偽狂犬病病毒研究進(jìn)展

劉運(yùn)超，楊素珍，尚延麗，郝慧芳

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450002)

根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2022年修訂的《一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》(第573號(hào)公告)，偽狂犬病(pesudorabies)被列為三類動(dòng)物疫病，屬多種動(dòng)物共患傳染病。偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(pesudorabies virus，PRV)感染引起的一種病毒性傳染病，最早發(fā)現(xiàn)于1813年的美國(guó)牛群中，隨后該病在全球范圍內(nèi)廣泛傳播[1]。我國(guó)于1947年首次在貓?bào)w內(nèi)發(fā)現(xiàn)PRV，隨后陸續(xù)在牛、豬等家畜中發(fā)現(xiàn)該病毒。1980年代初，PRV已經(jīng)蔓延至我國(guó)18個(gè)地區(qū)，暴發(fā)PRV的豬場(chǎng)中新出生仔豬的發(fā)病率和死亡率達(dá)到70%～100%。1979年我國(guó)從匈牙利引進(jìn)gE缺失疫苗株Bartha-K61，隨著該疫苗的推廣使用，我國(guó)PRV流行在80年代末得到有效的控制。同時(shí)，許多國(guó)家開(kāi)始實(shí)施PRV清除計(jì)劃，到2000年前后，全球主要生豬養(yǎng)殖國(guó)家如加拿大、美國(guó)、新西蘭、荷蘭、瑞典、法國(guó)和德國(guó)等已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了PRV在家養(yǎng)豬群的凈化，但是在歐洲東南部、拉丁美洲、非洲和亞洲等地區(qū)偽狂犬病仍然是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病[2]。

2011年我國(guó)出現(xiàn)了PRV變異株，華北地區(qū)大部分豬場(chǎng)PRV-gE陽(yáng)性率高于50%，部分地區(qū)甚至達(dá)到90%，部分育肥豬也出現(xiàn)了典型的神經(jīng)癥狀甚至死亡[3]。研究顯示，該P(yáng)RV變異毒株在進(jìn)化上屬于基因Ⅱ型，而歐美等經(jīng)典的PRV疫苗毒株屬于基因Ⅰ型，二者之間存在著較大的遺傳距離，這可能是造成Bartha-K61經(jīng)典疫苗免疫保護(hù)力下降的主要原因[4]。PRV流行株糖蛋白gB、gE和gI等基因在野毒株和疫苗株之間的重組，增強(qiáng)了變異毒株的毒力[5]。臨床上PRV經(jīng)常與豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus 2，PCV2)，豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)和豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)等發(fā)生混合感染，使得PRV防控更加困難[6-7]?！掇r(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于推進(jìn)動(dòng)物疫病凈化工作的意見(jiàn)》(農(nóng)牧發(fā)〔2021〕29號(hào))提出以“種畜場(chǎng)為重點(diǎn)，扎實(shí)開(kāi)展豬偽狂犬病等垂直傳播性疫病凈化”工作。本文從偽狂犬病臨床特征出發(fā)，對(duì)該病病原的分子生物學(xué)特征、致病機(jī)制和疫苗的最新進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為偽狂犬病的臨床防控提供理論參考。

