半乳糖凝集素-9（Gal-9）介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用在肝臟疾病中的研究進(jìn)展

凌 珺，朱 冰，陳威巍，王卓然，余麗梅，游紹莉

1 遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563003

2 中國人民解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心肝病醫(yī)學(xué)部，北京 100039

1 半乳糖凝集素-9（galectin-9，Gal-9）基因與分子結(jié)構(gòu)

Gal-9 是一種分子量為36 kDa 的β-D-半乳糖苷哺乳動物凝集素，1997年由Wada和Türeci等［1］從小鼠胚腎和人霍奇金淋巴瘤組織中分離鑒定。Gal-9基因定于17號染色體的短臂上17q11.2（HGNC：6570）。所有半乳糖凝集素（Gal）均含有一個(gè)由130個(gè)氨基酸殘基組成的碳水化合物識別結(jié)構(gòu)域（carbohydrate recognition domain，CRD），其家族共有15種蛋白質(zhì)，根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)的不同可分為3 型：（1）原型，只有1 個(gè)CRD（包括Gal-1、Gal-2、Gal-5、Gal-7、Gal-10、Gal-11、Gal-13、Gal-14、Gal-15）；（2）嵌合體型，由CRD 上富含脯氨酸和甘氨酸的短片段交聯(lián)結(jié)合形成（包括Gal-3）；（3）串聯(lián)重復(fù)型，由2個(gè)CRD 串聯(lián)融合形成（包括Gal-4、Gal-6、Gal-8、Gal-9、Gal-12）［2］。有研究［3］表明，Gal-9由一個(gè)肽鏈接2個(gè)CRD，分別是N端的N-CRD和C 端的C-CRD，二者氨基酸序列有較大差異且具有配體特異性，因此在介導(dǎo)Gal-9功能方面發(fā)揮不同的作用，其中C-CRD 是決定T 淋巴細(xì)胞受體識別和死亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要因素。迄今為止，Gal-9已被鑒定為T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白和黏蛋白結(jié)構(gòu)域分子-3（T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3，Tim-3）、CD 44和Dectin 1 等多種受體的配體［4］，在mRNA 的剪接、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移及細(xì)胞分化等多種生物學(xué)功能中發(fā)揮重要的作用，是一種多功能的免疫調(diào)節(jié)蛋白［5］。

2 Gal-9的表達(dá)分布

Gal-9 廣泛分布于肝臟、胸腺、脾臟等器官。在免疫系統(tǒng)中，Gal-9 主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞、CD4+T 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg）。Tim-3 是Gal-9 的配體，Tim 基因家族于2001年由Monney等［6］首次發(fā)現(xiàn)并鑒定，家族主要包括8個(gè)成員（Tim-1～8），其中Tim-1、Tim-3、Tim-4在人體中發(fā)現(xiàn)。Tim-3 是Gal-9 的配體，其選擇性表達(dá)于Th1、Th17細(xì)胞，也可表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞［7-8］。Gal-9 的2 個(gè)結(jié)構(gòu)域（C-CRD、N-CRD）均可與Tim-3 結(jié)合，其中C-CRD 與Tim-3 的結(jié)合力更強(qiáng)，主要在獲得性免疫中發(fā)揮功能，誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞凋亡，N-CRD 則傾向于活化樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，調(diào)節(jié)天然免疫反應(yīng)。

3 Gal-9的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

Gal-9主要由Kupffer細(xì)胞（KC）分泌，研究［9-11］提示肝損傷環(huán)境下KC 細(xì)胞受刺激后可釋放Gal-9。Gal-9 與CD4+T、CD8+T 淋巴細(xì)胞表面Tim-3 結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)功能［11］。Caspase 家族在細(xì)胞凋亡的進(jìn)程中起關(guān)鍵作用，caspase-1 在細(xì)胞中過表達(dá)可促使細(xì)胞早期凋亡［12］。caspase-1 的激活需要Ca2+依賴性蛋白酶（calpain），研究［13］證實(shí)Gal-9 可誘導(dǎo)Ca2+內(nèi)流使calpain 激活，從而激活caspase-1，最終通過Ca2+-calpain-caspase-1 途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。

