雞滑液囊支原體病的診斷及防控

石銀山

（宣漢縣漆樹(shù)土家族鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，四川 達(dá)州 635000）

滑液囊支原體（Mycoplasma synoviae，MS）、雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）和火雞支原體（Mycoplasma meleagridis，MM） 是目前臨床上對(duì)家禽危害最嚴(yán)重的支原體類致病微生物[1]。MS 又稱為滑液囊霉形體、滑膜支原體，主要易感動(dòng)物是雞和火雞等。感染后可引起雞亞臨床呼吸道癥狀、滑膜炎、關(guān)節(jié)炎及氣囊炎，還會(huì)導(dǎo)致雞蛋尖端異常和產(chǎn)蛋率下降。雞滑液囊支原體病在世界各地廣泛流行，在我國(guó)各地雞場(chǎng)也存在不同程度感染。目前該病已成為制約我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的一種重要疫病。

1 病原學(xué)

MS 屬于軟膜體綱支原體目支原體科支原體屬成員，于1964 年被Olson 發(fā)現(xiàn)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的體積最小的原核細(xì)胞型微生物，直徑為300～500 nm，革蘭染色呈陰性[2]。電鏡下觀察MS 呈圓形或梨形，無(wú)細(xì)胞壁，外面包裹3 層膜，內(nèi)部含有顆粒性核糖體，以芽生或二分裂法進(jìn)行增殖。固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)1 周后，低倍顯微鏡下可見(jiàn)菌落多呈光滑、透明的露珠狀或無(wú)中心凹陷的“荷包蛋樣”。最佳培養(yǎng)溫度為37 ℃，最適pH值為7.6～7.8。高溫或酸性環(huán)境會(huì)對(duì)其活性有影響，對(duì)外界環(huán)境抵抗力較弱，多種消毒劑都能將其殺死[3-4]。但在低溫環(huán)境中可長(zhǎng)期存活，于-80 ℃條件下能保存1 年以上，制備成凍干菌種可保存10 年以上[5-6]。

2 流行病學(xué)

MS 的易感動(dòng)物是雞、火雞和珍珠雞等，不同日齡及品種的雞均可被感染，3～7 周齡雛雞發(fā)病率最高，對(duì)MS 的抵抗力會(huì)隨著周齡的增長(zhǎng)而增強(qiáng)。MS 感染呈世界性流行，一年四季均可發(fā)病，氣溫驟降或寒冷季節(jié)發(fā)病率顯著升高，最高可達(dá)90%。MS 既可以通過(guò)呼吸道方式進(jìn)行水平傳播，又可以經(jīng)卵進(jìn)行垂直傳播，主要傳染源為病雞和隱性感染雞。Feberwee 等[7]發(fā)現(xiàn)，MS 通過(guò)呼吸道氣溶膠的方式傳播，最遠(yuǎn)蔓延距離為16.5 m，通常同一舍內(nèi)的雞感染率為100%。成年雞感染MS 后通常不表現(xiàn)臨床癥狀，但其分泌物和排泄物中含有大量病原體，這也是該病傳染性強(qiáng)且防治困難的主要因素之一。

3 臨床癥狀及病理變化

MS 感染后潛伏期通常為11～21 d，雛雞經(jīng)卵垂直感染后潛伏期較短。病雞最典型的臨床癥狀為跛行、關(guān)節(jié)腫脹及肌腱發(fā)炎的滑膜炎癥?；ぱ椎陌l(fā)病率為2%～75%。雛雞感染主要表現(xiàn)為雞冠蒼白、生長(zhǎng)遲緩。隨著病情的發(fā)展，病雞出現(xiàn)胸骨突出、足墊腫大、腳關(guān)節(jié)腫脹以致跛行及皮下水腫等癥狀；有的病雞會(huì)出現(xiàn)癱瘓[8]。蛋雞感染后主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率下降，蛋殼變薄、透明度增加、出現(xiàn)裂紋和斷裂。

感染初期，剖解病死雞，腫脹部位可見(jiàn)大量黏稠滲出液；感染中期，切開(kāi)腫脹部位可見(jiàn)大量膿性滲出物，有的可見(jiàn)黃色黏稠膠胨樣物質(zhì)或黃白色干酪樣物質(zhì)。內(nèi)臟器官通常不出現(xiàn)特征性病變。觀察組織學(xué)病變，會(huì)發(fā)現(xiàn)滑液囊腔和腱鞘有異嗜性細(xì)胞浸潤(rùn)，隨著病情的發(fā)展逐漸變厚，由于漿細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，腱鞘滑膜層會(huì)出現(xiàn)纖維素性樣變。部分雞肝脾腫大且紋路明顯，病理組織切片可見(jiàn)肝細(xì)胞壞死，白髓淋巴小結(jié)中淋巴細(xì)胞減少。

4 診斷方法

MS 的診斷方法主要分為病原的分離鑒定、血清學(xué)方法和病原的分子生物學(xué)檢測(cè)。

4.1 病原分離鑒定

MS 的分離和鑒定是診斷該病的“金標(biāo)準(zhǔn)”。采集急性發(fā)病雞的病料，接種于含有青霉素的支原體液體培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)1 周左右，當(dāng)培養(yǎng)基顏色變黃時(shí)，將培養(yǎng)液稀釋后涂于支原體瓊脂培養(yǎng)基中，在顯微鏡下觀察其生長(zhǎng)狀況，“荷包蛋”菌落是其特征性標(biāo)志[9]。該方法可信度極高，但MS 病原培養(yǎng)周期長(zhǎng)，培養(yǎng)過(guò)程需要較高的營(yíng)養(yǎng)成分，所以不是目前MS 臨床檢測(cè)的常用方法。

