外周血miR-30a對膿毒血癥并發(fā)ARDS患者預后的預測價值

歐陽銀, 唐偉偉

安慶市立醫(yī)院急診科, 安徽安慶246003

膿毒血癥是臨床較為常見的危重癥狀,流行病學調查顯示,膿毒血癥的發(fā)病率為0.3%,隨著人口老齡化的不斷升高,膿毒血癥的發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[1-2]。如果臨床對膿毒血癥不及時進行有效科學的治療,最終會導致多器官受累[3]。肺是最早也是最常見的受累器官,隨著肺內炎癥細胞的聚集以及炎癥介質的釋放,免疫失調,肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞損傷,彌漫性肺間質和肺泡水腫,最后引發(fā)急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),ARDS是臨床較為常見的膿毒血癥的并發(fā)癥[4]。隨著患者ARDS的發(fā)生,病情逐步加重,病死率也呈現(xiàn)顯著的上升趨勢。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)作為一種氧化應激信號轉導的重要物質,細胞外調節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)屬于MAPK家族,ERK信號通路是一種重要的信號轉導通路[5]。miR-30a能夠促進氣道上皮細胞的新生血管增生,進一步造成氣道的高反應性,引發(fā)機體產(chǎn)生ARDS[6]。而在ARDS的疾病進展過程中,ERK蛋白、磷酸化蛋白的異常表達最終會造成組織細胞的凋亡,而在此過程中會導致外周血miR-30a水平升高,因此miR-30a水平的監(jiān)測對于患者的預后評價具有重要的意義。本研究主要分析外周血miR-30a對膿毒血癥并發(fā)ARDS患者預后的預測價值,以期指導臨床診治。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2022年7月在本院就治的100例膿毒血癥合并ARDS患者為研究對象,其中男66例,女34例,平均年齡(70.95±11.40)歲,體質指數(shù)(24.83±1.02)kg/m2,急性生理與慢性健康評分(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEII)為(21.49±5.65)分,序貫器官衰竭估計評分(sequential organ failure assessment,SOFA)為(8.91±2.79)分。根據(jù)患者28天的生存情況分為死亡組35例,生存組65例,兩組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05;表1)。本研究經(jīng)本醫(yī)院倫理委員會論證通過,所有患者均簽署知情同意書。納入標準:①符合歐洲危重醫(yī)學會頒布的膿毒血癥診斷標準[7];②符合呼吸窘迫綜合征診斷標準。排除標準:①合并慢性心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙;②伴有急性冠狀動脈綜合征;③伴有惡性腫瘤疾病;④近3個月接受免疫抑制劑治療。

表1 兩組臨床資料比較

1.2 miR-30a檢測

所有患者入院后,均靜脈采血4 mL,按照TRIzol試劑(北京百奧萊博科技有限公司)說明書提取血清總RNA,采用qRT-PCR方法進行擴增,擴増方法:95 ℃條件下預變性5 min,94 ℃變性30 s,50～60 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 min,35個循環(huán)。miR-30a的檢測采取2-ΔΔCT方法進行計算,ΔCT=CT目的基因-CT內參。

1.3 ERK蛋白及磷酸化蛋白水平測定

Western blotting實驗嚴格按照試劑盒操作,采用Image-lab軟件進行條帶分析,以β-actin為參考蛋白,計算兩組的MAPK通路中的ERK蛋白及磷酸化蛋白水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料采用t檢驗,計數(shù)資料采用χ2檢驗。采用ROC曲線分析miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白對預后的預測價值。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比較

死亡組的miR-30a水平、磷酸化蛋白高于生存組,ERK蛋白低于生存組(P<0.05;表2)。

表2 兩組患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比較

2.2 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白對死亡的聯(lián)合檢測效能比較

通過聯(lián)合檢測效能進行分析,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯(lián)合檢測對膿毒血癥并發(fā)ARDS的診斷特異度較高(表3)。

表3 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯(lián)合檢測效能比較 %

2.3 ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯(lián)合檢測對膿毒血癥并發(fā)ARDS患者預后的預測效能高于單獨檢測(表4和圖1)。

圖1 ROC曲線分析

表4 ROC曲線分析

3 討 論

膿毒血癥的病理基礎為全身性的炎性反應,隨著疾病的進展,全身的炎癥細胞被過度激活后,機體的炎性反應呈現(xiàn)級聯(lián)反應,機體對于炎性反應的控制水平顯著下降,嚴重影響患者的生命安全[8-9]。在疾病的早期,及時對ARDS產(chǎn)生的風險進行評估,及時通過有效措施降低患者發(fā)生ARDS的風險,對于臨床具有積極的意義。但是在臨床指標中,由于膿毒血癥患者的炎性反應以及氧化應激反應對常規(guī)的生化指標的干擾,采取常規(guī)生化指標對患者的ARDS進行預測存在一定的局限性[10]。微小核苷酸是近年來的研究疾病進展的熱點,其相對穩(wěn)定性對于臨床治療具有相對的指導意義[11]。在膿毒血癥患者的疾病進展中,其引發(fā)的炎癥瀑布反應均會造成呼吸道黏膜的損傷,其發(fā)生ARDS的風險顯著升高[12]。

ERK蛋白作為MAPK家族,參與調控氣道上皮細胞相關炎癥因子的表達[13]。而在此階段,隨著炎性反應的不斷變化,最終引發(fā)機體的正常呼吸道黏膜細胞的損傷以及凋亡,在此過程中,miR-30a在血清中的釋放水平顯著升高。而在本研究中,合并ARDS患者的miR-30a水平呈現(xiàn)上升趨勢。miR-30a主要存在呼吸道黏膜細胞中,隨著膿毒血癥疾病的不斷進展,其局部產(chǎn)生的炎癥因子對于黏膜細胞的刺激性作用,其發(fā)生凋亡的風險顯著升高,在呼吸道細胞中的miR-30a不斷在血液中釋放,造成miR-30a的顯著升高[14]。通過對miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白的聯(lián)合檢測的效能分析,對ARDS的預測效能升高,可作為臨床診斷的重要依據(jù)。提示miR-30a可通過對ERK蛋白、磷酸化蛋白的顯著調控作用,進而影響患者的疾病進展。miR-30a還可通過對細胞之間的脂質代謝的調節(jié),影響細胞與細胞之間的黏附作用,也是患者ARDS進展的重要因素。miR-30a是MAPK/ERK信號途徑的重要節(jié)點,通過對患者的miR-30a水平的檢測,可以有效對患者的預后進行預測。

綜上所述,外周血miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白表達異?？勺鳛槟摱狙Y并發(fā)ARDS患者預后判定的重要依據(jù)。