止癢潤膚乳對特應性皮炎小鼠模型皮損組織IL-4、IFN-γ蛋白質與基因表達的影響

劉芳榕 徐翠萍 劉朝圣 成雪 程曉 張語林

〔摘要〕 目的 觀察止癢潤膚乳對小鼠特應性皮炎（atopic dermatitis， AD）樣模型皮損組織中Janus激酶信號轉導子和轉錄激活子（janus kinase-signal transducer and activator of transcription， JAK-STAT）信號轉導通路關鍵細胞因子白細胞介素-4（interleukin-4， IL-4）、γ干擾素（interferon-γ， IFN-γ）表達水平的影響。方法 將50只SPF級BALB/c小鼠隨機分為空白組、模型組、糠酸莫米松軟膏組、迪高替尼軟膏組、止癢潤膚乳組，每組10只。采用２，４-二硝基氯苯（2，4-dinitrochlorobenzene， DNCB）溶液誘導AD樣反應，實驗過程觀察小鼠抓撓行為并進行皮損評分，取材后進行HE染色觀察皮損組織病理學改變，采用Real-time PCR法和Western blot法分別測定皮損組織中IL-4、IFN-γ的mRNA表達水平和蛋白含量。結果 與空白組相比，模型組小鼠皮損組織IL-4mRNA和蛋白表達量上升（P<0.05），IFN-γ mRNA和蛋白表達量下降（P<0.05）；與模型組相比，止癢潤膚乳組、糠酸莫米松軟膏組、迪高替尼軟膏組IL-4 mRNA和蛋白表達量減少（P<0.01），IFN-γ mRNA和蛋白表達量升高（P<0.01）；與糠酸莫米松軟膏組相比，止癢潤膚乳組IL-4 mRNA和蛋白表達量降低（P<0.01）、IFN-γ mRNA和蛋白表達明顯升高（P<0.01）；與迪高替尼軟膏組相比，止癢潤膚乳組IL-4 mRNA 和蛋白表達量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），IFN-γ mRNA和蛋白表達量升高（P<0.01）。結論 止癢潤膚乳對DNCB誘導的AD樣癥狀有明顯療效，其作用機制可能通過抑制JAK-STAT信號轉導通路中關鍵細胞因子IL-4基因表達、上調IFN-γ基因表達，進而減輕炎癥反應來實現的。

〔關鍵詞〕 特應性皮炎；止癢潤膚乳；JAK-STAT信號通路；白細胞介素-4；γ干擾素；迪高替尼軟膏

〔中圖分類號〕R275.9? ? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.01.004

Effects of Zhiyang Runfu Cream on protein and gene expressions of IL-4 and IFN-γ in skin lesions of mice with atopic dermatitis

LIU Fangrong1， XU Cuiping1， LIU Chaosheng2*， CHENG Xue1， CHENG Xiao1， ZHANG Yulin3

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China; 3. Liuyang Hospital of Chinese Medicine， Liuyang， Hunan 410399， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Zhiyang Runfu Cream on the expression levels of interleukin-4 （IL-4） and interferon-γ （IFN-γ）， the key cytokines of janus kinase-signal transducer and activator of transcription （JAK-STAT） signaling pathway in skin lesions of mice with atopic dermatitis （AD）. Methods Fifty SPF BALB/c mice were randomized into blank， model， Mometasone Furoate Ointment （MFO）， Delgocitinib Ointment （DO）， and Zhiyang Runfu Cream （ZYRFC） groups， with 10 rats in each group. The AD-like reaction was induced by 2，4-dinitrochlorobenzene （DNCB） solution. The scratching behavior of mice was observed and the condition of skin lesions was scored during the experiment. The AD lesions of mice were peeled back for pathological observation through HE staining. The mRNA expression levels and protein content of IL-4 and IFN-γ in the AD lesions were determined by Real-time PCR and Western blot， respectively. Results Compared with blank group， the mRNA and protein expression levels of IL-4 in the AD lesions of model group increased （P<0.05）， while those of IFN-γ decreased （P<0.05）. Compared with model group， the mRNA and protein expression levels of IL-4 in the AD lesions of ZYRFC， MFO， and DO groups were reduced （P<0.01）， while those of IFN-γ increased （P<0.01）. Compared with MFO group， the mRNA and protein expression levels of IL-4 in the AD lesions of ZYRFC group were lower （P<0.01）， while those of IFN-γ were significantly higher （P<0.01）. Compared with DO group， the mRNA and protein expression levels of IL-4 in the AD lesions of ZYRFC group were not significantly different （P>0.05）， while those of IFN-γ were elevated （P<0.01）. Conclusion Zhiyang Runfu Cream has obvious curative effects on AD-like symptoms induced by DNCB. And its mechanism of action is probably inhibiting the expression of IL-4 gene and increasing the expression of IFN-γ gene in the JAK-STAT signal transduction pathway， and thus alleviating inflammatory reaction.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 atopic dermatitis; Zhiyang Runfu Cream; JAK-STAT signaling pathway; interleukin-4; interferon-γ; Digotinib Ointment

