闊葉十大功勞抗炎作用機制的實驗研究及網(wǎng)絡藥理學分析

付朝舉 成果 林登梅 李軍 張楠楠

摘要：基于網(wǎng)絡藥理學及動物實驗研究苗藥闊葉十大功勞抗炎的有效成分及作用機制。用二甲苯、角叉菜膠分別制作小鼠及大鼠的炎癥模型，并灌胃闊葉十大功勞（小鼠劑量為1.950 mg/kg；大鼠劑量為1.350 mg/kg）。通過TCMSP、SymMap、SwisstargetPrediction、SEA、STICH等數(shù)據(jù)庫，以口服生物利用度≥30%、類藥性≥0.18獲取闊葉十大功勞的活性成分及其相應靶點；通過GeneCards、DisGeNET、TTD、DrugBank、OMIM等數(shù)據(jù)庫獲取炎癥相關靶點；通過Venny 2.1.0獲取疾病和藥物的交集靶點，通過Cytoscape的MCODE、CytoHubba插件得到10個關鍵靶點，并構建藥物-成分-靶點網(wǎng)絡圖；對10個Hub gene進行KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes ）和GO （gene ontology）富集分析以及分子對接。動物實驗結果表明，闊葉十大功勞能夠減輕小鼠和大鼠的炎癥癥狀。網(wǎng)絡藥理學分析獲得28個闊葉十大功勞活性化合物，753個藥物作用靶點，1 025個炎癥靶點，闊葉十大功勞-炎癥交集靶點225個，Hub gene 10個。GO及 KEGG富集分析結果顯示，闊葉十大功勞主要參與JAK-STAT信號傳導途徑、Th17細胞分化和一些癌癥通路。分子對接結果顯示，小檗堿、異博爾定等11個活性成分與JUN、JAK3等8個靶點對接成功。動物實驗結果表明闊葉十大功勞具有抗炎作用，抗炎的主要成分為槲皮素、小檗堿等化合物，抗炎的機制可能是通過作用于IL-2、JAK1等靶點，參與JAK-STAT信號傳導途徑、Th17細胞分化等通路抗炎，初步揭示了闊葉十大功勞發(fā)揮抗炎作用的物質(zhì)基礎及作用機制。

關鍵詞：闊葉十大功勞；網(wǎng)絡藥理學；炎癥；分子機制；有效成分

中圖分類號：R285?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1002-4026（2024）01-0024-08

Experimental study and network pharmacological analysis of the anti-inflammatory action mechanism of ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr.

Abstract∶The aim of this study was to investigate the active ingredients and mechanism of action of the anti-inflammatory effect of ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. in Hmong medicine based on network pharmacology and animal experiments. Inflammation models of mice and rats were generated using xylene and carrageenan gum， respectively， and ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. was gavaged （dose of 1.950 mg/kg for mice; 1.350 mg/kg for rats）. The active ingredients and their corresponding targets of ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. were obtained using TCMSP， SymMap， SwisstargetPrediction， SEA， and STICH， among other databases， with oral bioavailability ≥30% and drug-likeness ≥0.18. Inflammationrelated targets were obtained through GeneCards， DisGeNET， TTD， DrugBank， OMIM and other databases. The intersection targets of diseases and drugs were determined using Venny 2.1.0， and 10 hub gene were obtained through Cytoscape′s MCODE， CytoHubba plug-in and constructed drug-component-target network diagram; Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG）， and Gene Ontology （GO） enrichment analysis and molecular docking were performed for the 10 Hub gene. The results of animal experiments showed that ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. could be used to reduce the inflammatory symptoms in mice and rats. The network pharmacological analysis revealed 28 ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. active ingredients， 753 drug action targets，1 025 inflammatory targets， 225 ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. inflammatory crossover targets and 10 hub genes. The results of GO and KEGG enrichment analysis showed that ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. top ten utilities were predominantly involved in the JAK-STAT signaling pathway， Th17 cell differentiation and some cancer pathways. The molecular docking results demonstrated that 11 active ingredients， including berberine and isoboridine， were successfully docked with 8 targets， including JUN and JAK3. The results of animal experiments showed that ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr. has anti-inflammatory effects， and the main ingredients of anti-inflammation include quercetin and berberine， among other compounds， and the mechanism of anti-inflammation may be through the action onIL-2， JAK1 and other targets， involved in JAK-STAT signaling pathway， Th17 cell differentiation， and other pathways of anti-inflammation. The present study initially revealed the material basis and mechanism of action of the anti-inflammatory effect of ‘Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr.

