蘇禽6號蛋雞早期血脂代謝規(guī)律研究

張晶鑫，楊平，葛宇峰，王星果，竇套存，郭軍，胡玉萍，王強(qiáng)，王克華，曲亮*

(1. 江蘇省家禽科學(xué)研究所/江蘇省家禽遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 揚(yáng)州 225125；2. 中國畜牧業(yè)協(xié)會，北京 100044)

我國雞蛋消費(fèi)偏好粉殼蛋，其市場份額正逐年上升。粉殼蛋主要由我國地方特色蛋雞生產(chǎn)，其蛋重較小、蛋形較長、蛋黃比率大，淘汰母雞體重適中，符合城鄉(xiāng)居民傳統(tǒng)消費(fèi)習(xí)慣[1-2]，但是地方特色蛋雞產(chǎn)蛋性能偏低，限制了產(chǎn)業(yè)發(fā)展速度[3-4]。蛋雞飼料以糧食為主要原料，在飼料原料價(jià)格不斷上漲的情況下，蛋雞飼養(yǎng)成本逐年增加，節(jié)約飼料、提高生產(chǎn)效率顯得尤為重要。目前市場上的節(jié)糧型蛋雞品種，高產(chǎn)與優(yōu)質(zhì)不兼容[5-7]，因此需培育產(chǎn)蛋數(shù)多、蛋品質(zhì)優(yōu)、耗料少的高產(chǎn)節(jié)糧地方特色蛋雞新品種。江蘇省家禽科學(xué)研究所借助蛋雞育種平臺，經(jīng)過多年培育，育成高產(chǎn)節(jié)糧蛋雞配套系蘇禽6號蛋雞(含有dw矮小基因[8])，其性能優(yōu)秀，市場前景十分廣闊。

脂質(zhì)代謝在一定程度上反映雞攝入的營養(yǎng)水平和健康狀況，同時(shí)還與其生長發(fā)育和繁殖相關(guān)。雞日糧中能量水平升高則增加腹脂，而蛋白質(zhì)水平升高則減少腹脂；血漿中極低密度脂蛋白(VLDL)含量隨著日糧能量水平升高而降低，而總脂和膽固醇含量則隨著日糧能量、蛋白質(zhì)水平的升高而降低[9]。對肉種雞限飼能提高雞胚血清中甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)含量，降低低密度脂蛋白(LDL)含量[10]。雞長期的脂肪代謝障礙會引發(fā)脂肪肝[11]，患有脂肪肝綜合征的雞與正常雞相比，體重明顯增大，腹脂率升高，血清TG、TC和LDL含量升高，而高密度脂蛋白(HDL)含量降低[12]。通過飼料中添加稀土殼聚糖，四川山地烏骨雞早期腹脂率、肝脂率以及血清TG、TC和VLDL含量都明顯降低，而日增重則明顯提高[13]。清遠(yuǎn)麻雞早期腹脂重與體重、屠體重和脛長顯著正相關(guān)[14]。肉雞的脂肪沉積與體重呈顯著正相關(guān)，適當(dāng)?shù)闹境练e有利于肉雞開產(chǎn)和產(chǎn)蛋，但脂肪沉積過度則降低產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重[15]。因此對雞的脂質(zhì)代謝特別是早期脂質(zhì)代謝進(jìn)行研究對生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。蘇禽6號蛋雞培育過程中并未對脂質(zhì)代謝進(jìn)行檢測分析，而血液中TC、LDL等脂代謝指標(biāo)含量高低能反應(yīng)出脂質(zhì)代謝狀況[16]，因此有必要進(jìn)行相關(guān)研究。本研究采集蘇禽6號蛋雞早期血清，對脂質(zhì)、脂蛋白、卵黃前體蛋白等脂代謝指標(biāo)進(jìn)行檢測和分析，為維持該配套系的早期生長發(fā)育和機(jī)體健康提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以蘇禽6號蛋雞為試驗(yàn)組，江蘇省家禽科學(xué)研究所選育的海蘭褐蛋雞為對照組。采用密閉雞舍兩段式籠養(yǎng)，飼養(yǎng)條件相同，標(biāo)準(zhǔn)飼糧進(jìn)行飼喂。飼料采用江蘇鹽城源耀飼料有限公司生產(chǎn)的806、816、828料，飼料營養(yǎng)水平見表1。自由飲水、采食，常規(guī)光照、免疫。試驗(yàn)雞為10～18周齡，每周各品種隨機(jī)選取健康母雞12只，空腹12 h后采血用于后續(xù)測定。