特應性皮炎（atopic dermatitis，AD）又名“異位性濕疹”“遺傳過敏性皮炎”，是一種具有遺傳傾向的變態(tài)反應性疾病，臨床上以具有“特應性”體質的人群反復出現皮膚濕疹樣皮損及瘙癢為主要特點。如今全世界受到AD影響的人口至少有2.3億，80%～90%的病例發(fā)病在5歲之前[1]，兒童AD由于發(fā)病年齡早、病程持續(xù)時間長、臨床缺乏特效藥物而成為中國家庭經濟負擔排名第一的兒童皮膚疾病，積極開發(fā)有效防治AD的藥物具有重大臨床價值。近年來，越來越多研究聚焦于Janus激酶信號轉導子和轉錄激活子（janus kinase-signal transducer and activator of transcription， JAK-STAT）信號通路與AD的關系，JAK-STAT信號通路與AD的發(fā)生發(fā)展密切相關，而白細胞介素-4（interleukin-4， IL-4）和γ干擾素（interferon-γ， IFN-γ）是AD發(fā)病機制中的重要調控因子，IL-4和IFN-γ通過JAK-STAT信號通路來轉導信號，這一過程可能是引起 AD發(fā)病的重要因素。

中醫(yī)藥療法以整體觀念和辨證論治為核心，強調個體化施治，取得了豐富且顯著的臨床療效，是臨床防治AD的重要手段。止癢潤膚乳作為湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院自制的純中藥外用復方乳膏，在前期研究中發(fā)現其對AD療效切確，無明顯不良反應[2]。本研究著眼于JAK-STAT信號通路，探究止癢潤膚乳對AD樣小鼠模型的治療作用及其分子機制，研究結果報道如下。

1 材料

1.1? 實驗動物

SPF級雌性BALB/c小鼠50只，6周齡，體質量18～20 g，購自湖南長沙斯萊克景達動物公司，合格證號：43072711102946448。飼養(yǎng)于學校SPF級動物實驗室，環(huán)境潔凈，晝夜明暗交替時間10 h/14 h，溫度22～26 ℃，相對濕度55%～70%。按照動物倫理學要求善待動物，倫理審批號：ZYFY20201212-07。

1.2? 實驗藥物

止癢潤膚乳由醫(yī)院制劑室提供[3]，批號：20191130。中藥組成：生地黃、當歸、制首烏、薄荷、苦杏仁、桃仁、紅花、地膚子、苦參、大楓子仁、蠶砂、瓜蔞霜、冰片?；|組成：水相包括甘油、苯甲酸鈉、氫氧化鉀。油相包括硬脂酸、單雙甘油酯、白凡士林、液體石蠟、羥苯乙酯。藥劑制備按乳劑制備法：（1）取中藥薄荷和當歸，以水蒸汽蒸餾法提取蒸餾液，并加TW-80乳化劑；（2）取“（1）”所得藥渣和其余藥材（除冰片外）以乙醇滲漏法提取其中有效成分，制至稠膏狀；（3）取配方中油相所含原料高溫加熱，融化后加入稠膏和冰片攪拌均勻；（4）取3種水相原料將“（1）”制備的混合物加熱融化；（5）將以上工序所制兩種液體在85 ℃時合并，連續(xù)攪拌至冷凝成膏，最后包裝為規(guī)格50 g/盒的成品制劑。湖北恒安芙林藥業(yè)股份有限公司提供的規(guī)格為10 g的糠酸莫米松軟膏（生產批號：200516）；日本煙草及鳥居制藥株會社提供的規(guī)格為5 g的5%迪高替尼軟膏（貨號：BCP34832）。

