腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞自身調(diào)控及中藥成分對(duì)其調(diào)控的研究進(jìn)展

呼 宇,曹寒冰,龔政艷,朱 曼,代秉玲,張彥民

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，西安 710061

腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment， TME）由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞、周圍的血管及細(xì)胞外基質(zhì)組成［1］。隨著腫瘤的惡化，腫瘤微環(huán)境也隨之發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，尤其是免疫微環(huán)境。TME中的免疫細(xì)胞功能被抑制，從而使腫瘤細(xì)胞得到保護(hù)，實(shí)現(xiàn)了免疫逃逸，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。TME 中浸潤的免疫細(xì)胞在腫瘤的生長和惡化過程中起著舉足輕重的作用。因此，了解TME 中免疫細(xì)胞的變化、改善免疫抑制、增強(qiáng)抗腫瘤免疫治療已成為抗腫瘤研究的重要方向之一，而免疫治療也成為繼手術(shù)、放療、化療外的又一種重要的抗腫瘤治療手段。

隨著對(duì)中醫(yī)探索的不斷深入，越來越多的研究證實(shí)了中藥在腫瘤免疫治療方面起著重要的作用，中藥成分如多糖類、黃酮類等化合物抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)機(jī)制也逐漸得到明確。中藥的優(yōu)勢(shì)是可以提高患者的生活質(zhì)量、提高患者機(jī)體的免疫力、降低藥物毒性和不良反應(yīng)等［2］。因此，在臨床中中藥作為抗腫瘤輔助用藥已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用。本文對(duì)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞活化和調(diào)控進(jìn)行歸納、總結(jié)，并闡述中藥對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，為中藥抗腫瘤機(jī)制研究提供依據(jù)。

1 免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中調(diào)控機(jī)制的研究

1.1 T 淋巴細(xì)胞活化和功能調(diào)控的研究

TME 中T 細(xì)胞亞群種類繁多，包括細(xì)胞毒性T 細(xì)胞（cytotoxic T cell， CTL）、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cells， Tregs）、輔助性T 細(xì)胞（helper T cell， Th）等。Th1 和Th2 細(xì)胞能分泌眾多細(xì)胞因子，分別參與到細(xì)胞免疫和體液免疫中，Th17 細(xì)胞具有雙重作用，既可以抗腫瘤又能在某些特定情況下促進(jìn)腫瘤發(fā)展［3］。但在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮腫瘤殺傷作用的主要是CTL。在腫瘤微環(huán)境中CTL 主要通過釋放顆粒酶和穿孔素、激活Fas/Fas蛋白配體（Fas ligand， FasL）通路以及分泌細(xì)胞毒性因子這3種方式殺傷腫瘤細(xì)胞［4］。

