棘腦通的抗抑郁作用及機制研究Δ

黃 雯,高 雄,夏辰希,段 然,董婷霞,詹華強

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部,廣州510095; 2.香港科技大學(xué)生命科學(xué)部暨中藥研發(fā)中心,香港特別行政區(qū) 999007)

抑郁癥是常見的情感性精神障礙。隨著現(xiàn)代社會工作生活壓力增加,抑郁癥已成為世界性的公共衛(wèi)生難題。2019年中國精神障礙的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,我國抑郁癥患者約9 500萬例,終生患病率達(dá)6.9%。抑郁癥患者在情緒上表現(xiàn)為持續(xù)性的低落、悲觀、冷漠,也存在睡眠障礙、認(rèn)知功能受損等,常伴發(fā)食欲減退、便秘等胃腸道癥狀[1-4]。龐大的患病群體及較高的致殘或自殺比例也表明抑郁癥需要引起更多的關(guān)注和重視。

棘腦通是由香港科技大學(xué)中藥研發(fā)中心研發(fā)、香港宏康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的中藥保健食品(產(chǎn)品編號:899959028045,批號:HKUST4)。其主要成分為沙棘提取物及花生殼提取物,功能主治為認(rèn)知力下降、記憶力減退、決定能力下降、語言表達(dá)衰退和社交障礙。研究表明,沙棘總黃酮類具有改善心肌細(xì)胞功能、降血糖和提高免疫等廣泛的藥理活性,可以模擬和增強神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能,誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化,可用于各種腦部疾病。槲皮素作為沙棘的主要成分,屬于黃酮醇類化合物,近年來有大量文獻(xiàn)報道其在抗抑郁方面有良好的活性,而且中藥沙棘因其多成分、多通路、多靶點及不良反應(yīng)小的優(yōu)勢成為抗抑郁藥物的研究熱點[5-8]。花生殼為豆科植物花生的果殼,其多作為農(nóng)作物廢物當(dāng)柴燒或制成肥料,近年來有文獻(xiàn)指出花生殼提取物具有抗氧化、降血脂和降血壓等活性,其主要化學(xué)成分為黃酮類化合物,有研究證實了花生殼乙醇提取物及其主要成分木犀草素對抑郁癥的治療效果,以及對炎癥和腸道菌群的調(diào)節(jié)作用,而腸道菌群的穩(wěn)態(tài)對抑郁癥的各項癥狀具有顯著影響[9-10]。以上研究表明,沙棘提取物和花生殼提取物單獨使用均可以增強神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能或治療抑郁癥。以兩種提取物結(jié)合為主要成分的棘腦通是否具有協(xié)同抗抑郁的作用?本研究將從細(xì)胞水平及整體動物水平系統(tǒng)評價棘腦通的抗抑郁藥效,為棘腦通的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。在整體水平上,通過建立小鼠慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(CUMS)抑郁模型,每日對小鼠進(jìn)行隨機輕度刺激,連續(xù)刺激60 d,模型建立后連續(xù)14 d給予不同劑量的棘腦通,最后進(jìn)行抑郁行為學(xué)檢測。

神經(jīng)營養(yǎng)因子是一類能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長、發(fā)育和分化的多肽或蛋白質(zhì),能調(diào)節(jié)神經(jīng)元存活,激活酶的活性,阻止成年神經(jīng)元損傷后的死亡,具有促進(jìn)神經(jīng)元損傷修復(fù)以及軸突再生,調(diào)節(jié)突觸可塑性和神經(jīng)遞質(zhì)等功能[4]。神經(jīng)營養(yǎng)因子已被用于預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病。目前已鑒定的神經(jīng)營養(yǎng)因子包括神經(jīng)生長因子(NGF)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)和神經(jīng)營養(yǎng)因子-4(NT-4)。其中BDNF廣泛存在于大腦中,是參與機體情緒和認(rèn)知功能的重要調(diào)節(jié)因子,能夠促進(jìn)腦內(nèi)神經(jīng)發(fā)生和突觸發(fā)育。本研究將重點圍繞棘腦通對BDNF釋放的調(diào)節(jié)作用,以闡明其抗抑郁作用機制。

1 材料

1.1 實驗動物

健康SPF級ICR小鼠,雄性,體重15～25 g,動物申請許可證號為SCXK(滬)2022-0005,購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司。動物飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF環(huán)境中,常規(guī)飼養(yǎng),溫度22～25 ℃,濕度40%～70%。

