唐子惟,劉應(yīng),陶鵬,陳林林,楊聯(lián)堂,彭騰,龍飛
(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,西南特色中藥資源國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 611137)
高脂血癥是現(xiàn)代社會(huì)較高發(fā)的一種慢性疾病,現(xiàn)代社會(huì)生活水平質(zhì)量提高,人們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間伏案工作后傾向于回家“躺平”,從而缺乏鍛煉,加上日常飲食油膩不注重營(yíng)養(yǎng)搭配,長(zhǎng)此以往容易導(dǎo)致體脂增加、體型肥胖、氣血不暢、血脂升高等問(wèn)題。高脂血癥患者雖在身體上不會(huì)感覺(jué)到明顯的不適,但是高血脂會(huì)導(dǎo)致多種并發(fā)癥,如果不及時(shí)采取措施,就有可能導(dǎo)致冠心病、腦梗死、腎功能衰竭等疾病[1]。生活中可通過(guò)運(yùn)動(dòng)、控制飲食、規(guī)律作息及保持良好的心態(tài)等來(lái)預(yù)防高脂血癥。除此之外,可在醫(yī)生的指導(dǎo)下服用相關(guān)藥物,如貝特類、他汀類等,但貝特類藥物存在胃腸道癥狀和骨骼肌癥狀等不良反應(yīng),他汀類藥物存在肌病和肝臟受損等不良反應(yīng)[2]。因此可在日常飲食中選擇有降血脂作用的食物及健康產(chǎn)品來(lái)預(yù)防高血脂癥。
黃精為百合科植物滇黃精(PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.)、黃精(PolygonatumsibiricumRed.)或多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua)的干燥根莖,是衛(wèi)健委公布的藥食同源藥材之一,具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎的功效[3],有研究報(bào)道黃精具有抗炎[4-5]、抗腫瘤[6]、降血糖[7-8]、降血脂[9-11]、增強(qiáng)免疫力[12-13]及肝腎保護(hù)性[14-15]等作用。老鷹茶是以樟科木姜子屬植物毛豹皮樟(LitseacoreanaLevl.var.lanuginosa)的嫩芽、葉或枝葉加工制作而成,在我國(guó)四川、重慶、貴州等地資源較為豐富,它含有豐富的黃酮類、多酚類、多糖、氨基酸等物質(zhì)[16],是我國(guó)民間長(zhǎng)期飲用的一種茶。老鷹茶不但營(yíng)養(yǎng)豐富,而且生理活性突出,《本草綱目》中記載其有“止咳、祛痰、平喘、消暑解渴”的功效[17]。除此之外,現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示,其具有抑菌抗炎[18-19]、護(hù)肝[20]、抗癌[21]、抗氧化[18,22-23]、降血糖血脂[24-25]等功效,是消食化積、祛暑、利尿、解表的純天然原材料。然而,多年以來(lái),人們一直自行采摘老鷹茶并將其用于餐飲業(yè),作為一般的火鍋底料或簡(jiǎn)單的飲用茶,其潛在價(jià)值尚未得到充分開(kāi)發(fā)。為充分開(kāi)發(fā)利用老鷹茶這一地方特色資源,本研究以達(dá)州大竹縣產(chǎn)老鷹茶成熟枝葉為原料,對(duì)黃精與老鷹茶配伍進(jìn)行輔助降血脂作用研究,評(píng)價(jià)其輔助降血脂的功效,以期為老鷹茶資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。
無(wú)特定病原體(specific pathogen free,SPF)雄性昆明小鼠[體質(zhì)量(20±2)g,96 只,許可證號(hào):SCXK(京)2019-0010]、基礎(chǔ)飼料、高脂飼料(58.6% 基礎(chǔ)飼料+15% 豬油+20% 蔗糖-5% 酪蛋白+1.2% 膽固醇+0.2%膽酸鈉):斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司。
制黃精(生品黃精來(lái)源于四川達(dá)州,經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院龍飛教授鑒定為多花黃精):成都中醫(yī)藥大學(xué)黃精產(chǎn)業(yè)研究所自制;老鷹茶:四川省達(dá)州市大竹縣;辛伐他?。?0 mg/片):山東鑫齊藥業(yè)有限公司;羧甲基纖維素鈉溶液(carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na):上海長(zhǎng)光企業(yè)發(fā)展有限公司;血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)測(cè)定試劑盒:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)測(cè)定試劑盒:武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司。
