鋸葉棕果實(shí)化學(xué)成分分離鑒定及抗前列腺炎活性研究

郝麗亞，李冰潔，王中林，鄭新華

(平頂山學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，河南 平頂山 467000)

鋸葉棕果實(shí)為棕櫚科灌木植物鋸葉棕櫚（Serenoarepens(bartr.) small）成熟的干燥果實(shí)，又稱(chēng)沙巴棕、藍(lán)棕、鋸棕櫚[1].鋸葉棕主要分布于美國(guó)東南部、墨西哥及中國(guó)的海南、廣西、河南、湖北、安徽、浙江等地.鋸葉棕果實(shí)具有清熱利濕、祛痰平喘、解毒消癰、鎮(zhèn)靜止痛的功效，臨床用于治療前列腺炎、內(nèi)分泌紊亂、乳房發(fā)育不良、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、頭痛、食欲不振、酒精中毒等50 多種疾病[2].藥理作用[3]顯示鋸葉棕果實(shí)具有抗菌、催欲生精、利尿、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、祛痰平喘、鎮(zhèn)靜、解痙、抗腫瘤等活性.鋸葉棕果實(shí)主要化學(xué)成分包括脂肪酸、黃酮、三萜、木脂素、揮發(fā)油、生物堿等[4].詹緒新等[5]研究顯示鋸葉棕果實(shí)提取物可有效緩解慢性前列腺炎大鼠的精液炎性指標(biāo).鋸葉棕果實(shí)提取物軟膠囊（批準(zhǔn)文號(hào)Z20170002，德國(guó)泰德制藥廠）作為治療良性前列腺增生的新藥，可有效緩解前列腺增生患者的臨床癥狀，提高患者的生存質(zhì)量[6].

本研究組致力于前列腺相關(guān)疾病研究，為了進(jìn)一步探討鋸葉棕果實(shí)治療前列腺炎的活性成分，本文對(duì)鋸葉棕果實(shí)提取物進(jìn)行分離純化，并測(cè)試所得化合物抗前列腺炎活性.

1 儀器與材料

DRX-600 型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker 公司）；Agilent1200 型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent Technologies 公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠（美國(guó)Waters 公司）；柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；HR-150A 型分析天平（日本艾安得公司）；氘代二甲基亞砜-d6(DMSO-d6，北京昱盛澤生物科技有限公司) ；白介素（IL）-1β，IL-6 酶聯(lián)免疫試劑盒（上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司）.所用試劑均為分析純.

鋸葉棕果實(shí)采自河南平頂山市，由平頂山學(xué)院鄭新華教授鑒定為鋸葉棕櫚[Serenoarepens(bartr.)small]成熟的干燥果實(shí).

2 提取與分離

取鋸葉棕果實(shí)19.7 kg，加90%乙醇連續(xù)回流得到鋸葉棕果實(shí)浸膏2.3 kg.依次加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚部分浸膏 (Fr.A，135.2 g)，二氯甲烷部分浸膏 (Fr.B，142.7 g)，丙酮部分浸膏 (Fr.C，164.9 g)，正丁醇部分浸膏(Fr.D，171.5 g).

取Fr.B，采用硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯(體積比90:10→60:40→40:60→10:90)梯度洗脫，得到9 個(gè)組分 (Fr.B1～Fr.B9).取Fr.B2，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以石油醚-丙酮 (體積比80:20→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物1(25 mg)、2(26 mg)、10(23 mg)、11(19 mg).取Fr.B5，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以石油醚-乙酸乙酯 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物3(21 mg)、4(18 mg)、6(27 mg)、14(26 mg)、20(30 mg)、24(23 mg)、26(19 mg).

取Fr.C，采用硅膠柱行分離，以二氯甲烷-乙酸乙酯 (體積比80:20→50:50→20:80→0:100)梯度洗脫，得到10 個(gè)組分 (Fr.C1～Fr.C10).取Fr.C3，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以二氯甲烷-丙酮 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物5(23 mg)、8(21 mg)、12(29 mg)、13(22 mg)、21(18 mg).取Fr.C5，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以二氯甲烷-丙酮 (體積比80:20→20:80→0:100)梯度洗脫，得化合物7(25 mg)、9(18 mg)、15(31 mg)、18(23 mg).