Wang 等［11］通過肺炎克雷伯菌小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射Gal-9 可抑制CD4+T 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量，降低Th1和Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如：IL-17、IFN-γ，且分離小鼠免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)并加入Gal-9刺激后，可減少Th17細(xì)胞的數(shù)量并抑制IL-17的產(chǎn)生，提示Gal-9在Th17免疫反應(yīng)中起重要作用。

CD4+CD25+Treg在免疫應(yīng)答負(fù)調(diào)控中發(fā)揮重要作用，可通過細(xì)胞間直接接觸或者分泌抗炎細(xì)胞因子發(fā)揮免疫抑制作用［14］。研究［15-16］發(fā)現(xiàn)Gal-9可在CD4+CD25+Treg上表達(dá)，誘導(dǎo)Treg 增殖，同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)中使用熒光染料CFSE 標(biāo)記的CD4+CD25-T 淋巴細(xì)胞和CD4+CD25+Treg 共培養(yǎng)，并加入可溶性CD3 和CD28 抗體刺激二者增殖，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+Treg可抑制CD4+CD25-T淋巴細(xì)胞的增殖，而加入Tim3 抗體阻斷Gal-9/Tim3 通路后可明顯降低Treg 的抑制效應(yīng)，導(dǎo)致CD4+T 淋巴細(xì)胞數(shù)量增加及分泌的相關(guān)細(xì)胞因子水平增高，提示CD4+CD25+Treg 可能通過Gal-9/Tim3通路抑制細(xì)胞增殖。在小鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型［17］中，敲除Gal-9蛋白的小鼠更容易患關(guān)節(jié)炎，且體內(nèi)Treg 數(shù)量降低、CD4+Tim3+T 淋巴細(xì)胞增多，隨后在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)Gal-9 可使外周血CD4+Tim3+T 淋巴細(xì)胞減少，誘導(dǎo)幼稚T 淋巴細(xì)胞向Treg 分化，間接抑制其向Th17 分化，并以劑量依賴性方式抑制IL-17 的分泌。在ConA誘導(dǎo)的肝炎小鼠模型［18］中，將Tim-3阻斷后病情加重，而經(jīng)過Gal-9 治療后病情得到改善。該模型中，Gal-9還可抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的產(chǎn)生，通過增加Treg與效應(yīng)T淋巴細(xì)胞因子的數(shù)量，誘導(dǎo)ConA激活的CD4+T 淋巴選擇性凋亡，進(jìn)一步阻止TNF-α、IL-6、IFN-γ的釋放，抑制對肝細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 不僅是Treg 的標(biāo)志物，還對Treg 具有調(diào)節(jié)作用［19］，Gal-9 可促進(jìn)肝Treg Foxp3 的表達(dá)，促進(jìn)Treg 增加來抑制IFN-γ的產(chǎn)生，抑制炎癥發(fā)展［20］。

自然殺傷T 淋巴細(xì)胞（NKT）可分泌IFN-γ 并作用于KC，KC 受到IFN-γ 刺激后釋放IL-15 和Gal-9，IL-15 反過來可使NKT 細(xì)胞增殖［21］。Gal-9 可與NKT 細(xì)胞上Tim-3結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)一步抑制炎癥反應(yīng)。Tang等［22］在非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中，檢測NKT細(xì)胞上Tim-3的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞在肝臟中表達(dá)Tim-3，且腹腔注射Gal-9 可發(fā)現(xiàn)肝臟NKT 細(xì)胞凋亡率顯著增高，隨后分離出肝臟NKT 細(xì)胞和重組Gal-9 一起培養(yǎng)，通過膜聯(lián)蛋白V/7-氨基放線菌素D（7AAD）染色測定NKT 細(xì)胞凋亡情況，發(fā)現(xiàn)Gal-9以劑量、時(shí)間依賴性方式誘導(dǎo)NKT 細(xì)胞凋亡，且可被Gal-9的競爭性抑制劑或Tim-3抗體阻斷。以上研究顯示Gal-9 在機(jī)體中可通過多種途徑發(fā)揮重要生物學(xué)功能（圖1）。

圖1 Gal-9免疫調(diào)節(jié)通路示意圖Figure 1 Schematic diagram of Gal-9 immunomodulatory pathway