分析天平(BSA124S-CW):賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)(TDZ5-WS):湘儀離心機(jī)有限公司;渦旋混合器(MX-S)、數(shù)控?fù)u床(SLK-O3000-S)、臺(tái)式高速微量離心機(jī)(D3024)、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(D3024R):美國(guó)SCILOGEX 公司;優(yōu)普系列超純水器(UPR-II-10T):四川優(yōu)普超純科技有限公司;數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器(THZ-82A):常熟朗越儀器制造有限公司;高速低溫組織研磨儀(KZ-III-F):武漢賽維爾生物科技有限公司;全自動(dòng)生化分析儀(BS360S):深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;酶標(biāo)檢測(cè)儀(Epoch):美國(guó)伯騰儀器有限公司。
1.3.1 藥液制備
1)制黃精:參照文獻(xiàn)[26]的方法制備四蒸四曬黃精。
2)藥液的制備:取一定量的黃精和老鷹茶,分別加10 倍量的水煎煮3 次,每次1 h,濾過(guò)濃縮得到黃精及老鷹茶提取液。黃精配伍老鷹茶的提取液,按黃精和老鷹茶5∶3(質(zhì)量比)混合后,同上煎煮方法制得。
3)辛伐他汀溶液:辛伐他汀片研成粉末,準(zhǔn)確稱取20 mg,加入0.5% CMC-Na 溶液,配制成濃度為1 mg/mL的藥液。
1.3.2 動(dòng)物分組及給藥
在22~25 ℃的環(huán)境中,將96 只小鼠,每8 只為一組飼養(yǎng)于鼠盒中,飼喂普通飼料、純凈水,適應(yīng)性自由飲食一周。實(shí)驗(yàn)時(shí)按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對(duì)照組(NC)、模型組(MC)、陽(yáng)性對(duì)照組(PC)、黃精老鷹茶低(HLD)、中(HLZ)、高(HLG)劑量組、黃精低(HD)、中(HZ)、高(HG)劑量組、老鷹茶低(LD)、中(LZ)、高(LG)劑量組,每組8 只??瞻讓?duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料,其余各組均給予高脂飼料。高脂飲食一周后,給予低、中、高3 個(gè)劑量組,分別按人體給藥量的9、18、36 倍給藥,即黃精老鷹茶低、中、高劑量組,黃精低、中、高劑量組及老鷹茶低、中、高劑量組分別為193、386、772 mg/kg,依據(jù)小鼠體質(zhì)量,每天相同時(shí)間按10 mL/kg 的體積灌胃一次,空白對(duì)照組和模型組灌胃等體積0.5% CMCNa 溶液;陽(yáng)性對(duì)照組采用同樣的方法灌胃等體積辛伐他汀溶液(10 mg/kg),持續(xù)8 周。第8 周結(jié)束后,獲取實(shí)驗(yàn)材料用于后續(xù)分析。
1.3.3 小鼠一般情況及體質(zhì)量變化監(jiān)測(cè)
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,每日觀察和記錄小鼠的飲食、飲水、活動(dòng)和毛色等。每周稱重一次,記錄并觀察,再根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整給藥量,一直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束為止。
1.3.4 指標(biāo)測(cè)定
第8 周結(jié)束后,所有的小鼠均在12 h 內(nèi)禁食不禁水,摘眼球取血至離心管,離心(3 000 r/min,4 ℃),分離血清,并根據(jù)試劑盒的檢測(cè)要求,測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C 的含量,以及AST 和ALT 的酶活性。取血后,解剖各組小鼠,迅速摘取各組小鼠的肝臟并稱重,計(jì)算肝臟指數(shù)后,錫箔紙包好保存于-80 ℃低溫冰箱備用。測(cè)定時(shí),取一定量的組織,用9 倍勻漿介質(zhì)研磨,然后將研磨液3 000~4 000 r/min離心10 min,取上清制備成10% 的組織勻漿,測(cè)定肝組織中SOD 和GSH-Px 活性及MDA 含量。肝臟指數(shù)計(jì)算公式如下。
I=Ml/Mm× 100
式中:I為肝臟指數(shù),%;Ml為小鼠肝臟質(zhì)量,g;Mm為最后一次稱得的小鼠體質(zhì)量,g。