1 偽狂犬病的臨床特征

豬是PRV的自然宿主，但不同日齡和性別的豬感染PRV的臨床癥狀存在差異，母豬感染PRV出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎；種豬精液質(zhì)量下降，導(dǎo)致不育；育肥豬出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)障礙和體重增長(zhǎng)停滯；2周齡以下仔豬的感染死亡率可達(dá)100%[8]。2011年出現(xiàn)的PRV變異株的毒力顯著增強(qiáng)，母豬、哺乳仔豬、保育豬等受到感染時(shí)都出現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀甚至死亡；妊娠母豬主要表現(xiàn)為產(chǎn)死胎和流產(chǎn)；斷奶仔豬感染后出現(xiàn)長(zhǎng)期的、難以根除的腹瀉和神經(jīng)癥狀。偽狂犬病是多種動(dòng)物共患傳染病，除了豬，還能感染牛、羊、馬、兔、浣熊、犬、小鼠、豚鼠、狐貍等多種哺乳動(dòng)物，也可以感染一些靈長(zhǎng)類動(dòng)物如恒河猴、狨猴等[9-10]。大多數(shù)被感染的動(dòng)物在發(fā)病后24～48 h內(nèi)死亡，臨床特征通常是頭部和頸部出現(xiàn)嚴(yán)重瘙癢，并伴有自殘等精神癥狀。豬是PRV的主要儲(chǔ)存宿主，只有豬可以發(fā)生潛伏性感染。近年來(lái)，不斷有PRV感染人的報(bào)道，2020年，中國(guó)科研人員首次從一名急性腦炎患者中分離出PRV毒株(hSD-1/2019，GenBank編號(hào)MT468550)，這為人類感染PRV提供了直接證據(jù)[11]。

2 PRV分子生物學(xué)特征

2.1 PRV分類與基因組結(jié)構(gòu)

PRV學(xué)名豬皰疹病毒1型(Suidherpesvirus1)，屬于皰疹病毒科(Herpesviridae)α-皰疹病毒亞科(Alphaherpesvirinae)，水痘病毒屬(Varicellovirus)，目前僅存在一個(gè)血清型。PRV是有囊膜的雙鏈DNA病毒，基因組約142～145 kb，具有長(zhǎng)獨(dú)特區(qū)域(unique long，UL)和短獨(dú)特區(qū)域(unique short，US)，內(nèi)部重復(fù)序列(internal repeat sequence)和末端重復(fù)序列(terminal repeat sequence)位于US的兩端。PRV基因組包含了70個(gè)以上的開(kāi)放閱讀框(open reading frame，ORF)，可編碼70～100種蛋白質(zhì)。成熟的PRV粒子直徑在150～180 nm，呈圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，由囊膜、二十面體的衣殼和衣殼內(nèi)包裹的雙鏈DNA組成[12]。

成熟的PRV衣殼蛋白由150個(gè)六鄰體蛋白和12個(gè)五鄰體蛋白組裝成T=16的二十面體晶格結(jié)構(gòu)，直徑125 nm。六鄰體蛋白由VP5蛋白(UL19)和VP26蛋白(UL35)組成，形成衣殼的各個(gè)面和條棱。十二面體的頂點(diǎn)中有11個(gè)五聚體的VP5蛋白組成，而第12個(gè)頂點(diǎn)是由12個(gè)門(mén)靜脈蛋白分子組成的柱狀通道，該通道的主要功能是允許一個(gè)拷貝的PRV DNA通過(guò)，進(jìn)入組裝完成的病毒衣殼[13]。所有的六鄰體和五鄰體通過(guò)三聚體VP19C(UL38)/VP23(UL18)/VP23(UL18)連接在一起，形成完整的PRV病毒粒子[14]。

2.2 PRV主要糖蛋白

PRV糖蛋白位于囊膜上，已經(jīng)鑒定的PRV糖蛋白有11種，其中g(shù)B(UL27)、gC(UL44)、gD(US6)與病毒的免疫學(xué)特征相關(guān)，gE(US8)、gM(UL10)、gK(UL53)與病毒毒力相關(guān)，gG(US4)、gL(UL1)、gH(UL22)、gI(US7)、gN(UL49.5)與病毒的膜融合和免疫逃逸相關(guān)[15]。