取Fr.D，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以乙酸乙酯-甲醇 (體積比80:20→50:50→20:80→0:100)梯度洗脫，得到9 個(gè)組分 (Fr.D1～Fr.D9).取Fr.D2，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以丙酮-甲醇 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物16(18 mg)、17(26 mg)、18(23 mg)、19(29 mg)、22(27 mg).取Fr.D4，采用硅膠柱進(jìn)行分離，以丙酮-甲醇 (體積比60:40→30:70)梯度洗脫，得化合物16(18 mg)、23(25 mg)、25(24 mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 無(wú)色膠狀物 (丙酮).ESI-MSm/z:204.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:6.39 (1H,m,H-2),5.32 (1H,m,H-6),5.18 (1H,m,H-5),4.47 (2H,m,H-1),3.12 (1H,m,H-4β),2.71 (1H,m,H-4α),1.93 (3H,s,8-CH3),1.65 (3H,s,9-CH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 60.3 (C-1),142.6 (C-2),128.4 (C-3),37.1 (C-4),76.1 (C-5),124.6 (C-6),139.2 (C-7),25.8 (8-CH3),18.5 (9-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7] aglycone 基本一致.

化合物2 白色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]2,2′,3,3′,4,4′-六羥基-6,6′-聯(lián)苯二甲酸二乙酯基本一致.

化合物3 白色晶體 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]丁香脂素基本一致.

化合物4 白色針晶 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10] 3,4,5-三甲氧基肉桂醇基本一致.

化合物5 白色粉末 (丙酮).ESI-MSm/z:558.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:5.71 (1H,s,H-11),4.38 (1H,d,J=12.0 Hz,H-3),4.16 (1H,m,H-2),3.08 (1H,m,H-18),1.57 (3H,s,H-24),1.43 (3H,s,H-27),1.38 (3H,s,H-29),1.03 (3H,d,J=8.2 Hz,H-30),0.93 (3H,s,H-25),0.87 (3H,s,H-26).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 49.1 (C-1),67.1(C-2),80.5 (C-3),56.3 (C-4),51.4 (C-5),22.6 (C-6),32.1 (C-7),38.5 (C-8),49.4 (C-9),37.5 (C-10),23.8(C-11),129.2 (C-12),139.1 (C-13),41.8 (C-14),30.5(C-15),27.1 (C-16),49.3 (C-17),54.8 (C-18),72.6 (C-19),43.1 (C-20),28.3 (C-21),40.2 (C-22),179.4 (C-23),15.2 (C-24),18.1 (C-25),17.9 (C-26),24.8 (C-27),179.1 (C-28),28.2 (C-29),18.1 (C-30).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11] triterpenoster 基本一致.

化合物6 黃色粉末 (甲醇).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12] 5,6,7,4′-四羥基-黃酮醇基本一致.

化合物7 白色粉末 (甲醇).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13] salicifoneoliganol 基本一致.

化合物8 淡黃色粉末 (甲醇),ESI-MSm/z:215.2 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:6.31 (1H,d,J=8.2 Hz,H-3),7.61 (1H,d,J=8.2 Hz,H-4),6.73 (1H,s,H-5),6.59 (1H,s,H-8),3.87 (3H,s,8-OCH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 124.6 (C-1),163.2 (C-2),102.9 (C-3),143.7 (C-4),113.5 (C-5),144.2 (C-6),151.9 (C-7),108.2 (C-8),55.8 (8-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14] scopoletin 基本一致.

化合物9 白色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]3,5-二甲氧基-4-羥基苯丙酮基本一致.

化合物10 淡黃色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:285.1 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:6.41 (1H,s,H-7),6.09 (1H,s,H-5),5.01 (1H,s,8-OH),3.83 (3H,s,10-OCH3),3.07 (2H,t,J=8.2 Hz,H-3),2.93 (2H,m,H-2′),2.63 (2H,m,H-6′),2.48 (2H,m,H-3′),2.37 (2H,m,H-5′),2.19 (2H,m,H-2).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 48.2 (C-1),36.1 (C-2),38.5 (C-3),147.2 (C-4),78.5 (C-5),98.3 (C-7),153.4 (C-8),125.2 (C-9),53.3 (C-1′),33.2 (C-2′),32.7 (C-3′),211.5 (C-4′),100.8 (C-5′),159.6 (C-6′),55.6 (10-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16] cannabispiran基本一致.

