CLIA、RPR、TPPA 檢測血清中梅毒螺旋體抗體的價值分析

趙穎 馬躍

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染后引起的一種易傳染的性傳播疾病, 臨床屬于一種進展緩慢的疾病, 患者全身重要器官都會感染梅毒, 是易傳染和有害的人類性傳播疾?。?］。這種疾病的主要誘發(fā)因素是梅毒螺旋體, 其可以侵入患者主要器官, 導致患者產(chǎn)生各種癥狀。近年梅毒的臨床發(fā)病率逐年上升, 對患者的生活及工作造成嚴重影響［2］。因此, 臨床對于梅毒準確診斷具有重要意義。梅毒螺旋體抗體的血清學檢測方法已被中國衛(wèi)健委列為手術前和產(chǎn)前、妊娠前的必備項目, 故選擇特異性強、敏感性高的檢測方法非常有助于診斷［3］。目前, 臨床對梅毒的診斷主要包括CLIA、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、RPR 和TPPA 等診斷方法,具有一定的診斷準確性、高靈敏度, 可為臨床診斷提供可靠的保障。然而, 為了進一步確保患者臨床診斷結果, 作者對此進行研究, 結果研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2022 年1 月～2023 年1 月臨床100 例疑似梅毒患者的血清樣本進行研究, 所有標本均于抽血3 h 內分離血清, 并在36℃下進行保存, 于次日進行檢測。

1.2 方法 CLIA 試劑盒和TPPA 試劑盒來自某科技有限公司, RPR 試劑盒來自某有限公司, 對100 份疑似梅毒患者血清樣本進行CLIA、RPR 和TPPA 檢測。CLIA 檢測：采用雙抗原夾心一步法免疫分析, 用梅毒螺旋體抗原制備抗原, 用辣根過氧化物酶標記梅毒抗原, 在樣品中形成雙抗原夾心。洗滌后加入發(fā)光底物溶液, 測量樣本發(fā)光值, 根據(jù)臨界值判斷其是否存在梅毒螺旋體抗體。TPPA 檢測：使用超聲裂解純化的菌株作為抗原, 將其涂覆在明膠顆粒上, 與血清中的特異性抗體結合后出現(xiàn)可見的凝集反應。RPR 檢測：取50 U待檢血清, 加入卡片的圓圈內并涂均, 用專用滴管加入搖勻的卡抗原1 滴, 將卡片旋轉8 min 后立即觀察結果,出現(xiàn)黑色凝集顆粒和?片為陽性。并以重組免疫印跡法檢測結果為金標準, 金標準檢測結果：陽性74 例,陰性26 例。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢測。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CLIA 檢測結果 CLIA 檢出陽性59 例, 陰性41 例。見表1。

表1 CLIA 檢測結果(n)

2.2 RPR 檢測結果 RPR 檢出陽性73 例, 陰性27 例。見表2。

表2 RPR 檢測結果(n)

2.3 TPPA 檢測結果 TPPA 檢出陽性59 例, 陰性41 例。見表3。

表3 TPPA 檢測結果(n)

2.4 CLIA、RPR 和TPPA 的診斷效能比較 CLIA 診斷準確率為69.00%(69/100), 敏感度為68.92%(51/74),特異度為69.23%(18/26)；RPR 診斷準確率為97.00%(97/100), 敏感度為97.30%(72/74), 特異度為96.15%(25/26)；TPPA 診斷準確率為77.00%(77/100), 敏感度為74.32%(55/74), 特異度為84.62%(22/26)。RPR 的診斷準確率、敏感度顯著高于CLIA、TPPA(P＜0.05)；RPR的特異度高于CLIA(P＜0.05)；CLIA 與TPPA 的診斷準確率、敏感度、特異度差異較小(P＞0.05)。