糖蛋白gB由UL27編碼，主要功能是通過(guò)其融合環(huán)以膽固醇依賴的方式結(jié)合到細(xì)胞膜上，參與膜融合過(guò)程。研究表明，由于gB的突變導(dǎo)致PRV突變株JS-2012和Bartha-K61的免疫反應(yīng)產(chǎn)生較大差異，使得經(jīng)典的疫苗毒株保護(hù)力下降。gB蛋白由913個(gè)氨基酸組成，其中1～58為信號(hào)肽序列，在444位精氨酸和445位絲氨酸之間存在1個(gè)弗林蛋白酶酶切位點(diǎn)，成熟的gB蛋白被弗林蛋白酶切割成gBb和gBc 2個(gè)片段。研究表明，gB有6個(gè)N糖基化位點(diǎn)，在病毒入侵細(xì)胞和細(xì)胞融合的過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[16]。

糖蛋白gB存在多個(gè)B細(xì)胞抗原表位和中和性表位，大部分gB抗原表位處于14個(gè)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)域中，其中10個(gè)抗原域位于gB復(fù)合體的gBc上，4個(gè)抗原域位于gBb上，所有位于gBc上的表位均呈構(gòu)象依賴性，而gBb上的表位均為線性表位。在自然感染的豬和免疫的小鼠中，gBc的構(gòu)象依賴性表位在誘導(dǎo)PRV的體液免疫應(yīng)答中具有重要作用[17]。有學(xué)者鑒定出一系列PRV-gB的小鼠單克隆抗體(mAbs)，可以有效地阻斷PRV感染，在這些mAbs中，14個(gè)以補(bǔ)體依賴的方式阻斷PRV的進(jìn)入，但是mAb 1H1可以直接中和病毒，不依賴于補(bǔ)體。同時(shí)，該研究者在PRV-gB的晶體結(jié)構(gòu)上繪制了這些抗原表位的分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有的補(bǔ)體依賴性中和抗體結(jié)合位點(diǎn)均位于gB冠區(qū)，相比之下，mAb 1H1識(shí)別的表位處于一個(gè)包含融合環(huán)的亞基底部，表明mAb 1H1可能通過(guò)干擾膜融合過(guò)程中和病毒感染。有研究顯示，以昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)的重組gB蛋白為抗原制備疫苗，免疫BALB/c小鼠，首次免疫后28 d，小鼠中和抗體效價(jià)可達(dá)1∶23.25。該研究在小鼠二次免疫后7 d，采用5倍半數(shù)致死量(median lethal dose，LD50)的PRV流行毒株HeNLH/2017進(jìn)行攻毒，免疫組小鼠存活率達(dá)到100%，未免疫組小鼠全部死亡，表明gB是一種很有潛力的亞單位疫苗候選靶標(biāo)[18]。

糖蛋白gC由UL44基因編碼，由479個(gè)氨基酸組成，包含22個(gè)氨基酸的信號(hào)肽(1～22 aa)，胞質(zhì)區(qū)(23～472 aa)和跨膜區(qū)(473～479 aa)。研究表明，PRV gC在病毒對(duì)宿主細(xì)胞的穩(wěn)定吸附中起到重要作用，在沒(méi)有g(shù)C的情況下病毒的吸附效率明顯降低，gC缺陷的毒株滴度比野生病毒低3～20倍。PRV病毒與細(xì)胞的吸附有兩種方式：gC介導(dǎo)的快速吸附和不依賴gC的不穩(wěn)定慢吸附，兩種吸附方式都可以被mAb抑制[19]。研究顯示，gC也是小鼠和豬的PRV特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的主要靶抗原，抗gC的mAb可以引起抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)從而清除病毒。

