綠茶中21 種黃酮醇糖苷類化合物的鑒別及地理溯源

黃永橋，高 亮，吳新文，李占彬，楊昌彪，毛敏霞*

（1 貴州省檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)用中心 貴陽550014 2 貴州省分析測(cè)試研究院 貴陽 550014）

茶在中國(guó)有著悠久的飲用歷史，茶的各種生物活性、健康益處及獨(dú)特的口感使其成為世界上廣泛消費(fèi)的飲料[1]。茶葉中富含兒茶素、黃酮醇、茶黃素等酚類化合物，其中黃酮醇糖苷類化合物（Flavonol glycosides，F(xiàn)Gs）主要以糖苷的形式存在，在黃酮醇母體苷元的C-3 位有糖分子部分，黃酮醇母體苷元主要有楊梅素苷、槲皮素苷和山奈素苷，糖分子分為單糖（葡萄糖、半乳糖、鼠李唐等）、二糖和三糖[2-3]。迄今為止，已報(bào)道的茶葉中黃酮醇苷類化合物有20 多種[4-6]。

黃酮醇糖苷類化合物在生理活性方面有一定的功效，如抗氧化、降血脂、清除自由基、抵御紫外線、抗菌、抗癌、體重調(diào)節(jié)、維持骨密度和神經(jīng)保護(hù)活性等生理功能[7-9]。有研究發(fā)現(xiàn)黃酮醇糖苷類化合物味覺閾值極低，呈苦澀味，對(duì)茶湯的苦澀味貢獻(xiàn)較大，對(duì)茶湯中咖啡因的苦味具有正向增強(qiáng)作用；同時(shí)對(duì)茶湯的滋味和色澤等感官品質(zhì)具有重要作用[10-12]。有學(xué)者提出黃酮醇糖苷類化合物與兒茶素相比，它們的穩(wěn)定性相對(duì)較高，被認(rèn)為是1 組有研究?jī)r(jià)值的生物標(biāo)志物，用于區(qū)分茶葉的產(chǎn)地或品種[13-14]。

液相色譜-紫外檢測(cè)因成本低且易操作，被廣泛用于茶葉和飲料中酚類化合物的識(shí)別和定量分析[15-16]。然而，由于液相色譜法靈敏度較差且易受干擾，很難對(duì)茶葉中低含量的黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行有效分離和準(zhǔn)確定量。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀技術(shù)具有選擇性好、靈敏度高、分辨率好、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，是茶葉中黃酮醇糖苷類化合物分析常用的檢測(cè)方法[17-18]。三重四極桿質(zhì)譜儀（Triple quadrupole mass spectrometry，QQQ-MS/MS）可以產(chǎn)生分子、離子的特征產(chǎn)物離子，有良好的靈敏度和選擇性，適用于目標(biāo)物的定量分析[4，18-19]。四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜（Quadrupole-orbitrap high resolution mass spectrometry，Q -Orbitrap HRMS）是一種高分辨率、寬質(zhì)量范圍和高靈敏度的方法，能對(duì)化合物進(jìn)行精確質(zhì)量數(shù)測(cè)定，適用于目標(biāo)物與未知物的識(shí)別和篩查[20-21]。

本研究探討用黃酮醇苷類化合物含量來分析綠茶地理溯源的可行性，通過高分辨質(zhì)譜儀結(jié)合三重四極桿質(zhì)譜儀，建立UPLC-Q-Orbitrap HRMS 結(jié)合UPLC-QQQ-MS/MS 分析茶葉中21 種黃酮醇苷類化合物的鑒別和定量方法。對(duì)不同地區(qū)綠茶中黃酮醇苷類化合物含量進(jìn)行測(cè)定和比較，分析綠茶中黃酮醇苷類化合物的差異性及相關(guān)性。采用主成分分析（Principal component analysis，PCA）、方向傳播算法-人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（Back pagation-artificial neural network，BPANN）、偏最小二乘法判別（Partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）、線性判別（Linear discriminant analysis，LSD）等化學(xué)計(jì)量學(xué)分析模型，探究黃酮醇苷類化合物的差異性及相關(guān)性對(duì)綠茶產(chǎn)地判別及溯源的可行性分析，篩選重要化學(xué)標(biāo)記，以期為茶葉指紋圖譜和化學(xué)判別提供依據(jù)，為茶葉地理溯源研究和化學(xué)分類提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、乙腈（色譜純級(jí)），德國(guó)默克公司；甲酸（色譜純級(jí)），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q 純水機(jī)制備。

