血清OPN、sPD-L1、miR-370在急性髓系白血病中的表達(dá)及與危險(xiǎn)分層的關(guān)系

劉冰,王舒,楊瑩

急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)是因髓系造血干細(xì)胞發(fā)生惡性病變,誘使外周血與骨髓內(nèi)的髓性細(xì)胞異常增生,從而轉(zhuǎn)移入侵旁系器官與非造血組織,致使自發(fā)性出血、貧血、器官衰竭等惡性事件發(fā)生,甚至危及患者生命的惡性腫瘤[1]。據(jù)相關(guān)報(bào)道[2],AML發(fā)病率占白血病總發(fā)病率20%左右,其惡性程度高于其他類(lèi)型白血病,60歲以上AML患者10年生存率低于5%。故及早發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行治療,對(duì)延長(zhǎng)患者預(yù)后生存時(shí)間極為重要。近年來(lái),多位學(xué)者[3-4]發(fā)現(xiàn)AML發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡、血管再生密切相關(guān)。其中,骨橋蛋白(OPN)是促進(jìn)腫瘤血管生成的重要因子,可參與腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的多項(xiàng)環(huán)節(jié)[5];可溶性程序性死亡因子配體-1(sPD-L1)通過(guò)與程序性死亡因子結(jié)合發(fā)生反應(yīng),進(jìn)而保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受免疫細(xì)胞殺死,最終促使腫瘤發(fā)生惡性病變[6];微小RNA-370(miR-370)屬于腫瘤抑制因子,可抑制多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。因此,本研究選取我院診治的79例AML患者作為研究對(duì)象,分析血清OPN、sPD-L1、miR-370與不同危險(xiǎn)分層AML的關(guān)聯(lián)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年11月—2023年2月我院診治的79例AML患者作為研究對(duì)象,參照文獻(xiàn)[8]中的分層標(biāo)準(zhǔn)將患者分為低危組(n=26)、中危組(n=39)和高危組(n=14)。3組一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理審批號(hào)：20231024-01)。

表1 3組一般資料比較

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];(2)臨床資料完整;(3)預(yù)計(jì)生存期>1年。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)重要臟器器官發(fā)生器質(zhì)性病變患者;(2)并發(fā)全身性疾病患者;(3)精神系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病患者;(4)入組前已接受相關(guān)治療患者;(5)其他類(lèi)型白血病患者;(6)對(duì)本研究藥物過(guò)敏患者;(7)存在心源性休克、永久性心臟內(nèi)傳導(dǎo)紊亂;(8)妊娠期或哺乳期女性。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 靜脈注射鹽酸阿糖胞苷1～3 mg/kg(國(guó)藥一心制藥,國(guó)藥準(zhǔn)字：H20040822,規(guī)格：0.3 g),1～2次/天,連續(xù)注射3 d;鹽酸米托蒽醌(浙江瑞新,國(guó)藥準(zhǔn)字：H10960120,規(guī)格：5 mg)溶于NaCl注射液(50 mL)或5%葡萄糖注射液中滴注,一次4～8 mg/m2,1次/天,連續(xù)滴注3 d,間隔2～3周。根據(jù)患者臨床治療反應(yīng)及時(shí)調(diào)整,周期為1個(gè)月。

1.3.2 檢測(cè)方法 采集患者治療前后清晨空腹靜脈血5 mL。其中3 mL血液樣本使用離心機(jī)(貝克曼Avanti J-15)3 500 r/min離心15 min分離血清,放置于-80 ℃冰箱冷凍保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清OPN、sPD-L1水平;采用熒光定量PCR儀(產(chǎn)地：美國(guó)ABI公司)應(yīng)用2-△△Ct方法計(jì)算miR-370-3p;剩余2 mL血液樣本放置于10%乙二胺四乙酸二鈉30 μL試管混勻后,采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(邁瑞6800)測(cè)定WBC、血紅蛋白(Hb)水平。

