宮頸癌組織中LncRNA CCAT2表達(dá)及其意義

彭 燦 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科,湖南省衡陽(yáng)市 421001

宮頸癌作為臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于乳腺癌位居女性惡性腫瘤的第2位,對(duì)女性生命健康造成了嚴(yán)重威脅[1]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展和進(jìn)步,宮頸癌的臨床治療方案已經(jīng)從單一的手術(shù)治療逐漸發(fā)展成為綜合性的治療方式,主要以傳統(tǒng)治療與新型輔助治療相結(jié)合,但患者臨床預(yù)后狀況仍無(wú)明顯改善,患者病死率仍居高不下[2]。因此,尋求宮頸癌疾病發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制,尋找有效的治療靶點(diǎn),對(duì)于改善患者臨床預(yù)后具有著重要價(jià)值。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類長(zhǎng)度在200nt以上的非編碼RNA,雖然LncRNA不具備編碼蛋白質(zhì)的能力,但其可通過(guò)轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后、表觀遺傳等多種途徑調(diào)控基因表達(dá),且越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),LncRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[3]。本文探討分析宮頸癌組織中LncRNA CCAT2表達(dá)及其意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年3月—2020年3月我院收治的宮頸癌患者86例作為觀察對(duì)象,患者年齡32～70歲,平均年齡(49.47±11.20)歲。取術(shù)中留存宮頸癌組織標(biāo)本及距腫瘤組織邊緣5cm以上的癌旁正常組織。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理科檢查確診為原發(fā)性宮頸癌;②患者均經(jīng)手術(shù)治療;③患者臨床資料完整,且組織標(biāo)本保存完整;④患者術(shù)前均未接受放療、化療等其他抗腫瘤治療方案。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他原發(fā)性腫瘤患者;②合并嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病患者;③合并嚴(yán)重心、肝、腎等器官疾病患者;④妊娠期及哺乳期女性。

1.3 LncRNA CCAT2表達(dá) 術(shù)中獲取的宮頸癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本置于液氮中保存,根據(jù)Trizol試劑(美國(guó)Invitrogen)提取總RNA,使用分光光度儀對(duì)提取總RNA質(zhì)量和濃度進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果合格后,將其置于-80℃冰箱內(nèi)保存。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,然后將cDNA保存于-20℃保存。采用qRT-PCR反應(yīng)檢測(cè),反應(yīng)體系20μl,根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)上下游引物,引物序列:LncRNA CCAT2上游引物:5’-CCCTGGTCAAATTGCTAAAC CT-3’,下游引物:5’-TTATTCGTCCTGTTTTATGGAT-3’;GADPH上游引物:5’-TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG-3’,下游引物:5’-TCCTTGGAGGCCCAGTGGGCCAT-3’。反應(yīng)條件:95℃ 30s;95℃ 15s、60℃ 30s,共完成35個(gè)循環(huán),以GADPH作為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。

1.4 生存預(yù)后 以患者術(shù)后出院作為起始日期,利用門診資料、電話、微信、郵件等多種方式進(jìn)行隨訪,隨訪截止日期為2023年1月31日,隨訪終點(diǎn)事件為患者死亡,記錄患者總體生存期。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析,計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn),生存分析繪制Kaplan-Meier生存曲線,生存情況比較采用Log-rank檢驗(yàn),以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織及癌旁組織LncRNA CCAT2表達(dá)比較 宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量為1.835±0.316,顯著高于癌旁組織的0.972±0.225(t=20.631,P=0.000<0.05)。

2.2 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量顯著高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05),低分化患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量顯著高于中高分化患者(P<0.05),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05),而患者年齡、最大腫瘤直徑、病理類型與LncRNA CCAT2表達(dá)無(wú)關(guān)(P>0.05),見(jiàn)表1。