Key words∶Mahonia bealei ‘（Fort.） Carr.; network pharmacology; inflammation; molecular mechanism; active ingredient

闊葉十大功勞Mahonia bealei （‘Fort.） ‘Carr.屬小檗科（Berberidaceae），灌木或小喬木，主要生長于廣西、四川、貴州、湖北、江西、浙江等地，是我國傳統(tǒng)藥用植物[1]，在《中國苗族藥物彩色圖集》[2]和《苗族醫(yī)藥學》[3]等苗藥相關著作中均有記載。闊葉十大功勞有清熱燥濕、瀉火解毒之效，可用于治療濕熱瀉痢、黃疸尿赤等癥，該中藥以根莖入藥稱為功勞木，以葉入藥稱為功勞葉?，F(xiàn)代藥理學研究表明，闊葉十大功勞具有抗氧化、抗炎、抗菌的作用[4]。

近年來，網(wǎng)絡藥理學在中藥物質(zhì)基礎、作用機制等方面的研究中發(fā)揮著重要的作用。炎癥是人體對微生物感染、組織損傷和毒素等刺激因素的一種高度協(xié)同反應，中等程度的炎癥反應對人體有利，但過度炎癥反應可引起糖尿病、動脈粥樣硬化及高血壓病等許多疾病，而抑制炎癥反應可減少一些疾病的發(fā)生[5-7]。本文主要采用網(wǎng)絡藥理學、分子對接及動物實驗的方法對闊葉十大功勞抗炎作用進行研究，旨在尋找闊葉十大功勞中具有成藥性、口服吸收較好的成分，并預測這些成分的抗炎作用靶點及相關信號通路，為闊葉十大功勞抗炎作用的深入研究提供參考，為闊葉十大功勞的二次開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物實驗

1.1.1 實驗動物及藥物制備

KM小鼠30只，雄性，4～5周齡，體重（25±5）g。SD大鼠18只，雄性，6～8周齡，體重（250±20） g，均購于貴州中醫(yī)藥大學動物研究所，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（黔）2021-0003，實驗動物使用許可證號：SYXK（黔）2021-0005。闊葉十大功勞木采集于貴州省開陽縣，樣本存放于貴州苗醫(yī)藥博物館，編號GZT2020121021530306，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學肖承鴻高級實驗師鑒定為小檗科十大功勞屬植物闊葉十大功勞 Mahonia bealei（ Fort．） Carr.。闊葉十大功勞根莖干燥粉碎，取藥物粉末100 g轉(zhuǎn)移到2 L圓底燒瓶，加95%乙醇1 L，浸泡0.5 h后采用超聲提取0.5 h，所得溶液過濾并濃縮，制得質(zhì)量濃度4 g/mL的醇提液25 mL，并用蒸餾水稀釋成0.4 g/mL的水提液備用。動物實驗方案經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學動物實驗福利倫理審查委員會審查，實驗動物倫理審查表編號20220130。

1.1.2 抗炎實驗

動物實驗分別采用二甲苯致小鼠耳腫脹和角叉菜膠致大鼠足腫脹的方法，研究闊葉十大功勞的抗炎作用。闊葉十大功勞用量參照臨床每日15 g的給藥量，以體重70 kg為準，換算為小鼠和大鼠的給藥劑量。

二甲苯致小鼠耳腫脹法：將KM雄性小鼠隨機分為3組，分別為空白對照組、陽性對照組、闊葉十大功勞組，每組10只，分別給予0.9%生理鹽水、1%阿司匹林、95%闊葉十大功勞醇提稀釋水提液。各組小鼠分別給藥1次，0.5 h后用二甲苯50 μL涂抹于小鼠右耳正、反面，左耳作為對照不予處理，0.5 h后處死小鼠，用打孔器在小鼠的左右耳同一部位打下圓耳片，稱重。同一小鼠的右耳與左耳質(zhì)量之差即為小鼠耳腫脹度，并計算小鼠耳廓腫脹抑制率。耳廓腫脹度抑制率（%）=（右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量）/左耳質(zhì)量×100%。