T 細(xì)胞的活化需要抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cell， APC）呈遞抗原，并在抗原分化簇28（cluster of differentiation 28， CD28）、信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子（signalling lymphocyte activation molecular，SLAM）和腫瘤壞死因子受體超家族（tumor necrosis factor receptor superfamily， TNFRSF）等共刺激分子以及相關(guān)細(xì)胞因子的共同作用下激活信號(hào)，通過下游磷脂酰肌醇3- 激酶（phosphatidyl inositol3-kinase，PI3K）、Ras 蛋白、蛋白激酶B（alkaline protein kinases，Akt）、細(xì)胞分裂周期42 蛋白（cell division cycle 42，CDC42）等通路調(diào)控核內(nèi)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase 1/2， ERK1/2）、銜接蛋白1/銜接蛋白2（adaptor protein， AP1/AP2）、雷帕霉素靶蛋白（mammal target of rapamycin， mTOR）、核因子κB（nuclear factor-κB， NF-κB）、活化T 細(xì)胞核因子（nuclear factor of activated T cell， NFAT）等蛋白作用，刺激細(xì)胞生長、激活效應(yīng)器功能并維持細(xì)胞存活［5-6］。CD8+T 細(xì)胞活化過程中胞內(nèi)的代謝變化會(huì)影響抗腫瘤功能。未成熟的CD8+ T 細(xì)胞遇到抗原活化后轉(zhuǎn)為糖酵解代謝方式以維持效應(yīng)器功能。但胃癌中腫瘤表面的CD155 與CD8+T 細(xì)胞表面的T 細(xì)胞免疫球蛋白和ITIM 結(jié)構(gòu)域（T cell immunoglobulin and ITIM domain， TIGIT）受體結(jié)合后會(huì)抑制T 細(xì)胞葡萄糖攝取和代謝，降低Akt 和mTOR 的磷酸化，使T細(xì)胞功能衰竭［7］。然而，高度糖酵解又會(huì)影響CD8+T 細(xì)胞抗腫瘤功能和長期記憶細(xì)胞的形成，而在2-脫氧葡萄糖（2-deoxy-D-glucose， 2DG）處理后，T 細(xì)胞可以分泌更多的干擾素-γ（interferon-γ， IFN-γ）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α），促進(jìn)叉頭框蛋白O1（forkhead box O1， Foxo1）向核轉(zhuǎn)移，加快記憶CD8+ T 細(xì)胞的形成。在這一過程中與葡萄糖攝取和糖酵解相關(guān)的途徑受到影響，腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP activated proteinkinase，AMPK）的磷酸化增強(qiáng)，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α， HIF-1α）表達(dá)下調(diào)［8］。見圖1。糖酵解代謝的轉(zhuǎn)換也會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)氨基酸的代謝從而影響T 細(xì)胞的增殖和效應(yīng)器功能。當(dāng)胞內(nèi)的天冬酰胺（asparagine， Asn）耗盡時(shí)CD8+T 細(xì)胞的活化會(huì)被抑制。Asn 可以結(jié)合SRC 家族蛋白酪氨酸激酶LCK，并在Tyr 394 和Tyr 505 處協(xié)調(diào)LCK 磷酸化，從而導(dǎo)致LCK 活性增強(qiáng)和T 細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［9］。CD8+T 細(xì)胞的抗免疫功能失效包含多方面的原因，如：抗原遞呈細(xì)胞的能力減弱無法刺激T 細(xì)胞分化，或者是腫瘤通過免疫檢查點(diǎn)程序性死亡受體配體1（programmed cell death ligand-1， PD-L1）、細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4， CTLA-4）、T 淋巴細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3， TIM-3）、淋巴細(xì)胞活化基因-3（lymphocyte activation gene-3， LAG3）、TIGIT 等作用最終逃脫了T 細(xì)胞的監(jiān)控和殺傷［10］。以阻斷PD-L1 和CTLA-4 為代表的免疫檢查點(diǎn)阻斷治療方案開啟了腫瘤免疫治療的新篇章，但其在臨床上的治療效果并不理想，應(yīng)用范圍有限。因此，急需尋找新的免疫檢查點(diǎn)，增強(qiáng)抗腫瘤治療效果和治療范圍。

在腫瘤微環(huán)境中Tregs 可以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫。Tregs 雖然是預(yù)防自身免疫疾病必不可少的，但它會(huì)抑制抗腫瘤免疫效應(yīng)。CD8+T 細(xì)胞功能也會(huì)直接或間接受到Tregs 的影響。

Tregs 可根據(jù)其表面標(biāo)志物不同細(xì)分為不同亞型，表現(xiàn)出強(qiáng)免疫抑制功能的Tregs 表型為CD4+CD25+Foxp3+［11］。Foxp3 即叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子，其是CD4 CD25 Treg，特異性分子標(biāo)志物，可調(diào)控Tregs 的功能，當(dāng)Foxp3 持續(xù)表達(dá)才能維持完整的Tregs 的抑制能力［12］。Tregs 在腫瘤微環(huán)境中主要通過以下幾種方式發(fā)揮免疫抑制作用：分泌抑制性細(xì)胞因子，如TGF-β、白細(xì)胞介素（interleukin， IL）-10、IL-35 等抑制CD8+T 細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（dendritic cells， DCs），降低抗腫瘤免疫［13］；通過顆粒酶B 和穿孔蛋白裂解效應(yīng)T 細(xì)胞；剝奪腫瘤微環(huán)境中的IL-2，減少效應(yīng)T 細(xì)胞對(duì)其的攝取，抑制效應(yīng)細(xì)胞增殖［14］；胞外分泌大量酶促進(jìn)腺苷生成，結(jié)合效應(yīng)T 細(xì)胞表面的腺苷 A2A 受體（adenosine A2A receptor，A2AR）發(fā)揮抑制作用［15］；通過免疫檢查點(diǎn)調(diào)控腫瘤微環(huán)境中其他免疫細(xì)胞，如通過CTLA-4 和LAG3下調(diào)DC 功能，或經(jīng)由程序性死亡受體1（programmed death-1，PD-1） / PD-L1 和CD80 / CTLA-4 軸與髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells， MDSC）協(xié)同增強(qiáng)抑制作用［12］。因此，阻斷以上Tregs 的作用途徑就可以有效逆轉(zhuǎn)其免疫抑制功能。另外，目前研究表明，激活Tregs 表面Toll 樣受體8（Toll-like receptor 8， TLR8）信號(hào)會(huì)調(diào)節(jié)Tregs細(xì)胞中的mTOR-HIF1α軸及其下游糖酵解程序，導(dǎo)致Tregs 抑制功能的逆轉(zhuǎn)［16］。以上研究結(jié)果表明，能量代謝也可以成為靶向Tregs 的抗腫瘤免疫治療的切入點(diǎn)。