1.3.3 分層標(biāo)準(zhǔn) 低危：Inv(16)or t(16;16);CBFB-MYH11;t(8;21) (q22;q22.1);RUNX1-RUNX1T1;NPM1突變不伴有FLT3—ITD突變或伴有ITD突變;以及雙等位基因CEBPA突變。中危：NPM1突變和FLT3-ITD^high突變;野生型NPM1不伴有FLT-ITD突變或者伴有FLT3ITD^low突變(不伴有不良細(xì)胞遺傳學(xué)異常);(t9;11)(p21.3;q23.3);MLLT3-KMT2A;未分到預(yù)后良好或者預(yù)后不良組的細(xì)胞遺傳學(xué)異常。高危：(t6;9)(p23;q34.1);DEK-NUP214;(tv;11q23.3);KMT2A重排;(t9;22)(q34.1;q11.2);BCR-ABL1;inv(3)(q21.3q26.2)或者(t3;3)(q21.3;q26.2);GATA2,MECOM(EVI1)-5或者de(I5q);-7;-17/abn(17p)復(fù)雜染色體異常^2,染色單體野生型NPN1以及FIT3-ITD^high突變、RUNX1突變^3、ASXL突變^3、TP53突變。

1.4 觀察指標(biāo) (1)比較3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平;(2)比較3組治療前后WBC、Hb水平;(3)采用Pearson分析治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關(guān)性;(4)采用受試者工作特征曲線(ROC)分析治療前血清OPN、sPD-L1、miR-370水平聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AML患者危險(xiǎn)分層情況的診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 3組血清OPN、sPD-L1、miR-370水平比較 3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平低危組<中危組<高危組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平比較

2.2 3組WBC、Hb水平比較 3組治療前后血清WBC水平比較：低危組<中危組<高危組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);血清Hb水平比較：低危組>中危組>高危組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 3組治療前后WBC、Hb水平比較

2.3 治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關(guān)性 AML患者治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC水平呈正相關(guān),與Hb水平呈負(fù)相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關(guān)性

2.4 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯(lián)合檢測(cè)不同病情程度患者的診斷價(jià)值 以低危患者為陽(yáng)性樣本,以中高?；颊邽殛幮詷颖纠L制ROC曲線,結(jié)果顯示,治療前血清OPN、sPD-L1、miR-370聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.942,最佳敏感度、特異度分別為84.62%、92.45%(P<0.05)。見(jiàn)表5,圖1。

圖1 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯(lián)合檢測(cè)診斷AML的ROC曲線

表5 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯(lián)合檢測(cè)不同病情程度患者的診斷價(jià)值

3 討論

OPN是一種具有細(xì)胞因子活性的糖蛋白,由多種組織細(xì)胞合成分泌,可參與介導(dǎo)細(xì)胞黏附、免疫應(yīng)答、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成及促炎癥反應(yīng)等多種生理病理生物學(xué)過(guò)程[9-11]。研究[12]發(fā)現(xiàn),OPN通過(guò)與自身受體、CD44結(jié)合,以調(diào)控下游效應(yīng)基因的表達(dá),進(jìn)而轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路,最終促使腫瘤血管生成。王海玲等[13]研究發(fā)現(xiàn),白血病細(xì)胞基因表達(dá)與蛋白分泌水平會(huì)影響OPN表達(dá)。本研究針對(duì)危險(xiǎn)分層進(jìn)行分組,發(fā)現(xiàn)3組治療前后OPN水平均隨疾病程度加深呈下降趨勢(shì),表明OPN可能參與了疾病進(jìn)展。后選取可直接反映疾病是否發(fā)生的“金標(biāo)準(zhǔn)”指標(biāo)對(duì)比其治療前后水平發(fā)現(xiàn),WBC隨疾病程度加深呈上升趨勢(shì),Hb水平隨疾病程度加深呈下降趨勢(shì),均可直觀反映疾病是否發(fā)生及疾病嚴(yán)重程度。本研究采用Pearson分析WBC、Hb與OPN的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),OPN與WBC水平呈正相關(guān),與Hb水平呈負(fù)相關(guān),證實(shí)OPN與疾病有關(guān)聯(lián)性,與王海玲等[13]研究觀點(diǎn)相似。其原因在于,白血病細(xì)胞為了獲取足量營(yíng)養(yǎng)成分,會(huì)激活有關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,促使OPN濃度上升,建立新生血管通路,從而間接誘使病情惡化。