1.3? 主要試劑與儀器

2，4-二硝基氯苯（美國Sigma公司，批號：237329）；通用逆轉錄試劑盒（批號：11141ES60）、Real time PCR熒光定量試劑盒（批號：11201ES08）均購自上海翊圣生物科技有限公司；IL-4抗體（批號：AF5142）、IFN-γ抗體（批號：DF6045）均購自美國Affinity Biosciences公司；羊抗兔-HRP（北京博奧森生物技術有限公司，批號：bs-0295G-HRP）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號：PC0020）。

臺式低速離心機（上海醫(yī)療器械股份有限公司，型號：80-2）；普通PCR儀（西安天隆科技有限公司，型號：Genesy 98T）；實時熒光定量PCR儀（江蘇迅睿生物技術有限公司，型號：MA-6000）；核酸檢測儀（杭州遂真生物技術有限公司，型號：F-1100）；蛋白marker（賽默飛世爾科技公司，型號：26617）；電泳儀（美國Bio-rad公司，型號：1645070）；電轉儀（美國Bio-rad公司，型號：BE6085）；酶標儀（上海倍特生物科技有限公司，型號：800TS）；全自動化學發(fā)光圖像分析系統(tǒng)（上海天能科技有限公司，型號：5200）。

2 實驗方法

2.1? 動物分組和造模

實驗前，將50只小鼠在SPF級實驗室適應性飼養(yǎng)5 d。采用隨機數字表法將小鼠分為空白組、模型組、糠酸莫米松軟膏組、迪高替尼軟膏組、止癢潤膚乳組，每組10只。第0天稱量每只小鼠體質量并記錄，在小鼠背部制備2 cm×3 cm脫毛區(qū)域。參考造模方法[4-7]，實驗第1～7天，每天將1% ２，４-二硝基氯苯（2，4-dinitrochlorobenzene， DNCB）溶液100 μL均勻涂抹于除空白組外小鼠背部脫毛處皮膚激發(fā)AD樣反應，第2周開始每周2次使用0.2%DNCB溶液100 μL維持AD樣反應，持續(xù)3周（規(guī)定每周的第3天和第6天進行造模，時間均為上午9點開始），具體造模時間線圖如圖1。成功的小鼠AD模型可見其背部脫毛處皮膚具有紅斑、丘疹、水腫、鱗屑覆蓋等癥狀。

2.2? 動物給藥

實驗第15天起，模型穩(wěn)定，各組開始給予相應的受試物：糠酸莫米松軟膏組每天涂抹糠酸莫米松軟膏（100 μg/次，1次/d），迪高替尼軟膏組每天涂抹迪高替尼軟膏（100 μg/次，1次/d），止癢潤膚乳組每天涂抹止癢潤膚乳（100 μg/次，1次/d），空白組及模型組均不予以處理，連續(xù)14 d。小鼠每天給藥時間均為造模后1 h，防止給藥時將造模藥物擦蹭掉。? ? ? ? ? 2.3? 實驗取材

實驗第29天采取頸部脫臼法處死小鼠，取背部典型部位皮損約1.0 cm×0.5 cm，分離剔除皮下脂肪，用PBS清洗后，將每份標本分為兩部分：用于病理觀察部分置于離心管中，用4%多聚甲醛浸泡進行固定；用于指標檢測部分用離心管裝好，凍存在

-80 ℃超低溫冰箱備用。

2.4? 觀測指標與方法

2.4.1? 小鼠一般情況觀察? （1）小鼠抓撓行為評價：實驗第5、10、15、20、25、28天定時統(tǒng)計，小鼠抬起爪持續(xù)性搔抓皮損區(qū)記為1次，小鼠將爪放下或出現停頓、舔舐后再次抓撓記為第2次，連續(xù)搔抓計為1次，統(tǒng)計時間為10 min。觀察過程中將小鼠放入透明有孔的聚丙烯盒子內，保持環(huán)境安靜無人，用攝像機記錄以方便統(tǒng)計。（2）皮損狀況評分：實驗第5、10、15、20、25、28天使用濕疹面積及嚴重程度指數（eczema area and severity index， EASI）評分評估AD嚴重程度[8]，并用數碼相機拍照記錄。①紅斑和出血：無為0分，輕微紅斑為1分，明顯紅斑但無出血為2分，明顯紅斑伴出血為3分；②水腫：無為0分，輕度為1分，中度為2分，重度為3分；③撕裂和糜爛：無為0分，輕度撕裂為1分，明顯撕裂但無糜爛為2分，明顯撕裂伴糜爛為3分；④干燥和結垢：無為0分，輕度干燥為1分，明顯干燥但無結垢為2分，明顯干燥伴結垢為3分。為最大限度減少技術差異，在每個實驗過程中，都有一名研究人員對治療視而不見進行測量。