1.2 巨噬細(xì)胞極化和功能調(diào)控的研究

巨噬細(xì)胞作為固有免疫的一部分，同時(shí)也承擔(dān)著遞送抗原的功能。在腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞被多種信號(hào)募集并活化，參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等階段。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor associated macrophages， TAMs）是TME 的重要組成部分，影響腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展。巨噬細(xì)胞的極化方向有極化為M1 表型發(fā)揮抗腫瘤作用或者極化為M2 表型發(fā)揮促腫瘤作用。在腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞通常是極化為M2 型，促進(jìn)組織重塑和血管形成，與腫瘤發(fā)展和患者預(yù)后不良密切相關(guān)。因此，調(diào)控腫瘤微環(huán)境中M1/M2 平衡有利于抗腫瘤治療。

Toll 樣受體（Toll-like receptor， TLR）配體和IFN-γ在M1 型巨噬細(xì)胞極化過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。IFN-γ和TLR 可以激活干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factor， IRF）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子（signal transducer and activator of transcription， STAT）信號(hào)通路，這是巨噬細(xì)胞極化的核心通路。TLR 接收到信號(hào)后，由髓樣分化蛋白-88（myeloid differentiation factor 88， MyD88）和β干擾素TIR 結(jié)構(gòu)域銜接蛋白（TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β， TRIF）介導(dǎo)下游信號(hào)，最后激活核因子NF-κB、轉(zhuǎn)錄因子STAT1，促使腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞向M1 型極化，并調(diào)節(jié)TNF-α、IL-1β、環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2， COX-2）、IL-6 等炎性因子的表達(dá)［17-18］。STAT4、STAT5 通路也可以參與到巨噬細(xì)胞極化中。研究表明，激活的Janus 激酶2（janus kinase 2， JAK2）和酪氨酸激酶2（tyrosine kinase， TyK2）會(huì)使STAT4 磷酸化，促使M1 型極化的發(fā)生［19］。通過抑制STAT5 的磷酸化以及CrkLSTAT5 復(fù)合物的形成可有效減少巨噬細(xì)胞的M1 型極化［20］。巨噬細(xì)胞的極化易受到環(huán)境的影響，腫瘤環(huán)境中普遍缺氧，因此，HIF 也會(huì)調(diào)控TAM 的極化。HIF-1α是丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸鹽這一過程的重要參與者，會(huì)影響巨噬細(xì)胞內(nèi)糖酵解代謝過程，這與巨噬細(xì)胞M1 型極化密切相關(guān)，通過HIF-1α/丙酮酸脫氫酶激酶4（pyruvate dehydrogenase kinase 4， PDK4）軸能影響M1 型極化［17，21］。

M2 型極化主要受IL-3 和IL-4 的調(diào)控，通過胞內(nèi)眾多信號(hào)分子，如STAT、過氧化物酶增殖激活受體（peroxisome proliferator-activated receptor， PPAR）、cMyc 等影響巨噬細(xì)胞功能。IL-3 和IL-4 會(huì)激活STAT3、STAT6，通過下游的Kruppel 樣因子4（Kruppel-like factor 4， KLF-4）抑制NF-κB / HIF-1α依賴性轉(zhuǎn)錄從而增強(qiáng)M2 型極化［18］。PPAR 則控制了M2巨噬細(xì)胞的活化和代謝，如PPAR-γ會(huì)被TAM 中的S100A4 蛋白激活，促使TAM 代謝重編程，使其向M2型轉(zhuǎn)化［22］。cMyc 會(huì)受到由IL-4 激活的絲裂原激活蛋白激酶5（MEK5）/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5（ERK5）通路或者經(jīng)典的wnt/β-catenin通路調(diào)控，最終誘導(dǎo)M2樣巨噬細(xì)胞形成［23-24］。見圖2。

圖2 巨噬細(xì)胞M1/M2 極化的調(diào)控機(jī)制Fig.2 Regulation mechanism of M1/M2 polarization in macrophages