血清sPD-L1可作為反映細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子,主要分布于樹(shù)突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞內(nèi)[14-15]。吳福群等[16]研究發(fā)現(xiàn),AML患者治療前后血清sPD-L1與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平成正比(r1=0.447,r2=0.327),表明惡性細(xì)胞生長(zhǎng)的內(nèi)環(huán)境(sPD-L1)與惡性細(xì)胞增殖的外環(huán)境(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)互相影響。本研究Pearson分析顯示血清sPD-L1與WBC、Hb密切相關(guān),進(jìn)一步說(shuō)明了高濃度sPD-L1影響機(jī)體免疫功能運(yùn)轉(zhuǎn),一定程度上會(huì)抑制Hb生成,使得機(jī)體處于惡性循環(huán)。本研究采用ROC發(fā)現(xiàn),血清sPD-L1診斷AML,AUC為0.823,最佳敏感度、特異度為88.46%、69.81%,表明該指標(biāo)具有較高的診斷效能,但特異性較低不利于臨床辨別相似癥狀疾病,故建議與其他特異性較好指標(biāo)聯(lián)合使用以充分發(fā)揮該指標(biāo)臨床應(yīng)用價(jià)值。推測(cè)其原因在于,當(dāng)sPD-L1水平上升時(shí),通過(guò)促使sPD-L1與自身受體程序性細(xì)胞死亡受體結(jié)合,傳導(dǎo)抑制信號(hào),抑制T細(xì)胞活化,影響免疫系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn),從而導(dǎo)致大量惡性造血干細(xì)胞避過(guò)免疫殺傷,影響細(xì)胞正常凋謝,最終致使疾病發(fā)生發(fā)展[17]。

miR-370是一種參與細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲等活動(dòng)的腫瘤標(biāo)志物[18-20]。王慶義等[2]研究發(fā)現(xiàn),miR-370-3p表達(dá)與治療反應(yīng)、風(fēng)險(xiǎn)狀況、有無(wú)復(fù)發(fā)、WBC水平密切相關(guān),且治療完全緩解、無(wú)復(fù)發(fā)、高水平WBC患者miR-370-3p水平呈上升趨勢(shì)。本研究發(fā)現(xiàn)不同危險(xiǎn)分層患者治療后疾病轉(zhuǎn)歸情況均不相同,治療后低危患者miR-370水平趨于正常,中高?；颊唠m有較大改善,但仍處于危險(xiǎn)范圍,再次說(shuō)明miR-370與風(fēng)險(xiǎn)狀況、WBC水平密切相關(guān),與王慶義等[2]研究觀點(diǎn)相似。后經(jīng)ROC分析結(jié)果顯示,血清miR-370檢測(cè)效能>0.7,表明miR-370具有一定臨床使用價(jià)值且與疾病關(guān)聯(lián)程度較高。

為深入驗(yàn)證血清OPN、sPD-L1、miR-370與AML的關(guān)聯(lián)性及聯(lián)合檢測(cè)效能,故而繪制聯(lián)合ROC曲線,發(fā)現(xiàn)治療前血清聯(lián)合檢測(cè)可判斷患者危險(xiǎn)程度。

綜上所述,血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與AML病情程度、分層情況密切相關(guān),可為臨床診療提供參考。但本研究樣本容量較小且未觀察患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸情況,其結(jié)果數(shù)據(jù)也可能存在偏倚,故后續(xù)研究者可進(jìn)一步擴(kuò)充樣本量,以觀察治療前后緩解患者與未緩解患者間水平變化,從而為臨床提供診療依據(jù)。