表1 飼料營養(yǎng)水平

1.2 測定項(xiàng)目及方法

1.2.1 血清脂代謝指標(biāo)測定

采血5 mL，靜置20 min后3 000 r/min離心5 min，吸取上清液，使用Angle Gene生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行各脂代謝指標(biāo)測定。TG、TC測定：2.5 μL血清加入250 μL工作液，混勻，37 ℃孵育10 min，使用酶標(biāo)儀測定波長510 nm的OD值。設(shè)置空白(蒸餾水)和校準(zhǔn)品，含量=(血清OD值-空白OD值)/(校準(zhǔn)OD值-空白OD值)×校準(zhǔn)品濃度。游離脂肪酸(FFA)測定：4 μL血清加入200 μL試劑1，混勻，37 ℃孵育5 min，使用酶標(biāo)儀測定波長546 nm的OD值(OD1)，再加入50 μL試劑2，混勻，37 ℃孵育5 min，測定波長546 nm的OD值(OD2)，計(jì)算ΔOD=OD2-OD1。FFA、HDL和LDL測定：2.5 μL血清加入180 μL R1，混勻，37 ℃孵育5 min，使用酶標(biāo)儀測定波長546 nm的OD值(OD1)，再加入60 μL R2，混勻，37 ℃孵育5 min，測定波長546 nm的OD值(OD2)，計(jì)算ΔOD=OD2-OD1。設(shè)置空白(蒸餾水)和校準(zhǔn)品，含量=(血清ΔOD-空白ΔOD)/(校準(zhǔn)ΔOD-空白ΔOD)×校準(zhǔn)品濃度。極低密度脂蛋白y(VLDLy)、卵黃蛋白原(VTG)測定：10 μL血清加入40 μL稀釋液中，然后加入50 μL酶標(biāo)試劑，37 ℃孵育30 min，棄去并甩干液體，加入洗滌液后靜置30 s，棄去并甩干，重復(fù)5次，先后加入顯色液A和B各50 μL，震蕩混勻，37 ℃避光顯色10 min，加50 μL終止液終止反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀測定波長450 nm的OD值。設(shè)置空白(蒸餾水)和標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后算出各血清樣品VLDLy、VTG含量。

1.2.2 生產(chǎn)性能測定

根據(jù)NY/T 823—2020《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量計(jì)算方法》對相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定和記錄[17]，包括屠宰前體重，屠宰后腹脂重、肝重和全凈膛重，并計(jì)算腹脂率、肝臟指數(shù)。腹脂率=腹脂重÷(全凈膛重+腹脂重)×1 000‰。肝臟指數(shù)=肝臟重÷體重×1 000‰。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用SPSS 26軟件中的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差分析，并進(jìn)行相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清脂質(zhì)指標(biāo)

不同周齡TG、TC、FFA含量和腹脂率、肝臟指數(shù)趨勢見表2、表3。隨著周齡增加，蘇禽6號蛋雞血清FFA含量整體降低，12周齡開始顯著降低(P<0.05)；TC含量在一定范圍內(nèi)波動變化，其中11、12、14、15、17周齡顯著降低(P<0.05)，13、16周齡又顯著升高(P<0.05)；腹脂率前期基本保持不變，17周齡后顯著升高(P<0.05)；肝臟指數(shù)在12周齡顯著降低(P<0.05)，之后基本保持不變。