1.2 細(xì)胞株

大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株(PC12細(xì)胞);人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SH-SY5Y細(xì)胞);小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株(BV2細(xì)胞);小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞(RAW 264.7細(xì)胞),由均美國ATCC公司提供。

1.3 藥品與試劑

棘腦通由香港科技大學(xué)中藥研發(fā)中心提供;Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基,批號為2472941,美國Thermo Fisher公司),用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清(FBS,批號為2391593,美國Invitrogen公司),馬血清(批號為2310170,美國Invitrogen公司),全反式維A酸(U0126,美國Sigma公司);胰蛋白酶和磷酸鹽緩沖溶液(PBS,批號為5325271,美國Thermo Fisher公司);Thioflavin T(ThT,批號為T3516,美國Sigma公司);姜黃素(批號為C7727,美國Sigma公司);N-乙酰半胱氨酸(NAC,CS-6942,美國Sigma公司);叔丁基過氧化氫(tBHP,批號為416665,美國Sigma公司);黃芩素(批號為A2309297,上海阿拉丁公司);Erastin(批號為HY-15763,美國Sigma公司);地塞米松(DEX,批號為D4902-1G,美國Sigma公司);脂多糖(LPS,批號為048M439V,美國Sigma公司)。

2 方法

2.1 棘腦通對CUMS小鼠模型的抗抑郁作用評價

2.1.1 CUMS模型建立和給藥:動物安置7 d以適應(yīng)環(huán)境,進(jìn)行體重與糖水偏嗜率測試,剔除數(shù)值異常的小鼠。選取測試評分正常的小鼠50只,隨機分為5組,每組10只。分別為空白組、模型組、棘腦通低濃度組(對應(yīng)60 kg的人,600 mg/d)、棘腦通高濃度組(對應(yīng)60 kg的人,1 600 mg/d)和氟西汀組。每日隨機給予不同的2種刺激建立CUMS模型小鼠,刺激方式包括禁水24 h、禁食24 h、斜籠、電擊、束縛4 h、濕籠、晝夜顛倒。持續(xù)8周,進(jìn)行糖水偏嗜測試,判斷抑郁表型,然后對抑郁小鼠進(jìn)行灌胃給藥,持續(xù)14 d?？瞻捉M小鼠與CUMS模型小鼠分開飼養(yǎng),不給予任何刺激。動物的分組和給藥情況見表1。

表1 棘腦通小鼠的分組及給藥情況(n=10)

2.1.2 糖水偏嗜實驗:通過糖水偏嗜實驗考察棘腦通對CUMS模型小鼠快感缺失行為的影響。糖水偏嗜實驗是通過測量小鼠的蔗糖偏好和攝入量的降低來顯示小鼠對獎勵敏感性的變化,從而評估小鼠的抑郁程度。實驗分為糖水適應(yīng)階段和測試階段,糖水適應(yīng)階段的小鼠單籠飼養(yǎng),第1日給予小鼠200 mL 1%的蔗糖水溶液2瓶,適應(yīng)24 h后將1瓶糖水換成1瓶200 mL的純水,第3日禁食禁水,第4日正式測試階段分別給予小鼠1%蔗糖水溶液和純水各200 mL,記錄各水瓶重量。4 h后記錄小鼠糖水和純水的消耗量,計算小鼠的糖水偏嗜率,糖水偏嗜率=糖水消耗量/(糖水消耗量+純水消耗量)×100%。

2.1.3 懸尾實驗:懸尾實驗用于考察棘腦通對小鼠行為絕望的影響。在距離小鼠尾部約1 cm處粘貼膠布,懸掛于平臺上,使其頭部與實驗臺面約15 cm,懸掛6 min,小鼠以頭朝下的姿勢懸掛,剛開始懸掛時會掙扎和晃動,隨之會放棄掙扎,記錄小鼠在2～6 min內(nèi)的不動持續(xù)時間。

2.1.4 強迫游泳實驗:給藥結(jié)束后對CUMS小鼠進(jìn)行強迫游泳實驗,考察棘腦通對其行為絕望的影響。將小鼠單獨放置于裝有干凈水的圓柱玻璃缸內(nèi),保持缸內(nèi)水溫25 ℃,水深約20 cm,強迫小鼠游泳6 min,游泳時使小鼠后爪不能碰觸水缸,小鼠的不動狀態(tài)為小鼠放棄掙扎,身體被動漂浮在水面上,記錄小鼠在2～6 min內(nèi)的不動持續(xù)時間。