槲皮素-3-O-葡萄糖-鼠李糖糖苷（Q-glurha）標(biāo)準(zhǔn)品、槲皮素-3-O-半乳糖糖苷（Q-gal）標(biāo)準(zhǔn)品、槲皮素-3-O-葡萄糖糖苷（Q-glu）標(biāo)準(zhǔn)品、山奈素-3-O-葡萄糖-鼠李糖糖苷（K-glu-rha）標(biāo)準(zhǔn)品、山奈素-3-O-葡萄糖糖苷（K-glu）標(biāo)準(zhǔn)品，均≥98%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

茶葉樣品分別購自貴州省6 個(gè)地州市茶葉生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的40 批次綠茶，均選取當(dāng)?shù)夭枞~進(jìn)行生產(chǎn)的綠茶，其中遵義地區(qū)13 批次；銅仁地區(qū)4批次；黔南地區(qū)6 批次；黔西南地區(qū)4 批次；貴陽地區(qū)5 批次；黔東南地區(qū)8 批次。

1.2 儀器與設(shè)備

6470A 三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀、1290 超高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent 公司；Q-Exactive HF-X 四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)及Dionex UltiMate 3000 快速高效液相色譜系統(tǒng)，美國(guó)Thermo-Fisher 公司；GM200 刀式研磨粉碎儀，德國(guó)Retsch 公司；超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；UMV-2 多管渦旋混合器，北京普立泰科儀器有限公司；Milli-Q 純水機(jī)，美國(guó)Millipore 公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取Q-glu-rha、Qgal、Q-glu、K-glu-rha 和K-glu 標(biāo)準(zhǔn)品，分別用甲醇配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL 的儲(chǔ)備液；于-18℃保存。儲(chǔ)備液用70%甲醇溶液稀釋至質(zhì)量濃度為0.02，0.05，0.2，0.5，1，2，5，10 μg/mL 制備標(biāo) 準(zhǔn)工作液，臨用現(xiàn)配。

1.3.2 UPLC-Q-Orbitrap HRMS 分析條件

1.3.2.1 色譜 ZORBAX Eclipse Plus-C18 色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A：0.1%乙酸水溶液，B：乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5.0 μL；梯度洗脫：0.0～2.0 min，2% B；2.0～8.0 min，2%～20% B；8.0～28.0 min，20%～65% B；28.0～35.0 min，65%～98% B；35.0～37.0 min，98%B；37.0～37.1 min，98%～2% B；37.1～40.0 min，2%B。

1.3.2.2 質(zhì)譜 加熱電噴霧離子源（HESI），負(fù)離子模式；離子源溫度：350 ℃；離子傳輸管溫度：325℃；噴霧電壓：3.5 kV；鞘氣流速：180 mL/min，輔助氣：45 mL/min；掃描模式：Full MS-ddMS2；采集范圍：m/z 100～900；一級(jí)掃描分辨率：70 000；二級(jí)子離子掃描分辨率：17 500；歸一化碰撞能量（NCEs）：40 eV，黃酮醇糖苷類化合物質(zhì)譜信息見表1。

1.3.3 UPLC-QQQ-MS/MS 分析條件

1.3.3.1 色譜 ZORBAX Eclipse Plus-C18 色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A：0.1%乙酸水溶液，B：乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：2.0 μL；梯度洗脫：0～0.5 min，5% B；0.5～2.0 min，5%～16% B；2.0～3.0 min，16% B；3.0～13.0 min，16%～18.5% B；13.0～13.5 min，18.5%～20.0%B；13.5～14.5 min，20%～60% B；14.5～15.0 min，60%～90% B；15.0～17.0 min，90% B；17.0～17.1 min，90%～5% B；17.1～20.0 min，5% B。