4 Gal-9在不同肝臟疾病中的作用

目前Gal-9 在白血病、宮頸癌、艾滋病以及自身免疫性疾病中有較多研究［23-25］。利用Gal-9 可誘導(dǎo)幼稚T 淋巴細(xì)胞向Treg 分化，減少自身反應(yīng)性T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量，使Treg抑制Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞分泌促炎因子從而在自身免疫性疾病中發(fā)揮治療作用。在痛風(fēng)的小鼠模型［26］中使用Gal-9 可降低關(guān)節(jié)中各種促炎因子（IL-17、IL-12、IFN-γ）濃度從而改善疾病。在白血病相關(guān)研究中，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)分別檢測白血病患者和正常人骨髓中的Gal-9 表達(dá)水平，白血病患者Gal-9 表達(dá)水平明顯高于正常人，經(jīng)過藥物治療后Gal-9 表達(dá)水平顯著下降，且白血病患者Gal-9 表達(dá)水平與疾病危險(xiǎn)程度和化療治愈效果有相關(guān)性［23］。楊艷等［24］用流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸癌患者外周單核細(xì)胞中Gal-9 的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)宮頸癌Ⅲ～Ⅳ期患者的外周血Gal-9 表達(dá)水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期的表達(dá)水平，且低分化的宮頸癌患者的Gal-9水平明顯高于高分化、中分化的患者，推測Gal-9 的表達(dá)水平與宮頸癌的臨床分期、病理分級相關(guān)。目前，肝病中關(guān)于Gal-9 的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的研究主要聚焦于肝缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）、藥物性肝損傷（drug induced liver injury，DILI）、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）以及肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）等疾病。

4.1 IRI 在IRI 小鼠模型［27］中發(fā)現(xiàn)，損傷的肝細(xì)胞分泌Gal-9 并與Th1 細(xì)胞上的Tim-3 結(jié)合，促使Th1 分泌的IFN-γ水平降低，從而減輕后續(xù)炎癥反應(yīng)。在IRI小鼠模型中，加入Tim-3 抗體的小鼠與對照組小鼠相比，加入Tim-3 抗體加劇了小鼠肝臟局部中性粒細(xì)胞浸潤，促使T 淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在肝臟局部聚集，加速肝細(xì)胞凋亡，小鼠肝損傷更嚴(yán)重。Toll樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）是IRI 的關(guān)鍵因素［10］。研究［28-29］發(fā)現(xiàn)在IRI 動物模型中TLR4缺陷型小鼠比野生型小鼠的肝損傷更輕，并證實(shí)TLR4 受體參與了IRI 的起始階段。研究［27-29］顯示Gal-9與Tim-3結(jié)合后可使TLR4受體表達(dá)降低，減輕中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞的聚集，從而減緩肝臟炎癥損傷。在CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性化學(xué)性肝損傷模型中，Gal-9 的抑制作用［30］與IRI 小鼠模型相似，在體外實(shí)驗(yàn)中，將脾T淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共同培養(yǎng)，阻斷Tim-3后，T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生更多IFN-γ、IL-6，加劇炎癥反應(yīng)，而不阻斷Tim-3 且加入Gal-9 后炎癥因子水平降低，推測Gal-9/Tim-3 通路可減輕炎癥反應(yīng)。阻斷Tim-3 通路后小鼠TLR4 和NF-κB 蛋白與對照組小鼠相比顯著升高，然而在敲除TLR4 受體的小鼠模型中阻斷Tim-3 通路則不影響肝損傷，進(jìn)一步提示Tim-3 可以通過抑制NF-κB 通路來負(fù)調(diào)控TLR4并調(diào)節(jié)TNF-α、IFN-γ、IL-1β的水平，進(jìn)一步證實(shí)Tim-3/Gal-9可通過調(diào)控TLR4信號通路來維持肝內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)。另有研究［31］利用Tim-3 轉(zhuǎn)基因（Tim-3 Tg）的肝缺血小鼠模型中Gal-9 的表達(dá)進(jìn)行動力學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)肝組織Gal-9 mRNA 的表達(dá)在再灌注過程中升高，之后利用免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞在缺血再灌注后分泌Gal-9 至肝竇中。將重組Gal-9 分別注射到對照組和Tim-3 Tg 組后，兩組的ALT 和TNF-α、IL-1β 等促炎因子水平均降低，且Tim-3 Tg 組降低更明顯，提示Gal-9 可增強(qiáng)肝臟對缺血再灌注損傷的抵抗力，發(fā)揮一定的保護(hù)作用。