1.3 樹突狀細(xì)胞分化和功能調(diào)控的研究

樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）是適應(yīng)性免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因子，是強(qiáng)大的APC，能夠調(diào)節(jié)T 細(xì)胞免疫。DCs 包括眾多亞型：常規(guī)樹突狀細(xì)胞（conventional dendritic cells，cDCs，包含cDC1 和cDC2，漿樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cell， pDC），單核細(xì)胞源性 DC（monocyte-derived dendritic cell，moDC）等［25］。

cDCs 在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要的抗腫瘤免疫作用。腫瘤微環(huán)境中cDC1 可以向CD8+ T 細(xì)胞提供腫瘤特異性抗原，調(diào)節(jié)T 細(xì)胞的增殖、活化和免疫效應(yīng)，cDC2 則可以調(diào)控CD4+ T 細(xì)胞。cDC 的發(fā)育依賴于堿性亮氨酸拉鏈ATF 樣轉(zhuǎn)錄因子3（basic leucine zipper ATF-like transcription factor 3， BATF3）、IRF8、IRF4、DNA 結(jié)合抑制因子（inhibitor of DNA binding 2， ID2）和樹突狀細(xì)胞生長因子FLT3L 等轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控［26］，而在其成熟和活化過程中Toll 樣受體與其下游信號(hào)通路發(fā)揮重要作用，如在小鼠的DC 中TLR 的激活影響了PI3K/Akt 通路促使DC 從氧化磷酸化到糖酵解代謝的轉(zhuǎn)變，促使DC 的成熟［27］。在cDC1 細(xì)胞表面可以特異性地表達(dá)趨化因子受體XCR1 和凝集素受體DNGR-1/CLEC9A。DNGR-1（CLEC9A）是一種死細(xì)胞感應(yīng)受體，可以抑制浸潤的cDC1，當(dāng)DNGR-1 被阻斷時(shí)，特別是在cDC1 個(gè)體所需的生長因子Flt3L 存在時(shí)，與cDC1 激活相關(guān)的基因如NFκB-TNFα信號(hào)通路，炎癥反應(yīng)等基因被富集［28］；且cDC1 中CCL5 的表達(dá)上調(diào)，增強(qiáng)了抗腫瘤免疫反應(yīng)。在DC 表面，一些免疫檢查點(diǎn)分子的激活會(huì)抑制DC 的功能，例如：PD-L1 和信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（signal regulatory proteinsα， SIRPα）。在雙特異性阻斷 PD-L1-SIRPα后，激活 DC 中STING-IFN-γ通路，增強(qiáng)DC 吞噬作用和遞呈抗原能力，從而增強(qiáng) T 細(xì)胞的腫瘤殺傷作用［29-30］。見圖3。有研究發(fā)現(xiàn)，在一簇共表達(dá)免疫調(diào)節(jié)基因（Cd274， Pdcd1lg2 and Cd200）和成熟基因（Cd40，Ccr7 and Il12b）的cDC（mature DCs enriched in immunoregulatory molecules， mregDCs）中受體酪氨酸激酶ALX 能夠誘導(dǎo)檢查點(diǎn)分子PD-L1 上調(diào)，并且這類細(xì)胞受到IL-4 的負(fù)性調(diào)控，影響IL-12 的表達(dá)，會(huì)降低cDC 尤其是cDC1 的功能［31］。

圖3 cDC 細(xì)胞發(fā)育、成熟、激活、免疫功能的調(diào)控機(jī)制Fig.3 Regulatory mechanisms of cDC cell in development, maturation, activation, and immune function

pDC 是異質(zhì)細(xì)胞，其在腫瘤免疫中的功能較為復(fù)雜，會(huì)產(chǎn)生雙重效果。pDC 發(fā)揮免疫抑制作用可能是通過誘導(dǎo)共刺激分子及其配體（ICOS/ICOSL）或吲哚胺-2，3-雙加氧酶（IDO）依賴性途徑從而誘導(dǎo)Tregs實(shí)現(xiàn)的；但在人結(jié)腸癌中，pDC 的高浸潤可以增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，且有可能通過產(chǎn)生可溶性分子［例如I 型IFN 和顆粒酶B（GrzB）］以及刺激GrzB CD8 T 細(xì)胞來促進(jìn)有效的抗腫瘤反應(yīng)［32］。有研究證實(shí)，pDC 活化可有效增強(qiáng)NK 和T 細(xì)胞的抗腫瘤功能［33］。

MoDC 是從單核細(xì)胞在體外經(jīng)過粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）和IL-4 刺激下生成的衍生DC，其分化與cDC2 一致，依賴于IRF4［34］。MoDC可以表達(dá)TNF 和iNOS，與體內(nèi)的炎性DC 相似。MoDC 的分化受到TLR 和STAT6 通路調(diào)控，MoDC可以誘導(dǎo)Tregs，下調(diào)HLA-DR、CD80、CD86、CD83和CD40 等與抗原呈遞和淋巴細(xì)胞激活相關(guān)的重要分子，抑制免疫功能，促使腫瘤進(jìn)一步惡化［35］。