糖蛋白gD由US6基因編碼，主要功能是在PRV入侵時(shí)與宿主受體結(jié)合，從而啟動(dòng)膜融合過(guò)程。gD的胞外區(qū)主要包含2個(gè)功能不同的分化結(jié)構(gòu)域。其中，HSV-1 gD的N末端(1～260 aa)主要攜帶受體結(jié)合位點(diǎn)，而C末端(260～310 aa)是預(yù)融合結(jié)構(gòu)域(pro-fusion domain，PFD)，gD結(jié)合受體以后，PFD的構(gòu)象發(fā)生變化從而發(fā)出膜融合信號(hào)。有研究者采用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)篩選到4株具有體外中和PRV感染活性的單克隆抗體，該單抗識(shí)別gD蛋白316QPAEPFP322表位[20]。Zhang等[18]以昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)的gD抗原和gB/gD混合抗原免疫仔豬，在免疫后7 d即可產(chǎn)生高滴度的中和抗體，免疫后3個(gè)月中和抗體效價(jià)仍然維持在1∶25以上；免疫后28 d，以106.6組織半數(shù)感染量劑量(tissue culture infective dose 50%，TCID50)的PRV流行毒株HeNLH/2017攻毒，結(jié)果顯示gD和gB/gD免疫組仔豬未出現(xiàn)發(fā)燒、排毒、gE抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)和病理?yè)p傷等癥狀。

糖蛋白gE由US8編碼，由579個(gè)氨基酸組成，屬于Ⅰ型糖蛋白，從功能上可以分為四部分：N端的信號(hào)肽、胞內(nèi)區(qū)、跨膜區(qū)和胞外區(qū)。gE是重要的毒力基因，也是PRV毒力傳播的重要媒介，缺失gE導(dǎo)致病毒對(duì)宿主的感染能力降低。gE含有2個(gè)潛在的酪氨酸內(nèi)化基序，分別起始于478位和517位氨基酸，參與感染細(xì)胞與臨近細(xì)胞的融合，促進(jìn)病毒在細(xì)胞之間傳播。gE不是病毒完成復(fù)制的必要蛋白，因此gE缺失毒株很早就被用于弱毒疫苗開(kāi)發(fā)，同時(shí)gE可以作為一種抗體檢測(cè)靶標(biāo)用于區(qū)分疫苗株和野毒株感染[21]。

糖蛋白gM由UL10基因編碼，長(zhǎng)度為1 185 bp，由394個(gè)氨基酸組成，包括8個(gè)潛在跨膜區(qū)。研究表明gM和gN以二硫鍵的方式連接在一起組成異源二聚體，gM輔助gN在病毒中的定位。有研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)分別敲除編碼gM、TK等蛋白編碼基因，然后在小鼠感染模型中評(píng)估這些突變對(duì)PRV致病性的影響。結(jié)果顯示，敲除TK和gM蛋白編碼基因之后，病毒的毒力明顯下降，表明gM也是影響PRV毒力的重要蛋白，且gM蛋白缺失對(duì)PRV毒力的影響僅次于TK缺失株[22]。

糖蛋白gK由UL53基因編碼，長(zhǎng)度為942 bp，由313個(gè)氨基酸組成。成熟的gK分子量約為36 kDa，包含高甘露糖和N-連接聚糖復(fù)合物，是PRV進(jìn)入胞內(nèi)傳播所必需的。gK是重要的毒力基因，gK缺失株的子代病毒感染滴度顯著降低。

糖蛋白gG由US4基因編碼，長(zhǎng)度為1 497 bp，由498個(gè)氨基酸組成。gG是PRV感染的細(xì)胞上清液中含量最豐富的病毒蛋白，可以和趨化因子以很高的親和力結(jié)合。gG與趨化因子結(jié)合抑制了趨化因子介導(dǎo)的細(xì)胞遷移，gG基因缺失PRV毒株也喪失與趨化因子結(jié)合活性，表明gG參與了PRV的免疫逃逸。因此，gG雖然不是PRV的毒力基因，gG缺失毒株作為候選疫苗可以提升免疫原性[23]。

糖蛋白gH由UL22基因編碼，長(zhǎng)度為2 061 bp，由686個(gè)氨基酸組成。gH由N端胞外區(qū)和胞質(zhì)尾部區(qū)域組成，是PRV誘導(dǎo)膜融合的關(guān)鍵糖蛋白，在入侵細(xì)胞以及病毒傳播過(guò)程中起重要作用。研究表明gH和gL通常以異源二聚體的形式，直接結(jié)合gB從而激活gB的膜融合功能[24]。