表1 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 以患者宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量平均值1.835作為臨界值,將LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量≥1.835患者作為高表達(dá)組(n=43)、LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量<1.835患者作為低表達(dá)組(n=43)。低表達(dá)組患者生存預(yù)后顯著優(yōu)于高表達(dá)組(P<0.05),見(jiàn)圖1。

3 討論

由于宮頸癌患者早期臨床癥狀不明顯,容易被忽視,目前對(duì)于宮頸癌的早期篩查手段,主要包括細(xì)胞學(xué)檢查以及HPV檢測(cè)[4]。隨著基因芯片技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步,宮頸癌的發(fā)病機(jī)制成為了越來(lái)越多學(xué)者共同關(guān)注的焦點(diǎn),近年來(lái),多項(xiàng)研究顯示,宮頸癌組織中LncRNA表達(dá)水平與宮頸癌疾病發(fā)生、侵襲以及患者臨床預(yù)后均具有密切的聯(lián)系[5-6]。LncRNA作為一種無(wú)完整開放閱讀框的RNA,是非編碼RNA家族中的重要成員之一,并無(wú)蛋白質(zhì)編碼功能。但隨著目前研究的不斷深入,越來(lái)越多的研究報(bào)道顯示,LncRNA在多種腫瘤進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,包括參與染色質(zhì)的修飾、轉(zhuǎn)錄激活以及核內(nèi)運(yùn)輸?shù)葟?fù)雜生物學(xué)功能,此外,LncRNA在轉(zhuǎn)錄調(diào)控、表觀遺傳調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程中可引起基因表達(dá)水平的改變,而這一系列生物學(xué)行為在生命體生長(zhǎng)、發(fā)育以及增殖等方面具有重要作用[7-8]。

LncRNA CCAT2最初被發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá),位于染色體8q 24.21上,已被多項(xiàng)研究證實(shí)其表達(dá)升高與多種惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[9]。LncRNA CCAT2作為一種潛在的新型惡性腫瘤標(biāo)志物,其表達(dá)增加促進(jìn)了蛋白質(zhì)合成以及核糖體生物發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá),直接與增殖阻斷蛋白1(BOP1)核糖體生物發(fā)生因子之間相互作用,而BOP1可通過(guò)增加染色體分離的極光激酶B的活性促進(jìn)染色體不穩(wěn)定以及癌癥的發(fā)生,同時(shí)增加對(duì)奧沙利鉑以及5-氟尿嘧啶等化療藥物的耐藥性[10]。為了進(jìn)一步明確LncRNA CCAT2與宮頸癌之間的關(guān)系,本文探討分析宮頸癌組織中LncRNA CCAT2表達(dá)及其意義。

本文結(jié)果顯示,宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對(duì)表達(dá)量顯著高于癌旁組織,同時(shí)其表達(dá)水平與患者臨床分期、組織分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。與相關(guān)研究報(bào)道結(jié)果相似[11],表明在宮頸癌中,存在LncRNA CCAT2的異常高表達(dá),且LncRNA CCAT2參與了宮頸癌疾病進(jìn)展過(guò)程,與腫瘤的惡性程度有關(guān)。此外,通過(guò)生存分析結(jié)果顯示,LncRNA CCAT2低表達(dá)組患者生存預(yù)后顯著優(yōu)于高表達(dá)組,LncRNA CCAT2有望成為宮頸癌潛在的生物治療靶點(diǎn)及預(yù)后預(yù)測(cè)分子標(biāo)志。但關(guān)于LncRNA CCAT2對(duì)宮頸癌的具體調(diào)控機(jī)制仍不清楚,提示后續(xù)還需要進(jìn)一步深入的研究分析。

綜上所述,LncRNA CCAT2在宮頸癌組織中呈高表達(dá),且其表達(dá)水平與腫瘤FIGO分期、腫瘤組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及患者臨床預(yù)后有關(guān),LncRNA CCAT2有望成為宮頸癌早期診斷和治療、預(yù)后預(yù)測(cè)的潛在生物學(xué)標(biāo)志物,值得進(jìn)一步深入研究分析。