2 腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞新靶點(diǎn)調(diào)控的研究

臨床應(yīng)用較為普遍的腫瘤免疫治療方案包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過繼性細(xì)胞轉(zhuǎn)移療法、腫瘤DC 疫苗、嵌合抗原受體T 細(xì)胞療法等，治療效果顯著，不良反應(yīng)小。但存在免疫治療的對(duì)象范圍較窄、效果個(gè)體差異大以及耐藥性等問題［36］。因此，探索新的免疫治療靶點(diǎn)，研究腫瘤微環(huán)境中新靶點(diǎn)的免疫調(diào)控機(jī)制，提出新的抗腫瘤免疫治療方法以及雙靶點(diǎn)乃至多靶點(diǎn)聯(lián)合治療方案，有望改善抗腫瘤免疫治療方案現(xiàn)有的不足。

2.1 YTH N6-甲基腺苷RNA 結(jié)合蛋白1

N-6 甲基腺苷（N6-methyladenosine，M6A）修飾是目前研究較為廣泛的RNA 修飾。其中YTH N6-甲基腺苷RNA 結(jié)合蛋白1（methyladenosine RNAbinding protein 1， YTHDF1）作為M6A 系統(tǒng)中的“讀碼器”分子之一，在腫瘤組織中普遍呈高表達(dá)狀態(tài)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。腫瘤免疫相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，YTHDF1 影響腫瘤浸潤免疫細(xì)胞、腫瘤微環(huán)境、腫瘤新抗原呈遞等多個(gè)方面［37］。

HAN D 等［38］研究發(fā)現(xiàn)，在YTHDF1 基因敲除小鼠的經(jīng)典樹突狀細(xì)胞中，YTHDF1 的缺失會(huì)導(dǎo)致溶酶體蛋白酶的翻譯受限，影響DCs 的交叉呈遞抗原能力，增強(qiáng)腫瘤免疫調(diào)控這一新機(jī)制。YTHDF1缺失的腫瘤組織會(huì)募集更多的成熟DCs，增加腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中T 細(xì)胞的比例；并激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)JAK/STAT1 信號(hào)通路，增強(qiáng)腫瘤免疫監(jiān)控［39］。眾多研究者通過對(duì)臨床病例樣本以及TCGA 數(shù)據(jù)庫和GEO 數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)整理分析發(fā)現(xiàn)，在胃癌、肺癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌癥中，YTHDF1 的表達(dá)與腫瘤免疫浸潤性細(xì)胞存在顯著相關(guān)性，YTHDF1 的擴(kuò)增與高表達(dá)可以降低免疫細(xì)胞的浸潤，在腫瘤免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用［39-41］，通過基因富集分析推測(cè)其下游靶點(diǎn)可能與MYC 通路和T 細(xì)胞分化相關(guān)［42］。雖然相關(guān)機(jī)制研究較少，但YTHDF1 有望成為潛在的腫瘤免疫治療新靶點(diǎn)。

2.2 唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素

唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素（sialic acidbinding immunoglobulin lectin 15，Siglec-15）是主要在人的樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)的一種跨膜蛋白，在脊椎動(dòng)物中高度保守，其在正常的巨噬細(xì)胞中表達(dá)較低，但在腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中呈高表達(dá)。Siglec-15 可以通過雙特異性磷酸酶1（dual-specificity phosphatase-1， DUSP1）/MAPK 通路或者誘導(dǎo)細(xì)胞自噬、EMT 等影響腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移［43-44］。

Siglec-15 作為一種免疫受體可以在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。WANG J 等［45］研究發(fā)現(xiàn)，Siglec-15 與PD-L1 有30%的氨基酸序列同源，同樣可以抑制T 細(xì)胞，但其作用機(jī)制與PD-L1 并不相同。因此，Siglec-15 可以作為抗腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)，并有可能在抗PD-L1/PD-1 治療無效的腫瘤患者中顯示良好的治療效果。LIU Y 等［46］研究發(fā)現(xiàn)，Siglec-15 是miR-7109 的直接靶標(biāo)，抑制miR-7109，會(huì)促使腫瘤細(xì)胞表面Siglec-15 的高度表達(dá)，形成免疫抑制。Siglec-15 抗體能調(diào)節(jié)TME 中的巨噬細(xì)胞極化從而抑制肺腺癌［47］；腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞能通過Siglec-15-SYK/ERK 通路的級(jí)聯(lián)作用影響其功能，但針對(duì)該條通路具體下游分子的調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究［48］。

2.3 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2

脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 （fatty acid transport protein 2， FATP2）影響正常細(xì)胞內(nèi)膜的合成、能量代謝、生物合成、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多個(gè)方面，對(duì)腫瘤細(xì)胞脂質(zhì)代謝的作用也十分顯著。在腫瘤細(xì)胞中脂質(zhì)的代謝會(huì)發(fā)生改變，進(jìn)一步影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、免疫逃逸、耐藥性和腫瘤內(nèi)血管生成等過程。因此，抑制癌細(xì)胞或者腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞的脂質(zhì)供給可以抑制腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展。