角叉菜膠致足腫脹法：將SD大鼠隨機分為3組，分別為空白對照組、陽性對照組、闊葉十大功勞組，每組6只，分別給予0.9%生理鹽水、1%阿司匹林、95%闊葉十大功勞醇提稀釋水提液。各組大鼠分別給藥1次，0.5 h后每只大鼠均在其右后足足跖皮下注射1%角叉菜膠致炎，每只0.1 mL。于注射后0.5、1.0、1.5 h時測量大鼠右后足足跖厚度，致炎前后足跖厚度之差作為腫脹度（mm），并計算大鼠的足跖腫脹率。足跖腫脹率（%）=（致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度）/致炎前足跖厚度×100%。

1.1.3 統(tǒng)計分析

本實驗采用GraphPad Prism 9.4.1軟件分析，GraphPad Prism是一種高效且易于使用的科學研究繪圖分析軟件，結合了科學圖形、綜合曲線擬合（非線性回歸）、可理解的計算數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)組織，能夠準確對各種數(shù)據(jù)進行分析，然后可視化形成各種圖表[8]。實驗數(shù)據(jù)均采用（‘x±s）表示。使用GraphPad Prism 9.4.1軟件進行數(shù)據(jù)單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

1.2 網(wǎng)絡藥理學分析

1.2.1 數(shù)據(jù)庫及網(wǎng)站

依托網(wǎng)絡數(shù)據(jù)庫平臺及在線作圖網(wǎng)站進行網(wǎng)絡藥理學研究，所使用的數(shù)據(jù)庫、在線作圖網(wǎng)站有TCMSP（https：//tcmsp-e.com/）、Symma（https：//www.symmap.org）、SEA數(shù)據(jù)庫（https：//sea.bkslab.org）、STITCH數(shù)據(jù)庫（http：//stitch.embl.de/）、PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、SwissTargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/predict.php）、DrugBank（https：//go.drugbank.com）、TTD（https：//db.idrblab.net）、DisGeNET（https：//www.disgenet.org）、GeneCards（https：//www.genecards.org/）、OMIM（https：//omim.org/）、Venny2.1.0（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）、STRING（https：//cn.string-db.org/）、DAVID（https：//david.ncifcrf.gov/home.jsp）、PubMed（https：//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/）、PDB（https：//www.rcsb.org/）、微生信（http：//www.bioinformatics.com.cn/）。

1.2.2 收集闊葉十大功勞靶點和炎癥靶點

通過 TCMSP和Symmap數(shù)據(jù)庫以及相關文獻對闊葉十大功勞化學成分進行檢索，根據(jù)口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18篩選出滿足條件的化合物為候選化合物。將藥物成分SMILES結構從PubChem中下載到SwissTargetPrediction、SEA和STITCH數(shù)據(jù)庫中預測靶點，剔除重復的靶基因，獲取闊葉十大功勞成分的潛在目標基因。將關鍵詞“inflammation”輸入到 OMIM、GeneCards、 DrugBank、TTD和DisGeNET數(shù)據(jù)庫中，搜索與炎癥有關的基因，提取GeneCards檢索結果中score≥5的基因和DisGeNET、OMIM、DrugBank、TTD的所有“Human”基因，去重匯總后，得到與炎癥相關靶點。

1.2.3 篩選交集靶點并構建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡

通過Venny 2.1.0對藥物靶點和疾病靶點進行在線作圖，數(shù)據(jù)取交集即闊葉十大功勞潛在的抗炎靶點。將闊葉十大功勞潛在的抗炎靶點導入STRING數(shù)據(jù)庫，將“Minimum required interaction score” 設置為“highconfidence （0.900）”，其他參數(shù)保持默認，將tsv.格式的數(shù)據(jù)結果上傳至Cytoscape（3.9.1版），構建目標蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡，同時利用 Cytoscape軟件插件MCODE及Cytohubba在PPI網(wǎng)絡上搭建分子相互作用模塊，篩選出核心靶點。

1.2.4 構建藥物-成分-靶點網(wǎng)絡

通過Cytoscape 3.9.1軟件，將1.2.2獲得的225個靶點與闊葉十大功勞藥效成分相對應，構建出闊葉十大功勞藥物-成分-靶點的網(wǎng)絡圖。

1.2.5 GO和KEGG功能富集分析

將1.2.3中得到的10個關鍵靶點導入 DAVID數(shù)據(jù)庫里，選擇“Homo sapiens”物種，進行基因本體（gene ontology，GO）功能富集和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路分析。通過微生信在線繪圖軟件，將GO和KEGG分析結果進行可視化。