表2 蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞血清脂質(zhì)指標(biāo)比較 mmol/L

表3 蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞腹脂率和肝臟指數(shù)比較 ‰

由表2可見，蘇禽6號蛋雞血清TG含量在10、12、13、16周齡極顯著(P<0.01)而15周齡顯著(P<0.05)高于海蘭褐蛋雞，其他周齡差異不顯著(P>0.05)；TC含量與海蘭褐蛋雞波動類似且無明顯規(guī)律；FFA含量與海蘭褐蛋雞變化基本一致。

10周齡與18周齡比較，僅FFA在蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞中均差異顯著，且均是18周齡比10周齡顯著降低(P<0.05)。

由表3可見，蘇禽6號蛋雞腹脂率極顯著高于海蘭褐蛋雞(P<0.01)；肝臟指數(shù)除10、13周齡極顯著高于海蘭褐蛋雞(P<0.01)，其余周齡與海蘭褐蛋雞基本一致。

表3中10周齡與18周齡腹脂率、肝臟指數(shù)比較結(jié)果顯示，僅在蘇禽6號蛋雞中存在顯著差異，其中腹脂率18周齡顯著升高(P<0.05)，肝臟指數(shù)18周齡顯著降低(P<0.05)。

2.2 血清脂蛋白指標(biāo)

不同周齡HDL和LDL含量趨勢見表4。隨著周齡增加，蘇禽6號蛋雞血清LDL含量波動變化，其中11、14、15和17周齡顯著降低(P<0.05)。

表4 蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞血清脂蛋白指標(biāo)比較 mmol/L

蘇禽6號蛋雞HDL含量在10、15周齡顯著(P<0.05)而11、14和17周齡極顯著(P<0.01)低于海蘭褐蛋雞其他周齡差異不顯著(P>0.05)。LDL含量除13周齡極顯著高于海蘭褐蛋雞(P<0.01)，其余周齡與海蘭褐蛋雞基本一致。

10周齡與18周齡HDL、LDL含量比較結(jié)果顯示，2個(gè)品種雞的2個(gè)指標(biāo)均無顯著差異。

2.3 血清卵黃前體蛋白指標(biāo)

不同周齡VLDLy和VTG含量趨勢見表5。隨著周齡增加，蘇禽6號蛋雞VTG含量11周齡開始顯著降低(P<0.05)，之后基本保持不變。

表5 蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞血清卵黃前體蛋白指標(biāo)比較 ng/mL

蘇禽6號蛋雞VLDLy含量整體與海蘭褐蛋雞一致，VTG含量前期與海蘭褐蛋雞基本一致，15周齡后顯著低于海蘭褐蛋雞(P<0.05)。

10周齡與18周齡VLDLy、VTG含量比較結(jié)果顯示，2個(gè)品種雞的2個(gè)指標(biāo)均無顯著差異。

2.4 相關(guān)性分析

血清各脂質(zhì)代謝指標(biāo)與腹脂率、肝臟指數(shù)間的相關(guān)性分析見表6。TG與VLDLy和腹脂率呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)。FFA則相反，它與VLDLy(P<0.05)和腹脂率(P<0.01)呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)，同時(shí)與TG也顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，但和肝臟指數(shù)顯著正相關(guān)(P<0.05)。TC、HDL和LDL三者之間均呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)。VLDLy與腹脂率呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。

