酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油對鯉魚生長性能和飼料利用的影響

■ 王子蔚 王曉亮 付大波 張成杰 吳金平 劉 偉 吳建軍*

（1.武漢新華揚生物股份有限公司，湖北 武漢 430206；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水生物多樣性保護重點實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所，湖北 武漢 430223）

鯉魚是我國淡水養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟魚類，無論是養(yǎng)殖面積還是養(yǎng)殖產(chǎn)量在淡水養(yǎng)殖業(yè)中都占有較大的比重[1]。近年來，由于魚粉、豆粕等優(yōu)質(zhì)蛋白原料和各種油脂等能量原料價格的不斷上漲，鯉魚的飼料成本和養(yǎng)殖成本也不斷提高，另一方面，受整個經(jīng)濟大環(huán)境的影響，鯉魚的銷售價格呈現(xiàn)持續(xù)下滑的態(tài)勢，導(dǎo)致這兩年來，河南、遼寧、山東、河北等鯉魚養(yǎng)殖區(qū)域不少養(yǎng)殖戶紛紛轉(zhuǎn)養(yǎng)或轉(zhuǎn)行，鯉魚養(yǎng)殖面積和養(yǎng)殖產(chǎn)量嚴(yán)重縮減。因此，降低鯉魚飼料和養(yǎng)殖成本，提升養(yǎng)殖效益，已成為廣大養(yǎng)殖戶、飼料行業(yè)從業(yè)人員以及科研人員共同關(guān)注的問題。

在此背景下，植物性原料逐漸替代魚粉、肉粉等動物性原料[2-6]，成為鯉魚飼料中的主要原料。然而植物性原料通常含有大量的木聚糖、纖維素、果膠、葡聚糖、甘露聚糖等非淀粉多糖類抗?fàn)I養(yǎng)因子[7]，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子是植物細胞壁的主要構(gòu)成成分，它們將大量的營養(yǎng)物質(zhì)包裹在細胞內(nèi)，阻礙消化酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而降低飼料的利用率[8]。隨著生物工程和發(fā)酵工程的發(fā)展，使大規(guī)模工廠化生產(chǎn)用于降解各種非淀粉多糖的酶制劑成為可能[9]。研究表明，通過添加外源性非淀粉多糖酶，可以消除飼料中非淀粉多糖的抗?fàn)I養(yǎng)作用，使飼料中更多營養(yǎng)物質(zhì)得到消化吸收，從而提高飼料的利用率[10]，有節(jié)約飼料中能量源原料添加的可能；且吡啶甲酸鉻在促進魚體的糖酵解供能上具有正向作用[11]。通過上述研究推知：酶制劑與吡啶甲酸鉻均存在從能量節(jié)約角度替代鯉魚飼料中能量源原料的可能，而有關(guān)酶制劑和吡啶甲酸鉻對水產(chǎn)飼料中油脂類原料替代以及替代后對養(yǎng)殖魚類生長性能和飼料利用的研究尚不多見。因此，本試驗旨在研究通過在飼料中添加酶制劑和吡啶甲酸鉻來提高鯉魚對飼料中蛋白質(zhì)、碳水化合物的利用率，從而減少飼料中油脂類原料的添加量，節(jié)約飼料成本和養(yǎng)殖成本，提高鯉魚養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益。

1 材料與方法

1.1 試驗魚及飼養(yǎng)管理

試驗用鯉魚為興國紅鯉（Cyprinus carpio var.singuonensis），購于武漢市正好養(yǎng)殖場，養(yǎng)殖試驗在中國水產(chǎn)科學(xué)院長江水產(chǎn)研究所室內(nèi)試驗養(yǎng)殖車間進行。試驗前先將試驗魚用高錳酸鉀浸泡消毒后，置暫養(yǎng)池暫養(yǎng)2 周，投喂商品飼料以適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境。待試驗魚馴養(yǎng)穩(wěn)定后，挑選大小一致、鱗片完整的平均體重為（7.53±0.02） g的健康魚，隨機分成7組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)30 尾魚，于直徑30 cm、盛水100 L 的循環(huán)系統(tǒng)水缸中飼養(yǎng)。試驗期為8 周，采用循環(huán)水控溫養(yǎng)魚，24 h 充氣增氧，水溫控制在（25±2） ℃，pH 控制在7.5～8.5，氨氮濃度控制在0.3 mg/L 以下，亞硝酸鹽濃度低于0.1 mg/L。每天投喂2次，時間分別為09：00和16：00，投喂率為魚體重的4%～5%。