1.3.3.2 質(zhì)譜 電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子掃描模式；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；毛細(xì)管電壓：-3.5 kV；霧化器壓力：68.95 kPa；干燥氣和鞘氣流速：10 L/min；干燥氣和鞘氣溫度：300 ℃；子離子均選取脫去糖苷后的骨架苷元離子。

1.3.4 樣品前處理 茶葉樣品經(jīng)粉碎后過425 μm 孔徑的篩子，稱取試樣1.00 g 于50 mL 離心管中，準(zhǔn)確加入30 mL 70%甲醇溶液，超聲15 min，渦旋振蕩10 min，5 000 r/min 離心10 min，取上清液過膜上機(jī)。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算采用Excel 2016版；圖譜繪制和主成分分析采用Origin 2018 版；化學(xué)結(jié)構(gòu)式繪制采用ChemDraw 7.0 版；差異顯著性分析、方向傳播算法-人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析和線性判別采用SPSS 22.0 版；偏最小二乘判別分析使用SIMCA 14.1 版。

2 結(jié)果與討論

2.1 黃酮醇糖苷類化合物的色譜分離

茶葉中富含較多氨基酸、有機(jī)酸、茶多酚（如兒茶素、茶黃素類、黃酮類及黃酮醇類）等成分。為了有效地對(duì)茶葉中的黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行分離，試驗(yàn)選用150 mm×1.8 μm 的色譜柱，并對(duì)流動(dòng)相組成進(jìn)及其洗脫梯度行了對(duì)比優(yōu)化，當(dāng)使用乙腈-0.1%乙酸水做為流動(dòng)相，采用梯度洗脫21 種化合物全部洗脫出來，且有較好的分離度，圖1 為綠茶樣品色譜圖。

圖1 綠茶中21 種黃酮醇糖苷類化合物的色譜圖Fig. 1 Chromatograms of 21 flavonol glycosides in green tea

2.2 黃酮醇糖苷類化合物的識(shí)別

根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)規(guī)律及裂解規(guī)律，結(jié)構(gòu)式中減少不同的取代基，其質(zhì)量數(shù)會(huì)相應(yīng)減少。如羥基減少16 u、葡萄糖及半乳糖減少162 u、鼠李糖減少146 u、阿拉伯糖減少132 u 等[5，22-24]。研究表明[2-3，18，25]，半乳糖和葡 萄糖為同分異構(gòu)體，在 液相色譜有效的分離條件下，半乳糖的糖苷色譜峰時(shí)間會(huì)早于葡萄糖的糖苷，說明在極性上半乳糖＞葡萄糖。

研究采用UPLC-Q-Orbitrap HRMS 對(duì)黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行分析，根據(jù)其結(jié)構(gòu)規(guī)律及裂解規(guī)律、與有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的化合物進(jìn)行比較（色譜圖上的保留時(shí)間、母離子及其特征碎片離子）分析，并與相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行比對(duì)，最終對(duì)21 種黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行識(shí)別確認(rèn)。圖2 為Q-glu-rha-glu 二級(jí)質(zhì)譜圖。

圖2 Q-glu-rha-glu 二級(jí)質(zhì)譜圖Fig. 2 MS2 spectra of Q-glu-rha-glu

2.3 UHPLC-QQQ-MS/MS 方法學(xué)驗(yàn)證

使用購買的5 種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立的定量方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，選取同一茶樣，按建立的分析方法分別進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線、重復(fù)性和加標(biāo)回收試驗(yàn)。結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度0.02～10.00 μg/mL 的范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)均大于0.99；加入相同加標(biāo)量的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行6 次平行試驗(yàn)，加標(biāo)回收率在79.3%～106.5%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.6%～7.9%之間，說明建立的定量分析方法有較好的回收率和重復(fù)性。