2.2 熒光素酶報告基因法檢測棘腦通協(xié)同NGF促進(jìn)神經(jīng)分化和神經(jīng)微絲的表達(dá)

為了探討棘腦通抗抑郁的可能機制,首先考察不同濃度的棘腦通與不同濃度NGF在單獨或協(xié)同作用下誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的作用,并利用含有神經(jīng)微絲編碼基因啟動子的熒光素酶報告基因載體pNF200-Luc考察神經(jīng)微絲表達(dá)。將PC12細(xì)胞接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基+6%胎牛血清+6%馬血清。24 h后,將含有神經(jīng)微絲編碼基因啟動子的熒光素酶報告基因的質(zhì)粒pNF200-Luc轉(zhuǎn)染至PC12細(xì)胞中。4 h后,換成低血清培養(yǎng)基,隨后加入不同濃度的棘腦通(0、10、30、100 μg/mL)輔以不同濃度的NGF處理。24 h后,經(jīng)處理得到含有熒光素酶的細(xì)胞裂解液。將50 μL細(xì)胞裂解液轉(zhuǎn)移至不透光的96孔酶標(biāo)板上,加入熒光素酶的底物,用化學(xué)發(fā)光儀檢測熒光素酶活性。

2.3 熒光素酶報告基因法檢測棘腦通協(xié)同BDNF、NT-3和NT-4促進(jìn)神經(jīng)微絲的表達(dá)

除了NGF外,本研究還考察了棘腦通對神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、NT-3和NT-4誘導(dǎo)神經(jīng)微絲表達(dá)的協(xié)同作用。將SH-SY5Y細(xì)胞接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基+15%胎牛血清。24 h后,更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)5 d。將含有神經(jīng)微絲編碼基因啟動子的熒光素酶報告基因的質(zhì)粒pNF200-Luc轉(zhuǎn)染至SH-SY5Y細(xì)胞中。8 h后,換成無血清的DMEM培養(yǎng)基,隨后加入100 μg/mL的棘腦通輔以不同種類不同濃度的神經(jīng)營養(yǎng)因子處理。24 h后,經(jīng)處理得到含有熒光素酶的細(xì)胞裂解液。將細(xì)胞裂解液50 μL轉(zhuǎn)移至不透光的96孔酶標(biāo)板上,加入熒光素酶的底物,用化學(xué)發(fā)光儀檢測熒光素酶活性。

2.4 棘腦通對抗β-淀粉樣蛋白(Aβ)引起神經(jīng)損傷的作用考察

Aβ是淀粉樣前體蛋白被β-和γ-分泌酶分解后形成的一系列蛋白肽,阿爾茨海默病的主要標(biāo)志之一為出現(xiàn)Aβ不溶性原纖維聚集體。本研究考察了濃度梯度的棘腦通對Aβ聚集的抑制效果,以及保護(hù)PC12細(xì)胞活性、降低Aβ引起的神經(jīng)毒性損傷的作用。(1)分別將濃度梯度的棘腦通或姜黃素(陽性對照)與100 μmol/L的Aβ混合,37 ℃孵育。7 d后分別與10 μmol/L的ThT混合,加入黑色不透光的96孔酶標(biāo)板,使用FlexStation 3 Multi-Mode Microplate Reader(Molecular Devices)檢測熒光讀數(shù)。(2)將PC12細(xì)胞接種至96孔板中培養(yǎng)(DMEM培養(yǎng)基+6%胎牛血清+6%馬血清),24 h后,將培養(yǎng)基更換為低血清培養(yǎng)基,并使用濃度梯度的棘腦通及姜黃素(陽性對照)對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)4 h,后加入100 μmol/L的Aβ處理細(xì)胞48 h。細(xì)胞活性采用四甲基偶氮唑鹽比色(MTT)法進(jìn)行檢測。