1.2.6 分子對接

將闊葉十大功勞藥對活性成分與10個關鍵靶點一一對應并進行分子對接，活性化合物小分子配體的2D結構從PubMed中獲取，Hub蛋白結構文件從PDB數(shù)據(jù)庫中獲取，并將活性化合物配體和Hub蛋白結構導入DS BIOVIA Discovery Studio 2016 v16.1進行分子對接模擬，對接分數(shù)表明配體與受體間親和能力的大小。

2 結果

2.1 動物實驗

2.1.1 闊葉十大功勞對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

小鼠抗炎結果如圖1所示，與生理鹽水組（空白對照組）比較，闊葉十大功勞組（實驗組）、阿司匹林組（陽性對照組）小鼠耳腫脹明顯減輕，且均能有效降低小鼠兩耳片質(zhì)量的差值（‘p＜0.01，表1）。

2.1.2 闊葉十大功勞對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響

大鼠抗炎結果如圖2所示，與生理鹽水組（空白對照組）相比，闊葉十大功勞組（實驗組）與阿司匹林組（陽性對照組）均能有效降低角叉菜膠誘導的大鼠足腫脹率（‘p＜0.05，見表2） ，但是闊葉十大功勞組效果不如陽性對照阿司匹林組。

2.2.1 闊葉十大功勞成分與靶點

在TCMSP、Symmap數(shù)據(jù)庫及文獻中查閱檢索闊葉十大功勞化學成分，按OB值≥30%和DL值≥0.18篩選，總共篩選出闊葉十大功勞成分31個，除去無靶點的化合物，獲得闊葉十大功勞成分28個，主要藥效成分見表3，全表見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附表1。采用“Homo sapiens”作為物種篩選的條件，去重匯總后獲得闊葉十大功勞成分753個潛在靶點。

2.2.2 炎癥靶點

以“inflammation”在GeneCards、OMIM等數(shù)據(jù)庫檢索與炎癥有關的靶點，去重匯總后，得到1 054個靶點基因。通過Venny 2.1.0對2.2.1得到的753個闊葉十大功勞靶點基因和炎癥靶點基因進行映射，獲得藥物和疾病的共同靶點225個，見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖1。

2.2.3 藥物-成分-靶點網(wǎng)絡分析

將2.2.2節(jié)的225個交集靶點，通過創(chuàng)建屬性文件整理成分-靶點，得到藥物-成分-靶點文件，將文件導入Cytoscape 3.9.1得到藥物-成分-靶點網(wǎng)絡圖（見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖2）。附圖2體現(xiàn)了闊葉十大功勞藥物-成分-靶點的網(wǎng)絡關系，圖中藍色圓形為成分對應的基因，橙色三角形表示闊葉十大功勞中能與這些基因反應的有效成分，共28個。

2.2.4 PPI網(wǎng)絡分析

將2.2.2節(jié)225個共同靶點導入STRING數(shù)據(jù)庫進行PPI分析，以置信度最大（0.900）為條件篩選，將數(shù)據(jù)結果上傳至Cytoscape 3.9.1軟件進行分析，去除游離蛋白，得到PPI圖，見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖3。蛋白連接的線越多，表明該蛋白degree值越高，是關鍵蛋白。利用插件Cytoscape 3.9.1軟件中MCODE 和 CytoHubba 插件篩選PPI 網(wǎng)絡中的核心蛋白，得到了PIK3CA、SRC、EGFR、MAPK1、IL-2、STAT3、JUN、JAK3、JAK1、MAPK14等10個蛋白，表明這些蛋白與闊葉十大功勞抗炎作用有著更為直接的關系。

2.2.5 GO和KEGG功能富集分析

將2.2.4節(jié)得到的10個關鍵基因進行功能富集分析，其結果如OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖4（a）所示，主要富集的細胞成分包括細胞核、細胞質(zhì)、細胞骨架等；主要富集的生物過程有白細胞介素-6介導的信號傳導途徑，細胞對活性氧的反應，STAT蛋白的酪氨酸磷酸化等；主要富集的分子功能包括蛋白激酶結合，蛋白酪氨酸激酶活性，跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等。在 KEGG 通路富集分析結果中（OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖4（b）），富集的通路有新型冠狀病毒感染、麻疹、人類巨細胞病毒感染、JAK-STAT信號傳導途徑、Th17細胞分化、Th1和Th2細胞分化等。