2.4 黃酮醇糖苷類化合物的定量方法

現(xiàn)階段商品化的黃酮醇糖苷類化合物的標(biāo)準(zhǔn)品較少，文獻(xiàn)報(bào)道[17-18，24，26-28]多采用相對(duì)定量的方法對(duì)其進(jìn)行定量，即用已有標(biāo)準(zhǔn)品的黃酮醇糖苷類化合物對(duì)其它黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行相對(duì)定量。本研究以Q-glu-rha 為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其它沒有標(biāo)準(zhǔn)品黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行相對(duì)定量。配置有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的5 種黃酮醇糖苷類化合物系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，對(duì)其在茶葉中的含量進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。

2.5 茶葉中黃酮醇糖苷類化合物的含量

表2 顯示不同地區(qū)綠茶中21 種黃酮醇糖苷類化合物的組成及含量，根據(jù)單因素ANOVA 檢驗(yàn)分析結(jié)果，每批次樣品均測(cè)定2 次。由表2 可知，不同地區(qū)的綠茶中總黃酮醇糖苷類化合物的含量存在差異，黔西南地區(qū)綠茶中總黃酮醇糖苷含量最高，黔南地區(qū)綠茶總黃酮醇糖苷含量最低。在21 種糖苷中K-glu-rha-glu 含量最高，占總含量的33.1%～57.8%；Q-gal-rha-rha 平均含量最低；3 種糖苷中以山奈素糖苷含量最高，其次為槲皮素糖苷，楊梅素糖苷含量最低；不同茶葉中以三糖苷的平均含量最高，二糖苷次之，平均含量最低的為單糖苷。

差異性分析結(jié)果顯示，黔西南地區(qū)綠茶茶葉中總黃酮醇糖苷、槲皮素糖苷、山奈素糖苷、單糖苷、二糖苷含量顯著高于其它地區(qū)（P＜0.05），貴陽地區(qū)綠茶和黔東南地區(qū)綠茶中總黃酮醇糖苷、山奈素糖苷、單糖苷、二糖苷、三糖苷無顯著差異（P＞0.05）；黔西南地區(qū)綠茶和黔東南地區(qū)綠茶中楊梅素糖苷含量顯著高于其它地區(qū)（P＜0.05）；貴陽地區(qū)綠茶中三糖苷含量顯著高于其它地區(qū)（P＜0.05）；遵義地區(qū)綠茶和黔南地區(qū)綠茶在總黃酮醇糖苷、楊梅素糖苷、槲皮素糖苷、山奈素糖苷、單糖苷、二糖苷、三糖苷含量無顯著差異（P＞0.05）。

6 個(gè)地區(qū)的綠茶中21 種糖苷中Q-gal 和Kgal 含量雖有差異但不顯著（P＞0.05）；黔西南地區(qū)綠茶中Q-glu、M-glu、K-glu-rha 和K-glu 的含量顯著高于其它幾個(gè)地區(qū)綠茶（P＜0.05）。貴陽地區(qū)綠茶中K-glu-rha-glu 含量顯著高于其它幾個(gè)地區(qū)，且為21 種糖苷化合物中含量最高。

2.6 不同地區(qū)綠茶的識(shí)別分析

2.6.1 主成分分析（PCA）在進(jìn)行主成分分析之前，先對(duì)綠茶樣本是否存在異常樣本進(jìn)行判定。Hotelling's T2Range 算法是常用一種常用的判定方法，當(dāng)樣本的值超過T2臨界（99%）值時(shí)，說明該樣本與其它樣本間存在較大差異。結(jié)果如圖3 所示，綠茶樣本的值均未超過T2臨界（99%）值，說明選取的綠茶樣本可用于主成分分析模型的建立。

圖3 綠茶樣品的Hotelling's T2 Range 圖Fig. 3 Hotelling's T2 Range plot of green tea samples

根據(jù)表2 計(jì)算出的每個(gè)茶葉中單個(gè)黃酮醇苷類化合物的含量，使用主成分分析PCA 來闡明每個(gè)茶葉中黃酮醇苷類化合物組成的貢獻(xiàn)，以反映通過程序鑒別的茶葉樣品的聚類。圖4 顯示了分配給不同程序的茶葉的得分圖。前兩個(gè)主成分分別代表6 個(gè)地區(qū)的茶葉樣品的可變性的方差貢獻(xiàn)率的42.1%和20.2%，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為62.3%。