2.4.2? HE染色觀察皮損組織病理學表現? 將各組小鼠皮損組織經多聚甲醛固定、脫水、包埋切片、核染、著色封片后，在光學顯微鏡下觀察表皮有無角化過度或角化不全、棘層及顆粒層厚度、真皮炎性細胞浸潤等情況。

2.4.3? Real time PCR檢測皮損組織中IL-4、IFN-γ mRNA表達水平? 將適量組織樣本完全破碎，應用 TRNzol總RNA提取試劑提取樣本RNA，運用4×Hifair■ Ⅲ SuperMix plus進行cDNA反轉錄，冰上配制反應液后，應用三步擴增程序法PCR擴增程序進行擴增，得到CT值，最終計算2-ΔΔCT值并作圖比較。

2.4.4? Western blot檢測皮損組織中IL-4、IFN-γ蛋白表達量? 將適量皮損組織破碎后采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白質濃度，根據目的蛋白的分子量配置相應比例的分離膠和濃縮膠，樣本以每孔10 μL的總量進行上樣，電泳結束后運用濕轉法轉膜，室溫封閉2 h。進行一抗、二抗孵育后顯色曝光，采用全自動化學發(fā)光圖像分析系統(tǒng)進行曝光。曝光結束后，進行膜洗脫再生、再次封閉2 h，洗滌后進行顯色曝光成像，曝光結果使用Image J軟件分析灰度值，制作Western blot圖表，每個蛋白至少測量3個標本以保證精確。

2.5? 統(tǒng)計學分析

統(tǒng)計學分析使用GraphPad Prism 8.0軟件進行處理，本實驗數據以“ｘ±s”表示。若符合正態(tài)性且方差齊性時，采用單因素方差分析，LSD法進行兩兩比較；方差不齊時采用Dunnett T3 法；否則使用非參數檢驗。

3 結果

3.1? 一般情況觀察

3.1.1? 小鼠抓撓行為? 空白組小鼠抓撓頻率在整個實驗過程中一直較低；模型組小鼠抓撓頻率數值起伏較大，但總體趨勢偏高，和空白組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；3個給藥組小鼠隨著實驗進行，抓撓頻率總趨勢下降，和模型組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。詳見圖2、表2。

3.1.2? 皮損狀況觀察? 空白組小鼠在整個實驗過程中，被剔除的毛發(fā)隨著實驗進程推進逐漸長出，質地光亮順澤。模型組小鼠隨著實驗的推進，DNCB刺激次數增多，皮膚受損程度加重，搔抓次數變頻繁，其皮損區(qū)域進一步出現抓痕、血痂等損害，皮毛數量、光亮順澤度也隨之降低?？匪崮姿绍浉嘟M小鼠在給予DNCB溶液的第10天背部皮膚出現紅斑、水腫、滲出、抓痕等明顯炎癥反應，在給予糠酸莫米松軟膏治療后，紅斑顏色逐漸變淺、水腫減輕，第28天仍有少量抓痕，血痂未完全脫落。迪高替尼軟膏組小鼠皮膚在給予治療后紅斑顏色明顯變淺、水腫明顯減輕，第28天已有部分毛發(fā)長出。止癢潤膚乳組小鼠在用藥后紅斑和水腫明顯改善，毛發(fā)長出，質地柔順，皮膚光滑，接近空白組和迪高替尼軟膏組皮膚顏色。詳見圖3。

給藥治療后，與模型組相比，糠酸莫米松軟膏組、迪高替尼軟膏組、止癢潤膚乳組皮損評分降低（P<0.05或P<0.01）；與糠酸莫米松軟膏比較，迪高替尼軟膏組、止癢潤膚乳組評分稍低，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；迪高替尼軟膏組和止癢潤膚乳組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表3。