數(shù)據(jù)用SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,多組間使用單因素方差分析(analysis of variance,ANOVA)進(jìn)行對(duì)比,用最小顯著性差異法(least significant difference,LSD)對(duì)兩組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,P<0.05 表示有顯著性差異,P<0.01 表示有極顯著差異。
實(shí)驗(yàn)期間,空白對(duì)照組小鼠攝食、飲水、排泄等各方面狀況良好,毛色有光澤;模型組小鼠開(kāi)始兩周同正常組相似,未見(jiàn)明顯異常,隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行,其毛色逐漸發(fā)黃,光澤度較差;其余組各方面狀況良好,毛色略有光澤。
黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠體質(zhì)量及肝臟指數(shù)的影響如表1 所示。
表1 黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠體質(zhì)量及肝臟指數(shù)的影響Table 1 Effect of Polygonatum cyrtonema-Hawk tea on the weight and the liver index of hyperlipidemia mice
由表1 可以看出,模型組肝臟指數(shù)極顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01),且其它組與模型組比較,肝臟指數(shù)均有所降低,其中黃精老鷹茶高劑量組肝指數(shù)顯著降低(P<0.05)。此外,各劑量組的肝臟指數(shù)與劑量呈負(fù)相關(guān),即給藥劑量越高,肝臟指數(shù)越低。表明黃精和老鷹茶均能降低高脂血癥小鼠的肝臟質(zhì)量。
模型組小鼠在第4 周后的體質(zhì)量極顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01);黃精老鷹茶高、中、低劑量組分別在第4、5、7 周后,體質(zhì)量顯著低于模型組(P<0.05);黃精中、高劑量組及老鷹茶中、高劑量組的體質(zhì)量均在7 周后顯著低于模型組(P<0.05),黃精低劑量和老鷹茶低劑量組在飼養(yǎng)全程與模型組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果顯示,給藥最后一周(第8 周)黃精老鷹茶高劑量組的體質(zhì)量與空白對(duì)照組差異較小,并低于陽(yáng)性對(duì)照組,表明其可減少小鼠因高脂飲食導(dǎo)致的體質(zhì)量增加。
對(duì)小鼠的血脂及相關(guān)酶活性進(jìn)行檢測(cè),TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST 及ALT 的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、表3。
表2 黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠血脂水平的影響Table 2 Effect of Polygonatum cyrtonema-Hawk tea on the blood lipid level in hyperlipidemia mice
表3 黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠相關(guān)酶活性的影響Table 3 Effect of Polygonatum cyrtonema-Hawk tea on related enzyme activities in hyperlipidemia mice
從表2 中可以看出,與空白對(duì)照組相比,模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C 極顯著升高(P<0.01),HDL-C極顯著降低(P<0.01),說(shuō)明模型組小鼠的血脂代謝異常,造模成功。與模型組比較,高劑量的黃精老鷹茶能極顯著降低血清中TC、TG、LDL-C 水平且能升高HDL-C 水平(P<0.01);且隨著黃精老鷹茶劑量降低,其降脂效果也減弱,呈現(xiàn)一定的劑量依賴性,即黃精老鷹茶劑量越高,TC、TG、LDL-C 的濃度越低,HDL-C 的濃度越高。而對(duì)于黃精各劑量組及老鷹茶各劑量組而言,各指標(biāo)濃度雖也呈一定的劑量相關(guān)性,但與模型組相比,僅有黃精高劑量組及老鷹茶高劑量組具有顯著的差異(P<0.05)。由此可以看出,在相同劑量組下,黃精老鷹茶組效果更好,表明黃精和老鷹茶在一定的劑量下可調(diào)節(jié)小鼠血脂代謝,起到輔助降血脂的作用,且兩者合用效果優(yōu)于單獨(dú)使用。