表6 蘇禽6號蛋雞血清脂代謝指標(biāo)與腹脂率、肝臟指數(shù)相關(guān)性分析

3 討論

3.1 血清脂代謝指標(biāo)表達(dá)規(guī)律

對蘇禽6號蛋雞早期脂質(zhì)代謝進(jìn)行系統(tǒng)研究可以對其早期飼養(yǎng)階段的生長發(fā)育提供間接數(shù)據(jù)支撐，指導(dǎo)生產(chǎn)。Bobek等[18]發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激育成雞飼喂反式三碘甲腺原氨酸(rT3)可以增加FFA含量。熱應(yīng)激會減緩機(jī)體的基礎(chǔ)代謝，而rT3能進(jìn)一步減緩代謝并加速脂質(zhì)裂解，這樣就增加了FFA含量，說明FFA受到甲狀腺激素調(diào)控。而在本研究中，隨著早期蘇禽6號蛋雞生長，血清中FFA含量降低，與Bobek等[18]的研究結(jié)果相反，提示其也受甲狀腺激素調(diào)控，且是反向調(diào)控。另外，早期蘇禽6號蛋雞血清FFA含量顯著低于海蘭褐蛋雞，說明節(jié)糧矮小蛋雞脂質(zhì)裂解能力可能比高產(chǎn)褐殼蛋雞弱[18]。農(nóng)大3號矮小蛋雞TG和TC含量與高產(chǎn)蛋雞無顯著差異[19]。而本研究中，蘇禽6號蛋雞血清中TG含量顯著高于海蘭褐蛋雞，而HDL含量則較低，提示不同品種矮小蛋雞血脂差異較大。因?yàn)楦逿G會增加脂質(zhì)沉積，高HDL會促進(jìn)肝外組織膽固醇向肝內(nèi)流動，降低動脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)[20-21]，因此蘇禽6號蛋雞早期脂質(zhì)降解能力可能低于高產(chǎn)蛋雞。VLDLy和VTG是形成卵黃的重要前體蛋白，兩者均富含脂質(zhì)，雞卵黃中的大部分脂質(zhì)均由VLDLy和VTG中獲得，血清中VLDLy和VTG水平與蛋雞繁殖性能密切相關(guān)[22-23]。蘇禽6號蛋雞血清VTG含量前期與海蘭褐蛋雞基本相當(dāng)，后期卻明顯較低，提示蘇禽6號蛋雞繁殖性能低于高產(chǎn)蛋雞。蘇禽6號蛋雞早期腹脂率高于海蘭褐蛋雞，說明蘇禽6號蛋雞早期腹脂沉積比海蘭褐蛋雞多。

3.2 育成前后期脂代謝指標(biāo)比較

本研究的各血清脂代謝指標(biāo)中只有FFA在蘇禽6號蛋雞和海蘭褐蛋雞中均存在顯著差異，提示FFA的明顯減少對2個(gè)雞種的發(fā)育均較重要。腹脂率和肝臟指數(shù)均只在蘇禽6號蛋雞中有顯著差異，而在海蘭褐蛋雞中無顯著差異，提示地方蛋雞腹脂和肝臟發(fā)育后期受脂質(zhì)代謝影響較大，而高產(chǎn)蛋雞則受影響較小，分析這可能和高產(chǎn)蛋雞的長期選擇有關(guān)。