1.2 試驗飼料

以魚粉、豆粕、菜粕、棉粕、小麥和米糠等為原料配制7 組飼料。HL 組為基礎(chǔ)對照組，ML、LL 組為負(fù)對照組，分別減少0.5%、1.0%豆油的添加，MLE、LLE組為加酶組，MLEC、LLEC 組為加酶加鉻組。試驗酶制劑由武漢新華揚生物股份有限公司提供，酶譜組成為：木聚糖酶600 U/g，β-葡聚糖酶5 600 U/g，β-甘露聚糖酶400 U/g，纖維素酶1 600 U/g，中性蛋白酶1 000 U/g。吡啶甲酸鉻（鉻含量0.1%）由湖北神舟化工科技有限公司提供。試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。原料粉碎后過60 目篩，按配方準(zhǔn)確稱量各種飼料原料，微量組分采用逐級擴大法混合，混合均勻后用小型環(huán)模顆粒機壓制成粒徑為2.0 mm的顆粒飼料，風(fēng)干后用封口袋包裝置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗飼料的原料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)，%）

1.3 樣品采集與指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能測定

試驗開始時，準(zhǔn)確稱量并記錄每個養(yǎng)殖桶中所放養(yǎng)魚的尾數(shù)和重量，作為初始尾數(shù)和初始重量。試驗過程中如出現(xiàn)死魚情況，必須及時撈出死魚并記錄死魚尾數(shù)和重量。試驗結(jié)束后，停食24 h，以MS222 麻醉后，準(zhǔn)確稱量并記錄每個養(yǎng)殖桶中所放養(yǎng)魚的尾數(shù)和重量，作為終末尾數(shù)和終末重量（如出現(xiàn)過死魚，需加上死魚數(shù)量和死魚重量），以進行生長指標(biāo)計算。另在每個養(yǎng)殖桶取3 尾魚測定體長、體重、肝重和內(nèi)臟重，以計算魚的肝體比、臟體比和肥滿度。

增重率（WGR，%）=100×（終末均重-初始均重）/初始均重

特定生長率（SGR，%/d）=100×（ln 終末均重-ln 初始均重）/養(yǎng)殖天數(shù)

肥滿度（CF，g/cm3）=100×平均體重/平均體長3

肝體比（HIS，%）=100×肝重/體重

臟體比（VSI，%）=100×內(nèi)臟重/體重

成活率（SR，%）=100×初始尾數(shù)/終末尾數(shù)

1.3.2 飼料利用指標(biāo)的測定

統(tǒng)計養(yǎng)殖期間飼料的投喂量、試驗魚的增重量和養(yǎng)殖天數(shù)，計算攝食量、飼料效率等指標(biāo)。

飼料系數(shù)（FCR）=飼料投喂總量/（試驗?zāi)~均重-試驗初魚均重）

攝食率（FI，%）=100×飼料投喂總量/[0.5×（初始尾數(shù)+終末尾數(shù)）×天數(shù)]

蛋白質(zhì)效率比（PER，%）=100×（終末均重-初始均重）/（飼料投喂總量×飼料蛋白質(zhì)含量）

1.3.3 表觀消化率的測定

養(yǎng)殖試驗開始后2 周，投喂2 h 后，等試驗魚排糞便時，用撈網(wǎng)收集水中的糞便，將糞便冷凍后置于真空干燥器中干燥，收集集中，并于-20 ℃冷藏備用。

飼料和糞便中的營養(yǎng)成分按《Official Methods of Analysis.17th ed., Association of Official Analytical Chemists, Washington, DC, USA》進行，即采用直接干燥法測定水分含量，凱氏定氮法測定粗蛋白含量，索氏抽提法測定粗脂肪含量，灼燒稱重法測定灰分含量，二苯碳酰二肼丙酮法測定吡啶甲酸鉻含量。最終計算獲得飼料干物質(zhì)、粗蛋白和粗脂肪的表觀消化率。

