張馨心,劉亞清,崔永輝,許春進(jìn)
商丘市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 商丘 476000
乙型肝炎病毒(HBV)屬于DNA嗜肝病毒,易損傷人體肝細(xì)胞,造成肝功能異常[1]。患者多為急性感染,以食欲減退、黃疸、全身乏力為典型癥狀,嚴(yán)重者可誘發(fā)肝硬化或肝癌的發(fā)生。肝癌晚期患者1 年內(nèi)的預(yù)后較差,死亡率較高[2]。目前,在臨床診療中相對(duì)缺乏早期肝癌的診斷指標(biāo),劉沁雨等[3]在慢性乙型肝炎(CHB)患者的治療中發(fā)現(xiàn),高爾基體蛋白73(GP73)對(duì)代償期肝硬化患者具有較高的診斷價(jià)值。白介素-28B(IL-28B)作為Ⅲ型干擾素家族成員之一,積極參與免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等相關(guān)過(guò)程,IL-28B 基因多態(tài)性與CHB 患者干擾素治療的應(yīng)答密切相關(guān)已被廣泛證實(shí),但其在HBV相關(guān)性肝癌中的表達(dá)研究較少[4]。而在HBV-DNA 的復(fù)制過(guò)程中,易造成患者干細(xì)胞纖維化程度進(jìn)一步加劇、機(jī)體免疫功能紊亂等情況,從而改變T 淋巴細(xì)胞亞群的比例,推測(cè)T 淋巴細(xì)胞數(shù)目和功能的變化,預(yù)示著機(jī)體免疫狀態(tài)的失衡[5]。因此,本研究旨在分析乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者T 淋巴細(xì)胞、IL-28B及GP73的表達(dá)及臨床意義,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。
選取2018 年10 月—2021 年10 月商丘市第一人民醫(yī)院收治的119 例乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者作為觀察組,選取同期體檢的112 例健康人群作為對(duì)照組。觀察組:男63例,女56 例;年齡29~75 歲,平均年齡(49.12±7.34)歲;分化程度為低55 例,中34 例,高30 例;TNM 分期為Ⅰ期41 例,Ⅱ期50 例, Ⅲ期19 例,Ⅳ期9 例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況為轉(zhuǎn)移39 例,未轉(zhuǎn)移80 例。對(duì)照組:男61 例,女51 例;年齡30~78 歲,平均年齡(50.31±8.04)歲。兩組研究對(duì)象一般資料具有可比性(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。
納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病歷資料完整。(2)經(jīng)病理學(xué)檢查確診。(3)之前均未接受放化療。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在自身免疫性疾病。(2)合并其他血液、腫瘤疾病。(3)嚴(yán)重心、腎功能異常。
血清IL-28B 及GP73、T 淋巴細(xì)胞檢測(cè):抽取所有患者5 mL 空腹靜脈血,其中,2 mL 外周靜脈血采用EDTA-K2 抗凝處理,使用流式細(xì)胞儀(泛肽生物科技(浙江)有限公司,浙械注準(zhǔn)20212220112)檢測(cè)T 淋巴細(xì)胞指標(biāo)。將另外3 mL 外周靜脈血進(jìn)行離心處理(轉(zhuǎn)速為3 000 r/min,10 min),得到血清后低溫儲(chǔ)存。使用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)IL-28B及GP73水平。
臨床資料采集:詳細(xì)記錄患者性別、年齡、煙酒史及以往病史,收集患者腫瘤數(shù)目、最大直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、血清IL-28B 及GP73、T 淋巴細(xì)胞水平等資料。通過(guò)電話(huà)、走訪等形式統(tǒng)計(jì)觀察組患者1 年內(nèi)的生存情況,終點(diǎn)事件為患者死亡或達(dá)到1年隨訪期。
(1)比較兩組研究對(duì)象血清IL-28B、GP73 及T 淋巴細(xì)胞水平。(2)分析血清IL-28B、GP73 及T 淋巴細(xì)胞水平與臨床病理特征的關(guān)系。(3)對(duì)比不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平。
采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
觀察組血清IL-28B、GP73 及CD8+表達(dá)水平均高于對(duì)照組,CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。
表1 兩組研究對(duì)象IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況(±s)
表1 兩組研究對(duì)象IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況(±s)
組別觀察組(n=119)對(duì)照組(n=112)t值P值GP73(ng/mL)201.34±9.12 40.36±7.19 148.380<0.001 IL-28B(ρ/pg·mL-1)719.23±152.43 502.34±87.51 13.155<0.001 CD3+(%)70.34±6.27 78.26±5.96 9.827<0.001 CD4+(%)41.29±5.03 48.27±5.64 9.939<0.001 CD8+(%)36.94±4.31 27.91±4.06 16.367<0.001 CD4+/CD8+(%)0.92±0.15 1.54±0.57 11.453<0.001