3.3 蘇禽6號蛋雞脂代謝指標(biāo)相關(guān)性分析

相關(guān)性分析可以為育種中特定性狀的選育提供一個(gè)較為合適的選擇指標(biāo)。蘇禽6號蛋雞早期血清TG含量與FFA顯著負(fù)相關(guān)，與TC、HDL無相關(guān)性，而TC與HDL顯著正相關(guān)。東鄉(xiāng)綠殼蛋雞血清TG含量與TC極顯著正相關(guān)，與HDL顯著負(fù)相關(guān)[24]。如皋黃雞血清TC含量與TG、HDL都是極顯著正相關(guān)[25]。綜上，說明不同品種雞血脂各指標(biāo)間相關(guān)性有所差異。蘇禽6號蛋雞早期血清TC含量還與LDL顯著正相關(guān)，與肉鴨早期血清中TC含量與LDL的相關(guān)性一致[26]，但是蘇禽6號蛋雞TC含量與FFA無相關(guān)性，而肉鴨TC含量與FFA顯著正相關(guān)[26]，說明不同禽類早期血脂代謝指標(biāo)存在差異。另外，本研究中蘇禽6號蛋雞早期血清TG含量與FFA顯著負(fù)相關(guān)，且這2個(gè)指標(biāo)與VLDLy和腹脂率等指標(biāo)的相關(guān)性正好相反，說明蘇禽6號蛋雞可以根據(jù)血清TG或是FFA含量判斷對方的含量，并估計(jì)其他脂質(zhì)相關(guān)指標(biāo)的大致情況，提示血清TG或FFA可作為選擇脂質(zhì)代謝性狀的潛在指標(biāo)。分析血脂代謝指標(biāo)與其他性狀指標(biāo)的相關(guān)性也能為脂代謝性狀或其他性狀的選育提供理論指導(dǎo)，如成年蕭山雞血漿TC含量與屠體重、半凈膛重、全凈膛重均呈顯著正相關(guān)，提示可通過血漿TC含量的選擇進(jìn)而選擇蕭山雞產(chǎn)肉性能[27]。限飼的肉雞脂肪組織中c-myc原癌基因表達(dá)量與血清TG含量呈顯著負(fù)相關(guān)，提示可通過c-myc基因表達(dá)量的選擇進(jìn)而選擇脂質(zhì)代謝性能[28]。因此，對蘇禽6號蛋雞早期血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)與其他性狀指標(biāo)的相關(guān)性分析有望為各性狀的選擇提供新思路，值得進(jìn)一步研究。

3.4 血清脂代謝研究展望

患有脂肪肝出血綜合征的雞血清中TG、TC和LDL含量顯著高于正常雞，而HDL含量則顯著低于正常雞，說明TG、TC和LDL含量的升高和HDL含量的降低會導(dǎo)致雞肝臟脂肪病變，并造成脂質(zhì)代謝紊亂，降低生產(chǎn)性能[12]。因此，對雞脂質(zhì)代謝進(jìn)行調(diào)控可以改善或提高生產(chǎn)性能。肉雞飼喂益生菌膠囊可以顯著降低血清TG、TC和LDL含量[29]。在羅曼蛋雞性成熟時(shí)期，血清TG、TC、VLDLy和VTG均有顯著提高，通過上調(diào)肝臟-血液-卵巢信號軸上各相關(guān)基因的表達(dá)，卵黃的形成和卵泡的發(fā)育均得到促進(jìn)[30]。在蛋雞體內(nèi)使用RNAi對2個(gè)重要的脂質(zhì)代謝相關(guān)基因ACACA和SREBP1進(jìn)行敲低，可以顯著降低血清TG、TC、HDL和LDL含量，并降低雞蛋中TC和LDL含量，影響蛋品質(zhì)[31]。蛋雞日糧中添加白藜蘆醇可以降低血清TG、TC、LDL和VLDL含量以及卵黃TC含量，提高飼料轉(zhuǎn)化率、雞蛋蛋白高度和哈氏單位[32]。飼養(yǎng)方式也能調(diào)控雞脂質(zhì)代謝，例如與籠養(yǎng)相比，散養(yǎng)可以降低血清TC含量，提高雞肉品質(zhì)[33]。蘇禽6號蛋雞早期血清脂代謝指標(biāo)反映了其育成期的脂質(zhì)代謝水平，間接反映其營養(yǎng)和健康情況，為蘇禽6號蛋雞進(jìn)行早期脂質(zhì)代謝調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。

4 小結(jié)

蘇禽6號蛋雞從10周齡到18周齡發(fā)育過程中，腹脂率顯著升高，F(xiàn)FA、VTG和肝臟指數(shù)顯著降低。與海蘭褐蛋雞相比，蘇禽6號蛋雞腹脂率、血清TG含量較高，HDL含量較低，而VTG含量前期相當(dāng)，后期則明顯較低。蘇禽6號蛋雞血清TG含量與VLDLy、腹脂率顯著正相關(guān)，與FFA顯著負(fù)相關(guān)；TC、HDL和LDL三者之間均顯著正相關(guān)?？傮w上蘇禽6號蛋雞早期血脂代謝穩(wěn)定。