圖4 依據(jù)21 種黃酮醇苷類化合物的含量對(duì)不同產(chǎn)地綠茶進(jìn)行主成分分析Fig. 4 PCA plots of green tea from different producing area based on the content of 21 flavonol glycosides

從圖4a 中可知，6 個(gè)地區(qū)的綠茶樣品對(duì)應(yīng)的分值有明顯差異，各地區(qū)的茶樣有較好的聚集且茶樣且無重疊部分，PC1 和PC2 平面中6 個(gè)地區(qū)綠茶樣品得到有效的聚類，樣品的區(qū)分度較好。從圖4b 的加載圖中可以觀察到變量的方向，PC1 和PC2 中除K-gal 和Q-gal 貢獻(xiàn)較小外，其它化合物貢獻(xiàn)均大于0.2，但不存在突出貢獻(xiàn)變量。綜上，不同產(chǎn)地綠茶樣品可根據(jù)黃酮醇苷類化合物的含量進(jìn)行PCA 聚類分析。

2.6.2 BP 人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析（BP-ANN）使用SPSS 軟件進(jìn)行BP 人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析，隨機(jī)抽取70%的茶葉樣本作為訓(xùn)練集，剩余的30%茶葉樣本作為測(cè)試集，對(duì)BP 人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析模型的識(shí)別能力和預(yù)測(cè)能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，該模型的輸入層神經(jīng)元為21 個(gè)、隱藏層神經(jīng)元為13 個(gè)和輸出層神經(jīng)元為6 個(gè)，隱藏層層數(shù)為1。

從表3 可知，在模型訓(xùn)練和測(cè)試過程中，代表6 個(gè)不同地區(qū)的所有茶葉樣品識(shí)別的準(zhǔn)確率均為100.0%，說明BP 人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析模型具有較好的適用性。根據(jù)模型中的重要性和規(guī)范化的重要性得知（圖5），規(guī)范化的重要性大于80%的化學(xué)標(biāo)記有9 個(gè)，分別為K-gal-rha-rha、K-glu-rha、K-gal、K-glu、K-glu-rha-rha、K-gal-rha-glu、Mgal-rha-glu、Q-gal-rha-glu 和Q-gal-rha-rha，其中K-gal-rha-rha 和K-glu-rha 的重要性達(dá)到100%。

表3 BP-ANN 的訓(xùn)練和測(cè)試結(jié)果Table 3 Model training and prediction results of the BP-ANN model

2.6.3 偏最小二乘法判別分析（PLS-DA）為確定分組樣品的差異，進(jìn)一步采用PLS-DA，以21種黃酮醇苷類化合物為自變量（X），6 個(gè)地區(qū)綠茶作為因變量（Y），建立PLS-DA 分析模型。結(jié)果表明，分析模型的擬合指數(shù)分別為R2X（cum）=0.992、R2Y（cum）=0.942，預(yù)測(cè)指標(biāo)Q2（cum）=0.782，表明該模型能反映總自變量的99.2%，能反映總因變量的94.2%，預(yù)測(cè)能力為78.2%，說明建立的PLSDA 分析模型結(jié)果可靠。

PLS-DA 得分圖（圖6a）顯示了R2X 中特征值貢獻(xiàn)度最大的兩個(gè)，且兩個(gè)R2X 均沒有特征貢獻(xiàn)變量，說明21 種黃酮醇苷類化合物的值對(duì)該模型的總方差影響均衡。圖6b 顯示了在PLS-DA 預(yù)測(cè)模型中自變量對(duì)于分析結(jié)果的貢獻(xiàn)率，變量值與各糖苷對(duì)于模型貢獻(xiàn)率呈正相關(guān)。從圖中可知，VIP 值＞1 的變量有K-gal-rha-rha、K-glu-rhaglu、K-gal-rha、K-glu-rha-rha、Q-gal-rha-rha、Mgal-rha-glu、Q-glu-rha-rha 和K-glu-rha，該8 個(gè)變量可以作為綠茶中地理溯源的PLS-DA 模型最重要的化學(xué)標(biāo)記成分。

