寧夏地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的鑒定和分布特點(diǎn)

劉建成，楊 潔

寧夏血液中心，寧夏 銀川 750000

輸血治療是一種十分重要的臨床治療手段，主要應(yīng)用于創(chuàng)傷、產(chǎn)科圍產(chǎn)期出血和手術(shù)出血、其他出血性疾病等。隨著臨床輸血需求的不斷增長(zhǎng)，由于不規(guī)則抗體產(chǎn)生的輸血不良反應(yīng)逐漸增多，易危及患者的生命安全。不規(guī)則抗體的檢測(cè)和輸血安全關(guān)系非常密切，是引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病的重要原因［1-2］。不同區(qū)域、不同民族、不同年齡人群中不規(guī)則抗體的分布存在一定的差異［3-5］。隨著輸血技術(shù)的進(jìn)步，檢測(cè)水平和方法不斷提高，越來(lái)越多的不規(guī)則抗體被發(fā)現(xiàn)，探討本地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體特異性分布，具有非常重要的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2019 年—2021 年寧夏血液中心122 305 例無(wú)償獻(xiàn)血者作為研究對(duì)象。其中男性67 512 例，女性54 793 例；漢族96 531例，回族25 774例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 儀器和試劑

全自動(dòng)血型分析儀（愛(ài)康生物），戴安娜全自動(dòng)血型分析儀、卡式專(zhuān)用離心機(jī)、專(zhuān)用孵育器和抗人球蛋白檢測(cè)卡（Diagnostic Grifols，S.A.），KA-2200 型細(xì)胞洗滌離心機(jī)（日本），16 種譜細(xì)胞（Sanquin），抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒和直接抗人球蛋白試劑盒（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

首先采用全自動(dòng)血型分析儀對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)的ABO 血型正反定型試驗(yàn)（96 孔板）。微柱凝膠卡抗人球蛋白試驗(yàn)進(jìn)行抗體篩選試驗(yàn)。對(duì)O 細(xì)胞出現(xiàn)凝集的標(biāo)本，用抗體篩選細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ按照操作說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)用鹽水方法篩查免疫球蛋白M（IgM）型抗體。采用抗人球蛋白試驗(yàn)進(jìn)行抗體鑒定。對(duì)抗體篩選試驗(yàn)為陽(yáng)性的標(biāo)本，利用16種譜細(xì)胞采用微柱凝膠抗人球蛋白法進(jìn)行抗體鑒定試驗(yàn)分析抗體特異性，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行，同時(shí)需要嚴(yán)格進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體特異性分布情況

122 305例無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本中共檢出不規(guī)則抗體58例，其中抗-D 16 例（34.5%），抗-E 14 例（24.1%），抗-C 3例（5.2%），抗-Ce 1 例（1.7%），抗-Ec 3 例（5.2%），抗-M 12 例（13.8%），抗-Lea 1 例（1.7%），抗-P1 2 例（3.4%），同種抗體（特異性不明確）有4 例（6.9%），冷自身抗體（特異性不明確）有2例（3.4%）。

2.2 不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者性別情況

在58例不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者中，女性獻(xiàn)血者檢出22例（37.9%）大于男性獻(xiàn)血者36 例（62.1%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.997，P＜0.05）。

2.3 不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者不同民族情況

在58例不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者中，漢族獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽(yáng)性40 例（69.0%）大于回族獻(xiàn)血者18 例（31.0%），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.567，P＞0.05）。

2.4 不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者輸血或妊娠情況

在58例不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者中，男性有輸血或妊娠史13例（22.4%），女性有輸血或妊娠史31例（53.4%）。

2.5 不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者不同年齡段分布情況

在58 例不規(guī)則抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者中，18～30 歲8 例（13.8%），31～40 歲12 例（20.7%），41～50 歲15 例（25.9%），51～60 歲23 例（39.6%）。對(duì)比18～40 歲和40～60 歲年齡段之間陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.257，P＜0.05）。

3 結(jié)論

紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體又稱(chēng)意外抗體，是指血清中抗-A、抗-B 以外的其他血型抗體，ABO 血型系統(tǒng)中的亞型，變異型抗A1 或抗B 也是不規(guī)則抗體［6］。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有36 個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，360 多個(gè)抗原。不規(guī)則抗體主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，必須通過(guò)特殊介質(zhì)才能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)［7］。不規(guī)則抗體篩選陽(yáng)性率并不高，在健康人群中檢出率為0.3%～2.0%［8］。既往有輸血史、妊娠史的人群容易產(chǎn)生不規(guī)則抗體。不規(guī)則抗體陽(yáng)性的患者一旦輸入具有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，抗原抗體就會(huì)免疫性結(jié)合，在補(bǔ)體的參與下，使輸入的紅細(xì)胞溶解破壞，發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，常表現(xiàn)為發(fā)熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿等癥狀，嚴(yán)重時(shí)危及生命［9］。不規(guī)則抗體檢測(cè)的意義主要在于3 個(gè)方面：第一是對(duì)獻(xiàn)血者的血清或血漿進(jìn)行抗體篩查，可以防止含有不規(guī)則抗體的血液輸注給患者，避免由于獻(xiàn)血者血液中的不規(guī)則抗體引起患者紅細(xì)胞的破壞而引起的溶血性輸血反應(yīng)。第二是對(duì)需要輸血治療的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可以有助于血液選擇，從而有充分的時(shí)間來(lái)選擇不含有針對(duì)某抗體的相應(yīng)抗原的血液，防止因?yàn)檩斪⒑心晨贵w相應(yīng)抗原的血液而引起溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。第三是對(duì)孕婦進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可以盡早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，并在孕期進(jìn)行新生兒溶血病的預(yù)防和治療，減少不規(guī)則抗體對(duì)胎兒或新生兒帶來(lái)的傷害，減輕新生兒溶血病的程度，提高胎兒或新生兒的身體素質(zhì)。因此，在臨床實(shí)踐中要經(jīng)常警惕出現(xiàn)不規(guī)則抗體引起不良反應(yīng)的可能性。