不同年齡、性別、腫瘤直徑的HBV相關(guān)性肝癌患者血清中IL-28B、GP73 水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有血管浸潤(rùn)者血清中IL-28B、GP73 水平高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、有無(wú)血管浸潤(rùn)者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。
表2 兩組研究對(duì)象IL-28B、GP73與病理特征的關(guān)系情況(±s)
表2 兩組研究對(duì)象IL-28B、GP73與病理特征的關(guān)系情況(±s)
項(xiàng)目性別例數(shù)(例)GP73(ng/mL)t值1.353 P值0.179 IL-28B(ρ/pg·mL-1)t值0.378 P值0.706男 女63 56 198.41±5.01 196.96±6.64 702.26±142.34 692.54±136.97年齡<60歲≥60歲TNM分期Ⅰ~Ⅱ期Ⅲ~Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況1.827 0.070 0.299 0.765 50 69 198.34±6.24 200.36±5.61 698.23±152.34 706.34±141.09 4.529<0.001 1.986 0.049 91 28 199.23±5.42 204.64±5.87 662.37±126.41 715.98±119.64 3.583<0.001 2.125 0.036 64 55 201.84±6.01 205.68±5.61 671.42±124.31 719.20±120.07 5.240<0.001 2.127 0.035否 是80 39 201.24±5.44 206.64±4.92 669.23±119.54 719.14±121.34腫瘤直徑<3 cm≥3 cm血管浸潤(rùn)1.810 0.073 0.366 0.715 68 51 203.61±4.83 205.29±5.24 689.64±132.24 698.52±129.61 5.776<0.001 2.112 0.037否 是81 38 198.52±4.93 204.24±5.26 663.24±124.61 715.64±129.51
HBV 相關(guān)性肝癌患者血清中CD3+、CD4+、CD8+在不同年齡、性別、腫瘤直徑中比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CD3+、CD4+、CD8+水平在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、分化程度及血管浸潤(rùn)中比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表3。
表3 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系情況(±s)
表3 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系情況(±s)
項(xiàng)目性別例數(shù)(例)CD3+(%)t值0.404 P值0.687 CD4+(%)t值1.504 P值0.135 CD8+(%)t值0.814 P值0.417 CD4+/CD8+t值0.981 P值0.329男 女63 56 72.34±5.31 71.96±4.91 40.23±4.21 41.36±3.95 35.12±3.07 34.69±2.64 0.84±0.06 0.85±0.05年齡<60歲≥60歲TNM分期Ⅰ~Ⅱ期Ⅲ~Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況否 是腫瘤直徑<3 cm≥3 cm血管浸潤(rùn)50 69 91 28 64 55 80 39 68 51 72.34±5.64 71.23±4.26 73.64±3.61 72.32±4.13 71.11±3.67 70.64±3.24 70.34±3.64 69.15±3.57 71.34±3.57 69.95±4.26 1.2230.224 1.6350.105 0.7350.464 1.6840.095 1.9340.055 1.4060.162 41.13±4.21 40.26±4.62 39.54±3.12 38.24±3.54 40.17±3.94 39.54±3.16 41.06±4.16 39.67±5.34 39.11±3.64 38.86±3.74 1.0520.295 1.8670.064 0.9510.343 1.5550.123 0.3660.715 1.8350.069 33.94±2.94 34.17±3.64 33.42±2.67 34.14±2.57 34.86±2.97 35.24±2.19 32.91±2.54 33.26±3.61 33.17±3.15 33.99±2.65 0.3680.714 1.2590.211 0.7830.435 0.6120.542 1.5020.136 0.3360.737 0.83±0.05 0.81±0.07 0.89±0.06 0.81±0.08 0.91±0.07 0.83±0.05 0.85±0.06 0.79±0.07 0.87±0.08 0.85±0.04 1.726 5.681 7.065 4.844 1.637 9.108 0.087<0.001<0.001<0.001 0.104<0.001否 是81 38 71.24±3.95 72.36±4.26 40.29±3.67 38.92±4.06 33.96±2.54 34.14±3.08 0.87±0.02 0.82±0.04
隨訪1 年,其中有35 例患者死亡,4 例患者失訪。死亡者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存者,CD4+/CD8+指標(biāo)低于生存者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。