FATP2 主要表達(dá)于肝臟細(xì)胞中，其能調(diào)節(jié)肝細(xì)胞脂肪酸攝取，常作為脂肪肝治療的靶點(diǎn)［49］。但隨著研究的深入，該靶點(diǎn)在腫瘤免疫調(diào)控方面的重要作用逐漸被明確。 VEGLIA F 等［50］研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境中的多形核髓源性抑制細(xì)胞（polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells， PMN-MDSC）存在FATP2 過表達(dá)情況，增加了PMN-MDSC 對(duì)花生四烯酸的攝取和利用，促進(jìn)了前列腺素E2 的合成，抑制腫瘤組織中CD8+ T 細(xì)胞的能力，有利于腫瘤生長。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ATP2 對(duì)MDSCs 脂肪酸堆積的調(diào)節(jié)還會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)ROS 的產(chǎn)生。有研究報(bào)道，當(dāng)MDSCs 內(nèi)ROS 增加時(shí)會(huì)促使MDSCs 對(duì)T 細(xì)胞免疫抑制的增強(qiáng)，并抑制MDSCs 向其他髓系細(xì)胞分化［51］。FATP2 的表達(dá)是由GM-CSF 作用于STAT3或STAT5 通路，因此GM-CSF-STAT3/STAT5-FATP2 信號(hào)軸對(duì)髓源性抑制細(xì)胞的免疫抑制作用十分重要［50-51］。此外，阻斷MDSCs 的FATP2 能增強(qiáng)抗PD-L1 腫瘤免疫治療的效果［50］。綜上所述，F(xiàn)ATP2不僅可以成為腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)，同時(shí)提供了一個(gè)增強(qiáng)抗PD-L1 免疫治療效果的聯(lián)合治療方法。

3 中藥對(duì)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

在臨床抗腫瘤治療中，中藥作為放療、化療的輔助用藥而被廣泛應(yīng)用，例如：養(yǎng)正合劑能發(fā)揮減毒增敏的作用，緩解放療、化療引起的不良反應(yīng)，改善患者的不適癥狀，特別是可以改善免疫抑制，增強(qiáng)患者的免疫力［52］。眾多研究表明，中藥中多糖、黃酮、生物堿、皂苷等種類的單成分物質(zhì)都具有抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用，可以影響腫瘤微環(huán)境中T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、DC、NK 細(xì)胞等眾多免疫細(xì)胞的分化和功能，影響腫瘤微環(huán)境的免疫狀態(tài)。

3.1 多糖類成分對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

多糖類成分作為研究最為廣泛的具有免疫調(diào)節(jié)的中藥成分之一，可以作用于多種免疫細(xì)胞，整體改善患者腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制狀態(tài)。

香菇多糖能促進(jìn)T 細(xì)胞分泌TNF-γ，提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果［53］。黃芪多糖可以作用于DC，激活TLR4，促使DC 分泌IL-12p70 發(fā)揮抗腫瘤免疫功效［54］。在靈芝三萜的協(xié)同作用下靈芝多糖表現(xiàn)出更強(qiáng)的Tregs 抑制效果，減少腫瘤微環(huán)境中Tregs 的數(shù)量［55］。蛹蟲草多糖可以結(jié)合腫瘤巨噬細(xì)胞表面的Toll 樣受體，引起細(xì)胞內(nèi)的Ca2+釋放，激活p38、Akt-NF-κB/ERK 通路，促使腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，從M2 型向M1 型極化，并抑制巨噬細(xì)胞與T 淋巴細(xì)胞之間PD-L1/PD-1 的相互作用［56］。車前草種子中的多糖成分PLP-2 與TLR4 結(jié)合，能激活下游與MAPK 相關(guān)的3 條途徑：p38、ERK1/2 和JNK 途徑，促使MHC Ⅱ、CD86 等分子在DC 細(xì)胞膜上的表達(dá)，促使DC 發(fā)育成熟［57］。枸杞多糖可以作用于TLR4及其相關(guān)下游通路促使DC 細(xì)胞成熟［58］，其脂質(zhì)體能誘導(dǎo)共刺激分子上調(diào)，激活未成熟的DC 發(fā)育并產(chǎn)生IL-12p40、TNF-α等細(xì)胞因子，調(diào)控TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB 的基因和蛋白表達(dá)，增強(qiáng)抗原攝取和呈遞［59］。地黃多糖、葛根多糖、桔梗多糖等也可以增加DCs 表面特征分子的表達(dá)以及重要細(xì)胞因子的生成和分泌，促進(jìn)DCs 進(jìn)一步成熟［60］。針對(duì)抑制性的免疫細(xì)胞，竹蓀多糖則能誘導(dǎo)MDSC 的凋亡，逆轉(zhuǎn)免疫環(huán)境的抑制狀態(tài)［61］。