化合物11 棕色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:765.3 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:6.81 (2H,d,J=2.2 Hz,H-5,5′),6.73 (2H,br s,H-2,2′),6.43 (2H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6,6′),4.97 (2H,t,J=2.2 Hz,H-9α,9′α),3.76 (2H,t,J=2.2 Hz,H-9β,9′β),3.65 (6H,s,3,3′-OCH3),3.52 (6H,s,4,4′-OCH3),2.91 (2H,dd,J=12.0,5.2 Hz,H-7α,7′α),2.52 (2H,dd,J=12.0,2.2 Hz,H-7β,7′β),2.48 (2H,m,H-8,8′).13C NMR (150 MHz,acetone-d6)δ: 126.1(C-1),113.1 (C-2),147.2 (C-3),144.2 (C-4),110.9(C-5),124.6 (C-6),40.3 (C-7),46.2 (C-8),69.5 (C-9),126.1 (C-1′),113.1 (C-2′),147.2 (C-3′),144.2 (C-4′),110.9(C-5′),124.6 (C-6′),40.3 (C-7′),46.2 (C-8′),69.5 (C-9′),56.3 (3-OCH3),55.7 (3′-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17] diarctigenin 基本一致.

化合物12 黃色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:273.4 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.61 (1H,s,H-8),7.23(1H,d,J=8.2 Hz,H-4),7.13(1H,s,H-5),6.62 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2),2.53 (3H,s,7-CH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 166.8 (C-1),108.5 (C-2),167.2 (C-3),108.2 (C-4),150.3 (C-4α),120.9 (C-5),135.3 (C-6),164.2 (C-7),124.9 (C-8),191.7 (C-9),184.1 (C-10),114.6 (C-8α),108.2 (C-9α),137.1 (C-10α),23.5 (7-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]1,3,7-trihydroxy-6-methyl-anthraquinone 基本一致.

化合物13 白色粉末 (甲醇).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19] 3-羥基-4-甲氧基肉桂酸甲酯基本一致.

化合物14 白色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:236.8 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.09 (1H,s,H-8),6.53 (1H,s,H-5),6.37 (2H,s,H-2',6'),4.91 (1H,d,J=8.2 Hz,H-1),4.63 (1H,d,J=12.0 Hz,H-4),4.47 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-11α),4.09 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-11β),3.84 (6H,s,3',5'-OCH3),3.79 (3H,s,4'-OCH3),2.96 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-2),2.63(1H,m,H-3).13C NMR (150 MHz,丙 酮-d6)δ: 44.3(C-1),45.7(C-2),43.6(C-3),72.9 (C-4),108.1 (C-5),151.3 (C-6),51.3 (C-7),109.4(C-8),133.2 (C-9),134.3 (C-10),73.1 (C-11),176.3(C-12),137.6 (C-1'),111.5 (C-2'),154.1 (C-3'),137.3(C-4'),154.1 (C-5'),111.5 (C-6'),58.2 (3'-OCH3),60.7(4'-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18] podophyllotoxin 基本一致.

化合物15 白色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:560.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.15 (1H,d,J=8.2 Hz,H-6′),7.03 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2′),6.79 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6′′),6.65～6.71 (5H,m,H-2,5,6,2′′,5′′),5.51 (1H,d,J=8.2 Hz,H-7′′),4.65 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-7′),4.02 (3H,s,10-OCH3),3.75 (3H,s,10′-OCH3),3.71 (3H,s,10′′-OCH3),3.51 (1H,m,H-8′′).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 135.7 (C-1),113.8 (C-2),148.1 (C-3),144.9 (C-4),115.3 (C-5),120.7 (C-6),33.8 (C-7),44.0(C-8),73.4 (C-9),136.1 (C-1′),108.4 (C-2′),151.5 (C-3′),148.3 (C-4′),12 8.3(C-5′),1 158.4 (C-6′),83.5 (C-7′),54.0 (C-8′),59.7 (C-9′),134 .2(C-1′′),109.2 (C-2′′),151.5 (C-3′′),146.2(C-4′′),117.6 (C-5′′),120.4 (C-6′′),90.2 (C-7′′),55.3 (C-8′′),65.1 (C-9′′),58.1 (10-OCH3),56.7 (10′-OCH3),56.3 (10′′-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]herpetriol 基本一致.

化合物16 黃色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21] 4’,5-二羥基-3’,7-二甲氧基黃酮基本一致.

化合物17 白色針晶 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22] 對(duì)羥基苯甲酸基本一致.

化合物18 白色結(jié)晶 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22] 羥基苯甲醛基本一致.

化合物19 白色結(jié)晶 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23] 對(duì)羥基肉桂酸基本一致.

化合物20 白色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24] 1,3,5-三甲氧基苯基本一致.

化合物21 白色針晶 (丙酮).ESI-MSm/z:325.1 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:9.57 (1H,s,4-OH) 7.51 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2),7.23(1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6),6.92 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),3.52 (3H,s,3-OCH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 125.7 (C-1),112.4 (C-2),149.1 (C-3),153.8(C-4),115.4 (C-5),126.1 (C-6),193.7 (C-7),56.5 (3-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25] vanillil 基本一致.