干物質(zhì)表觀消化率（ADCDM，%）=100×（1-飼料吡啶甲酸鉻含量/糞便吡啶甲酸鉻含量）

粗蛋白表觀消化率（ADCPro，%）=100×[1-（飼料中吡啶甲酸鉻含量/糞便中吡啶甲酸鉻含量）×（糞便蛋白質(zhì)含量/飼料蛋白質(zhì)含量)]

粗脂肪表觀消化率（ADCFat，%）=100×[1-（飼料中吡啶甲酸鉻含量/糞便中吡啶甲酸鉻含量）×（糞便蛋白質(zhì)含量/飼料蛋白質(zhì)含量）]

1.3.4 血清生理生化指標(biāo)分析試驗結(jié)束時，經(jīng)MS222麻醉后，每個養(yǎng)殖桶取3尾魚，從尾部靜脈采血，4 ℃冰箱靜置2 h，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層血清用Sysmex 全自動生化分析儀（型號Chemix-800）測定血糖濃度、極低密度脂蛋白含量、高密度脂蛋白含量、三酰甘油濃度、膽固醇濃度、白蛋白濃度。肝糖原、肌糖原含量采用南京建成生物工程研究所有限公司試劑盒進行測定。

1.3.5 肝臟組織切片

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，從每個養(yǎng)殖桶中取3 尾魚，解剖后，取同一部位的肝臟，放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h 后，用石蠟包埋，連續(xù)切片，H.E.染色，光鏡下逐片觀察及照片，運用IPP 6.0（Media Cybernetics Inc., Bethesda, MD, USA）圖像分析軟件對HE 染色結(jié)果進行分析、處理。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示。數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 軟件進行one-way ANOVA 分析，并Duncan’s 法作多重比較，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同脂肪水平飼料中添加酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚生長性能與形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

由表2 可知，在不添加酶制劑和吡啶甲酸鉻時，隨著飼料脂肪水平的降低，ML 組鯉魚的增重率和特定生長率分別較HL 組顯著降低了8.34%和5.99%（P＜0.05），LL 組鯉魚的增重率和特定生長率分別較HL 組顯著降低了19.46%和13.77%（P＜0.05）。在ML組中添加酶制劑后的MLE 組試驗魚的增重率和特定生長率與HL組無顯著差異（P＞0.05），但分別較ML組顯著提高8.20%和5.73%（P＜0.05）；在LL 組中添加酶制劑后的LLE 組試驗魚的增重率和特定生長率較LL分別顯著提高13.73%和9.03%（P＜0.05），而較HL 組分別顯著降低8.40%和5.99%（P＜0.05）。在ML 組中同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后的MLEC 組試驗魚的增重率和特定生長率較HL 組分別顯著提高8.59%和5.39%（P＜0.05），較ML 組分別顯著提高18.47%和12.10%（P＜0.05）；在LL 組中同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后的LLEC組試驗魚的增重率和特定生長率較HL 組分別降低5.90%和4.38%（P＞0.05），較LL 組分別顯著提高16.84%和11.11%（P＜0.05）。LL 組和LLE組試驗魚的臟體比低于其他各組，而LLEC 組的臟體比則高于其他各組，HL 組、ML 組、MLE 組和MLEC 組各組之間的臟體比均無顯著差異（P＞0.05）。試驗各組在肥滿度、肝體比和成活率方面均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼用酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚生長與形態(tài)的影響