2.2.6 分子對接

為了測試化合物-靶點相互作用的可靠性，根據(jù)2.2.4的結果對選取的核心靶點進行分子對接驗證。對接分數(shù)越高說明蛋白與配體的結合能越低，越容易結合。結果顯示，11個活性成分與8個蛋白對接成功，其山茱萸苷H、異博爾定、硫唑胺、異鼠李素、鴉膽子苷M、鴉膽子苷J、槲皮素、不列顛寧、弗拉辛、小檗堿、與 JUN、JAK3、IL-2、MAPK14、EGFR、MAPK1、SRC、JAK1等蛋白有較好的親和力。部分分子對接結果見表4，全表見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附表2。部分分子對接結果示意圖見OSID科學數(shù)據(jù)與內(nèi)容附圖5。

3 討論

炎癥是人體對致炎因子的損傷作用所引起的反應，能引起人體充血、腫脹、滲出和變性，局部組織缺血缺氧并伴有代謝機能的變化，嚴重者可引起多種疾病[9]。因此，控制過度的炎癥反應對于機體的功能恢復非常關鍵。動物實驗結果顯示，闊葉十大功勞具有良好的抗炎效果。在對二甲苯致小鼠耳腫脹實驗中，闊葉十大功勞與陽性對照阿司匹林表現(xiàn)出同等的抗炎效果；在對角叉菜膠致大鼠足腫脹實驗中，闊葉十大功勞的抗炎效果相對陽性對照阿司匹林較弱，其原因可能是大、小鼠之間的種屬差異所致。本研究通過網(wǎng)絡藥理學和分子對接的方法，構建了闊葉十大功勞的藥物-成分-靶點網(wǎng)絡，探索了闊葉十大功勞抗炎的物質(zhì)基礎和潛在作用機制。

本研究結果展示了闊葉十大功勞中小檗堿、槲皮素、不列顛寧、異博爾定等化合物具有抗炎活性，IL-2、SRC、EGFR、MAPK14等是闊葉十大功勞抗炎的核心靶點。IL-2是一種刺激細胞生長的因子，在免疫細胞中，IL-2與IL-2受體共同作用可導致Jak/STAT信號通路、PI3K/Akt信號通路和MEK/ERK信號通路活化，這些通路與炎癥的發(fā)生密切相關[10]。EGFR是上皮生長因子（EGF）細胞增殖和信號傳導的受體，降低 EGFR的含量，能有效控制其前期炎癥發(fā)生發(fā)展，其作用機制可能是通過下調(diào)EGFR抑制PI3K-AKT信號通路的激活，促進細胞凋亡[11]。MAPK14是4個p38 MAPKs家族之一，p38 MAPKs 調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄級聯(lián)過程中，相關促炎細胞因子IL-β 和 TNF-α會產(chǎn)生，炎癥反應有關的酶會激活[12]。

分子對接結果表明JUN、JAK3、IL-2、MAPK14、EGFR等8個蛋白能夠與小檗堿、槲皮素、不列顛寧、黃連素等11種有效成分穩(wěn)定地結合。研究表明，異博爾定是林氏基（TARL）總生物堿中的主要生物活性成分之一，能夠減輕小鼠膠原蛋白引起的關節(jié)炎和關節(jié)損傷[13]。不列顛寧是一種倍半萜化合物，具有顯著的抗氧化和抗炎活性，能夠減少炎癥細胞浸潤和黏液分泌的增加。研究表明，不列顛寧抑制HMC-1中促炎細胞因子的基因表達和分泌，口服給予不列顛寧（10～20 mg/kg）能夠降低IgE致敏小鼠肥大細胞介導的PCA反應[14-15]。小檗堿可通過調(diào)控NF-κB、MAPK、PPARγ信號及其他途徑來影響免疫細胞中Treg與Th17細胞間的平衡，并抑制IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α及ICAM-1等炎癥因子的分泌及表達，能阻礙白細胞黏附，遷移內(nèi)皮，減少中性粒細胞的浸潤，促使細胞凋亡及減少組織損傷[16-18]。槲皮素能通過沉默Toll樣受體（TLR），進而抑制細菌脂多糖（LPS）誘導的細胞膜表面黏附分子和炎癥介質(zhì)的表達，從而發(fā)揮抗炎作用[19]。因此，結合靶點與成分分析，推測闊葉十大功勞中的小檗堿等成分通過抑制MAPK14等使IL-β與TNF-α等促炎細胞因子釋放減少，達到抗炎作用。