2.5 棘腦通對抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)神經(jīng)損傷的作用考察

(1)將PC12細(xì)胞接種至96孔板中培養(yǎng),24 h后,將培養(yǎng)基更換為低血清培養(yǎng)基,并使用濃度梯度的棘腦通或5 mmol/L的NAC(陽性對照)對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)4 h,后加入200 μmol/L的tBHP處理細(xì)胞24 h。細(xì)胞活性采用MTT比色法進(jìn)行檢測。(2)將SH-SY5Y細(xì)胞種于96孔板中培養(yǎng)(DMEM培養(yǎng)基+15%胎牛血清)。24 h后,將培養(yǎng)基換成低濃度培養(yǎng)基,并使用濃度梯度的棘腦通及10 μmol/L黃芩素(陽性對照)對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)4 h,后加入1 μmol/L的Erastin(鐵死亡的誘導(dǎo)劑)處理細(xì)胞24 h。細(xì)胞活性采用MTT比色法進(jìn)行檢測。

2.6 棘腦通的抗炎作用考察

(1)將BV2細(xì)胞種于24孔板中培養(yǎng)(DMEM培養(yǎng)基+10%熱滅活胎牛血清)。24 h后,使用濃度梯度的棘腦通或地塞米松(陽性對照)對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)4 h,后加入100 ng/mL的LPS處理細(xì)胞以誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。24 h后,移除細(xì)胞培養(yǎng)液,并用PBS沖洗。隨后用RNAzol行總細(xì)胞RNA提取,反轉(zhuǎn)錄后對cDNA進(jìn)行熒光定量聚合酶鏈反應(yīng),測定促炎因子白細(xì)胞介素(IL)1β的表達(dá)水平。(2)將RAW 264.7細(xì)胞種于24孔板中培養(yǎng)(DMEM培養(yǎng)基+10%熱滅活胎牛血清)。24 h后,將含有核因子κB(NF-κB)基因啟動子的熒光素酶報告基因的質(zhì)粒pNF-κB-Luc轉(zhuǎn)染至RAW 264.7細(xì)胞中。8 h后更換培養(yǎng)基,并使用濃度梯度的棘腦通及地塞米松為陽性對照對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)4 h,后加入100 ng/mL的LPS處理細(xì)胞。24 h后,經(jīng)處理后得到含有熒光素酶的細(xì)胞裂解液。將50 μL細(xì)胞裂解液轉(zhuǎn)移至不透光的96孔酶標(biāo)板上,加入熒光素酶的底物,用PromegaGlomax 96孔化學(xué)發(fā)光儀(美國Glomax公司)檢測熒光素酶活性。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.01為差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 棘腦通對CUMS小鼠糖水偏嗜率的影響

模型組小鼠糖水偏嗜率較空白組顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);棘腦通給藥組小鼠糖水偏嗜率較模型組顯著升高,提示棘腦通的攝入會刺激抑郁小鼠攝入更多的糖水,作用與陽性藥物氟西汀相當(dāng),見圖1。

與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05。

3.2 棘腦通對CUMS模型小鼠體重的影響

與空白組相比,模型組小鼠體重顯著降低(P<0.01),棘腦通給藥組、氟西汀組小鼠體重較模型組顯著升高(P<0.01),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;棘腦通給藥組、氟西汀組小鼠體重的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見圖2。

與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。

3.3 棘腦通對CUMS小鼠懸尾不動時間的影響

與空白組相比,模型組小鼠懸尾不動時間顯著延長(P<0.01);棘腦通低、高濃度組小鼠懸尾不動時間較模型組顯著縮短(P<0.01、P<0.05),上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,提示棘腦通可改善抑郁小鼠的絕望行為,見圖3。

與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

3.4 棘腦通對CUMS小鼠強迫游泳不動時間的影響

與空白組比較,模型組小鼠強迫游泳不動時間顯著延長(P<0.01);棘腦通給藥組小鼠強迫游泳不動時間較模型組顯著縮短(P<0.01),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,提示棘腦通可改善抑郁小鼠的行為絕望狀態(tài),見圖4。

與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。

3.5 棘腦通對NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化和神經(jīng)微絲表達(dá)的作用

不同濃度的棘腦通(0、10、30、100 μg/mL)在單獨使用時對PC12細(xì)胞分化或?qū)NF200-Luc表達(dá)熒光素酶的誘導(dǎo)作用不明顯。當(dāng)棘腦通與NGF(5、50 ng/mL)協(xié)同使用時,PC12細(xì)胞被誘導(dǎo)分化的程度及pNF200-Luc表達(dá)熒光素酶活性被誘導(dǎo)提高的程度均顯著高于相應(yīng)濃度NGF單獨使用時的效果,分化細(xì)胞比例及熒光素酶活性的提高百分比或倍數(shù)呈濃度依賴形式,提示棘腦通可協(xié)同NGF促進(jìn)神經(jīng)分化和誘導(dǎo)神經(jīng)微絲的表達(dá),見圖5—6。