圖6 不同產(chǎn)地綠茶樣品PLS-DA 分析結(jié)果圖Fig. 6 Comparison of the PLS-DA analysis results of green tea samples from different regions

2.6.4 線性判別分析（LSD）LSD 以21 種黃酮醇苷類化合物為自變量，6 個(gè)地區(qū)綠茶作為因變量，建立判別模型，分析方法采用Fisher 函數(shù)和交叉檢驗(yàn)。由表4 可知，此模型對(duì)綠茶產(chǎn)地的整體判別準(zhǔn)確率為100%，6 各地區(qū)茶葉的交叉驗(yàn)證結(jié)果準(zhǔn)確率為100%，其中銅仁綠茶的準(zhǔn)確率為75%。說明使用線性判別對(duì)不同產(chǎn)地綠茶的判別效果較好。

表4 基于黃酮醇苷類化合物含量的茶葉分類判別結(jié)果Table 4 The discrimination results of tea based on the content of flavonol glycosides

3 結(jié)論

采用高分辨質(zhì)譜儀結(jié)合三重四極桿質(zhì)譜儀，建立了測(cè)定茶葉中黃酮醇糖苷類化合物的分析方法。通過與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比對(duì)、分析黃酮醇糖苷類化合物組成及裂解規(guī)律，并結(jié)合高分辨質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)果解析，共鑒定識(shí)別出茶葉中21 種黃酮醇糖苷類化合物，包括5 種楊梅素糖苷（三糖苷2 鐘、二糖苷1 種、單糖苷2 種）、8 種槲皮素糖苷（三糖苷4 鐘、二糖苷2 種、單糖苷2 種）和8 種山奈素糖苷（三糖苷4 鐘、二糖苷2 種、單糖苷2 種）。使用三重四極桿質(zhì)譜儀對(duì)不同產(chǎn)地綠茶中的21 種黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行測(cè)定，以Q-glu-rha 為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其它沒有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的黃酮醇糖苷類化合物進(jìn)行相對(duì)定量。

結(jié)果表明，不同產(chǎn)地綠茶中黃酮醇糖苷類化合物的含量及分布存在差異，經(jīng)化學(xué)計(jì)量學(xué)模型分析，采用21 種黃酮醇糖苷類化合物對(duì)綠茶地理溯源分析。PCA 顯示各地區(qū)的茶樣有較好的區(qū)分度，樣品得到有效的聚類。BP-ANN 顯示分析模型具有較好的適用性，對(duì)6 個(gè)地區(qū)的綠茶樣品識(shí)別的準(zhǔn)確率均為100.0%，并得到2 種規(guī)范化的重要性為100%的黃酮醇苷類化合物標(biāo)記物（P<0.05）。PLS-DA 顯示預(yù)測(cè)能力為78.2%，預(yù)測(cè)能力較好，分析結(jié)果可靠，判別出重要化學(xué)標(biāo)記成分8 種（VIP>1）。LSD 表明對(duì)6 個(gè)地區(qū)整體判別準(zhǔn)確率為100%，交叉驗(yàn)證結(jié)果準(zhǔn)確率為100%，判別效果較好。綜上，采用21 種黃酮醇糖苷類化合物的指紋技術(shù)對(duì)綠茶地理溯源分析是可行的。

研究開發(fā)建立的分析方法適用于分析茶葉中的黃酮醇糖苷類化合物，結(jié)合各分析模型成功對(duì)不同產(chǎn)地的茶葉進(jìn)行了地理溯源分析。研究結(jié)果為茶葉指紋圖譜和化學(xué)判別提供參考指標(biāo)，為茶葉地理溯源提供科學(xué)依據(jù)，為茶葉產(chǎn)品認(rèn)證及建立質(zhì)量追溯體系提供相應(yīng)技術(shù)和理論支撐。在后續(xù)研究中應(yīng)增加有統(tǒng)計(jì)意義和代表性的樣本量，構(gòu)建出穩(wěn)健、有效的產(chǎn)地判別模型，以進(jìn)一步評(píng)價(jià)黃酮醇糖苷類化合物在茶葉品質(zhì)中的適用性。