氣相色譜法測定醫(yī)用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量

＊梅煒華 吳小紅 汪家升 董芳芳

（浙江伽奈維醫(yī)療科技有限公司 浙江 310000）

α-氰基丙烯酸酯粘合劑是目前應(yīng)用最廣泛的醫(yī)用膠粘合劑之一，這類粘合劑的開發(fā)、研究備受矚目，發(fā)展非常迅速，主要用于迅速止血、組織及器官等局部部位的粘結(jié)及栓塞等，解決了一些傳統(tǒng)方法無法達(dá)到的預(yù)期效果的問題，與其他粘合劑相比，其單組分、無溶劑、聚合速度快、粘結(jié)強度大、毒性小及良好的生物相容性等優(yōu)良特性，已經(jīng)成為臨床應(yīng)用的良好醫(yī)學(xué)材料[1]。檸檬酸三乙酯是膠粘劑較為常用的增塑劑，在醫(yī)用膠中加入適宜的增塑劑可以明顯地改善其柔韌性，使膜性能由彎曲易折斷改善為耐彎折無硬物，使用中放熱不明顯，達(dá)到醫(yī)用要求。

國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的2016年第6號《α-氰基丙烯酸酯類醫(yī)用粘合劑注冊 技術(shù)審查指導(dǎo)原則》[2]中明確對產(chǎn)品主體成分含量要求質(zhì)量控制；目前尚未制定對該類產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并且相關(guān)文獻(xiàn)資料也相對匱乏。其中，氣相色譜-質(zhì)譜法測定醫(yī)用膠a-氰基丙烯酸正丁酯的含量[3]，CN113447587A是一種氰基丙烯酸酯類化合物的純度測定方法[4]，氰基丙烯酸甲氧基乙酯中微量雜質(zhì)的毛細(xì)管氣相色譜分析[5]，毛細(xì)管氣相色譜法測定檸檬酸三乙酯含量[6]，以上幾篇文獻(xiàn)單個成分檢測有相應(yīng)的介紹但并不完善。本方法主要針對α-氰基丙烯酸正丁酯及其增塑劑檸檬酸三乙酯兩種成分在同一條件下進(jìn)行檢測，經(jīng)過方法學(xué)驗證確保準(zhǔn)確性。

1.實驗部分

(1)儀器與試劑

8860型氣相色譜儀，配備氫火焰離子化檢測器，美國安捷倫科技公司；色譜柱：HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），美國安捷倫科技公司；ME204E分析天平，梅特勒-托利多公司。

α-氰基丙烯酸正丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司）；檸檬酸三乙酯對照品（中國食品藥品檢定研究院）；丙酮（色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

(2)色譜條件

色譜柱為HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），程序升溫：初始溫度100℃保持2min，以10℃/min的速率升溫至180℃，保持3min；進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測室溫度：250℃；柱流速：2mL/min；進(jìn)樣量：1.0μL，分流比30:1。

(3)實驗方法

空白溶液配制：用移液槍移取1mL丙酮，置于進(jìn)樣小瓶中，密封，作為空白溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：分別量取適量氰基丙烯酸正丁酯對照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL氰基丙烯酸正丁酯中間液和適量檸檬酸三乙酯對照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL檸檬酸三乙酯中間液，再取5mL氰基丙烯酸正丁酯中間液和1mL檸檬酸三乙酯中間液用丙酮定容至配制成5mg/mL的氰基丙烯酸正丁酯和1mg/mL檸檬酸三乙酯溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.2mL、0.5mL、0.8mL、1.0mL和1.2mL，用丙酮定容至10mL，配制成含α-氰基丙烯酸正丁酯0.1mg/mL、0.25mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL和檸檬酸三乙酯0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.12mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液混合溶液。

2.結(jié)果與討論

(1)定性分析

溶劑丙酮的出峰位置不影響α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的定性和定量，如圖1所示。

圖1 丙酮與α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯的色譜圖

(2)精密度與系統(tǒng)適用性

配制6份含α-氰基丙烯酸正丁酯0.6mg/mL和檸檬酸三乙酯0.12mg/mL的供試品溶液，由一個分析人員在相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液的含量在＞100.0μg/mL，100～1000μg/mL時，物質(zhì)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯精密度與系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果，如表1所示。

表1 精密度與系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果

(3)線性

線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，線性試驗結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈比例關(guān)系的能力?？捎猛粚φ掌穬湟航?jīng)精密稀釋或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進(jìn)行測定，至少制備5個不同濃度水平。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯各自所得線性方程，如表2所示，線性關(guān)系圖見圖2、圖3。

表2 兩種物質(zhì)的線性方程

圖2 α-氰基丙烯酸正丁酯線性圖

圖3 檸檬酸三乙酯線性圖

(4)準(zhǔn)確度

分別配制含α-氰基丙烯酸正丁酯0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL；檸檬酸三乙酯0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.10mg/mL的供試品溶液各三份，分別測定其含量。含量＞10.0μg/mL，≤100μg/mL的物質(zhì)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于4.0%；含量＞100.0μg/mL，≤1000μg/mL的物質(zhì)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯加標(biāo)回收率試驗結(jié)果，如表3所示。

表3 加標(biāo)回收率試驗結(jié)果

(5)定量限

主峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于10。所測6份溶液濃度＞1μg/mL，≤10μg/mL時物質(zhì)的含量相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于6.0%，所測6份溶液主峰的保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯定量限試驗結(jié)果，如表4所示。

表4 定量限試驗結(jié)果

(6)檢出限

主峰與噪音峰信號的強度比不得小于3。α-氰基丙烯酸正丁酯的最小檢出量為0.4μg/mL；檸檬酸三乙酯最小檢出量為1.0μg/mL。

3.討論

醫(yī)用膠屬于生物醫(yī)學(xué)特殊功能性膠粘劑，在我國作為Ⅲ類醫(yī)療器械管理。然而，由于目前國內(nèi)缺乏針對這類產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，企業(yè)在注冊產(chǎn)品時無依據(jù)可循，因此難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯本身較高黏度，樣品濃度應(yīng)適宜。當(dāng)樣品濃度過高時（20mg/mL），進(jìn)樣針易堵塞，且目標(biāo)物峰拖現(xiàn)象較為明顯。通過降低樣品濃度至5mg/mL，并調(diào)高分流比，可以有效改善拖尾現(xiàn)象，但同時易產(chǎn)生殘留物質(zhì)，在多次進(jìn)樣后會導(dǎo)致目標(biāo)峰濃度偏高。最終將樣品濃度降至0.5mg/mL時，重復(fù)進(jìn)樣不會使目標(biāo)物濃度增加，因此該濃度下的進(jìn)樣效果更佳。另一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯遇水極易固化，因此，在配制時需注意環(huán)境保持干燥，以免樣品長時間暴露在空氣中吸收水分并引起聚合現(xiàn)象。同時，在現(xiàn)有的α-氰基丙烯酸正丁酯檢測方法的基礎(chǔ)上，對檸檬酸三乙酯的檢測方法進(jìn)行優(yōu)化驗證。結(jié)果表明，在該條件下，兩種物質(zhì)均能夠良好地響應(yīng)。

4.結(jié)論

實驗結(jié)果表明，該方法適用于醫(yī)用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量檢測。該方法簡單易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性良好，為醫(yī)用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量測定及生產(chǎn)監(jiān)控提供了有力支持。