由表3 可知,模型組小鼠血清中AST 和ALT 的活性與空白對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明模型組小鼠肝損傷。與模型組比較,黃精高劑量組及老鷹茶高劑量組可顯著降低AST 的活性(P<0.05),老鷹茶高劑量組可顯著降低ALT 的活性(P<0.05),黃精低劑量組也對(duì)這兩種酶活性具有一定程度的降低作用;黃精老鷹茶中、高劑量組的AST 及ALT 的活性均顯著低于模型組(P<0.05 或P<0.01),其余各劑量組與模型組相比無(wú)顯著性差異。在同劑量組的對(duì)比下,黃精老鷹茶組效果更好。以上結(jié)果說(shuō)明,黃精和老鷹茶均可輔助緩解高脂飲食對(duì)小鼠肝臟的損傷,兩者配伍使用效果更佳。
黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠肝臟抗氧化水平的影響如表4 所示。
表4 黃精老鷹茶對(duì)高脂血癥小鼠肝臟抗氧化水平的影響Table 4 Effect of Polygonatum cyrtonema-Hawk tea on the liver antioxidant level in hyperlipidemia mice
由表4 可知,與空白對(duì)照組相比,模型組小鼠肝臟MDA 含量極顯著升高(P<0.01),GSH-Px 和SOD 的活性顯著降低(P<0.05),表明長(zhǎng)期飲食高脂飼料對(duì)小鼠肝臟有損害,且抗氧化能力下降。與模型組相比,黃精老鷹茶中、高劑量組的MDA 含量顯著降低(P<0.05),黃精老鷹茶高劑量組的GSH-Px、SOD 活性顯著升高(P<0.05);黃精高劑量組、老鷹茶高劑量組的MDA 含量顯著降低(P<0.05),老鷹茶高劑量組的GSH-Px 活性顯著升高(P<0.05)。表明以上各劑量組在一定程度上能幫助小鼠肝臟恢復(fù)抗氧化能力,且同劑量組相比,黃精老鷹茶組效果最好,老鷹茶組次之。
研究結(jié)果表明,長(zhǎng)期食用高脂飼料會(huì)使小鼠血脂水平異常,并對(duì)小鼠肝臟造成一定的損傷,使其抗氧化能力降低,但若給予等劑量的黃精、老鷹茶,可使其血脂水平趨于正常,緩解肝臟損傷,恢復(fù)一定的抗氧化作用。這說(shuō)明黃精、老鷹茶均具有輔助降血脂的作用,并都能起到一定的保護(hù)肝臟的作用,但根據(jù)各劑量組結(jié)果顯示,黃精老鷹茶組配伍效果更好,說(shuō)明兩者合用效果優(yōu)于單獨(dú)使用。
研究發(fā)現(xiàn)黃精多糖能明顯提高肝組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptor-alpha,PPAR-α)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體β(peroxisome proliferator-activated receptor-beta,PPAR-β)信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)及蛋白的表達(dá),降低肝組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體β(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma,PPAR-γ)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosing factor-alpha,TNF-α)mRNA 的表達(dá),能有效地控制肝脂質(zhì)的氧化,調(diào)控脂類代謝相關(guān)基因及蛋白質(zhì)的表達(dá),從而達(dá)到防治高血脂的目的[27];老鷹茶水提物可通過(guò)影響肥胖小鼠體內(nèi)膽汁酸代謝、AMPK/ACC 信號(hào)通路和腸道菌群結(jié)構(gòu)來(lái)降低小鼠體質(zhì)量及內(nèi)臟脂肪、改善血脂及轉(zhuǎn)氨酶,保護(hù)肝臟功能[24]。老鷹茶總黃酮可通過(guò)抑制TLR4 介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)改善大鼠非酒精性脂肪性肝炎[28]。
中醫(yī)認(rèn)為,脾失運(yùn)化是高脂血癥的主要病機(jī),而由于脾虛及肝脾功能紊亂引起的痰濕,則是高脂血癥的病因[29]。黃精具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾的功效,老鷹茶具有祛痰平喘的功效。通過(guò)黃精來(lái)補(bǔ)虛扶正,調(diào)理脾氣,使脾運(yùn)化有常,再兼用老鷹茶祛痰,則痰淤自消,起到輔助降血脂的作用。老鷹茶性涼,配伍補(bǔ)益藥制黃精,能夠制約茶的涼性,而黃精性平、味甘,久服易滋膩,配伍老鷹茶可緩解其滋膩性。兩者合用可互補(bǔ)其不足,并且二者均具有輔助降血脂的作用,可能與多糖、皂苷、黃酮、多酚等活性成分相輔相成,協(xié)同發(fā)揮輔助降血脂作用有關(guān),其作用機(jī)理尚需進(jìn)一步探討。