2.2 不同脂肪水平飼料中添加酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚飼料利用的影響

由表3 可知，飼料中脂肪水平分別降低0.5%和1.0%時，ML 組和LL 組鯉魚飼料的飼料系數(shù)較HL 組分別升高14.53%和13.37%（P＜0.05），而在飼料中添加酶制劑后,MLE 組的飼料系數(shù)較ML 組降低了8.63%，LLE 組的飼料系數(shù)較LL 組降低了2.05%（P＞0.05）。同時在飼料中添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后，MLEC 組的飼料系數(shù)較HL 組和ML 組分別降低了8.72%和20.30%（P＜0.05），LLEC 組的飼料系數(shù)較LL組降低了8.72%（P＞0.05）。ML 組和LL 組的蛋白質(zhì)效率比較HL 組分別降低了12.50%和11.98%（P＜0.05），而MLE 組和LLE 組的蛋白質(zhì)效率比較ML 組和LL 組分別提高8.93%和2.96%（P＞0.05），MLEC 組和LLEC組的蛋白質(zhì)效率比較ML 組和LL 組分別提高25.00%（P＜0.05）和10.65%（P＞0.05），MLEC 組的蛋白質(zhì)效率比最高。MLE 和MLEC 組的干物質(zhì)、粗蛋白及粗脂肪的表觀消化率均顯著高于ML 組（P＜0.05），LLE 組和LLEC 組的粗脂肪的表觀消化率顯著高于LL 組（P＜0.05）。

表3 飼用酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚飼料利用的影響

2.3 不同脂肪水平飼料中添加酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚飼料成本的影響

由表4可知，在不添加酶制劑和吡啶甲酸鉻（ML、LL 組），飼料的脂肪水平分別降低0.5%和1.0%時，每千克魚的飼料成本分別增加1.02 元和0.86 元，而投喂1 噸飼料的產(chǎn)魚量分別減少71.38 kg 和66.42 kg。在ML組飼料中添加酶制劑或同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻，每千克魚的飼料成本較ML 組分別降低0.70 元和1.73元，較HL組增加0.32元和降低0.71元；投喂1噸飼料的產(chǎn)魚量較ML 組增加47.87 kg 和127.67 kg，較HL組分別減少23.51 kg和增加56.29 kg；在LL組飼料中添加酶制劑或同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻，每千克魚的飼料成本較LL組分別降低0.15元和0.72元，較HL組分別降低0.71元和0.14元，投喂1噸飼料的產(chǎn)魚量較LL組增加10.27 kg和51.15 kg，但較HL組分別減少56.15 kg和15.27 kg。

表4 飼用酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚飼料成本及產(chǎn)魚量的影響

2.4 不同脂肪水平飼料中添加酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚血液生化指標(biāo)的影響

由表5 可知，與HL 組相比，隨著飼料脂肪水平的降低，ML 組和LL 組魚肌糖原和肝糖原含量顯著降低（P＜0.05），而在ML 和LL 飼料中添加酶制劑后，MLE和LLE 組肌糖原含量較ML 組和LL 組分別提高43.30%（P＜0.05）和12.50%（P＞0.05），肝糖原含量較ML 組和LL 組顯著提高12.17%和58.87%（P＜0.05），同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后，MLEC 和LLEC 組肌糖原含量較ML 組和LL 組顯著提高117.53%和54.76%（P＜0.05），肝糖原含量較ML 組和LL 組分別提高31.80%和62.54%（P＜0.05）。在ML 和LL 飼料中添加酶制劑后，MLE和LLE組極低密度脂蛋白的含量分別較ML 組和LL 組升高，而同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后，MLEC 和LLEC 組極低密度脂蛋白的含量又較MLE 和LLE 組顯著降低（P＜0.05）。各組試驗魚血糖濃度、高密度脂蛋白含量、三酰甘油濃度、膽固醇濃度及白蛋白濃度等均無顯著差異（P＞0.05）。

表5 飼用酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚血清生理生化指標(biāo)的影響

2.5 不同脂肪水平飼料中添加酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚肝臟健康的影響

從圖1 中可以看出，HL 組的試驗魚肝細胞核偏移，存在空泡變性的現(xiàn)象，逐步降低飼料脂肪含量后，ML 組和LL 組的核偏移和肝細胞空泡變性的情況得到明顯改善，在飼料中添加酶制劑后，MLE 組和LLE組肝細胞空泡變性程度得到較大程度的改善，添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后，MLEC 組和LLEC 組肝細胞均排列整齊，大小均一，細胞膜分界明顯，無核偏移和空泡變性現(xiàn)象出現(xiàn)，肝臟細胞健康。