表4 不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況(±s)
表4 不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況(±s)
生存情況死亡(n=35)生存(n=80)t值P值GP73(ng/mL)228.31±9.12 196.34±9.64 16.629<0.001 IL-28B(ρ/pg·mL-1)762.34±126.54 709.64±124.18 2.082 0.040 CD3+(%)67.94±5.14 69.41±3.59 1.761 0.081 CD4+(%)40.27±5.05 42.16±4.58 1.973 0.051 CD8+(%)36.15±4.07 34.81±4.57 1.494 0.138 CD4+/CD8+0.81±0.06 0.95±0.08 9.267<0.001
近年來(lái),隨著腫瘤免疫逃逸機(jī)制的發(fā)現(xiàn),臨床工作者逐漸重視機(jī)體免疫功能在腫瘤發(fā)展、遷移過(guò)程中起到的作用[6]。乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者體內(nèi)同時(shí)存在HBV與腫瘤抗原的雙重刺激,擁有較為復(fù)雜的免疫狀態(tài)[7]。因此,深入探索相關(guān)因子及免疫功能在乙型肝炎相關(guān)性肝癌發(fā)展、遷移過(guò)程中的水平變化尤為重要。
陳超等[8]通過(guò)對(duì)98 例HBV 相關(guān)性肝癌患者血清因子水平的分析發(fā)現(xiàn),GP73 呈異常表達(dá)趨勢(shì),在蛋白水解酶的分解作用下,使得GP73 表達(dá)水平顯著增加。而本研究結(jié)果提示,GP73 水平的升高與肝功能損傷有關(guān)。IL-28B與Ⅰ型干擾素具有相似的生物活性和相同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑,主要是在病毒或雙鏈RNA 的誘導(dǎo)作用下,產(chǎn)生樹(shù)突、巨噬、內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)一步激活MAPK 等信號(hào)通路,達(dá)到實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒的目的[9]。當(dāng)出現(xiàn)病毒感染時(shí),CD3+能夠反應(yīng)機(jī)體一系列的免疫狀態(tài),而CD4+在免疫應(yīng)答過(guò)程中能夠有效清除病毒,同時(shí),影響CD8+的激活和抑制。本研究結(jié)果表明,IL-28B、GP73 水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、分化程度及血管浸潤(rùn)有關(guān),提示IL-28B、GP73 參與乙型肝炎相關(guān)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。IL-28B、GP73 血清水平能夠間接地反映疾病的嚴(yán)重程度,受到臨床工作者的高度重視。同時(shí),胡善雷等[10]研究發(fā)現(xiàn),GP73 的表達(dá)與炎癥損傷狀態(tài)及患者肝功能情況存在聯(lián)系。當(dāng)存在HBV感染時(shí),淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平紊亂,進(jìn)而導(dǎo)致免疫功能下降,造成病情的加重,三者形成惡性循環(huán)[11]。本研究結(jié)果顯示,CD4+/CD8+水平變化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、分化程度和血管浸潤(rùn)有關(guān),間接證實(shí)了HBV 的復(fù)制對(duì)機(jī)體內(nèi)T細(xì)胞亞群的表達(dá)存在一定的影響。分析其原因在于,在HBV-DNA 的復(fù)制過(guò)程中,會(huì)損耗大量CD4+,而CD8+在體內(nèi)抗原慢性刺激的作用下,表達(dá)水平不斷上升,造成CD4+/CD8+顯著下降的情況發(fā)生。候?qū)氈薜龋?2]提出,在腫瘤免疫治療過(guò)程中,機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)揮著識(shí)別、靶向作用。由此可見(jiàn),嚴(yán)密監(jiān)測(cè)HBV 相關(guān)性肝癌患者的外周血T 淋巴細(xì)胞平衡,有利于評(píng)估疾病進(jìn)展和免疫功能。此外,本研究結(jié)果表明,死亡患者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存患者,CD4+/CD8+指標(biāo)低于生存患者,提示GP73、IL-28B 及CD4+/CD8+指標(biāo)能有效反映患者的預(yù)后情況。GP73 作為一種高爾基體Ⅱ型跨膜蛋白,不僅在肝癌患者血清水平中出現(xiàn)特異性增高的情況,而且在其他肝病中也會(huì)出現(xiàn)此類(lèi)型情況。因此,GP73 對(duì)于早期肝癌的診斷受到諸多質(zhì)疑[13],但仍可作為反應(yīng)乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者病情程度和生存預(yù)后情況的分子指標(biāo)。
綜上所述,乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者血清IL-28B、GP733及CD8+表達(dá)水平明顯升高,CD3+、CD4+及CD4+/CD8+指標(biāo)下降,IL-28B、GP73 及CD4+/CD8+水平與相關(guān)病理特征和預(yù)后情況具有密切聯(lián)系。