3 討論

梅毒的病原體是梅毒螺旋體, 是一種慢性全身性疾病。梅毒螺旋體是一種螺旋狀微生物, 透明, 又稱為蒼白螺旋體, 其特征有：①梅毒螺旋體菌種螺旋方式整齊, 旋轉方式固定不變；②梅毒螺旋體細菌折光力強；③梅毒螺旋體行動緩慢；④梅毒螺旋體行動有規(guī)律,圍繞長軸旋轉前后移動, 全身彎曲如蛇行［4,5］。梅毒螺旋體感染患者具有多種臨床癥狀, 后果嚴重。梅毒螺旋體可以侵入身體的主要器官, 會導致患者出現(xiàn)全身損害, 對患者的生活質量造成嚴重影響。

世界上梅毒螺旋體感染率仍在上升。在全球范圍內, 25 歲的西方男性和黑人男性的梅毒發(fā)病率最高。2020 年, 男性占所有梅毒螺旋體感染患者的87.32%,大約一半梅毒患者報告與男男發(fā)生性關系有關, 其中還有大約53.32%的患者同時感染了人類免疫缺陷病毒, 這一發(fā)現(xiàn)突顯了梅毒螺旋體感染事件與人類免疫缺陷病毒感染風險增加之間的密切關系, 人類免疫缺陷病毒感染也可能伴隨其他性傳播感染。梅毒在中國是一種B 類傳染性疾病。2015～2020 年, 梅毒臨床報告發(fā)病人數(shù)從每萬人的301.2 例增加到每萬人的377.0 例,年均增長約4.41%；此外, 早期梅毒下降了約1.73%,胎兒梅毒下降了25.32%, 但隱性梅毒患者增加了約12.75%。我國梅毒螺旋體感染病例高發(fā)省份主要在新疆北部、青海南部、浙江、海南等地區(qū)和福建省, 且該地區(qū)男性梅毒螺旋體感染病例略低于女性, 男女性別比為0.87∶1～0.98∶1, 青少年呈逐年快速增長趨勢,年均增長近14.14%。2015～2019 年, 梅毒高發(fā)年齡為20～39 歲, 2019 年主要為20～36 歲, 正在年輕化, 同時潛伏梅毒比例逐年上升。

絕大多數(shù)梅毒螺旋體感染是通過性途徑傳播的,也可以通過輸入梅毒螺旋體的傳染性血液制品而感染?；加忻范镜脑袐D將通過胎盤垂直傳播給下一代。臨床分期主要為一期、二期和三期梅毒以及潛伏梅毒。神經(jīng)梅毒可出現(xiàn)在梅毒的早期和晚期, 如果沒有及時和合理的治療, 梅毒將發(fā)展為多個階段, 并呈現(xiàn)各種臨床表現(xiàn)［6］。因此, 梅毒疾病的早期檢測對于控制梅毒傳播和及時治療具有重要意義, 這引起了廣泛學者、專家和企業(yè)的關注。因此, 梅毒的檢測在臨床實踐中發(fā)揮著重要作用, 研究指出, 目前臨床實踐中, 梅毒螺旋體實驗室診斷主要采用病原學和血清學兩種, 其中病原學檢查梅毒螺旋體的結果最直接［7］。梅毒螺旋體很難在體外培養(yǎng), 其診斷主要為血清學檢測, 包括特異性抗體和非特異性抗體檢測。非特異性抗體檢測對早期梅毒檢測不敏感, 生物假陽性幾率高。目前, 梅毒特異性抗體檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗、TPPA、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗和重組免疫印跡法。除了酶聯(lián)免疫吸附試驗外, TPPA、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗和重組免疫印跡法不適合人類批量和自動化檢測,但酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測梅毒螺旋體自動化只能實現(xiàn)批量樣品自動化。研究發(fā)現(xiàn), 在使用病因學梅毒螺旋體臨床診斷中, 由于條件的限制, 其測試方法僅適用于教學。臨床常用的實驗室檢査為梅毒螺旋體血清試驗,根據(jù)所用的抗原不同而分為兩類：①非梅毒螺旋體抗原血清試驗；②梅毒螺旋體抗原血清試驗。非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床特異性較差, 其具有成本低、肉眼可變、臨床診斷快特點, 適用于臨床對梅毒螺旋體感染早期癥狀的篩查, 但這種方法不是特異性診斷,臨床診斷梅毒螺旋體存在較高的假陽性率；螺旋體抗原血清試驗特異性較好, 但梅毒螺旋體血清試驗在早期梅毒患者中可以是陰性, 對于早期梅毒螺旋體感染敏感性不高, 梅毒螺旋體抗體試驗在臨床試驗中具有較高的敏感性, 可作為梅毒螺旋體感染診斷的臨床試驗。