糖蛋白gL由UL1基因編碼，長(zhǎng)度為471 bp，由156個(gè)氨基酸組成。gL與gH形成的異源二聚體，在PRV的感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用，也是病毒在細(xì)胞之間傳播所必需的。有研究顯示，抗gL多抗血清可以中和PRV粒子的感染，但不能阻斷PRV在細(xì)胞間的傳播[25]。

糖蛋白gI由US7基因編碼，長(zhǎng)度為1 056 bp，由351個(gè)氨基酸組成，屬于Ⅰ型跨膜蛋白，有6個(gè)N-糖基化位點(diǎn)。研究表明gE和gI可以組成異源二聚體，該二聚體的主要功能是間接地促進(jìn)或穩(wěn)定US9和驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員1A(kinesin family member 1A，KIF1A)之間的相互作用。這3種膜蛋白是PRV病毒粒子在神經(jīng)元有效順行傳播的關(guān)鍵蛋白。

糖蛋白gN由UL49.5基因編碼，長(zhǎng)度為297 bp，由98個(gè)氨基酸組成。gN由N端信號(hào)肽、C端胞質(zhì)尾、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔區(qū)和跨膜區(qū)組成。gN可以阻止病毒肽通過(guò)TAP轉(zhuǎn)運(yùn)從而阻斷肽負(fù)載復(fù)合物將病毒肽轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，使得MHC I類分子無(wú)法在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上識(shí)別病毒多肽，進(jìn)而逃避宿主天然免疫[26]。

3 PRV的致病機(jī)制

3.1 PRV的感染過(guò)程

PRV在呼吸道的復(fù)制受多種因素影響，如病毒接種途徑、接種滴度、動(dòng)物年齡和免疫狀況等。PRV首先感染鼻腔、扁桃體和口咽等上呼吸道，主要在呼吸道上皮細(xì)胞復(fù)制，并在24 h內(nèi)穿過(guò)基膜，以斑片狀方式感染下層組織中的所有細(xì)胞類型(纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞)。在肺部，PRV在所有上皮細(xì)胞類型中復(fù)制，并向斑塊方向擴(kuò)散，肺巨噬細(xì)胞也被鑒定為感染的靶細(xì)胞[27]。在PRV感染后2～5 d，病毒以細(xì)胞傳播的方式擴(kuò)散到整個(gè)黏膜上，并深入黏膜下層。病毒復(fù)制誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞在感染部位募集，吞噬細(xì)胞開(kāi)始攻擊感染區(qū)域，由此造成的大規(guī)模破壞會(huì)引起呼吸道癥狀，如打噴嚏、咳嗽、流鼻涕和呼吸障礙。在后續(xù)的入侵過(guò)程中，病毒在神經(jīng)元、血液和淋巴管中傳播，并到達(dá)大腦、淋巴組織和妊娠中的子宮等重要的靶器官。在PRV感染豬的2～7 d，可以檢測(cè)到α干擾素(IFN-α)，且濃度與鼻內(nèi)病毒載量成反比。感染后6～7 d，可以檢測(cè)到體液免疫和局部細(xì)胞免疫，病毒粒子被中和抗體結(jié)合而失去感染活性，感染病毒的細(xì)胞被吞噬細(xì)胞清除。特異性免疫應(yīng)答啟動(dòng)后，機(jī)體開(kāi)始進(jìn)入恢復(fù)階段，在鼻腔接種后13 d和扁桃體接種后18 d能夠完全消除PRV病毒粒子[28]。

