的PCV2合成肽疫苗無安全性問題，且具有極好的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，對預(yù)防PCV2感染具有較好的免疫保護(hù)作用，是一種很好的合成肽疫苗佐劑。

分子佐劑能夠非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對抗原的特異性免疫應(yīng)答，它們的形式與傳統(tǒng)佐劑不同，是質(zhì)粒編碼的蛋白質(zhì)，其作用方式依賴靶向先天免疫受體或分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件，包括模式識別受體激動劑、細(xì)胞因子、趨化因子和免疫靶向基因等[48]。Fu等[49]比較了泛素(Ub)、熱休克蛋白70 C端多肽結(jié)合區(qū)( Hsp70c)和白細(xì)胞介素-2(IL-2)這3種分子佐劑在基于PCV2 ORF2基因DNA疫苗中的增強(qiáng)能力，結(jié)果表明相較于Hsp70c和IL-2，利用Ub作為分子佐劑可誘導(dǎo)更強(qiáng)的Th1型細(xì)胞免疫，血清中Cap蛋白特異性IgG抗體水平也更高，而且在感染后的大部分時間內(nèi)產(chǎn)生的特異性免疫均強(qiáng)于其他2組。因此，對于PCV2 DNA疫苗接種，Ub是比Hsp70c和IL-2更好的分子佐劑。

6 PCV2疫苗對不同亞型毒株的保護(hù)能力

目前PCV2的商業(yè)疫苗大多都來源于PCV2a和PCV2b亞型毒株，面對當(dāng)前流行的主流PCV2d亞型毒株，已有研究者們評估了它們能否提供可靠的保護(hù)。Jeong等[50]、Opressing等[9]、黃亞平等[51]使用現(xiàn)有商品PCV2滅活疫苗對流行的PCV2d毒株的免疫保護(hù)效果進(jìn)行評估，F(xiàn)ort等[8]通過試驗(yàn)驗(yàn)證了基于PCV2 Cap蛋白的亞單位疫苗對來自具有不同基因型和地理來源的4種不同 PCV2分離株的保護(hù)作用，結(jié)果均表明現(xiàn)有商品疫苗能完全保護(hù)PCV不同基因型的攻擊。然而，Li等[52]比較了基于基因型2b和2d的2種試驗(yàn)性PCV1-2滅活嵌合疫苗的保護(hù)能力，結(jié)果表明2個疫苗接種組在攻毒后的體液免疫反應(yīng)、PCV2b載量或 PCV 相關(guān)微觀病變方面沒有顯著差異。然而，在接種PCV2b疫苗豬的腹股溝淺表淋巴結(jié)中沒有檢測到來自攻擊毒株的DNA，但攻毒后21 d在PCV2d免疫組的1頭豬中檢測到來自攻擊毒株的DNA。Kang等[53]發(fā)現(xiàn)在韓國田間分離的PCV2毒株[QIA215(PCV2a)、QIA418(PCV2b)、QIA169(PCV2d)和QIA244(PCV2d)]表現(xiàn)出不同的抗原結(jié)合活性，觀察到不同基因型之間以及相同基因型的毒株之間存在交叉保護(hù)差異。Reiner等[54]也發(fā)現(xiàn)了一致的結(jié)果，與未接種疫苗的豬群相比，接種疫苗的豬群中感染PCV2a的頻率相對降低，而感染PCV2b的情況正好相反。綜上所述，當(dāng)受到異源毒株感染時，目前商品疫苗雖然也能引起對臨床綜合征的充分保護(hù)，并減少病毒復(fù)制，但是病毒感染和復(fù)制并不能被完全阻止，并且在不太理想的條件下(例如不準(zhǔn)確的疫苗接種、免疫抑制、母源免疫下降、伴隨感染等)免疫可能不太有效[52]。

7 討論和展望

目前，國際和國內(nèi)上應(yīng)用的PCV2商品疫苗在防治PCVAD方面臨床效果較好，且對PCV2感染有效，但由于PCV的高度變異性和免疫逃逸等特點(diǎn)，目前尚未有一種完全有效的疫苗能夠提供長期的保護(hù)。傳統(tǒng)的滅活疫苗具有很強(qiáng)的免疫原性，制備過程簡單，成本較低，但在大規(guī)模應(yīng)用中，由于長時間的病毒培養(yǎng)周期，這些疫苗的產(chǎn)量通常無法滿足需求并存在安全性較差的問題。新型純凈性較高、安全性較好的基因工程疫苗正在逐漸取代一些傳統(tǒng)疫苗，但這些新型疫苗的免疫原性較弱，單獨(dú)使用時無法引發(fā)有效的免疫反應(yīng)[55]。新上市的的PCV2合成肽疫苗在技術(shù)上層面實(shí)現(xiàn)了突破性創(chuàng)新，為疫苗的標(biāo)準(zhǔn)化、大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了可能，為規(guī)?；B(yǎng)殖企業(yè)帶來了更多選擇，有力保障了生豬產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。然而，單獨(dú)的基于肽的疫苗，即使包含最佳B細(xì)胞和T細(xì)胞表位，仍需佐劑和適當(dāng)?shù)倪f送系統(tǒng)才能更高效地發(fā)揮疫苗效果[33，56]。因此，目前需要開發(fā)能夠應(yīng)對疫苗應(yīng)用范圍擴(kuò)大，并且能夠適用于多種給藥途徑的多樣化應(yīng)用方法的新型免疫佐劑來進(jìn)一步提高疫苗的免疫效果。

研究表明，當(dāng)前的PCV2疫苗對于不同亞型的毒株具有保護(hù)作用，能夠有效地預(yù)防臨床癥狀的發(fā)展，減輕病毒血癥并產(chǎn)生有效的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。然而，同樣也有試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明這些疫苗往往對同源攻擊比異源攻擊表現(xiàn)出更高的保護(hù)作用，并有部分流行病學(xué)調(diào)查分析和統(tǒng)計評估指出，觀察到的PCV2基因型轉(zhuǎn)變通常與地方流行毒株和使用疫苗的不同保護(hù)有關(guān)[57]。盡管無法得到確切的證實(shí)，但從個體試驗(yàn)數(shù)據(jù)到地區(qū)流行調(diào)查統(tǒng)計的一致結(jié)果均表明了特定基因型疫苗誘導(dǎo)免疫在推動PCV2變異過程中起到了一定作用，從長遠(yuǎn)來看可能對當(dāng)前疫苗免疫效力產(chǎn)生不利影響。

隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的不斷進(jìn)步，研究者們在基于現(xiàn)有研究成果的基礎(chǔ)上積極探索如何改進(jìn)、創(chuàng)新PCV2疫苗，比如改良免疫原設(shè)計、提高免疫效力、減少副反應(yīng)等。研發(fā)出一種安全高效且生產(chǎn)成本低的PCV2基因工程疫苗，已成為疫苗研發(fā)的主流方向，相信隨著相關(guān)研究的不斷深入，一定能研制出理想的疫苗。