4.2 血清學(xué)方法

血清學(xué)方法主要包括血清平板凝集試驗(yàn)（SPA）、血凝抑制試驗(yàn) （HI） 和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。SPA 操作簡(jiǎn)單，敏感性強(qiáng)，無(wú)需專業(yè)儀器設(shè)備，但由于雞群使用的是滅活疫苗，存在交叉反應(yīng)以及污染，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。HI 主要用于檢測(cè)血清中的IgG 抗體，準(zhǔn)確性及特異性高，易于操作，但耗時(shí)較長(zhǎng)，且IgG 抗體出現(xiàn)較晚，通常于MS 感染后7 d 才出現(xiàn)，因此HI對(duì)于MS 感染前期不適用，具有一定的局限性。經(jīng)過(guò)眾多研究發(fā)現(xiàn)，ELISA 特異性越來(lái)越強(qiáng)，同時(shí)可以檢測(cè)大量的樣品，敏感性和準(zhǔn)確性高，且檢測(cè)結(jié)果可定量，可用于血清、蛋清和卵黃中MS 抗體的檢測(cè)，是目前應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方式[10]。

4.3 分子生物學(xué)檢測(cè)

分子生物學(xué)技術(shù)是目前使用較為廣泛的檢測(cè)方法。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是常用方法之一，具有高靈敏度和高特異性的特點(diǎn)?？煽焖贆z測(cè)樣品中MS 的DNA，與病原分離鑒定及血清學(xué)方法相比，大大縮短了診斷時(shí)間，且準(zhǔn)確性也高。多重PCR 技術(shù)的應(yīng)用，不僅能對(duì)MS 的感染情況進(jìn)行診斷，還能快速區(qū)分MG 和MS。郭亞男等[11]建立的多重套式PCR 方法，在臨床中檢測(cè)樣本的靈敏度與病原分離鑒定沒(méi)有區(qū)別，尤其是面對(duì)沒(méi)有明顯癥狀或多種病原混感時(shí)，該方法可以節(jié)約檢測(cè)成本和時(shí)間，有效提升診斷效率。

5 防控措施

雞滑液囊支原體病的防治主要通過(guò)種源凈化、藥物治療和疫苗免疫3 種途徑。

5.1 種源凈化

MS 可以通過(guò)垂直傳播，所以凈化傳染源，建立陰性祖代群，從它們的遺傳系根除MS，可有效減少M(fèi)S感染。種源凈化操作周期長(zhǎng)且成本較高，若操作過(guò)程中管理不當(dāng)，極易返陽(yáng)。寧宜寶等[12]研究發(fā)現(xiàn)，將雞蛋置于45 ℃環(huán)境中處理14 h 后，支原體被有效殺滅。因此在生產(chǎn)過(guò)程中要強(qiáng)化管理并制定完善的生物安全措施，可達(dá)到凈化種群的目的，從而有效控制MS。

5.2 藥物治療

藥物治療可以有效降低MS 傳播，及時(shí)減輕臨床癥狀，從而減輕該病對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的影響。由于MS 沒(méi)有細(xì)胞壁，所以對(duì)β 酰胺類抗生素不敏感。體外試驗(yàn)表明，MS 對(duì)氯霉素、恩諾沙星、泰樂(lè)菌素、諾氟沙星和鏈霉素等抗生素較為敏感[11]。感染初期，可在飼料中加入0.05～0.1 g/kg 氯霉素，連續(xù)用藥5～7 d，可有效減少病雞通過(guò)呼吸道傳播到鄰近雞群的風(fēng)險(xiǎn)。不同菌株對(duì)藥物敏感性不同，并且連續(xù)使用抗生素可導(dǎo)致MS 出現(xiàn)耐藥性，因此抗生素藥物在預(yù)防和控制MS 感染時(shí)雖然有一定的效果，但不能徹底消除雞群感染MS 的現(xiàn)象。

5.3 疫苗免疫

疫苗免疫是預(yù)防和控制雞滑液囊支原體病的有效手段。疫苗包括MS 滅活疫苗和活疫苗兩類。MS 滅活疫苗具有安全性好、不散毒和針對(duì)流行毒株等特點(diǎn)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答。MS 滅活疫苗在產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答的同時(shí)也可產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。目前，可供選擇的MS 滅活疫苗種類不多，實(shí)現(xiàn)商品化生產(chǎn)的有青島易邦生物工程有限公司研制的YBF-MS1株滅活疫苗和江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院使用本土分離株HN01 研制的滅活疫苗。常用的弱毒疫苗有澳大利亞MS-H 疫苗株，但是該疫苗對(duì)已感染MS 雞群沒(méi)有免疫保護(hù)效果，接種后反而會(huì)使臨床癥狀更為嚴(yán)重。在生產(chǎn)實(shí)踐中，活疫苗操作條件和要求較高，可通過(guò)點(diǎn)眼滴鼻、噴霧、氣管注射和胸腔注射等方式進(jìn)行免疫接種。其中，點(diǎn)眼滴鼻免疫方法個(gè)體免疫質(zhì)量較高且易于控制，但操作過(guò)于煩瑣。噴霧接種適用于集中飼養(yǎng)。丁美娟等[13]通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)噴霧免疫和點(diǎn)眼免疫2 種途徑進(jìn)行免疫，免疫效果無(wú)顯著差異。