炎癥作為機體對于刺激的一種保護性反應，免疫細胞、血管和多種分子介質(zhì)均有參與。KEGG 信號通路分析發(fā)現(xiàn)，闊葉十大功勞發(fā)揮抗炎的作用通路主要與癌癥中途徑、JAK-STAT信號傳導途徑、Th17細胞分化、Th1和Th2細胞分化等有關。研究表明炎癥反應是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素，可誘發(fā)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[20]。JAK-STAT信號通路通過負調(diào)控因子（SOCS和PIAS）功能失調(diào)使得JAK/STAT信號通路持續(xù)激活，導致體內(nèi)促炎細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、生長因子等水平顯著升高，而JAK-STAT信號傳導途徑是細胞因子分泌的運輸樞紐，因此對于炎癥反應的調(diào)節(jié)至關重要[21]。Th17和Th1免疫應答是一種促炎反應[22]，TH2免疫應答是一種抗炎反應，通過促進特應性中的IgE和嗜酸性粒細胞反應并產(chǎn)生抗炎作用[23-25]。結合成分與通路分析，推測闊葉十大功勞中槲皮素、不列顛寧等成分作用于Th1、Th2和Th17等免疫細胞，參與JAK-STAT信號通路發(fā)揮抗炎作用。此外，KEGG結果中顯示硫唑胺、鴉膽子苷等成分作用于乙型肝炎、新型冠狀病毒感染、卡波西肉瘤相關的皰疹病毒感染、病毒性癌癥的發(fā)生、麻疹等通路，這表明闊葉十大功勞中可能含有治療癌癥、麻疹、肺炎、肝炎的成分靶點，當然還有待于今后進一步的研究證實。

本研究利用體內(nèi)實驗證實了闊葉十大功勞的抗炎作用，同時利用網(wǎng)絡藥理學和分子對接對闊葉十大功勞抗炎物質(zhì)基礎及作用機制進行預測。研究結果表明，闊葉十大功勞能夠有效減輕小鼠及大鼠的炎癥反應，抗炎的主要成分可能為小檗堿、槲皮素、不列顛寧等，抗炎的機制可能是通過作用于IL-2、MAPK14、EGFR等靶點參與JAK-STAT信號通路。

參考文獻：

［1］中國科學院中國植物志編輯委員會．中國植物志第二十九卷［M］． 北京： 科學出版社，2001： 235．

[2]汪毅. 中國苗族藥物彩色圖集[M]. 貴陽： 貴州科技出版社， 2002.

[3]貴州省民委文教處. 苗族醫(yī)藥學［M］．貴陽：貴州民族出版社，1992.

[4]劉偲翔， 劉布鳴， 何開家， 等. 兩種十大功勞葉中生物堿成分的分析與比較[J]. 中國藥業(yè)， 2010， 19（5）： 4-5. DOI： 10.3969/j.issn.1006-4931.2010.05.002.

[5]郭立敏， 呂潔麗， 張來賓. 天然倍半萜類化合物抗炎作用機制的研究進展[J]. 中國中藥雜志， 2018， 43（20）： 3989-3999. DOI： 10.19540/j.cnki.cjcmm.20180726.013.

[6]KIM H J， JOE H I， ZHANG Z Y， et al. Anti-inflammatory effect of Acalypha australis L. via suppression of NF-κB signaling in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages and LPS-induced septic mice[J]. Molecular Immunology， 2020， 119： 123-131. DOI： 10.1016/j.molimm.2020.01.010.

[7]LI S S， LI J， SUN J， et al. Berkeleyacetal C， a meroterpenoid isolated from the fungus Penicillium purpurogenum MHZ 111， exerts anti-inflammatory effects via inhibiting NF-κB， ERK1/2 and IRF3 signaling pathways[J]. European Journal of Pharmacology， 2017， 814： 283-293. DOI： 10.1016/j.ejphar.2017.08.039.

[8]MITTEER D R， GREER B D， RANDALL K R， et al. Further evaluation of teaching behavior technicians to input data and graph using GraphPad Prism[J]. Behavior Analysis： Research and Practice， 2020， 20（2）： 81-93. DOI： 10.1037/bar0000172.

[9]楊翰林， 羅川晉， 吳偉. 濕熱與瘀熱類炎癥的中醫(yī)思考[J]. 中西醫(yī)結合心腦血管病雜志， 2019， 17（3）： 464-467. DOI： 10.12102/j.issn.1672-1349.2019.03.042.

