幾種外用抗生素對(duì)痤瘡丙酸桿菌抑菌作用的比較研究

◆重慶市育才中學(xué)校 劉桀睿

痤瘡丙酸桿菌（C.acnes）作為誘發(fā)痤瘡的重要因素之一，除了其本身會(huì)引發(fā)炎癥外，也可能將葡萄球菌等其他細(xì)菌帶入皮膚，造成更復(fù)雜的感染。進(jìn)入青春期，很多同學(xué)因?yàn)轲畀彾鄲溃⒉磺宄x擇何種藥物進(jìn)行治療。

外用抗生素是治療痤瘡的藥物之一，哪種外用抗生素的抑菌效果最優(yōu)？我對(duì)此進(jìn)行了探究，以期為同學(xué)們治療輕中度痤瘡提供參考。

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

（一）菌種選取

北京保藏生物科技有限公司保存的痤瘡丙酸桿菌ATCC11827。

（二）培養(yǎng)基選取

采用FT 液體培養(yǎng)基和CBA 固體培養(yǎng)基進(jìn)行C.acnes 的活化及擴(kuò)培，取代強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基。

（三）藥物選取

選擇夫西地酸鈉、克林霉素、鹽酸金霉素進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。

圖1 作者與指導(dǎo)老師汪海（左）討論

二、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

我選擇通過(guò)高溫滅菌這一方式進(jìn)行氧氣的去除和儀器的滅菌。在溶液配置方面，由于儀器不夠精確，采用“做減法”的方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。創(chuàng)造性地使用厭氧袋加恒溫?fù)u床的方式進(jìn)行培養(yǎng)，并關(guān)閉恒溫?fù)u床的振蕩功能。

（一）菌種活化及傳代培養(yǎng)

1.將凍干粉離心至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球?qū)龈晒懿粮蓛?，并將凍干管的尖端放在火焰上加熱?/p>

2.迅速滴幾滴蒸餾水至已加熱的凍干管的尖端處，尖端破裂后用鑷子輕輕敲掉凍干管尖端。

3.逐漸敲開(kāi)凍干管，直至適當(dāng)位置注入2 mL 無(wú)菌水溶解（剩余菌液冷凍備用)。

4.用移液槍吸取0.5 mL 菌液，快速地注射到3 個(gè)裝7 mL FT 培養(yǎng)基的試管底層，塞上試管塞，并用牛皮紙包裹，在37 ℃環(huán)境下密封培養(yǎng)48 h。

5.用移液槍吸取剩余的0.5 mL 菌液，在平板上涂布均勻，放入?yún)捬醮?、產(chǎn)氣包和指示劑，在37 ℃環(huán)境下密封培養(yǎng)48 h 備用。

6.48h 后，用移液槍吸取試管底層菌液1 mL（取長(zhǎng)勢(shì)最好的），注射到2 個(gè)裝25 mL FT 培養(yǎng)基的錐形瓶底層、2 個(gè)7 mL FT 培養(yǎng)基的試管，用橡膠塞塞緊，在37 ℃環(huán)境下密封傳代培養(yǎng)48 h。

（二）抑菌作用比較

1.配置藥物溶液

用電子天平分別稱量夫西地酸鈉、克林霉素、鹽酸金霉素，用滅菌水配置質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20 mg/L、200 mg/L 的藥物溶液備用，如表1。

表1 藥物溶液及其對(duì)應(yīng)的涂布平板編號(hào)

2.抑菌實(shí)驗(yàn)比較

（1）傳代培養(yǎng)完成后，用移液槍吸取1 mL 長(zhǎng)勢(shì)較好的菌液加入平板中，用涂布器均勻涂布到1 號(hào)至13 號(hào)平板中。14 號(hào)平板不加菌液，作為陰性空白對(duì)照。

（2）用移液槍吸取配置好的藥物100 uL 后，在已涂布好的培養(yǎng)基上打孔，之后用無(wú)菌針頭將槍頭從培養(yǎng)基中挑出。各孔中心相距25 mm 以上，與培養(yǎng)基邊緣相距15 mm 以上，在每個(gè)平板上打3 個(gè)孔。每種藥物濃度做2 次平行重復(fù)。