4.2 DILI DILI 是肝損傷的重要病因，DILI 的嚴(yán)重程度可從輕度血清轉(zhuǎn)氨酶升高發(fā)展到嚴(yán)重的肝損傷，甚至可進(jìn)展為肝衰竭［32］。Rosen團(tuán)隊(duì)［33］分析了149例急性肝衰竭患者的血漿樣本，其中110 例為對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝損傷，39 例為非對乙酰氨基酚藥物誘導(dǎo)的肝損傷，同時(shí)選擇了年齡相似無肝臟疾病的健康個(gè)體作為對照。采用多克隆抗體和比色法測定血漿Gal-9的水平，發(fā)現(xiàn)肝衰竭患者血漿Gal-9水平明顯高于健康對照組，對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝損傷和非對乙酰氨基酚藥物誘導(dǎo)的肝損傷二者之間無顯著差異。且Gal-9水平高于690 pg/mL的患者在21 天內(nèi)的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Gal-9 水平低于690 pg/mL 患者的2.9倍，提示血漿Gal-9水平與急性肝衰竭死亡風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)。該團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步分析了血漿Gal-9 水平與全身炎癥反應(yīng)綜合征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)肝衰竭患者的Gal-9水平高于386 pg/mL與其發(fā)生全身炎癥反應(yīng)綜合征明顯相關(guān)。

4.3 病毒性肝炎 HBV 感染具有持續(xù)性和慢性化的特點(diǎn)，這些特點(diǎn)是由于效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞和記憶T 淋巴細(xì)胞功能缺陷所致。從急性感染到慢性感染的特征是由于效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞功能減弱和Treg 增多［34-35］。研究［36］證明，KC 細(xì)胞中的Gal-9 與病毒特異性CD4+T、CD8+T 淋巴細(xì)胞上的Tim-3 結(jié)合可誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞凋亡。與健康對照組相比，乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中Tim-3 表達(dá)顯著增加，且隨著炎癥加重，CD4+T、CD8+T 淋巴細(xì)胞上Tim-3 的表達(dá)逐漸增高，乙型肝炎患者的血漿Gal-9循環(huán)水平也顯著高于健康對照組，且與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。對兩組細(xì)胞進(jìn)行7AAD染色，發(fā)現(xiàn)乙型肝炎患者Tim-3+CD4+T、Tim-3+CD8+T 淋巴細(xì)胞凋亡程度顯著高于健康對照組。此外，在乙型肝炎患者細(xì)胞培養(yǎng)基中加入Tim-3的Fc段融合蛋白，可較大程度上減緩CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡，使其產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α。Mengshol等［16］發(fā)現(xiàn)丙型肝炎患者血漿Gal-9 水平顯著升高，之后進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析健康志愿者和丙型肝炎患者的肝組織標(biāo)本中Gal-9蛋白的表達(dá)，使用Gal-9抗體標(biāo)記Gal-9蛋白并使用CD68 標(biāo)記KC 細(xì)胞。與健康志愿者相比，丙型肝炎患者肝組織尤其門靜脈周圍區(qū)域CD68 及Gal-9 共定位且表達(dá)呈陽性，而健康志愿者肝組織中93%的肝門靜脈區(qū)域沒有Gal-9染色。Tim-3也可在丙型肝炎特異性T淋巴細(xì)胞表面高表達(dá)［37］，McMahan 團(tuán)隊(duì)［38］發(fā)現(xiàn)阻斷Tim-3能夠阻止T 淋巴細(xì)胞耗竭并恢復(fù)CD4+T 淋巴細(xì)胞和CD8+T 淋巴細(xì)胞的功能，從而在病毒感染期間引起肝損傷［37，39］。用重組Gal-9刺激丙型肝炎患者和正常人PBMC可以促進(jìn)Treg增多從而減緩疾病慢性化進(jìn)程［16］。Gal-9/Tim-3 途徑在病毒性肝炎感染中可導(dǎo)致病毒特異性T 淋巴細(xì)胞功能缺陷且數(shù)量減少，在慢性乙型肝炎患者體外培養(yǎng)PBMC 中，無論是加入Gal-9 抗體或是Tim-3 抗體阻斷Gal-9/Tim-3 通路，CD8+T 淋巴細(xì)胞數(shù)量以及相關(guān)細(xì)胞因子水平都較對照組升高，提示阻斷該通路可部分恢復(fù)CD8+T淋巴細(xì)胞功能，增強(qiáng)抗病毒治療效果［40］。