3.2 PRV的入侵

PRV的潛伏期一般為3～6 d，短期有36 h，長(zhǎng)期可以達(dá)到10 d。PRV主要是通過(guò)呼吸道感染，首先在鼻咽部、扁桃體中增殖，經(jīng)嗅神經(jīng)、吞咽神經(jīng)或三叉神經(jīng)到達(dá)腦和脊髓，也可以通過(guò)鼻黏膜經(jīng)呼吸道感染肺泡細(xì)胞。有囊膜的病毒通常依賴于細(xì)胞融合來(lái)完成感染，病毒穿過(guò)雙層質(zhì)膜把基因組DNA傳遞到胞內(nèi)完成感染過(guò)程。在膜融合過(guò)程中，病毒囊膜與細(xì)胞質(zhì)膜融合，從而使DNA基因組進(jìn)入到宿主胞內(nèi)。膜融合主要通過(guò)插入融合肽完成，與宿主細(xì)胞相互作用引發(fā)病毒膜表面蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生變化，導(dǎo)致囊膜上效應(yīng)蛋白的一段多肽鏈進(jìn)入靶細(xì)胞膜。病毒的融合肽通常埋藏在病毒粒子表面融合蛋白的寡聚界面上，并在融合過(guò)程中通過(guò)蛋白構(gòu)象變化暴露出來(lái)[17]。

3.3 PRV的膜融合

PRV囊膜與宿主的細(xì)胞膜或囊泡的融合是PRV進(jìn)入易感細(xì)胞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，這個(gè)過(guò)程涉及到gB、gD、gH和gL等糖蛋白的參與。gD胞外區(qū)由兩個(gè)結(jié)構(gòu)和功能都不同的結(jié)構(gòu)域組成，包括N端的受體結(jié)合域和C端的前融合結(jié)構(gòu)域(PFD)，gD在結(jié)合受體以后，其構(gòu)象產(chǎn)生變化使其C端的PFD顯露出來(lái)，從而釋放出膜融合信號(hào)，激活膜融合，最終由gB在gH和gL的幫助下完成膜融合過(guò)程[29]。gD是膜融合的啟動(dòng)者，gB為膜融合過(guò)程的直接執(zhí)行者，gH和gL為膜融合過(guò)程的輔助者，4個(gè)蛋白缺一不可。研究表明gD結(jié)構(gòu)中包含了類似于HSV-gD的由N-和C-末端延伸包裹的IgV樣的典型折疊結(jié)構(gòu)。雖然已經(jīng)鑒定出幾種受體，例如3-O-磺化-乙酰肝素(3-O-S-HS)，皰疹病毒進(jìn)入介體A(HveA，也稱為HVEM)，TNF受體相關(guān)蛋白和Nectin-1等。然而，只有豬源Nectin-1與人源Nectin-1具有類似的結(jié)合gD的親和力，且都參與了gD介導(dǎo)的細(xì)胞融合。同時(shí)，PRV-gD/SW-Nectin-1的復(fù)合結(jié)構(gòu)表明：受體Nectin-1上的K61、T63、Q64、K75、Q76、N77、I80、N82、M85、S88、L90、A91、E125、A127、T128、F129、P130、N133和E135等氨基酸是Nectin-1和gD結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)，而這些氨基酸在許多物種的Nectin-1受體上(豬、人、鼠、牛、羊、山羊、貓、犬和蝙蝠)都是十分保守的。這表明PRV存在與這些物種的Nectin-1受體結(jié)合并且利用其完成細(xì)胞的入侵的可能性，提示PRV存在跨物種感染的風(fēng)險(xiǎn)[30]。因此，通過(guò)阻斷gD介導(dǎo)的病毒囊膜與細(xì)胞膜融合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)PRV感染過(guò)程的阻斷，對(duì)開(kāi)發(fā)抗PRV特效藥物具有重要價(jià)值。