圖5 不同濃度棘腦通單獨或協(xié)同不同濃度NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的作用

圖6 不同濃度棘腦通單獨或與不同濃度NGF誘導(dǎo)pNF200-Luc表達(dá)熒光素酶的作用

3.6 棘腦通協(xié)同BDNF、NT-3、NT-4促進(jìn)神經(jīng)微絲表達(dá)的作用

棘腦通(100 μg/mL)及低劑量(5 ng/mL)神經(jīng)營養(yǎng)因子在單獨使用時,均可分別誘導(dǎo)pNF200-Luc熒光素酶活性提高2～3倍。棘腦通與BDNF、NT-3和NT-4(5 ng/mL)協(xié)同使用時,熒光素酶的活性顯著提高,其中棘腦通與BDNF(5 ng/mL)聯(lián)用時可使熒光素酶活性提高8倍,提示棘腦通可協(xié)同神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF、NT-3、NT-4)誘導(dǎo)神經(jīng)微絲的表達(dá),見圖7。

圖7 棘腦通與不同神經(jīng)營養(yǎng)因子協(xié)同誘導(dǎo)pNF200-Luc表達(dá)熒光素酶的結(jié)果

3.7 棘腦通對Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)損傷的作用

棘腦通在100～1 000 μg/mL的濃度范圍內(nèi)可顯著降低Aβ的聚集;50 μg/mL的棘腦通可使得PC12細(xì)胞活性恢復(fù)至50%,與姜黃素的效果相同,提示棘腦通具有抑制Aβ聚集及保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞對抗Aβ造成的神經(jīng)毒性損傷的作用,見圖8。

A.棘腦通對Aβ聚集的作用;B.棘腦通對Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用。

3.8 棘腦通對抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)神經(jīng)損傷的作用

采用tBHP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的氧化損傷后,應(yīng)用棘腦通可提高PC12細(xì)胞活性,且濃度越高,效果越好,在濃度為100 μg/mL時幾乎可以使細(xì)胞活性恢復(fù)至對照組水平;采用Erastin誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞鐵死亡后,應(yīng)用棘腦通可提高SH-SY5Y細(xì)胞活性,且濃度越高,效果越好,在濃度為100 μg/mL時可達(dá)到與陽性對照黃芩素相近的保護(hù)效果,提示棘腦通具有保護(hù)細(xì)胞、抑制氧化損傷及鐵死亡損傷的潛在藥用功能,見圖9。

A.棘腦通對tBHP誘導(dǎo)損傷的細(xì)胞保護(hù)作用;B.棘腦通對Erastin誘導(dǎo)損傷的細(xì)胞保護(hù)作用。

A.抑制IL-1β的表達(dá)水平;B.抑制NF-κB轉(zhuǎn)錄活性水平。

3.9 棘腦通的抗炎作用

本研究在BV2、RAW 264.7細(xì)胞上考察了不同濃度的棘腦通抑制LPS引起的炎癥損傷的作用。提示棘腦通可抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥損傷。將LPS用于BV2、RAW 264.7細(xì)胞后,應(yīng)用棘腦通可降低IL-1β的mRNA水平、NF-κB轉(zhuǎn)錄活性,且具有濃度依賴性,見圖10。

4 討論

抑郁癥是一種精神情感障礙,主要表現(xiàn)為情緒低落、快感和興趣喪失、疲勞感和精力不濟等,常伴有軀體和認(rèn)知變化[11]。2008年,世界衛(wèi)生組織將重度抑郁癥列為全球疾病負(fù)擔(dān)的第三大原因,預(yù)計2030年重度抑郁癥將居全球疾病負(fù)擔(dān)的首位。目前,關(guān)于抑郁癥病理機制的研究較多,主要包括單胺假說、下丘腦-垂體-腎上腺軸變化、炎癥因子、神經(jīng)可塑性和神經(jīng)發(fā)生、大腦結(jié)構(gòu)和功能變化、基因、環(huán)境因素及表觀遺傳學(xué)等,但目前尚無任何單一模型或機制能夠解釋抑郁癥發(fā)病的所有方面[12]。中醫(yī)藥基于整體觀出發(fā),發(fā)揮中藥復(fù)方多成分、多靶點的優(yōu)勢,通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、抑制神經(jīng)炎癥與保護(hù)腸道屏障等環(huán)節(jié)發(fā)揮整體調(diào)節(jié)作用,實現(xiàn)其抗抑郁功能[13]。中醫(yī)認(rèn)為,抑郁癥屬于“郁證”范疇?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中提及“愁憂者,氣閉塞,而不行”,提出如若情緒憂郁,則易致身體氣機不暢,“思則心有所存,神有所歸,正氣留而不行,故氣結(jié)”,提出了引起機體氣機失調(diào)的重要原因是情志因素[14]。