（3）接種完成后將所有平板分裝至厭氧培養(yǎng)袋中，迅速加入打開(kāi)包裝的產(chǎn)氣袋和開(kāi)口的氧氣指示劑密封，放入37 ℃環(huán)境下正置培養(yǎng)。

（4）48 h 后取出平板，測(cè)定各個(gè)平板中的抑菌圈的直徑。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（1）1—12 號(hào)涂布平板的抑菌圈直徑見(jiàn)表2、表3、表4（其中“＜7”表示無(wú)明顯抑菌作用，“無(wú)”表示沒(méi)有抑菌圈）。

表2 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的鹽酸金霉素的抑菌圈直徑

表3 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的夫西地酸鈉的抑菌圈直徑

表4 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的克林霉素的抑菌圈直徑

（2）13 號(hào)平板為陽(yáng)性空白對(duì)照，14 號(hào)為陰性空白對(duì)照，如圖2。1—12 號(hào)平板的抑菌圈如圖3。

圖2 13 號(hào)陽(yáng)性空白對(duì)照與14 號(hào)陰性空白對(duì)照

圖3 1—12 號(hào)平板的抑菌圈

三、實(shí)驗(yàn)分析

（一）結(jié)果分析

克林霉素在高濃度環(huán)境中表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗菌效果，達(dá)到了高敏，抑菌圈平均直徑約為31.14 mm，是同等條件下夫西地酸鈉抑菌圈直徑的兩倍以上。在低濃度環(huán)境中，兩者的抑菌圈直徑差別不明顯。

在低濃度環(huán)境中，鹽酸金霉素的抑菌圈直徑不明顯，而在高濃度環(huán)境中的抑菌圈直徑大于夫西地酸鈉的，但數(shù)值不穩(wěn)定，出現(xiàn)了較多未產(chǎn)生抑菌圈的情況。

綜上所得，在低濃度環(huán)境中，抑菌作用從大到小依次為克林霉素（中敏）、夫西地酸鈉（中敏）、鹽酸金霉素（鈍敏）；在高濃度環(huán)境中，抑菌作用從大到小依次為克林霉素（高敏）、鹽酸金霉素（中敏）、夫西地酸鈉（中敏）。

（二）誤差分析

鹽酸金霉素和夫西地酸鈉的抑菌圈在48 h 后繼續(xù)放置了一段時(shí)間，可能導(dǎo)致抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)些許菌落生長(zhǎng)。取放平板過(guò)程中的搖晃導(dǎo)致藥液流動(dòng)，因此在培養(yǎng)基上出現(xiàn)了少許未生長(zhǎng)菌落的不規(guī)則抑菌斑紋。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

由C.acnes 侵入皮脂腺引起的痤瘡，通常以局部外用抗生素的方案進(jìn)行治療。我通過(guò)比較鹽酸金霉素、克林霉素、夫西地酸鈉對(duì)痤瘡丙酸桿菌ATCC11827 的抑菌作用效果，發(fā)現(xiàn)對(duì)于由C.acnes 感染引起的輕中度痤瘡，藥物選擇優(yōu)先級(jí)依次為克林霉素、夫西地酸鈉、鹽酸金霉素。建議局部外用克林霉素類和夫西地酸類藥物對(duì)尋常性痤瘡進(jìn)行治療。

專家點(diǎn)評(píng)

文章比較了不同抗生素在低濃度和高濃度下的抑菌效果，提供了科學(xué)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)證據(jù)。這種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)有助于評(píng)估抗生素的敏感性和抑菌效果，對(duì)研究抗菌治療的有效性具有科學(xué)性。文章還提供了對(duì)C.acnes 感染引起的痤瘡的治療方案建議，通過(guò)比較不同抗生素的抑菌效果，得出局部應(yīng)用克林霉素、夫西地酸鈉對(duì)輕中度痤瘡的治療效果較好的結(jié)論，這為臨床實(shí)踐提供了實(shí)用的指導(dǎo)。

值得引起重視的是，文章未提及是否進(jìn)行了重復(fù)實(shí)驗(yàn)。為了提高實(shí)驗(yàn)的可靠性，需更加嚴(yán)格地控制實(shí)驗(yàn)條件，并充分進(jìn)行誤差分析和排除。