梅毒血清試驗可能出現(xiàn)假陽性反應, 如許多非梅毒螺旋體引起的感染性疾病(風疹等)、自身免疫性疾病、腫瘤等情況下均可出現(xiàn)假陽性反應。國內外多次臨床研究發(fā)現(xiàn), 血清學檢查對早期梅毒的檢出率不高,此時就需要有其他檢測法方輔助。CLIA 是一種基于患者梅毒螺旋體抗原反應的高特異性, 結合酶催化化學發(fā)光反應的超靈敏微量免疫分析技術［8］。CLIA 由免疫和化學發(fā)光組成, 免疫反應產(chǎn)物化學發(fā)光信號用于指示免疫反應, 從而實現(xiàn)抗原或抗體物質含量的檢測。CLIA 具有試劑穩(wěn)定、靈敏度高、無輻射危害、無環(huán)境污染及可定量等優(yōu)點, 近年來, 其已成為一種快速發(fā)展的技術［9］。目前, 類似CLIA 分析技術產(chǎn)品只是一些國外產(chǎn)品, 包括雅培等, 在中國大型醫(yī)院廣泛銷售, 最大的問題是檢測試劑和儀器昂貴, 不能滿足免費研究的要求。由于CLIA 儀器和試劑價格昂貴, 也導致醫(yī)療費用的上漲, 增加患者負擔, 不適合中國國情, 不利于CLIA 在中國廣泛機構的普及。因此, 迫切需要開發(fā)一種具有自主知識產(chǎn)權的開放、低成本CLIA 診斷試驗,以滿足國內各級醫(yī)療機構對臨床診斷的需求。

TPPA 的特點是在臨床實踐中快速診斷梅毒, 從樣品處理到結果只需約120 min, 不需要特殊設備的配合,但當檢測到大量患者血清樣本時, 此方法極其耗時費力, 同時人工肉眼觀察結果存在差異, 無法自動保存,導致臨床診斷準確性較差［10,11］。在臨床試驗中, 血清樣本進行CLIA 可以有效消除其他因素對診斷結果的干擾, 檢測過程自動化程度高, 實驗重復性好, 具有一定的敏感性。然而, 這種診斷方法對梅毒螺旋體感染的診斷成本相對較高。

RPR 檢測梅毒螺旋體感染是一種非特異性的抗體檢測方法, 在臨床診斷中具有較高的診斷準確性, 在臨床確診中具有敏感性和特異性, 適用于梅毒螺旋體抗體的臨床診斷［12］。重組免疫結合梅毒試驗作為診斷的金標準, 具有操作簡單、臨床無需特殊設備的優(yōu)點, 可以用肉眼判斷, 但這種診斷方法在臨床診斷中耗時較長, 在檢測大量樣本時操作過程極其繁瑣, 檢測成本較高, 故不適用于臨床診斷中大量樣本的診斷, 而僅適用于特殊樣本的科學研究和臨床測試。

綜上所述, RPR 在梅毒螺旋體抗體的臨床診斷中具有更佳的診斷準確率, 可為梅毒患者的治療提供可靠的診療依據(jù)。