[10]YE C X， BRAND D， ZHENG S G. Targeting IL-2： an unexpected effect in treating immunological diseases[J]. Signal Transduction and Targeted Therapy， 2018， 3： 2. DOI： 10.1038/s41392-017-0002-5.

[11]繆志偉， 徐艷， 寧麗琴， 等. 白頭翁湯治療潰瘍性結腸炎分子機制的網(wǎng)絡藥理學分析及初步驗證[J]. 中國中藥雜志， 2020， 45（8）： 1808-1815. DOI： 10.19540/j.cnki.cjcmm.20191112.406.

[12]KIM D K， LIM J H， LEE J， et al. Synthesis and biological evaluation of trisubstituted imidazole derivatives as inhibitors of p38α mitogen-activated protein kinase[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters， 2008， 18（14）： 4006-4010. DOI： 10.1016/j.bmcl.2008.06.007.

[13]LI Y， ZENG R J， CHEN J Z， et al. Pharmacokinetics and metabolism study of isoboldine， a major bioactive component from Radix Linderae in male rats by UPLC-MS/MS[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2015， 171： 154-160. DOI： 10.1016/j.jep.2015.05.042.

[14]PARK H H， KIM S G， PARK Y N， et al. Suppressive effects of britanin， a sesquiterpene compound isolated from inulae Flos， on mast cell-mediated inflammatory responses[J]. The American Journal of Chinese Medicine， 2014， 42（4）： 935-947. DOI： 10.1142/s0192415x14500591.

[15]KIM S G， LEE E， PARK N Y， et al.Britanin attenuates ovalbumin-induced airway inflammation in a murine asthma model[J]. Archives of Pharmacal Research， 2016， 39（7）： 1006-1012. DOI： 10.1007/s12272-016-0783-z.

[16]LI C L， TAN L H， WANG Y F， et al. Comparison of anti-inflammatory effects of berberine， and its natural oxidative and reduced derivatives from Rhizoma Coptidis in vitro and in vivo[J]. Phytomedicine： International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology， 2019， 52： 272-283. DOI： 10.1016/j.phymed.2018.09.228.

[17]李紅枚， 黨萬太， 楊小紅. 小檗堿抗炎機制的研究進展[J]. 中國醫(yī)藥導報， 2017， 14（33）： 31-34.

[18]CALICETI C， FRANCO P， SPINOZZI S， et al.Berberine： new insights from pharmacological aspects to clinical evidences in the management of metabolic disorders[J]. Current Medicinal Chemistry， 2016， 23（14）： 1460-1476. DOI： 10.2174/0929867323666160411143314.

[19]BYUN E B， YANG M S， CHOI H G， et al. Quercetin negatively regulates TLR4 signaling induced by lipopolysaccharide through Tollip expression[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications， 2013， 431（4）： 698-705. DOI： 10.1016/j.bbrc.2013.01.056.

[20]范麗梅， 柳昀熠， 潘鈺， 等. 炎癥與腫瘤的關系研究進展[J]. 江漢大學學報（自然科學版）， 2016， 44（5）： 432-437. DOI： 10.16389/j.cnki.cn42-1737/n.2016.05.009.

[21]BANERJEE S， BIEHL A， GADINA M， et al. JAK-STAT signaling as a target for inflammatory and autoimmune diseases： current and future prospects[J]. Drugs， 2017， 77（5）： 521-546. DOI： 10.1007/s40265-017-0701-9.

[22]DONG C. Differentiation and function of pro-inflammatory Th17 cells[J]. Microbes and Infection， 2009， 11（5）： 584-588. DOI： 10.1016/j.micinf.2009.04.001.

[23]MOSS R B， MOLL T， EL-KALAY M， et al. Th1/Th2 cells in inflammatory disease states： Therapeutic implications[J]. Expert Opinion on Biological Therapy， 2004， 4（12）： 1887-1896. DOI： 10.1517/14712598.4.12.1887.

[24]ROMAGNANI S. Th1/Th2 cells[J]. Inflammatory Bowel Diseases， 1999， 5（4）： 285-294. DOI： 10.1097/00054725-199911000-00009.

[25]WALKER J A， MCKENZIE A N J. TH2 cell development and function[J]. Nature Reviews Immunology， 2018， 18（2）： 121-133. DOI： 10.1038/nri.2017.118.