3.2? 各組小鼠局部皮損組織病理學變化

空白組小鼠皮膚組織表皮層、真皮層結構基本未見明顯異常，細胞形態(tài)正常，真皮淺層未見明顯炎癥反應。與空白組相比，模型組皮損可看到明顯炎癥增生性改變，可見角化過度、棘層肥厚、海綿水腫、真皮血管擴張充血，可見真皮層大量淋巴細胞、嗜酸性粒細胞等炎性細胞浸潤，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組相比，各給藥組可見表皮厚度明顯減小，表皮層與真皮層的肥大細胞和粒細胞浸潤減輕，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與迪高替尼軟膏組、止癢潤膚乳組比較，糠酸莫米松軟膏組小鼠棘層肥厚、海綿水腫、真皮血管擴張充血較嚴重，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。詳見圖4。

3.3? 止癢潤膚乳對AD小鼠背部皮損組織IL-4、IFN-γ mRNA表達量的影響

與空白組相比，模型組小鼠皮損組織IL-4 mRNA表達量明顯升高（P<0.05），IFN-γ mRNA表達量降低（P<0.05）。與模型組相比，止癢潤膚乳組、迪高替尼軟膏組、糠酸莫米松軟膏組小鼠IL-4 mRNA表達量明顯降低（P<0.01），IFN-γ mRNA表達量升高（P<0.01）。與糠酸莫米松軟膏組比較，止癢潤膚乳組小鼠IL-4 mRNA表達量明顯降低（P<0.01）。與迪高替尼軟膏組相比，止癢潤膚乳組IL-4 mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與糠酸莫米松軟膏組、迪高替尼軟膏組相比，止癢潤膚乳組IFN-γ mRNA表達升高（P<0.01）。詳見圖5。

3.4? 止癢潤膚乳對AD小鼠背部皮損組織IL-4、IFN-γ蛋白表達水平的影響

與空白組相比，模型組小鼠IL-4蛋白水平明顯上升（P<0.05），IFN-γ蛋白水平下降（P<0.05）。與模型組相比，用藥干預后3個治療組小鼠IL-4蛋白含量明顯下降（P<0.01），IFN-γ蛋白含量明顯上升（P<0.01）。與糠酸莫米松軟膏組相比，止癢潤膚乳組和迪高替尼軟膏組IL-4蛋白含量下降（P<0.01）。與迪高替尼軟膏組相比，止癢潤膚乳組IL-4蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與迪高替尼軟膏組、糠酸莫米松軟膏組相比，止癢潤膚乳組IFN-γ蛋白含量明顯上升（P<0.01）。詳見圖6。

4 討論

特應性皮炎作為目前皮膚科最為常見、治療難度大的一種慢性炎癥性皮膚病，隨著對疾病內在機制的深入研究，雖然精準的靶向藥物治療包括免疫抑制劑、生物制劑、磷酸二酯酶-4抑制劑被投入重度AD患者的治療當中[9]，但其復發(fā)風險和不良反應依然顯著。既往研究表明，JAK-STAT信號通路作為多種細胞因子的經典信號傳導途徑，包括4個受體相關激酶和7個蛋白[10]，在AD發(fā)病機制中具有重要意義，是AD治療的新突破點。而IL-4和IFN-γ作為參與機體免疫反應的細胞因子，是AD發(fā)病機制中的重要調控因子。IL-4存在兩類受體[11]：I型受體只與IL-4結合，在造血細胞中表達；Ⅱ型受體在其他細胞類型中表達。IL-4主要通過JAK-STAT信號通路調節(jié)參與免疫調節(jié)和炎癥反應基因的表達，IL-4Ｒα鏈上的3個中心酪氨酸殘基在受體的刺激下被磷酸化，在STAT6的激活中起重要作用[12]。除此之外，JAK-STAT信號轉導通路經過提供IL-4刺激，促使白細胞分化抗原4（cluster of differentiation 4， CD4+）細胞分化為T輔助細胞2（T helper cell 2，Th2）細胞，催化B細胞的成熟，誘導其分化的漿細胞分泌的抗體類別向IgE轉換，從而促進組胺釋放，加重AD的發(fā)生[13]。IFN-γ主要由T輔助細胞1（T helper

cell 1， Th1）細胞表達[14]。經過JAK-STAT信號通路的轉導，可抑制Th2細胞因子受體包括IL-4Rα、IL-13Rα1等及其下游信號介質的表達來抑制AD的發(fā)生[15]，使由IL-4介導的IgE合成減少，降低IgE受體的表達。除此之外，IFN-γ還能在發(fā)揮免疫作用的同時恢復皮膚屏障功能，總之，IFN-γ能夠參與皮膚乃至全身的免疫反應中。IL-4和IFN-γ通過JAK-STAT信號通路來轉導信號，這一過程可能在AD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關鍵作用。