3.4 PRV的細(xì)胞傳播

皰疹病毒通過(guò)感染細(xì)胞病灶實(shí)現(xiàn)在體內(nèi)和體外的傳播，這種傳播方式逃避了抗體、補(bǔ)體、酶以及吞噬細(xì)胞的病毒清除作用。這種傳播方式主要有4種機(jī)制[31]：第一種情況是，PRV從已經(jīng)感染的細(xì)胞直接傳播到臨近的未感染細(xì)胞，這一過(guò)程由表達(dá)在感染細(xì)胞膜上的病毒糖蛋白及未感染細(xì)胞的質(zhì)膜上的受體介導(dǎo)；第二種情況是，被PRV侵染的懸浮液里的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)能夠在其表面表達(dá)PRV包膜蛋白，通過(guò)這些蛋白附著并與未感染的鄰近細(xì)胞融合，這一過(guò)程的機(jī)制與病毒細(xì)胞的附著和融合非常相似；第三種情況是，PRV病毒誘導(dǎo)的突起形成后，可能向較遠(yuǎn)處細(xì)胞而非臨近的細(xì)胞傳播，這一過(guò)程涉及到細(xì)胞和病毒成分之間復(fù)雜的相互作用，具體機(jī)制目前還不清楚，推測(cè)該過(guò)程可能與PRV感染引起的肌動(dòng)蛋白重組，應(yīng)力纖維分解，并形變成為不同的細(xì)胞突起，與鄰近細(xì)胞接觸有關(guān)；第四種情況是，PRV在細(xì)胞黏附分子介導(dǎo)的附著作用下與遠(yuǎn)處的細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞間傳播。PRV感染的單核細(xì)胞暴露于病毒特異性抗體后，會(huì)將其病毒糖蛋白與它們對(duì)應(yīng)的MHC I類分子一起內(nèi)化，使感染細(xì)胞無(wú)法被免疫系統(tǒng)的不同成分有效識(shí)別和消除。這些免疫掩蔽的單核細(xì)胞使用黏附分子wCD11R3和CD18特異性黏附內(nèi)皮細(xì)胞，隨后是病毒介導(dǎo)的膜融合過(guò)程，導(dǎo)致PRV向內(nèi)皮細(xì)胞擴(kuò)散[32-33]。有研究顯示，以15 mg/kg劑量接種PRV中和性單克隆抗體10B6，可以抵抗致死劑量的PRV感染。進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示，10B6可以抑制PRV-gD與細(xì)胞膜上的Nectin-1結(jié)合，進(jìn)而抑制PRV對(duì)易感細(xì)胞的吸附，阻斷病毒在細(xì)胞間的傳播，表明Nectin-1也在PRV的細(xì)胞傳播中發(fā)揮重要作用[20]。

4 PRV疫苗研究

接種疫苗是防控PRV感染的唯一有效手段。根據(jù)《國(guó)家獸藥基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)》(http://www.ivdc.org.cn/xxgk/syzwglpt/)統(tǒng)計(jì)，2003年至今共有8個(gè)PRV疫苗獲得新獸藥注冊(cè)審批，其中弱毒疫苗5個(gè)，滅活疫苗3個(gè)。2013年至今，共有41個(gè)PRV疫苗獲得臨床試驗(yàn)審批，其中有21個(gè)弱毒/基因缺失疫苗，16個(gè)滅活疫苗和4個(gè)亞單位疫苗?；蛉笔б呙缗c相應(yīng)的鑒別診斷試劑盒聯(lián)合應(yīng)用，為偽狂犬病的預(yù)防、控制和凈化提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。