沙棘(Hippophaerhamnoides L.)屬于胡頹子科沙棘屬的落葉性灌木或喬木,具有藥食同源性。沙棘營養(yǎng)豐富,含有維生素E、維生素C、維生素K、維生素A、維生素B、維生素P,氨基酸,脂肪酸(飽和、不飽和脂肪酸),有機酸,揮發(fā)油,類胡蘿卜素,甾類化合物,黃酮,多酚,植物蛋白和脂肪等多種營養(yǎng)成分。在沙棘的各種營養(yǎng)成分中,黃酮類化合物是主要功能性成分之一,具有抗氧化活性、抗炎活性、抑制腫瘤生長、改善心血管疾病和改善腎臟纖維化等多種生理活性[15]。

花生是豆科落花生屬一年生草本植物,是全球最重要的四大油料作物之一。我國花生種植面積逐年遞增,產(chǎn)量已超過1 500萬噸,位居世界第一。花生殼是花生果加工成食品和食用油脂后的廢棄物,除含有大量纖維素、木質(zhì)素外,還含有少量的蛋白質(zhì)、脂肪、多糖、黃酮類物質(zhì)以及礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分?；ㄉ鷼ぬ崛∥锏挠行С煞质且阅鞠菟貫橹鞯狞S酮類化合物?，F(xiàn)代研究表明,花生殼黃酮具有降脂減肥、抗自由基、抗氧化、抑菌、抗病毒和抗腫瘤等作用[16-17]?；ㄉ鷼ぶ欣w維素占比高達(dá)38.9%,因此,花生殼廉價易得,且可用于生產(chǎn)膳食纖維。膳食纖維應(yīng)用在食品中,可以提高人們的膳食水平。膳食纖維還具有降低患癌風(fēng)險、預(yù)防結(jié)腸疾病、降低血液膽固醇濃度、控制體重和降低心血管疾病發(fā)病率等生理活性[18]。因此,對于花生殼的開發(fā)利用不僅有很大的生物學(xué)價值,也有豐富的資源再利用價值。

沙棘和花生均屬藥食同源類中藥材,作為民族醫(yī)藥的應(yīng)用已有很多年的歷史,但現(xiàn)今對其的藥理學(xué)研究大多局限在抗糖、抗炎和抗氧化作用等,較少有關(guān)于二者合用治療神經(jīng)退行性疾病的報道。本研究利用CUMS抑郁小鼠模型,系統(tǒng)研究了以沙棘提取物和花生殼提取物為主要成分的棘腦通的抗抑郁作用。本研究結(jié)果證實,棘腦通可逆轉(zhuǎn)CUMS引起的體重減輕,并通過糖水偏嗜、強迫游泳和懸尾等行為學(xué)測試證實棘腦通可顯著改善抑郁小鼠的絕望情緒和快感缺乏,其療效與臨床使用最廣泛的選擇性血清素再攝取抑制劑氟西汀相當(dāng)。為了嘗試闡明其抗抑郁作用機制,本研究通過細(xì)胞模型,證明了棘腦通能夠模擬和增強神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能,包括促進(jìn)細(xì)胞突起生長、激活神經(jīng)微絲編碼基因表達(dá),可抗氧化、抗炎及抗Aβ的作用,并可協(xié)同神經(jīng)營養(yǎng)因子誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化。以上作用闡明了棘腦通緩解抑郁癥狀的機制,也提示棘腦通可能對改善多種神經(jīng)退行性疾病等認(rèn)知障礙有療效。

綜上所述,本研究從動物及細(xì)胞水平上闡釋了棘腦通抗抑郁的藥效及作用機制,為其臨床用于改善抑郁癥疾病提供了支撐,也為抗抑郁產(chǎn)品的開發(fā)提供了借鑒。同時,本研究為沙棘及花生殼的藥理研究提供了新方向,希望能開拓沙棘及花生殼的藥用資源應(yīng)用。