圖1 飼用酶制劑與吡啶甲酸鉻對鯉魚肝臟健康的影響

3 討論

3.1 酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油對鯉魚的生長性能的影響

研究表明，在鯉魚成魚飼料中粗蛋白為30%左右時，推薦的飼料粗脂肪含量應(yīng)為5%左右[12]，本試驗的飼料配方設(shè)計及營養(yǎng)水平符合該要求。當(dāng)鯉魚飼料中粗脂肪含量不足時，會出現(xiàn)增重率和特定生長率顯著下降的情況[13]。文獻指出，豆油中的粗脂肪含量為99%[14]。由此推測，作為水產(chǎn)飼料中的主要脂肪來源之一的豆油[15]，其含量的減少將極大程度上對鯉魚生長性能造成負(fù)面影響。

在本試驗用飼料中，較基礎(chǔ)對照組HL組而言，負(fù)對照組ML組和LL組分別減少0.5%和1.0%的豆油添加量，ML 組和LL 組的粗脂肪水平分別對應(yīng)降低0.52%和1.02%。在本試驗結(jié)果里，較HL 組而言，ML組和LL 組試驗魚的增重率分別下降8.34% 和19.46%，特定生長率分別下降5.99%和13.77%，證實了上述推測。

本試驗中，在ML 組和LL 組的基礎(chǔ)上僅添加酶制劑形成的MLE 組和LLE 組飼料對應(yīng)飼喂的試驗魚的增重率的數(shù)值，雖然仍比基礎(chǔ)對照組HL組低，但較其相應(yīng)的負(fù)對照組分別提高了8.20%、13.73%，特定生長率較其相應(yīng)的負(fù)對照組分別提高了5.73%、9.03%。這部分試驗結(jié)果展現(xiàn)的比較趨勢，與在黃羽肉雞[16]和在鯽魚[17]方面的研究結(jié)果一致。這意味著在飼料中添加酶制劑，可能在一定程度上彌補由飼料中低豆油添加量導(dǎo)致飼料粗脂肪水平降低對鯉魚生長性能造成的負(fù)面影響。

本研究中，在ML 組和LL 組的基礎(chǔ)上同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻形成的MLEC 組和LLEC 組飼料對應(yīng)飼喂的試驗魚，與其對應(yīng)的負(fù)對照組、僅添加酶制劑組比較增重率和特定生長率的結(jié)果，在數(shù)值上均增加。據(jù)此推測，酶制劑和吡啶甲酸鉻聯(lián)合應(yīng)用在鯉魚飼料中替代豆油對鯉魚生長性能的提高具有一定的協(xié)同作用。最近20 年的國內(nèi)外多項研究表明，在飼料中添加酶制劑和吡啶甲酸鉻能夠有效促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和沉積，從而改善養(yǎng)殖動物的生長性能[18-23]，佐證了我們的推測。

更有趣的是，MLEC 組的試驗魚的增重率和特定生長率甚至高于基礎(chǔ)對照組HL 組，這說明酶制劑和吡啶甲酸鉻聯(lián)用能在不影響?zhàn)B殖魚類生長性能的情況下，節(jié)約飼料中0.5%的脂肪水平。

3.2 酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油對鯉魚的飼料利用程度及飼料成本的影響

在常規(guī)情況下，任何飼料都不會被完全消化，在動物飼料中添加外源酶制劑，一方面可以彌補動物內(nèi)源消化酶分泌的不足，另一方面可以幫助降解動物自身不能消化利用的一些非淀粉多糖，從而提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化率及代謝能值[24]。而吡啶甲酸鉻可以通過葡萄糖耐受因子協(xié)助或增強胰島素在體內(nèi)的功能作用而影響蛋白質(zhì)、脂肪、糖等多種營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，尤其是在糖的吸收利用方面具有正向作用[25]，因此可以推測，將二者聯(lián)合應(yīng)用，可能提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，從而提升鯉魚的飼料利用程度，降低養(yǎng)殖鯉魚所需的飼料成本。

本研究中，與中脂飼料ML 組相比，MLEC 組在中脂飼料中添加酶制劑和吡啶甲酸鉻后，其蛋白質(zhì)效率比、粗蛋白表觀消化率和粗脂肪表觀消化率顯著提高，飼料系數(shù)顯著降低；與在中脂飼料中僅添加酶制劑的MLE 組相比，MLEC 組蛋白質(zhì)效率比和粗蛋白表觀消化率也有了顯著提高，這說明酶制劑與吡啶甲酸鉻聯(lián)用替代豆油的確達到了協(xié)同增效的作用，提升了鯉魚的飼料利用程度。