中醫(yī)學認為AD的發(fā)病與心脾關系密切，辨證多從濕熱內蘊、脾虛濕盛和陰虛血燥等論治。大多數醫(yī)家認為AD病機是稟賦不耐，后天復感外邪，客于肌表而發(fā)病。本研究團隊長期關注AD的基礎和臨床研究，認為AD病因在于先天稟賦不足，復感風、濕、燥邪，蘊于肌表，阻遏氣機，郁熱化火，基本病機是脾虛津傷燥勝。因此，治療上應以固護脾胃、養(yǎng)陰潤燥為原則，提出“健脾滋陰、培土生金”的AD辨治基本法則，并在此基礎上形成了內治以“七味白術散”為主方，外治以醫(yī)院特色制劑“止癢潤膚乳”為主的中醫(yī)治療方案，臨床療效肯定。止癢潤膚乳作為本院的純中藥乳膏制劑，中藥成分為生地黃、當歸、制何首烏、薄荷、苦杏仁、桃仁、紅花、地膚子、苦參、大楓子仁、蠶砂、瓜蔞霜、冰片。方中君藥當歸、制首烏滋陰養(yǎng)血，生地黃養(yǎng)陰生津；桃仁、紅花活血行氣，地膚子、苦參長于祛風除濕止癢，為治療皮膚濕瘡瘙癢要藥，大楓子仁性熱味辛，長于攻毒除濕，蠶砂溫燥祛風，上六味共為臣藥；五臟之中肺主皮毛，故加佐藥杏仁、瓜蔞霜治肺利氣；使藥薄荷疏風散邪，冰片涼開芳香促滲。全方有養(yǎng)血滋陰、祛風除濕止癢的功效。

止癢潤膚乳在治療銀屑病、老年性瘙癢癥、濕疹等疾病的臨床作用已被證實[16-18]。本團隊在前期研究中，發(fā)現止癢潤膚乳對兒童AD療效切確，無明顯不良反應[2]，并圍繞皮膚微生態(tài)影響方面進行了初步基礎研究，發(fā)現止癢潤膚乳具有較好保護皮膚屏障、改善皮膚微生態(tài)、抑制角質形成細胞增生的作用[19]。本實驗在此基礎上，驗證了止癢潤膚乳對DNCB致敏的BALB/c特應性皮炎小鼠模型免疫功能的影響，是能夠抑制皮損組織的IL-4基因表達及其蛋白含量，上調IFN-γ基因表達及其蛋白含量，從而達到抑制炎癥、調節(jié)免疫的作用，具有良好的科學性及參考價值。

本研究結果顯示，止癢潤膚乳能夠顯著改善DNCB致敏的BALB/c AD小鼠瘙癢癥狀、真皮及棘層炎性細胞浸潤情況，降低EASI評分，提示止癢潤膚乳對AD模型有切確治療效果。研究結果還顯示，止癢潤膚乳能夠抑制皮損組織的IL-4基因表達及其蛋白含量，上調IFN-γ基因表達及其蛋白含量，本研究團隊從已證實的JAK-STAT信號通路在AD發(fā)病機制中具有重要意義，推測止癢潤膚乳的療效作用機制可能是通過調控JAK-STAT信號通路中的關鍵因子，使Th1/Th2細胞亞群達到平衡，起到免疫調控作用。但本實驗對于JAK-STAT 信號通路的研究較為局限，該通路激活還涉及各種蛋白的復雜變化，止癢潤膚乳對有關蛋白的特異性調節(jié)作用還需大量深層次的實驗來驗證，未來可聚焦于多種炎癥因子檢測指標，并與迪高替尼軟膏多方面對比治療效果，或許能夠為止癢潤膚乳的優(yōu)勢性提供更多實驗依據。

基于以上研究結果，本研究團隊推測止癢潤膚乳可能通過抑制DNCB致敏的AD小鼠皮損組織中IL-4基因表達及其蛋白含量，上調IFN-γ基因表達及其蛋白含量，以達到治療AD的目的，這在一定程度上揭示了止癢潤膚乳通過JAK-STAT信號通路治療AD的可能作用機制。

參考文獻

[1] BOGUNIEWICZ M， ALEXIS A F， BECK L A， et al. Expert perspectives on management of moderate-to-severe atopic dermatitis： A multidisciplinary consensus addressing current and emerging therapies[J]. The Journal of Allergy and Clinical Immunology in Practice， 2017， 5（6）： 1519-1531.