化合物22 黃色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26] 1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) ethanone基本一致.

化合物23 白色粉末 (丙酮).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27] 對(duì)羥基苯丙酸基本一致.

化合物24 黃色粉末 (甲醇).ESI-MSm/z:265.1 [M+Na]+.1H NMR (DMSO-d6,600 MHz)δ:7.85 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.31 (1H,d,J=8.2,2.2 Hz,H-1),6.58 (1H,d,J=2.2 Hz,H-6),6.37 (1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.26 (1H,d,J=2.2 Hz,H-3),3.52(3H,4-OCH3),2.61 (4H,s,H-9,10).13C NMR(DMSO-d6,150 MHz)δ: 108.1 (C-1),161.4 (C-2),99.2 (C-3),158.5 (C-4),130.2 (C-5),115.1 (C-6),156.1 (C-7),113.9 (C-8),31.6 (C-9),29.4 (C-10),140.1 (C-1a),118.3 (C-2a),126.1 (C-3a),148.3 (C-4a),57.2 (4-OCH3).以上數(shù)值與Leong 等[28]報(bào)道的coelonin 數(shù)據(jù)基本一致.

化合物25 白色粉末 (甲醇).波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29] isopropylidenkirenol 基本一致.

化合物26 白色粉末 (甲醇).ESI-MSm/z309.3[M+Na]+.1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ: 7.62(1H,d,J=8.2 Hz,H-4),7.20 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.71 (1H,d,J=8.2 Hz,H-6),6.09 (1H,d,J=8.2 Hz,H-3),5.11 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-2'),3.39 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-3'),3.31 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-3'),1.96 (3H,s,H-4″),1.58 (3H,s,1″-CH3),1.39 (3H,s,1 ″-CH3).13C NMR (DMSO-d6,150 MHz)δ: 74.9 (C-1),156.7 (C-2),112.4 (C-3),145.1(C-4),127.2 (C-5),106.8 (C-6),163.2 (C-7),113.4 (C-8),150.6 (C-9),113.2 (C-10),82.4 (C-1'),90.2 (C-2'),28.1 (C-3').以上數(shù)值與Liao 等[30]報(bào)道的 libanoridin數(shù)據(jù)基本一致.

4 抗前列腺炎活性

取8 周齡雄性SD 大鼠90 只，體質(zhì)量(210±20) g，均來(lái)源于平頂山學(xué)院醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK（豫）2018～0013.大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、鋸葉棕果實(shí)提取物（TQU）組、化合物組（1～26），每組3 只.參照文獻(xiàn)[31]造模，正常組、模型組給予純化水；陽(yáng)性組給予舍尼通灌胃，100 mg·kg-1；鋸葉棕果實(shí)提取物組給予鋸葉棕果實(shí)水提取物灌胃，300 mg·kg-1；化合物組（1～26），分別給予化合物1～26，200 mg·kg-1.每日1 次，連續(xù)14 d.末次給藥12 h 后，剝離大鼠前列腺，進(jìn)行組織勻漿，采用按酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)前列腺組織中IL-1β、IL-6 的水平.結(jié)果顯示（表1）：與模型組比較，化合物8、10、12、14、21、25組前列腺組織中IL-1β水平降低（P＜0.05）.與模型組比較，化合物5、8、12、25組前列腺組織中IL-6 水平降低（P＜0.05）.

表1 化合物對(duì)大鼠前列腺組織中 IL-1β 和 IL-6 的影響(，n=3)Tab.1 Effects of the compound on IL-1β and IL-6 in rat prostate tissue (xˉ±s,n=3)

表1 化合物對(duì)大鼠前列腺組織中 IL-1β 和 IL-6 的影響(，n=3)Tab.1 Effects of the compound on IL-1β and IL-6 in rat prostate tissue (xˉ±s,n=3)

與模型組比較 *P＜0.05.

5 討論

鋸葉棕果實(shí)為治療前列腺炎的常用藥物，療效明顯[32-35].本研究從鋸葉棕果實(shí)中分離得26 個(gè)化合物，均為首次從鋸葉棕果實(shí)中分離得到，其中化合物1、5、8、10、12、14、21、22、24、25、26為首次從該屬植物中分離得到.對(duì)所得化合物的抗前列腺炎活性測(cè)試顯示：化合物8、10、12、14、21、25對(duì)前列腺組織中IL-1β，化合物5、8、12、25對(duì)前列腺組織中IL-6 具有抑制作用.本研究結(jié)果豐富了鋸葉棕果實(shí)化學(xué)成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)抗前列腺炎活性的新藥的研發(fā)提供了一定的幫助.