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，每千克魚的飼料成本和每噸飼料的產(chǎn)魚量是決定養(yǎng)殖效益高低的兩個重要因素，也是養(yǎng)殖從業(yè)人員最為關(guān)注的兩個指標(biāo)。本研究中，在中脂飼料ML 組基礎(chǔ)上同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻的MLEC 組，每千克魚的飼料成本較高脂飼料HL 組降低0.71 元，而每噸飼料的產(chǎn)魚量較高脂飼料HL 組增加56.29 kg。由此可知，酶制劑與吡啶甲酸鉻聯(lián)用替代豆油確實能夠提升鯉魚的飼喂每噸飼料的產(chǎn)魚量，降低了養(yǎng)殖鯉魚所需的飼料成本。

綜上，將酶制劑與吡啶甲酸鉻聯(lián)用替代豆油，能夠提升鯉魚的飼料利用程度，降低養(yǎng)殖鯉魚所需的飼料成本，證實了上述推測。

3.3 酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油對鯉魚血清生理生化指標(biāo)的影響

血清生理生化指標(biāo)能反映魚類的生理代謝狀態(tài)，與營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，生化指標(biāo)的變化可以闡明營養(yǎng)素在機體代謝變化的作用機制[26]。糖原是葡萄糖在動物體內(nèi)的一種儲存形式，它們在維持血糖穩(wěn)定、體內(nèi)能量循環(huán)及物質(zhì)代謝等方面具有重要的作用[27-28]。在本試驗中，與中脂飼料ML 組和低脂飼料LL 組相比，同時添加酶制劑和吡啶甲酸鉻的MLEC 組和LLEC 組，均顯著提高了肌糖原和肝糖原的含量，這說明酶制劑和吡啶甲酸鉻的使用，可能促進了飼料中碳水化合物的消化、吸收和沉積，從而提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率。造成這種效果可能是飼料中添加了吡啶甲酸鉻后，鉻作為葡萄糖耐量因子的組成成分，通過增強胰島素的作用而增強了肝糖原與肌糖原的合成。有趣的是，Brooks 等[29]有關(guān)雞的研究的結(jié)果，與我們的推論相似。

極低密度脂蛋白是內(nèi)源性三酰甘油體內(nèi)運輸?shù)闹匾d體[30]，即三酰甘油是極低密度脂蛋白的重要組成成分，而葡萄糖可提供生成三酰甘油所需要的甘油[31]。在本試驗中，與中脂飼料ML 組和低脂飼料LL組相比，使用添加了酶制劑的MLE組和LLE組飼料飼喂鯉魚后的血清中血糖濃度、極低密度脂蛋白濃度均提升，變化趨勢一致。由此可以推測，添加酶制劑替代豆油能通過調(diào)節(jié)血清中血糖濃度方式調(diào)節(jié)極低密度脂蛋白濃度，提升魚體內(nèi)源性三酰甘油運輸效率，從而提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率。而令人意外的是，與中脂飼料ML 組和低脂飼料LL 組相比，使用添加了酶制劑的MLE 組和LLE 組飼料飼喂鯉魚后的血清中三酰甘油濃度、極低密度脂蛋白濃度變化趨勢也一致，結(jié)合血糖濃度同樣的變化趨勢，推測這可能是由于飼料中酶制劑的添加促進魚體血糖生成過多，進一步轉(zhuǎn)化成三酰甘油導(dǎo)致的[32]。

脂蛋白酯酶會從極低密度脂蛋白中奪取三酰甘油，用來儲存或制造能量[33]。與中脂飼料加酶組（MLE 組）和低脂飼料加酶組（LLE 組）相比，使用同時添加了酶制劑和吡啶甲酸鉻的MLEC 組和LLEC組飼料飼喂鯉魚后的血清中三酰甘油濃度和極低密度脂蛋白濃度均下降，變化趨勢一致。結(jié)合血清中血糖濃度、肝糖原含量、肌糖原含量升高的結(jié)果，表明酶制劑與吡啶甲酸鉻聯(lián)用可能通過增強胰島素的作用進一步利用由酶制劑產(chǎn)生的高血糖影響，促進外源性糖轉(zhuǎn)化為內(nèi)源性糖原沉積，降低魚體內(nèi)源性糖酵解供能壓力；推測還可能降低葡萄糖通過磷酸戊糖途徑轉(zhuǎn)化生成三酰甘油的效率，從而降低魚體由于過高的脂肪含量導(dǎo)致的脂肪性肝損傷等疾病的可能[34]。