本研究從122 305 例無(wú)償獻(xiàn)血者樣本中篩選出不規(guī)則抗體58 例，主要集中在Rh 血型系統(tǒng)，其次是MNS 血型系統(tǒng)，另外還有特異性不明確的抗體和冷自身抗體。各地區(qū)不規(guī)則抗體檢出率的差異與遺傳多樣性、使用的試劑方法有一定的關(guān)系。Rh 血型系統(tǒng)臨床意義的重要性?xún)H次于ABO 血型系統(tǒng)，在不規(guī)則抗體陽(yáng)性中抗-D 抗體占比最多，其次為抗-E，這與D 抗原和E 抗原的免疫原性強(qiáng)弱相符合。本研究共檢出抗-M 12 例，此抗體為MNS 血型系統(tǒng)，抗-M 抗體的性質(zhì)主要是IgM，也有免疫球蛋白G（IgG），能夠引起ABO 血型正反定型不一致和輸血不良反應(yīng)［10］。一般情況下在4 ℃條件下凝集較強(qiáng)，在37 ℃條件下凝集比較弱，容易漏檢，利用微柱凝膠技術(shù)能夠大大降低漏檢的幾率。檢出抗-P1抗體2例，此抗體為P1PK 血型系統(tǒng)，人血漿中抗-P1 抗體比較常見(jiàn)，通常為冷反應(yīng)性抗體，凝集反應(yīng)較弱。若反應(yīng)體系的溫度超過(guò)25 ℃，一般不會(huì)出現(xiàn)凝集反應(yīng)，也不會(huì)發(fā)生溶血反應(yīng)，臨床意義不大。如果抗-P1在37 ℃條件下有活性，則應(yīng)該選擇抗人球蛋白方法配血為陰性反應(yīng)的紅細(xì)胞［11-12］。檢出Lewis血型系統(tǒng)的抗-Lea 1 例，該抗體通常是IgM 型，37 ℃條件下多數(shù)沒(méi)有活性，不發(fā)生凝集反應(yīng)，所以該抗體很少引起溶血性輸血反應(yīng)。由于在人體的血漿中含有大量的Lewis 血型物質(zhì)能夠中和相應(yīng)抗體，該抗體一般不具有臨床意義［13-14］。抗體篩選為陽(yáng)性，用16種譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定時(shí)反應(yīng)格局特異性不明確，無(wú)法確定具體的型別，提示此類(lèi)抗體在健康人群中有一定的發(fā)生頻率，也有可能和抗體鑒定譜細(xì)胞的質(zhì)量有一定的關(guān)系。本研究中共檢出4例特異性不明確的抗體，在實(shí)際工作中需要多加注意。發(fā)現(xiàn)冷自身抗體2 例，此類(lèi)抗體多為IgM 性質(zhì)，在4 ℃條件下能夠凝集紅細(xì)胞，在37 ℃條件下不凝集紅細(xì)胞，一般不具有臨床意義［15］。從性別和輸血或妊娠的差異來(lái)看，女性無(wú)償獻(xiàn)血者檢出36例（62.1%），有輸血或妊娠史的獻(xiàn)血者為31 例比男性22 例（37.9%），有輸血史的獻(xiàn)血者為13 人檢出比率高。有輸血史和妊娠史的人群更容易受免疫刺激產(chǎn)生不規(guī)則抗體，所以針對(duì)該類(lèi)人群要重視不規(guī)則抗體的篩查，其捐獻(xiàn)的血漿不能用于臨床，捐獻(xiàn)的紅細(xì)胞可以制備成洗滌紅細(xì)胞發(fā)往臨床。從民族方面來(lái)看，漢族獻(xiàn)血者中檢出40例，回族獻(xiàn)血者中檢出18 例。這與張曼等［16］報(bào)道的漢族和回族不規(guī)則抗體檢出率不一致，可能是由于本研究中回族樣本沒(méi)有嚴(yán)格按照三代以?xún)?nèi)純回族進(jìn)行選取樣本有一定的關(guān)系。在不同的年齡段中，40歲以上的獻(xiàn)血者檢出不規(guī)則抗體的比率較高。

綜上所述，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查能夠確保臨床安全有效地血液輸注，避免免疫性輸血不良反應(yīng)。另外，由于試劑盒的檢測(cè)局限性和低頻抗體不易發(fā)現(xiàn)的原因，抗體篩選陰性這一結(jié)果并不能完全表示該樣本的不規(guī)則抗體是真陰性，所以在輸血前要非常重視交叉配血。本研究初步探討了本地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的分布情況，下一步將進(jìn)一步優(yōu)化不規(guī)則抗體的篩選方法，如使用木瓜酶處理抗體篩選細(xì)胞，使用巰基乙醇處理血漿等等，提高不規(guī)則抗體的檢出率，以便針對(duì)此類(lèi)受血者在緊急情況下能夠快速實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)輸血，為疑難輸血患者的搶救治療贏得寶貴的時(shí)間。