4.4 AIH AIH 是一種具有高丙種球蛋白血癥、肝組織學(xué)上大量漿細(xì)胞浸潤為主的肝臟疾病。AIH患者Tim-3+CD4+T淋巴細(xì)胞在效應(yīng)CD4+T淋巴細(xì)胞中的占比低于正常人，Gal-9+Treg在Treg中的比例更低，Gal-9誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡或使Treg 增殖作用減弱，且AIH 患者的Gal-9+Treg 亞群中含有更多的IFN-γ+和IL-17+細(xì)胞，而轉(zhuǎn)化生長因子-β+（TGF-β+）和IL-10+細(xì)胞較少，從而炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，免疫調(diào)節(jié)受損。此外，Gal-9+Treg 與自身免疫球蛋白G水平和自身抗體滴度（疾病的血清學(xué)標(biāo)志物）呈負(fù)相關(guān)，提示Gal-9+Treg可調(diào)控AIH 的發(fā)展［41］。Gal-9促進(jìn)Treg 增殖后對CD4+T 淋巴細(xì)胞的抑制作用提示Gal-9 在AIH 治療中具有潛在價(jià)值，目前常規(guī)治療對一部分AIH患者無效，將Treg細(xì)胞作為靶點(diǎn)，可能對AIH患者的免疫治療有一定意義［41］。

4.5 HCC HCC 是全球常見的癌癥之一，最常見的病因是慢性病毒性肝炎［42］。Gal-9 在乙型肝炎相關(guān)性肝癌中主要表達(dá)于CD68+CD163+KC細(xì)胞上，免疫熒光染色顯示Gal-9+KC 與Tim-3+T 淋巴細(xì)胞共定位，CD4+T 淋巴細(xì)胞表面Tim-3 呈高水平表達(dá)，且與HCC 預(yù)后密切相關(guān)，推測Gal-9/Tim-3 參與了HCC 的免疫逃逸［43］，Gal-9 在抗腫瘤免疫中也發(fā)揮重要作用。NK 細(xì)胞是抗腫瘤免疫的靶標(biāo)，NK 細(xì)胞表面的Gal-9 可導(dǎo)致NK 細(xì)胞IFN-γ 分泌降低，從而降低NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用［44］。另外，有研究［45］認(rèn)為Gal-9以劑量和時(shí)間依賴性方式在體外抑制HCC細(xì)胞系HLE和Li-7的生長，在體內(nèi)誘導(dǎo)Li-7細(xì)胞的凋亡，并在異種移植無胸腺小鼠模型中抑制了HCC細(xì)胞的生長。上述研究提示Gal-9在HCC中表現(xiàn)出雙面功能，既參與HCC 的免疫逃逸，又促進(jìn)HCC 細(xì)胞凋亡。至于何種情況下，哪一方面機(jī)制占主導(dǎo)作用還需進(jìn)一步研究。

5 小結(jié)與展望

Gal-9 在肝病免疫調(diào)節(jié)中具有多種生物學(xué)功能，這些功能與肝內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)相關(guān)。根據(jù)不同肝臟疾病，Gal-9可能通過不同通路發(fā)揮不同的功能。此外，檢測Gal-9水平變化可作為疾病嚴(yán)重程度分型及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。但是，Gal-9 在體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)的具體機(jī)制尚未完全闡明，例如在DILI 中Gal-9 水平的升高是炎癥反應(yīng)的結(jié)局還是調(diào)控炎癥的因子；在HCC 中Gal-9 既發(fā)揮免疫抑制又發(fā)揮免疫促進(jìn)的作用等，還需進(jìn)一步開展研究驗(yàn)證。通過深入研究Gal-9 在各類肝病中的作用機(jī)制，有助于Gal-9 作為治療靶點(diǎn)研發(fā)新型治療藥物，進(jìn)而改善病毒感染、自身免疫性疾病和癌癥的臨床結(jié)局。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：凌珺負(fù)責(zé)查找文獻(xiàn)、撰寫論文；朱冰負(fù)責(zé)擬定寫作思路；陳威巍、王卓然負(fù)責(zé)修改論文；余麗梅、游紹莉負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章，修改論文并最后定稿。余麗梅與游紹莉?qū)Ρ疚呢暙I(xiàn)等同，同為第一作者。