[2] 鐘? 昕. 止癢潤膚乳對特應性皮炎樣小鼠皮膚屏障功能影響的實驗研究[D]. 長沙： 湖南中醫(yī)藥大學， 2022.

[3] 唐? 林， 鹿愛娟， 王? 璐， 等. 止癢潤膚乳成型工藝的優(yōu)化[J]. 中成藥， 2022， 44（11）： 3614-3618.

[4] 莫俊鑾， 周繼昌， 劉小立， 等. DNCB致敏誘導BALB/c小鼠特應性皮炎模型的建立[J]. 中國熱帶醫(yī)學， 2013， 13（12）： 1439-1442.

[5] 王欣欣， 李思佳， 關洪全， 等. DNCB對BALB/c小鼠特應性皮炎的誘導作用及其機制[J]. 吉林大學學報（醫(yī)學版）， 2020， 46（3）： 439-443， 669.

[6] KIM J， LEE J， SHIN S， et al. Molecular mechanism of atopic dermatitis induction following sensitization and challenge with 2， 4-dinitrochlorobenzene in mouse skin tissue[J]. Toxicological Research， 2018， 34（1）： 7-12.

[7] HOU D D， DI Z H， QI R Q， et al. Sea buckthorn （hippopha？觕 rhamnoides L.） oil improves atopic dermatitis-like skin lesions via inhibition of NF-κB and STAT1 activation[J]. Skin Pharmacology and Physiology， 2017， 30（5）： 268-276.

[8] 趙? 辨. 濕疹面積及嚴重度指數評分法[J]. 中華皮膚科雜志， 2004， 37（1）： 3-4.

[9] SINGH S， BEHL T， SHARMA N， et al. Targeting therapeutic approaches and highlighting the potential role of nanotechnology in atopic dermatitis[J]. Environmental Science and Pollution Research International， 2022， 29（22）： 32605-32630.

[10] CHAPMAN S， KWA M， GOLD L S， et al. Janus kinase inhibitors in dermatology： Part I. A comprehensive review[J]. Journal of the American Academy of Dermatology， 2022， 86（2）： 406-413.

[11] JIANG H， HARRIS M B， ROTHMAN P. IL-4/IL-13 signaling beyond JAK/STAT[J]. The Journal of Allergy and Clinical Immunology， 2000， 105（6 Pt 1）： 1063-1070.

[12] MIYAZAKI T， KAWAHARA A， FUJII H， et al. Functional activation of Jak1 and Jak3 by selective association with IL-2 receptor subunits[J]. Science， 1994， 266（5187）： 1045-1047.

[13] DUBIN C， DEL DUCA E， GUTTMAN-YASSKY E. The IL-4， IL-13 and IL-31 pathways in atopic dermatitis[J]. Expert Review of Clinical Immunology， 2021， 17（8）： 835-852.

[14] MEEPHANSAN J， TSUDA H， KOMINE M， et al. Regulation of IL-33 expression by IFN-γ and tumor necrosis factor-α in normal human epidermal keratinocytes[J]. The Journal of Investigative Dermatology， 2012， 132（11）： 2593-2600.

[15] KIM J， LEE S K， JUNG M， et al. Extracellular vesicles from IFN-γ-primed mesenchymal stem cells repress atopic dermatitis in mice[J]. Journal of Nanobiotechnology， 2022， 20（1）： 526.

[16] 吳世婷， 劉麗芳， 熊家青. 養(yǎng)血潤燥法對銀屑病皮損中IRF-4表達的影響[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2019， 15（11）： 15-18.

[17] 熊家青， 劉麗芳， 范洪橋. 止癢潤膚乳聯合當歸飲子治療血虛風燥型老年性皮膚瘙癢癥臨床觀察[J]. 中醫(yī)藥臨床雜志， 2015， 27（8）： 1129-1131.

[18] 祁? 林， 劉麗芳， 席建元. 潤膚止癢乳劑治療血虛風燥證慢性濕疹臨床研究[J]. 中國中西醫(yī)結合皮膚性病學雜志， 2011， 10（5）： 294-296.

[19] 洪培育. 七味白術散治療兒童脾虛型特應性皮炎的臨床觀察（附：學齡前兒童特應性皮炎患病影響因素的調查）[D]. 長沙： 湖南中醫(yī)藥大學， 2021.