3.2 黃酮與異黃酮類成分對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

異黃酮類化合物刺芒柄花素在多種中藥中都存在，其可以提高T 淋巴細(xì)胞中PI3K、Akt 等重要蛋白的表達(dá)和T 細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌水平，阻斷PD-1/PD-L1 信號(hào)通路和活化PI3K/Akt 信號(hào)等協(xié)同作用，改善T 淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài)［62］。

黃酮類化合物淫羊藿素可以上調(diào)T 細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)基因表達(dá)，促進(jìn)T 細(xì)胞增殖；顯著抑制腫瘤微環(huán)境中MDSC 上的PD-L1 表達(dá)［63］，改善免疫抑制狀態(tài)。木犀草素可以作為佐劑調(diào)控DC 細(xì)胞中PI3KAkt 通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，促進(jìn)APC 表達(dá)IL-12，并改善其抗原遞呈功能［64］。芹菜素則可以抑制DC表面PD-L1 的表達(dá)，調(diào)節(jié)DC 的功能［65］。

雙黃酮類化合物穗花杉雙黃酮可以激活PPARα/PPAPγ促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2 型極化［66］。

3.3 生物堿類成分對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

生物堿類成分龍葵堿可以減少肝癌腫瘤微環(huán)境中與Tregs 相關(guān)免疫抑制性細(xì)胞因子的分泌［67］。玫瑰樹堿則可通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類鏈相關(guān)蛋白A/主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類鏈相關(guān)蛋白B（MICA/MICB）等分子表達(dá)，增強(qiáng)NK 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力［68］?？鄥A能緩解腫瘤患者化療后的白細(xì)胞減少情況，提高荷瘤小鼠外周血Th/Treg 的細(xì)胞比值，具有顯著的腫瘤抑制和免疫調(diào)節(jié)功能［69］。小檗堿作為中藥黃連的主要成分，可以發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞表面PD-L1 的表達(dá)、抑制IDO1的合成、促進(jìn)體外腫瘤細(xì)胞對(duì)T 細(xì)胞的敏感性、增加腫瘤組織中浸潤性CTL 和NK 的活性并減弱MDSC和Tregs 的活化等多方面協(xié)同作用，恢復(fù)腫瘤微環(huán)境免疫監(jiān)視和腫瘤清除功能［70-71］。

3.4 其他類成分對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

青蒿素的衍生物雙氫青蒿素屬于含過氧化基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯化合物，可通過抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)M2 型分子的表達(dá)、STAT3 的磷酸化來抑制M2 型極化，并通過Akt/mTOR 通路促進(jìn)M1 型極化［72-73］。

皂苷類化合物人參皂苷作為人參的主要活性成分，可發(fā)揮抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種作用。人參皂苷Rg1可以通過NF-κB 通路促進(jìn)DC 的活化［74］、增強(qiáng)T 細(xì)胞的增殖、強(qiáng)化NK 細(xì)胞的殺傷作用等整體改善腫瘤微環(huán)境［75］。

苷類化合物紅景天苷可以影響DCs 的ERK 通路，進(jìn)一步調(diào)節(jié)重要細(xì)胞因子IL-12p70 的分泌，促進(jìn)DC 成熟并激活T 細(xì)胞的免疫功能［76］。

非黃酮類多酚白藜蘆醇會(huì)影響NK 細(xì)胞活性，能上調(diào)IL-2 活化的NK 細(xì)胞表面CD107a、NKp30 和NKG2D 分子表達(dá)，并增強(qiáng)IFN-γ的分泌［77］。

羥基蒽醌類化合物大黃素與玫瑰樹堿調(diào)控NK細(xì)胞的機(jī)制相似，可強(qiáng)化NK 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力和殺傷作用［68，78］。

香豆素類化合物秦皮乙素在抑制腫瘤生長的同時(shí)，可有效下調(diào)TME 中Tregs 細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志性分子Foxp3 的表達(dá)水平，增強(qiáng)重要細(xì)胞因子IL-10 的表達(dá)和分泌，從而抑制Tregs 細(xì)胞的分化，減少腫瘤免疫逃逸［79］。