我國(guó)在20世紀(jì)70年代末由哈爾濱獸醫(yī)研究所從匈牙利引進(jìn)了偽狂犬疫苗Bartha-k61株，為我國(guó)PRV感染的防控做出了重要貢獻(xiàn)[34]。2011年，國(guó)內(nèi)出現(xiàn)了PRV變異株，Bratha-K61株的免疫保護(hù)率下降，國(guó)內(nèi)多個(gè)研究團(tuán)隊(duì)迅速開(kāi)發(fā)了針對(duì)變異株的基因缺失疫苗[35]。有學(xué)者報(bào)道了針對(duì)PRV變異株的基因缺失疫苗PRV-TJ-ΔgE，在豬上可以保護(hù)105TCID50PRV-TJ野毒株感染[36-37]。隨后有研究報(bào)道，基因缺失疫苗HN1201-ΔTK/gE/gI在豬上可以保護(hù)107TCID50的HN1201毒株的感染[38-39]；基因缺失疫苗RSMX-ΔTK/gE/gI可以保護(hù)107TCID50SMX毒株的感染[40-41]；基因缺失疫苗JS-2012-ΔgE/gI不僅可以保護(hù)105TCID50PRV JS-2012毒株的感染，同時(shí)可以保護(hù)105TCID50的經(jīng)典毒株SC的感染[42]。也有研究顯示，經(jīng)典的Bartha-k61疫苗在加強(qiáng)接種劑量后可以保護(hù)生長(zhǎng)中的豬免受PRV變異株的感染[43-44]。隨著針對(duì)變異株的PRV疫苗陸續(xù)上市，疫情得到有效控制。目前，基因缺失弱毒疫苗仍然是臨床防控PRV的主要手段。

滅活疫苗和亞單位疫苗具有更好的生物安全性和更長(zhǎng)的免疫持續(xù)期，降低了疫苗的免疫頻率，減輕了養(yǎng)殖企業(yè)的免疫壓力，是PRV疫苗研究的熱點(diǎn)[45-46]。目前，已經(jīng)獲得新獸藥注冊(cè)審批的PRV滅活疫苗主要有中國(guó)農(nóng)科院上海獸醫(yī)研究所研發(fā)的JS-2012-ΔgI/gE株基因缺失滅活疫苗和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)研發(fā)的HNX-12株gE基因缺失滅活疫苗。PRV亞單位疫苗主要是以重組表達(dá)的PRV糖蛋白gB、gC和gD為抗原，配合佐劑制備而成的疫苗[47-48]。目前，尚無(wú)PRV亞單位疫苗獲得新獸藥注冊(cè)審批，但是僅2022年就有3個(gè)PRV亞單位疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，可見(jiàn)該技術(shù)路線的高熱度和認(rèn)可度。不同技術(shù)路線的PRV疫苗具有各自的優(yōu)勢(shì)，弱毒疫苗免疫起效更快，滅活疫苗和亞單位疫苗則具有更長(zhǎng)的免疫持續(xù)期，序貫免疫或許會(huì)成為PRV疫苗接種的有效方式。

5 總結(jié)與展望

偽狂犬病是一種由口、鼻傳播的病毒性傳染病，能夠感染各年齡段豬，導(dǎo)致豬的生長(zhǎng)停滯、繁殖失敗和仔豬死亡。目前已經(jīng)鑒定的PRV糖蛋白有11種，在介導(dǎo)病毒與細(xì)胞膜融合、病毒在神經(jīng)元中的傳導(dǎo)和免疫逃逸方面發(fā)揮重要作用。PRV的感染首先發(fā)生在上呼吸道，經(jīng)膜融合進(jìn)入呼吸道上皮細(xì)胞，隨后沿神經(jīng)元進(jìn)行傳導(dǎo)或者直接進(jìn)入肺泡進(jìn)行復(fù)制。近些年來(lái)，國(guó)內(nèi)PRV流行株gE基因缺失疫苗和配套診斷試劑的研發(fā)，為穩(wěn)定豬偽狂犬病防控和促進(jìn)生豬養(yǎng)殖業(yè)健康生產(chǎn)發(fā)揮重要作用。然而，我國(guó)生豬養(yǎng)殖體量大，養(yǎng)殖情況復(fù)雜多樣，管理水平參差不齊，加之PRV能夠感染多種動(dòng)物，徹底凈化PRV任重道遠(yuǎn)。因此，在加強(qiáng)免疫與臨床檢測(cè)、促進(jìn)PRV無(wú)疫區(qū)建設(shè)的同時(shí)，應(yīng)積極開(kāi)展PRV致病機(jī)制研究，為PRV臨床凈化工作提供理論指導(dǎo)和技術(shù)支撐。