3.4 酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油對鯉魚肝細胞組織形態(tài)的影響

肝胰臟是魚類重要的代謝器官，在集約化養(yǎng)殖過程中，飼料中的脂肪水平過高常會引起養(yǎng)殖魚類脂肪肝病的發(fā)生[35]。在本試驗中，投喂高脂飼料HL 組的鯉魚肝細胞核偏移，存在空泡變性現(xiàn)象，表明投喂高脂飼料可能會對鯉魚的肝臟健康造成負(fù)面影響。Ye等[36]有關(guān)高脂飼料投喂草魚的研究的結(jié)論，與本推測一致。

酶制劑的添加可能有利于改善肝臟的健康狀況[37]。本試驗中，與高脂飼料HL 組相比，將高脂飼料HL 組的脂肪水平分別降低0.5%和1.0%后形成的中脂飼料ML 組與低脂飼料LL 組分別飼喂鯉魚，試驗魚的肝臟空泡面積明顯減少。在中脂飼料ML組和低脂飼料LL 組中分別添加了酶制劑后，由對應(yīng)的MLE 組飼料與LLE 組飼料飼喂的試驗魚的肝細胞中空泡化面積進一步顯著降低，細胞質(zhì)面積明顯增加，說明酶制劑的添加確實有利于改善肝細胞組織形態(tài)，證實了上述推論。

本研究里，用在低脂飼料LL 組中同時添加了酶制劑和吡啶甲酸鉻形成的LLEC 組飼料飼喂鯉魚，肝細胞中空泡化面積較HL 組、LL 組和LLE 組都有降低，細胞質(zhì)面積都有明顯增加，此結(jié)果表明酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油降低鯉魚飼料1%粗脂肪水平可能有利于改善肝細胞組織形態(tài)，且酶制劑與吡啶甲酸鉻聯(lián)用替代豆油對改善肝細胞組織形態(tài)可能具有協(xié)同作用。

本試驗中，將中脂飼料ML 組添加酶制劑和吡啶甲酸鉻形成的MLEC 組飼料飼喂鯉魚，肝細胞中空泡化面積較HL組、ML組有降低，細胞質(zhì)面積都有增加，此結(jié)果表明酶制劑與吡啶甲酸鉻替代豆油降低鯉魚飼料0.5%粗脂肪水平可能有利于改善肝細胞組織形態(tài)。但與由MLE 組飼料飼喂的鯉魚相比，MLEC 組鯉魚的肝細胞中空泡化面積升高，細胞質(zhì)面積減少。由此推測，在鯉魚飼料中由于低豆油添加量降低0.5%的粗脂肪水平的情況下，加入等同于降低部分豆油質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的吡啶甲酸鉻與質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%的酶制劑聯(lián)用，對肝細胞組織形態(tài)的影響可能具有拮抗作用，加入的等同于降低部分豆油質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的吡啶甲酸鉻相對于降低鯉魚飼料0.5%的粗脂肪水平來講可能過量。這可能是由于過量的吡啶甲酸鉻對細胞DNA 的負(fù)面作用導(dǎo)致的[38]。

4 結(jié)論

酶制劑和吡啶甲酸鉻聯(lián)合應(yīng)用在鯉魚飼料中替代豆油，是具有一定的協(xié)同作用的，且能節(jié)約飼料中0.5%的脂肪水平。酶制劑和吡啶甲酸鉻聯(lián)合應(yīng)用在鯉魚飼料中替代豆油，沒有負(fù)面影響甚至提高鯉魚生長性能，提升鯉魚的飼料利用程度，降低養(yǎng)殖鯉魚所需的飼料成本，改善鯉魚肝細胞組織形態(tài)。