3.5 中藥組方對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

大多數(shù)中藥單體成分的藥物作用效果較弱，復(fù)方中藥的調(diào)控作用更為顯著。

丹參和人參的協(xié)同使用可以影響MDSC 內(nèi)STAT3 和NOD 樣受體3（nod-like receptor protein3， NLRP3）通路，從而減少腫瘤微環(huán)境中MDSC的數(shù)量［80］。西黃丸組分中藥可以通過調(diào)控Tregs 細(xì)胞中PI3K、Akt 的mRNA 水平和蛋白水平的表達(dá)，改善Tregs 細(xì)胞的腫瘤免疫抑制作用［81］。養(yǎng)正合劑是目前臨床上應(yīng)用的化療輔助用藥，其與化療藥物聯(lián)用可以提高癌癥患者在化療后血液中CD4+ T 細(xì)胞亞群的比例［82］，可以顯著改善放療、化療導(dǎo)致的骨髓DNA 含量降低［83］，增強(qiáng)骨髓造血功能，并提高外周血中白細(xì)胞數(shù)量［82］，促進(jìn)大鼠脾細(xì)胞IL-2 的產(chǎn)生［84］。中藥方劑溫陽散結(jié)湯可以通過調(diào)控巨噬細(xì)胞內(nèi)NFκB 等信號(hào)通路而影響巨噬細(xì)胞M1 型極化，作用于TGF-β信號(hào)通路抑制M2 型極化，增強(qiáng)免疫監(jiān)控［85］。復(fù)方中藥鱉甲煎丸可以下調(diào)HIF-1α/NF-κB 信號(hào)通路發(fā)揮M1 型極化的抑制效果，緩解缺氧環(huán)境下巨噬細(xì)胞的損傷，延緩肝纖維化［86］。

希望中藥研究可以實(shí)現(xiàn)以幾種主要有效成分的配伍組合替代復(fù)雜且龐大的中藥組方體系，并期望保持相似、乃至相同的治療效果。但一種組方中藥包含了多種藥材，含有成千上萬種成分，多種成分之間的相互作用為中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究帶來了極大的困難。

4 總結(jié)與展望

腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)為腫瘤細(xì)胞提供了良好的生長環(huán)境，了解免疫細(xì)胞的分化、激活、功能及其相關(guān)調(diào)控途徑有助于認(rèn)識(shí)并改善腫瘤微環(huán)境的免疫抑制。DC 和巨噬細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞，能夠識(shí)別腫瘤特異性抗原并激活CTL、殺傷腫瘤細(xì)胞。因此，增加cDC 在腫瘤微環(huán)境中的募集、調(diào)控巨噬細(xì)胞極化、減少M(fèi)2 型的比例、增加T 細(xì)胞的浸潤和功能、減少免疫抑制細(xì)胞的浸潤等方法都可以逆轉(zhuǎn)腫瘤微環(huán)境的抑制狀態(tài)。但現(xiàn)有的抗腫瘤免疫治療存在耐藥性及單一免疫治療方案應(yīng)用范圍狹窄等缺陷，因此，需要發(fā)現(xiàn)新的靶點(diǎn)，增加新的抗腫瘤免疫治療方法和聯(lián)合治療方案。

中藥對(duì)腫瘤免疫的調(diào)節(jié)作用具有很大的優(yōu)勢(shì)，中藥通過多途徑協(xié)同作用，提高機(jī)體的免疫能力，改善腫瘤微環(huán)境的免疫機(jī)制，發(fā)揮抗腫瘤功效。正如前文所述，以枸杞多糖為例，不僅可以調(diào)控DC、巨噬細(xì)胞極化，還可以影響T 淋巴細(xì)胞的功能，減少Tregs 細(xì)胞浸潤，增強(qiáng)NK 細(xì)胞活性。這些研究結(jié)果表明，中藥的抗腫瘤免疫調(diào)控功能是多靶點(diǎn)、多途徑協(xié)同作用的結(jié)果。但正是因?yàn)橹兴帍?fù)雜廣闊的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)致對(duì)中藥抗腫瘤的深入機(jī)制的探索十分困難。因此，中藥的研究不能僅限于一條通路的研究，要找到每種中藥單體成分所調(diào)控每一條通路之間的關(guān)系，構(gòu)建出中藥免疫調(diào)控機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)。而新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)也將為中藥復(fù)雜的免疫調(diào)控機(jī)制網(wǎng)絡(luò)的完善提供新的“編織點(diǎn)”，這對(duì)中藥的抗腫瘤免疫調(diào)控研究既是新的挑戰(zhàn)、亦是新的機(jī)遇。對(duì)中藥抗腫瘤和抗腫瘤免疫的新機(jī)制的探索將為中藥在臨床抗腫瘤治療方案上的應(yīng)用提供更加堅(jiān)實(shí)、先進(jìn)的理論支持。